Sažetak zahtjeva za mikrobiološka ispitivanja
2024-01-24 15:14:33
Zahtjevi i koraci zamikrobiološka ispitivanjasu kako slijedi:
Zahtjevi za aseptični rad:
1. Prilikom inokulacije bakterija morate nositi radnu odjeću i radnu kapu.
2. Prilikom inokulacije uzoraka hrane potrebno je nositi posebnu radnu odjeću, kape i papuče koje treba staviti u tampon prostoriju sterilne sobe i koristiti nakon UV dezinfekcije prije rada.
3. Prilikom inokulacije uzoraka hrane, operite ruke sapunom prije ulaska u sterilnu prostoriju, a zatim obrišite ruke vatom sa 75% alkohola.
4. Slamke, plosnate posude i podloge za kulture koje se koriste za inokulaciju moraju biti sterilizirane i sterilizirane. Neiskorišteni spremnici ne smiju ostati neiskorišteni nakon otvaranja pakiranja. Metalno posuđe prije upotrebe treba autoklavirati ili spaliti tri puta u 95% alkoholu.
5. Prilikom vađenja slamke iz pakiranja, vrh slamke ne smije dodirivati izložene dijelove. Kada koristite slamku za inokulaciju epruvete ili pločice, vrh slamke ne smije dodirivati rub epruvete ili pločice.
6. Inokulacija uzoraka i prijenos bakterija moraju se obaviti ispred alkoholne lampe. Prilikom inokulacije bakterija ili uzoraka, slamku je potrebno sterilizirati plamenom nakon vađenja iz pakiranja i otvaranja čepa epruvete.
7. Prije inokulacije bakterija potrebno je sve metalne žice inokulacijske petlje i igle spaliti plamenom, a po potrebi i spoj između petlje, igle i štapića. Inokulacijsku petlju za cijepljenje bakterija tuberkuloze i virulentnih bakterija treba kuhati u kipućoj vodi 5 minuta, a zatim spaliti na plamenu.
8. Kada usisavate bakterijsku tekućinu ili uzorke slamkom, koristite odgovarajući gumeni vrh za usisavanje, a ne usisavajte izravno ustima.
Zahtjevi za korištenje sterilne sobe:
1. Prozori koji vode prema vanjskoj strani sterilne prostorije trebaju biti dvostruko ostakljeni i zabrtvljeni. Ne treba ih otvarati po volji. Treba postojati tampon prostorija i klizna vrata koja odgovaraju veličini sterilne sobe. Također bi trebao postojati mali prozