Обобщение на изискванията за микробиологично изследване
2024-01-24 15:14:33
Изискванията и стъпките замикробиологично изследванеса както следва:
Изисквания за асептична работа:
1. Трябва да носите работно облекло и работна шапка, когато инокулирате бактерии.
2. При инокулиране на хранителни проби трябва да се носи специално работно облекло, шапки и чехли, които да се поставят в буферното помещение на стерилната стая и да се използват след UV дезинфекция преди работа.
3. Когато инокулирате хранителни проби, измийте ръцете си със сапун преди да влезете в стерилната стая и след това избършете ръцете си с памучен тампон със 75% алкохол.
4. Сламките, плоските чинии и хранителната среда, използвани за инокулация, трябва да бъдат стерилизирани и стерилизирани. Неизползваните контейнери не трябва да остават неизползвани след отваряне на опаковката. Металните прибори трябва да бъдат автоклавирани или изгорени три пъти с 95% алкохол преди употреба.
5. Когато изваждате сламката от опаковката, върхът на сламката не трябва да докосва откритите части. Когато използвате сламката за инокулиране на епруветката или плаката, върхът на сламката не трябва да докосва ръба на епруветката или плаката.
6. Инокулирането на проби и прехвърлянето на бактерии трябва да се извършва пред спиртна лампа. Когато се инокулират бактерии или проби, сламката трябва да се стерилизира на пламък след изваждане от опаковката и отваряне на запушалката на епруветката.
7. Преди инокулиране на бактерии, всички метални проводници на инокулационния контур и иглата трябва да бъдат изгорени с пламък, а ако е необходимо, връзката между контура, иглата и пръчката трябва да бъде изгорена. Примката за инокулация за инокулиране на туберкулозни бактерии и вирулентни бактерии трябва да се вари във вряща вода за 5 минути и след това да се изгори на пламък.
8. Когато смучете бактериална течност или проби със сламка, използвайте съответния гумен накрайник, за да ги смучете, а не ги смучете директно с устата си.
Изисквания за използване на стерилна стая:
1. Прозорците, водещи към външната страна на стерилната стая, трябва да бъдат двойно-стъклени и запечатани. Не трябва да се отварят по желание. Трябва да има буферна стая и плъзгаща се врата, съответстващи на размера на стерилната стая. Трябва да има и малък прозорец от 0,5~0,7m2. При подготовка за преминаване на предмети след влизане в стерилната стая.
2. Стерилната стая трябва да се поддържа чиста. След работа трябва да се дезинфекцира с 2% до 3% разтвор на крезолов сапун, работната повърхност трябва да се избърше и да не се съхраняват предмети, несвързани с експеримента.
3. Вратата на стерилната стая трябва да се затвори плътно преди и след употреба и да се включи ултравиолетовата лампа. Ако за дезинфекция се използва вътрешна окачена ултравиолетова лампа, е необходима ултравиолетова лампа от 30 W. Разстоянието е 1.0m, а времето за облъчване не по-малко от 30 минути. Когато използвате ултравиолетови лампи, трябва да обърнете внимание да работят директно под ултравиолетова светлина, за да избегнете повреда. Лампата трябва да се избърсва внимателно с памучен тампон, напоен със спирт, на всеки две седмици, за да се отстранят прахът и мазнините, за да се намали въздействието на ултравиолетовото проникване.
4. Когато обработвате и инокулирате хранителни проби, влезте в стерилната стая за работа и не ви е позволено да влизате или излизате по желание. Ако предметите трябва да бъдат предадени, те могат да бъдат предадени през малкия прозорец.
5. При необходимост от инсталиране на климатик в стерилната стая трябва да има филтриращо устройство.
Изисквания за дезинфекция и стерилизация
Стъклени съдове, метални прибори и хранителна среда, използвани замикробиологично изследване, замърсени и инокулирани култури и др. трябва да бъдат стерилизирани преди употреба. Методи за парна стерилизация със суха топлина и влажна топлина под налягане.
1. Подготовка преди стерилизация
(1) Всички артикули, които трябва да бъдат стерилизирани, трябва първо да бъдат измити и подсушени. Стъклените изделия като сламки и плоски съдове трябва да бъдат плътно опаковани с хартия. Ако се използват метални тръби, вентилационните отвори на тях трябва да се отворят.
(2) Увийте запушалката на триъгълната колба, съдържаща културалната среда, в хартия, покрийте епруветката и издърпайте сърцевината на спринцовката и я увийте с марля.
2. инсталирам
(1) Стерилизатор със суха топлина: Артикулите не трябва да са претъпкани и не могат да докосват четирите стени на кутията.
(2) Голяма готварска печка с високо-налягане: Поставете стерилизираните предмети, опаковайте ги отделно и ги поставете директно в стерилизационния цилиндър. Не претрупвайте артикулите.
3. Проверка на оборудването
(1) Проверете дали превключвателят на вратата е гъвкав, дали гуменият пръстен е повреден и дали е плосък.
(2) Проверете дали манометърът остава на нулева позиция, когато парата е изчерпана, затворете вратата и капака, вентилирайте парата или топлината и наблюдавайте дали има изтичане на въздух, дали условията, отбелязани от манометъра и термометъра, съвпадат и дали тръбопроводът е блокиран.
(3) За стерилизатори с автоматични електронни устройства за управление на програмата, определената програма трябва да се провери преди употреба, за да се види дали отговаря на изискванията за стерилизация.
4. Стерилизационна обработка
(1) Метод на стерилизация със суха топлина:
Този метод е подходящ за предмети, които не се повреждат, развалят или изпаряват при условия на суха топлина. По-често се използва за стерилизиране на стъклени изделия, метални изделия, керамични изделия и др.
①Инструментите и приборите трябва да се измият преди сухо-изпичане, за да се предотврати карбонизирането на мръсотията, прикрепена към повърхността.
② По време на стерилизация артикулите не трябва да бъдат претъпкани, не контактувайте директно с дъното и стената на кутията и не оставяйте празнини между артикулите.
③ По време на стерилизация затворете плътно вратата, свържете захранването, отворете изпускателния отвор за около 30 минути, за да отстраните студения въздух в стерилизатора, регулирайте светлинния индикатор, когато температурата се повиши до 160°C, и я поддържайте за 1,5 до 2 часа.
④След приключване на стерилизацията или по време на процеса на повишаване на температурата, вратата трябва да се отвори под 60°C.
(2) Трябва да се следват следните стъпки, когато се използва преносима тенджера под налягане или вертикален парен стерилизатор под налягане:
① Добавете 3 л вода към основното тяло на преносимата тенджера под налягане и 16 л вода към вертикалната тенджера под налягане (количеството вода трябва да се допълва при повторна употреба и водата трябва да се смени, ако стане мътна);
② За преносима тенджера под налягане, поставете изпускателната тръба на горния капак в квадратната тръба на вътрешната стена на стерилизационния варел (не трябва да се използват стерилизатори без маркучи или такива с корозирали и напукани маркучи);
③ Покрийте горния капак и го затегнете плътно, за да предотвратите изтичане на въздух; поставете стерилизатора върху източника на огън, за да се нагрее, включете захранването на вертикалната тенджера под налягане и отворете изпускателния клапан на горния капак, за да излезе въздухът (изпускайте въздух за 10 до 15 минути след като водата заври));
④Затворете изпускателния клапан, за да повишите налягането на парата до определените изисквания и го поддържайте за определеното време (в зависимост от естеството на стерилизираните предмети и съответните обстоятелства);
⑤ След достигане на определеното време, за предмети, които трябва да бъдат изсушени, незабавно отворете изпускателния клапан, за да изпуснете парата. Когато налягането се върне до нула, охладете го естествено до 60°C и след това отворете капака, за да извадите предметите. Ако е течен елемент, не отваряйте изпускателния клапан. Тенджерата трябва незабавно да се отстрани от източника на топлина и да се остави да се охлади естествено, докато налягането се върне до нула и температурата падне под 60°C, преди да отворите капака, за да извадите съдържанието, за да предотвратите внезапната декомпресия на течността от силно кипене или експлозия на контейнера.
(3) Следвайте следните стъпки, за да използвате парен стерилизатор за хоризонтална тенджера под налягане:
①Затворете плътно вратата на тенджерата, отворете вентила за входящия въздух, вкарайте пара в мецанина за предварително загряване и студеният въздух в мецанина автоматично ще бъде изхвърлен през въздушната бариера;
②След като междинният слой достигне предварително определената температура, отворете вентила за входящия въздух на камерата на съда, вкарайте парата в камерата на съда и студеният въздух в камерата на съда ще бъде автоматично изхвърлен през въздушния ограничител на камерата на съда;
③Когато налягането и температурата в камерата на съда достигнат определеното налягане, регулирайте вентила за входящия въздух, за да го поддържате постоянен;
④ Охладете температурата естествено или изкуствено до 60 ℃, преди да отворите вратата, за да извадите предметите. Не използвайте метода за бързо изпускане на пара, за да предотвратите внезапен спад на налягането, бурно кипене на течността или експлозия на контейнера;
⑤ Когато използвате автоматична програма-парен стерилизатор с контролирано налягане, след поставяне на артикулите и плътно затваряне на вратата, трябва да се натисне съответният превключвател според категорията на артикулите, така че стерилизацията да може да се извърши автоматично според изискваните процедури. По време на стерилизация прикрепеният инструмент трябва да се използва за записване на температурата и времето. За бъдещи справки експлоатационните изисквания трябва да бъдат стриктно в съответствие с инструкциите на производителя;
5. Температура и време на стерилизация
(1) Температурата на стерилизация на стерилизатор със суха топлина е 160 ℃, 1,5 ~ 2 часа.
(2) Температура на стерилизация и време на парен стерилизатор под налягане
Метод на периодична стерилизация
1. Метод на стерилизация:
Използвайте парна стерилизация без налягане. Някои вещества лесно се унищожават при стерилизация с пара под високо налягане, така че този метод може да се използва за стерилизация.
(1) Поставете предметите за стерилизация в съда, покрийте горния капак, отворете дренажния отвор и изцедете останалата вода в съда.
(2) Затворете дренажния отвор, отворете вратата за вход за въздух и дезинфекцирайте за 10 до 20 минути, ако е необходимо.
(3) След като стерилизацията приключи, затворете вратата за вход за въздух, извадете предметите и изчакайте да се охладят до стайна температура, поставете ги в инкубатор при 37°C за една нощ и продължете да стерилизирате съгласно горния метод на следващия ден. Направете това три пъти, за да постигнете целта на стерилизацията.
2. Как да използвате серумния коагулатор:
Когато хранителната среда съдържа специални съставки като серум или яйца, високата температура ще унищожи нейните хранителни вещества. Следователно ниската температура може да се използва за коагулация на серума и постигане на стерилизационни цели:
(1) Когато се използва серум, стерилизиран по този метод за аликвотиране, трябва стриктно да се спазват асептични операции, а епруветките и плочките също трябва да бъдат стерилизирани преди употреба;
(2) Направете културалната среда в наклонен или висок слой според изискванията. След като добавите достатъчно вода, свържете захранването, повишете температурата до 75~90°C за един час и след това го стерилизирайте. Поставете го в инкубатор при 37°C за една нощ и след това го стерилизирайте три пъти.
3. Сварете и дезинфекцирайте:
Можете да използвате вряща тенджера или врящ стерилизатор. След като водата заври, я варете 5 до 15 минути. Можете също да добавите 2% карболова киселина във водата и да я варите 5 минути. Добавете 0,02% формалдехид и го кипнете при 80°C в продължение на 60 минути, за да постигнете целта на стерилизацията. Въпреки това може да се постигне стерилизация с кипене. При използване на подобрители трябва да се обърне внимание на корозивността на предметите.
4. Стерилизационна обработка:
След стерилизация артикулите вече са стерилни при нормални обстоятелства. Те трябва да бъдат внимателно проверени и поставени, когато се извадят от стерилизатора, за да се избегне повторно заразяване;
(1) Извадете артикулите и незабавно проверете целостта на опаковката. Ако има повреда или тампонът е отстранен, той не може да се използва като стерилен предмет;
(2) Извадените артикули не могат да се използват като стерилни, ако опаковката им е видимо напоена с вода;
(3) Хранителната среда или реагентите трябва да се проверят, за да се види дали отговарят на цвета или състоянието след стерилизация. Тези, които не отговарят на изискванията, трябва да бъдат изхвърлени;
(4) За отворени затворени контейнери, отворите на екрана трябва да бъдат затворени, когато ги изваждате;
(5) Ако отстранените артикули паднат на земята, загубят се на нечисто място или са зацапани с вода, те се считат за замърсени и не могат да се използват като стерилни артикули;
(6) Извадените квалифицирани стерилизирани артикули трябва да се съхраняват в складово помещение или прахоустойчив шкаф и е строго забранено смесването им с нестерилизирани артикули;
(7) Всички квалифицирани артикули трябва да бъдат маркирани с датата на стерилизация и срока на годност;
(8) След завършване на всяка партида стерилизационна обработка, запишете името, количеството, температурата, времето и оператора на стерилизираните продукти.
Изисквания за третиране на токсични и бактериални отпадъци
Експерименталното оборудване и културите, използвани в микробиологичните опити, не трябва да се изнасят от лабораторията без дезинфекция.
1. Замърсените с култури материали и отпадъци трябва да се поставят в плътно затворени контейнери или телени кошници и да се съхраняват централно на определени места, докато бъдат равномерно автоклавирани.
2. Замърсените с микроорганизми култури трябва да бъдат автоклавирани при 121°C за 30 минути.
3. След употреба замърсените сламки трябва да се поставят в 5% разтвор на креолов сапун или разтвор на карболова киселина, да се накиснат за най-малко 24 часа (дезинфекциращата течност не трябва да е по-ниска от височината на накисване) и след това да се стерилизират под високо налягане при 121°C за 30 минути.
4. Течността за оцветяване и изплакване на петна обикновено може да се измие директно в канализацията. Течността за изплакване за вирулентни бактерии трябва да се измие в чаша и да се стерилизира под високо налягане, преди да се излее в канализацията. Оцветените слайдове се поставят в 5% разтвор на крезолов сапун. След накисване във вода за 24 часа се вари и се измива. Предметните стъкла или паничките, използвани за тест за аглутинация, трябва да бъдат автоклавирани и след това измити.
5. След разбиване на културата незабавно напръскайте и накиснете замърсените части с 5% разтвор на крезолов сапун или разтвор на карболова киселина, накиснете за половин час и след това избършете.
Замърсеното работно облекло или работно облекло, шапки, маски и др., носени за насилствени тестове, трябва да се поставят в специални торби за дезинфекция и да се стерилизират под високо налягане, преди да се изперат.
Средни изисквания за подготовка
Качеството на подготовката на културалната среда ще повлияе пряко върху растежа на микроорганизмите, тъй като различните микроорганизми имат различни хранителни изисквания и различни цели на културата. Изискванията за подготовка за различни хранителни среди са както следва:
1. Претеглете съставките според формулата на средата и след това ги разтворете в дестилирана вода. Качеството на прилаганите реактиви и лекарства трябва да се провери преди употреба.
2. Измерване и регулиране на pH: Измерването на pH трябва да се извършва, когато културалната среда е охладена до стайна температура, тъй като има известна разлика в pH при горещи или студени условия. Когато измерването приключи, добавете основа или киселина според изчисленото количество и разбъркайте добре. Трябва да се тества отново. Стойността на pH на културалната среда трябва да е точна, в противен случай това ще повлияе на растежа на микроорганизмите или ще повлияе на наблюдението на резултатите. Все пак трябва да се отбележи, че стерилизацията под високо-налягане може да повлияе на намаляването или повишаването на рН на някои културни среди, така че не е препоръчително да се стерилизира при твърде високо налягане или твърде много пъти, за да се избегне повлияване на качеството на културната среда. Индикатори, натриев дезоксихолат, агар и т.н. обикновено се добавят след коригиране на pH.
3. Хранителната среда трябва да се поддържа чиста, за да се улесни наблюдението на бактериалния растеж. След като хранителната среда се нагрее и кипне, тя може да се филтрира с абсорбиращ памук или фланела, за да се отстрани утайката. При необходимост може да се избистри с белтък. Използваните ленти агар трябва да бъдат предварително измити и подсушени. Преди употреба избягвайте повлияване на прозрачността поради примеси в агара.
4. Железни, медни и други съдове не трябва да се използват за съхранение на хранителната среда. По-добре е да използвате чисти неутрални твърди стъклени съдове.
5. Стерилизирането на културалната среда трябва не само да постигне целта на пълната стерилизация, но и да внимава да не се намали хранителната й стойност поради нагряване. Обикновено 121°C за 15 минути е достатъчна. За културни среди, съдържащи вещества, които са непоносими към висока топлина, като захари и серум, желатин и др., трябва да се стерилизират чрез ниска температура или периодичен метод. Някои реактиви, които не могат да се нагряват, като калиев телурит, яйчен жълтък, TTC, антибиотици и т.н., трябва да се охладят до около 50°C, след като основният агар е автоклавен и след това добавен;
6. След приготвяне на всяка партида културална среда трябва да се извърши тест за стерилен растеж и тест за растеж на тестваните щамове. Ако това е биохимична хранителна среда, използвайте стандартни бактериални щамове за инокулация и култура и наблюдавайте резултатите от биохимичната реакция. Трябва да показва нормална реакция. Хранителната среда не трябва да се съхранява твърде дълго. При необходимост може да се съхранява в 4°C хладилник.
7. В момента има много видове сухи хранителни среди. Всяка партида трябва да използва стандартни щамове за тест за растеж или наблюдение на биохимични реакции. Различни хранителни среди могат да се използват само след като тестът за растеж на съответните щамове е добър. Могат да се използват новозакупени или изсушени, които са се съхранявали дълго време. pH на културалната среда също трябва да се измерва, когато се приготвя, а дозировката и методът трябва да се следват съгласно инструкциите на продукта.
8. Химическите реагенти, условията на стерилизация, резултатите от тестовете за растеж на щама и производствения персонал, използвани във всяка партида от подготвени културни среди, трябва да бъдат записани за запитване.
Изисквания за събиране и обработка на проби
1. Събраните инспекционни проби трябва да бъдат представителни. При вземане на проби суровините, обработката, транспортирането, методите на съхранение и условията на партидата храна, околните здравни условия на околната среда и т.н. трябва да бъдат подробно проучени, за да се провери дали има някакви източници на замърсяване.
2. Според вида и количеството на храната количеството и методът на вземане на проби трябва да се извършват в съответствие с изискванията на стандартните методи за проверка.
3. Обърнете внимание на асептичното действие при вземане на проби и контейнерът трябва да бъде стерилизиран, за да се избегне микробно замърсяване в околната среда. Контейнерът не трябва да се стерилизира с креозален сапунен разтвор, стерилизация с хлорметионин, алкохол и други дезинфектанти и не трябва да съдържа такива дезинфектанти или антибиотици. За да се избегне убиването на микроорганизми в пробата, използваните ножици, ножове и лъжици също трябва да бъдат стерилизирани преди употреба.
4. Пробите трябва да бъдат изпратени в стаята за инспекция за проверка веднага след вземането им. Процесът на проверка обикновено не надвишава 3 часа. Ако разстоянието е голямо, може да се съхранява в среда от 1 ~ 5 ℃. Ако трябва да се замрази, трябва да се съхранява в замразено състояние. Предайте за проверка.
5. След получаване на пробата, помещението за проверка ще я регистрира (име на пробата, единица за проверка, количество, дата, номер и т.н.) и ще наблюдава външния вид на пробата. Ако се установи някое от следните условия, проверката може да бъде отказана:
(1) Проби, които са били стерилизирани чрез специално високо налягане, кипене или други методи, ще загубят значението си за представяне на оригиналната храна;
(2) Бутилките и торбите с храна са отворени, сготвеното месо и продуктите от него, сготвените птици и други храни са счупени и непълни, т.е. оригиналната форма на храната е загубена (с изключение на проби от хранително отравяне);
(3) Количеството на пробата е недостатъчно, както се изисква;
За представени за проверка образци, които отговарят на изискванията, в помещението за проверка следва незабавно да се извърши проверка след получаването им. Ако условията не са изпълнени, те трябва да се съхраняват в 4°C хладилник, да се подготвят за създаване на условия навреме и след това да се извърши проверка.
6. Когато проверявате проби, извършете подходяща обработка според различните им свойства.
(1) Когато се инокулират течни проби, те трябва да се смесят старателно и да се инокулират според количеството.
(2) За твърди проби използвайте стерилизиран нож, за да изрежете 25 g различни части, поставете ги в 225 ml стерилизиран физиологичен разтвор или други разтвори, натрошете и разбъркайте с хомогенизатор и инокулирайте според количеството.
(3) Бутилките и торбите с храна трябва да се отварят чрез стерилизация и горните методи трябва да бъдат избрани според характеристиките преди инокулацията.
Изисквания за инспекция на проби, записване и докладване
1. След получаване на пробата, помещението за проверка първо ще извърши проверка на външния вид и незабавно ще извърши проверката в съответствие с националните стандартни методи за проверка. По време на процеса на инспекция асептични операции трябва да се извършват внимателно, отговорно и стриктно, за да се избягватрезултат от микробен тестзамърсяване в околната среда.
2. Методите, използвани по време на процеса на проверка на пробите, възникналите явления и резултати и т.н. трябва да бъдат записани в писмени протоколи от изпитване като основа за анализ и преценка на резултатите. Записите трябва да бъдат подробни, ясни, автентични, обективни и не трябва да бъдат променяни или фалшифицирани.
Изисквания за асептична работа:
1. Трябва да носите работно облекло и работна шапка, когато инокулирате бактерии.
2. При инокулиране на хранителни проби трябва да се носи специално работно облекло, шапки и чехли, които да се поставят в буферното помещение на стерилната стая и да се използват след UV дезинфекция преди работа.
3. Когато инокулирате хранителни проби, измийте ръцете си със сапун преди да влезете в стерилната стая и след това избършете ръцете си с памучен тампон със 75% алкохол.
4. Сламките, плоските чинии и хранителната среда, използвани за инокулация, трябва да бъдат стерилизирани и стерилизирани. Неизползваните контейнери не трябва да остават неизползвани след отваряне на опаковката. Металните прибори трябва да бъдат автоклавирани или изгорени три пъти с 95% алкохол преди употреба.
5. Когато изваждате сламката от опаковката, върхът на сламката не трябва да докосва откритите части. Когато използвате сламката за инокулиране на епруветката или плаката, върхът на сламката не трябва да докосва ръба на епруветката или плаката.
6. Инокулирането на проби и прехвърлянето на бактерии трябва да се извършва пред спиртна лампа. Когато се инокулират бактерии или проби, сламката трябва да се стерилизира на пламък след изваждане от опаковката и отваряне на запушалката на епруветката.
7. Преди инокулиране на бактерии, всички метални проводници на инокулационния контур и иглата трябва да бъдат изгорени с пламък, а ако е необходимо, връзката между контура, иглата и пръчката трябва да бъде изгорена. Примката за инокулация за инокулиране на туберкулозни бактерии и вирулентни бактерии трябва да се вари във вряща вода за 5 минути и след това да се изгори на пламък.
8. Когато смучете бактериална течност или проби със сламка, използвайте съответния гумен накрайник, за да ги смучете, а не ги смучете директно с устата си.
Изисквания за използване на стерилна стая:
1. Прозорците, водещи към външната страна на стерилната стая, трябва да бъдат двойно-стъклени и запечатани. Не трябва да се отварят по желание. Трябва да има буферна стая и плъзгаща се врата, съответстващи на размера на стерилната стая. Трябва да има и малък прозорец от 0,5~0,7m2. При подготовка за преминаване на предмети след влизане в стерилната стая.
2. Стерилната стая трябва да се поддържа чиста. След работа трябва да се дезинфекцира с 2% до 3% разтвор на крезолов сапун, работната повърхност трябва да се избърше и да не се съхраняват предмети, несвързани с експеримента.
3. Вратата на стерилната стая трябва да се затвори плътно преди и след употреба и да се включи ултравиолетовата лампа. Ако за дезинфекция се използва вътрешна окачена ултравиолетова лампа, е необходима ултравиолетова лампа от 30 W. Разстоянието е 1.0m, а времето за облъчване не по-малко от 30 минути. Когато използвате ултравиолетови лампи, трябва да обърнете внимание да работят директно под ултравиолетова светлина, за да избегнете повреда. Лампата трябва да се избърсва внимателно с памучен тампон, напоен със спирт, на всеки две седмици, за да се отстранят прахът и мазнините, за да се намали въздействието на ултравиолетовото проникване.
4. Когато обработвате и инокулирате хранителни проби, влезте в стерилната стая за работа и не ви е позволено да влизате или излизате по желание. Ако предметите трябва да бъдат предадени, те могат да бъдат предадени през малкия прозорец.
5. При необходимост от инсталиране на климатик в стерилната стая трябва да има филтриращо устройство.
Изисквания за дезинфекция и стерилизация
Стъклени съдове, метални прибори и хранителна среда, използвани замикробиологично изследване, замърсени и инокулирани култури и др. трябва да бъдат стерилизирани преди употреба. Методи за парна стерилизация със суха топлина и влажна топлина под налягане.
1. Подготовка преди стерилизация
(1) Всички артикули, които трябва да бъдат стерилизирани, трябва първо да бъдат измити и подсушени. Стъклените изделия като сламки и плоски съдове трябва да бъдат плътно опаковани с хартия. Ако се използват метални тръби, вентилационните отвори на тях трябва да се отворят.
(2) Увийте запушалката на триъгълната колба, съдържаща културалната среда, в хартия, покрийте епруветката и издърпайте сърцевината на спринцовката и я увийте с марля.
2. инсталирам
(1) Стерилизатор със суха топлина: Артикулите не трябва да са претъпкани и не могат да докосват четирите стени на кутията.
(2) Голяма готварска печка с високо-налягане: Поставете стерилизираните предмети, опаковайте ги отделно и ги поставете директно в стерилизационния цилиндър. Не претрупвайте артикулите.
3. Проверка на оборудването
(1) Проверете дали превключвателят на вратата е гъвкав, дали гуменият пръстен е повреден и дали е плосък.
(2) Проверете дали манометърът остава на нулева позиция, когато парата е изчерпана, затворете вратата и капака, вентилирайте парата или топлината и наблюдавайте дали има изтичане на въздух, дали условията, отбелязани от манометъра и термометъра, съвпадат и дали тръбопроводът е блокиран.
(3) За стерилизатори с автоматични електронни устройства за управление на програмата, определената програма трябва да се провери преди употреба, за да се види дали отговаря на изискванията за стерилизация.
4. Стерилизационна обработка
(1) Метод на стерилизация със суха топлина:
Този метод е подходящ за предмети, които не се повреждат, развалят или изпаряват при условия на суха топлина. По-често се използва за стерилизиране на стъклени изделия, метални изделия, керамични изделия и др.
①Инструментите и приборите трябва да се измият преди сухо-изпичане, за да се предотврати карбонизирането на мръсотията, прикрепена към повърхността.
② По време на стерилизация артикулите не трябва да бъдат претъпкани, не контактувайте директно с дъното и стената на кутията и не оставяйте празнини между артикулите.
③ По време на стерилизация затворете плътно вратата, свържете захранването, отворете изпускателния отвор за около 30 минути, за да отстраните студения въздух в стерилизатора, регулирайте светлинния индикатор, когато температурата се повиши до 160°C, и я поддържайте за 1,5 до 2 часа.
④След приключване на стерилизацията или по време на процеса на повишаване на температурата, вратата трябва да се отвори под 60°C.
(2) Трябва да се следват следните стъпки, когато се използва преносима тенджера под налягане или вертикален парен стерилизатор под налягане:
① Добавете 3 л вода към основното тяло на преносимата тенджера под налягане и 16 л вода към вертикалната тенджера под налягане (количеството вода трябва да се допълва при повторна употреба и водата трябва да се смени, ако стане мътна);
② За преносима тенджера под налягане, поставете изпускателната тръба на горния капак в квадратната тръба на вътрешната стена на стерилизационния варел (не трябва да се използват стерилизатори без маркучи или такива с корозирали и напукани маркучи);
③ Покрийте горния капак и го затегнете плътно, за да предотвратите изтичане на въздух; поставете стерилизатора върху източника на огън, за да се нагрее, включете захранването на вертикалната тенджера под налягане и отворете изпускателния клапан на горния капак, за да излезе въздухът (изпускайте въздух за 10 до 15 минути след като водата заври));
④Затворете изпускателния клапан, за да повишите налягането на парата до определените изисквания и го поддържайте за определеното време (в зависимост от естеството на стерилизираните предмети и съответните обстоятелства);
⑤ След достигане на определеното време, за предмети, които трябва да бъдат изсушени, незабавно отворете изпускателния клапан, за да изпуснете парата. Когато налягането се върне до нула, охладете го естествено до 60°C и след това отворете капака, за да извадите предметите. Ако е течен елемент, не отваряйте изпускателния клапан. Тенджерата трябва незабавно да се отстрани от източника на топлина и да се остави да се охлади естествено, докато налягането се върне до нула и температурата падне под 60°C, преди да отворите капака, за да извадите съдържанието, за да предотвратите внезапната декомпресия на течността от силно кипене или експлозия на контейнера.
(3) Следвайте следните стъпки, за да използвате парен стерилизатор за хоризонтална тенджера под налягане:
①Затворете плътно вратата на тенджерата, отворете вентила за входящия въздух, вкарайте пара в мецанина за предварително загряване и студеният въздух в мецанина автоматично ще бъде изхвърлен през въздушната бариера;
②След като междинният слой достигне предварително определената температура, отворете вентила за входящия въздух на камерата на съда, вкарайте парата в камерата на съда и студеният въздух в камерата на съда ще бъде автоматично изхвърлен през въздушния ограничител на камерата на съда;
③Когато налягането и температурата в камерата на съда достигнат определеното налягане, регулирайте вентила за входящия въздух, за да го поддържате постоянен;
④ Охладете температурата естествено или изкуствено до 60 ℃, преди да отворите вратата, за да извадите предметите. Не използвайте метода за бързо изпускане на пара, за да предотвратите внезапен спад на налягането, бурно кипене на течността или експлозия на контейнера;
⑤ Когато използвате автоматична програма-парен стерилизатор с контролирано налягане, след поставяне на артикулите и плътно затваряне на вратата, трябва да се натисне съответният превключвател според категорията на артикулите, така че стерилизацията да може да се извърши автоматично според изискваните процедури. По време на стерилизация прикрепеният инструмент трябва да се използва за записване на температурата и времето. За бъдещи справки експлоатационните изисквания трябва да бъдат стриктно в съответствие с инструкциите на производителя;
5. Температура и време на стерилизация
(1) Температурата на стерилизация на стерилизатор със суха топлина е 160 ℃, 1,5 ~ 2 часа.
(2) Температура на стерилизация и време на парен стерилизатор под налягане
Метод на периодична стерилизация
1. Метод на стерилизация:
Използвайте парна стерилизация без налягане. Някои вещества лесно се унищожават при стерилизация с пара под високо налягане, така че този метод може да се използва за стерилизация.
(1) Поставете предметите за стерилизация в съда, покрийте горния капак, отворете дренажния отвор и изцедете останалата вода в съда.
(2) Затворете дренажния отвор, отворете вратата за вход за въздух и дезинфекцирайте за 10 до 20 минути, ако е необходимо.
(3) След като стерилизацията приключи, затворете вратата за вход за въздух, извадете предметите и изчакайте да се охладят до стайна температура, поставете ги в инкубатор при 37°C за една нощ и продължете да стерилизирате съгласно горния метод на следващия ден. Направете това три пъти, за да постигнете целта на стерилизацията.
2. Как да използвате серумния коагулатор:
Когато хранителната среда съдържа специални съставки като серум или яйца, високата температура ще унищожи нейните хранителни вещества. Следователно ниската температура може да се използва за коагулация на серума и постигане на стерилизационни цели:
(1) Когато се използва серум, стерилизиран по този метод за аликвотиране, трябва стриктно да се спазват асептични операции, а епруветките и плочките също трябва да бъдат стерилизирани преди употреба;
(2) Направете културалната среда в наклонен или висок слой според изискванията. След като добавите достатъчно вода, свържете захранването, повишете температурата до 75~90°C за един час и след това го стерилизирайте. Поставете го в инкубатор при 37°C за една нощ и след това го стерилизирайте три пъти.
3. Сварете и дезинфекцирайте:
Можете да използвате вряща тенджера или врящ стерилизатор. След като водата заври, я варете 5 до 15 минути. Можете също да добавите 2% карболова киселина във водата и да я варите 5 минути. Добавете 0,02% формалдехид и го кипнете при 80°C в продължение на 60 минути, за да постигнете целта на стерилизацията. Въпреки това може да се постигне стерилизация с кипене. При използване на подобрители трябва да се обърне внимание на корозивността на предметите.
4. Стерилизационна обработка:
След стерилизация артикулите вече са стерилни при нормални обстоятелства. Те трябва да бъдат внимателно проверени и поставени, когато се извадят от стерилизатора, за да се избегне повторно заразяване;
(1) Извадете артикулите и незабавно проверете целостта на опаковката. Ако има повреда или тампонът е отстранен, той не може да се използва като стерилен предмет;
(2) Извадените артикули не могат да се използват като стерилни, ако опаковката им е видимо напоена с вода;
(3) Хранителната среда или реагентите трябва да се проверят, за да се види дали отговарят на цвета или състоянието след стерилизация. Тези, които не отговарят на изискванията, трябва да бъдат изхвърлени;
(4) За отворени затворени контейнери, отворите на екрана трябва да бъдат затворени, когато ги изваждате;
(5) Ако отстранените артикули паднат на земята, загубят се на нечисто място или са зацапани с вода, те се считат за замърсени и не могат да се използват като стерилни артикули;
(6) Извадените квалифицирани стерилизирани артикули трябва да се съхраняват в складово помещение или прахоустойчив шкаф и е строго забранено смесването им с нестерилизирани артикули;
(7) Всички квалифицирани артикули трябва да бъдат маркирани с датата на стерилизация и срока на годност;
(8) След завършване на всяка партида стерилизационна обработка, запишете името, количеството, температурата, времето и оператора на стерилизираните продукти.
Изисквания за третиране на токсични и бактериални отпадъци
Експерименталното оборудване и културите, използвани в микробиологичните опити, не трябва да се изнасят от лабораторията без дезинфекция.
1. Замърсените с култури материали и отпадъци трябва да се поставят в плътно затворени контейнери или телени кошници и да се съхраняват централно на определени места, докато бъдат равномерно автоклавирани.
2. Замърсените с микроорганизми култури трябва да бъдат автоклавирани при 121°C за 30 минути.
3. След употреба замърсените сламки трябва да се поставят в 5% разтвор на креолов сапун или разтвор на карболова киселина, да се накиснат за най-малко 24 часа (дезинфекциращата течност не трябва да е по-ниска от височината на накисване) и след това да се стерилизират под високо налягане при 121°C за 30 минути.
4. Течността за оцветяване и изплакване на петна обикновено може да се измие директно в канализацията. Течността за изплакване за вирулентни бактерии трябва да се измие в чаша и да се стерилизира под високо налягане, преди да се излее в канализацията. Оцветените слайдове се поставят в 5% разтвор на крезолов сапун. След накисване във вода за 24 часа се вари и се измива. Предметните стъкла или паничките, използвани за тест за аглутинация, трябва да бъдат автоклавирани и след това измити.
5. След разбиване на културата незабавно напръскайте и накиснете замърсените части с 5% разтвор на крезолов сапун или разтвор на карболова киселина, накиснете за половин час и след това избършете.
Замърсеното работно облекло или работно облекло, шапки, маски и др., носени за насилствени тестове, трябва да се поставят в специални торби за дезинфекция и да се стерилизират под високо налягане, преди да се изперат.
Средни изисквания за подготовка
Качеството на подготовката на културалната среда ще повлияе пряко върху растежа на микроорганизмите, тъй като различните микроорганизми имат различни хранителни изисквания и различни цели на културата. Изискванията за подготовка за различни хранителни среди са както следва:
1. Претеглете съставките според формулата на средата и след това ги разтворете в дестилирана вода. Качеството на прилаганите реактиви и лекарства трябва да се провери преди употреба.
2. Измерване и регулиране на pH: Измерването на pH трябва да се извършва, когато културалната среда е охладена до стайна температура, тъй като има известна разлика в pH при горещи или студени условия. Когато измерването приключи, добавете основа или киселина според изчисленото количество и разбъркайте добре. Трябва да се тества отново. Стойността на pH на културалната среда трябва да е точна, в противен случай това ще повлияе на растежа на микроорганизмите или ще повлияе на наблюдението на резултатите. Все пак трябва да се отбележи, че стерилизацията под високо-налягане може да повлияе на намаляването или повишаването на рН на някои културни среди, така че не е препоръчително да се стерилизира при твърде високо налягане или твърде много пъти, за да се избегне повлияване на качеството на културната среда. Индикатори, натриев дезоксихолат, агар и т.н. обикновено се добавят след коригиране на pH.
3. Хранителната среда трябва да се поддържа чиста, за да се улесни наблюдението на бактериалния растеж. След като хранителната среда се нагрее и кипне, тя може да се филтрира с абсорбиращ памук или фланела, за да се отстрани утайката. При необходимост може да се избистри с белтък. Използваните ленти агар трябва да бъдат предварително измити и подсушени. Преди употреба избягвайте повлияване на прозрачността поради примеси в агара.
4. Железни, медни и други съдове не трябва да се използват за съхранение на хранителната среда. По-добре е да използвате чисти неутрални твърди стъклени съдове.
5. Стерилизирането на културалната среда трябва не само да постигне целта на пълната стерилизация, но и да внимава да не се намали хранителната й стойност поради нагряване. Обикновено 121°C за 15 минути е достатъчна. За културни среди, съдържащи вещества, които са непоносими към висока топлина, като захари и серум, желатин и др., трябва да се стерилизират чрез ниска температура или периодичен метод. Някои реактиви, които не могат да се нагряват, като калиев телурит, яйчен жълтък, TTC, антибиотици и т.н., трябва да се охладят до около 50°C, след като основният агар е автоклавен и след това добавен;
6. След приготвяне на всяка партида културална среда трябва да се извърши тест за стерилен растеж и тест за растеж на тестваните щамове. Ако това е биохимична хранителна среда, използвайте стандартни бактериални щамове за инокулация и култура и наблюдавайте резултатите от биохимичната реакция. Трябва да показва нормална реакция. Хранителната среда не трябва да се съхранява твърде дълго. При необходимост може да се съхранява в 4°C хладилник.
7. В момента има много видове сухи хранителни среди. Всяка партида трябва да използва стандартни щамове за тест за растеж или наблюдение на биохимични реакции. Различни хранителни среди могат да се използват само след като тестът за растеж на съответните щамове е добър. Могат да се използват новозакупени или изсушени, които са се съхранявали дълго време. pH на културалната среда също трябва да се измерва, когато се приготвя, а дозировката и методът трябва да се следват съгласно инструкциите на продукта.
8. Химическите реагенти, условията на стерилизация, резултатите от тестовете за растеж на щама и производствения персонал, използвани във всяка партида от подготвени културни среди, трябва да бъдат записани за запитване.
Изисквания за събиране и обработка на проби
1. Събраните инспекционни проби трябва да бъдат представителни. При вземане на проби суровините, обработката, транспортирането, методите на съхранение и условията на партидата храна, околните здравни условия на околната среда и т.н. трябва да бъдат подробно проучени, за да се провери дали има някакви източници на замърсяване.
2. Според вида и количеството на храната количеството и методът на вземане на проби трябва да се извършват в съответствие с изискванията на стандартните методи за проверка.
3. Обърнете внимание на асептичното действие при вземане на проби и контейнерът трябва да бъде стерилизиран, за да се избегне микробно замърсяване в околната среда. Контейнерът не трябва да се стерилизира с креозален сапунен разтвор, стерилизация с хлорметионин, алкохол и други дезинфектанти и не трябва да съдържа такива дезинфектанти или антибиотици. За да се избегне убиването на микроорганизми в пробата, използваните ножици, ножове и лъжици също трябва да бъдат стерилизирани преди употреба.
4. Пробите трябва да бъдат изпратени в стаята за инспекция за проверка веднага след вземането им. Процесът на проверка обикновено не надвишава 3 часа. Ако разстоянието е голямо, може да се съхранява в среда от 1 ~ 5 ℃. Ако трябва да се замрази, трябва да се съхранява в замразено състояние. Предайте за проверка.
5. След получаване на пробата, помещението за проверка ще я регистрира (име на пробата, единица за проверка, количество, дата, номер и т.н.) и ще наблюдава външния вид на пробата. Ако се установи някое от следните условия, проверката може да бъде отказана:
(1) Проби, които са били стерилизирани чрез специално високо налягане, кипене или други методи, ще загубят значението си за представяне на оригиналната храна;
(2) Бутилките и торбите с храна са отворени, сготвеното месо и продуктите от него, сготвените птици и други храни са счупени и непълни, т.е. оригиналната форма на храната е загубена (с изключение на проби от хранително отравяне);
(3) Количеството на пробата е недостатъчно, както се изисква;
За представени за проверка образци, които отговарят на изискванията, в помещението за проверка следва незабавно да се извърши проверка след получаването им. Ако условията не са изпълнени, те трябва да се съхраняват в 4°C хладилник, да се подготвят за създаване на условия навреме и след това да се извърши проверка.
6. Когато проверявате проби, извършете подходяща обработка според различните им свойства.
(1) Когато се инокулират течни проби, те трябва да се смесят старателно и да се инокулират според количеството.
(2) За твърди проби използвайте стерилизиран нож, за да изрежете 25 g различни части, поставете ги в 225 ml стерилизиран физиологичен разтвор или други разтвори, натрошете и разбъркайте с хомогенизатор и инокулирайте според количеството.
(3) Бутилките и торбите с храна трябва да се отварят чрез стерилизация и горните методи трябва да бъдат избрани според характеристиките преди инокулацията.
Изисквания за инспекция на проби, записване и докладване
1. След получаване на пробата, помещението за проверка първо ще извърши проверка на външния вид и незабавно ще извърши проверката в съответствие с националните стандартни методи за проверка. По време на процеса на инспекция асептични операции трябва да се извършват внимателно, отговорно и стриктно, за да се избягватрезултат от микробен тестзамърсяване в околната среда.
2. Методите, използвани по време на процеса на проверка на пробите, възникналите явления и резултати и т.н. трябва да бъдат записани в писмени протоколи от изпитване като основа за анализ и преценка на резултатите. Записите трябва да бъдат подробни, ясни, автентични, обективни и не трябва да бъдат променяни или фалшифицирани.
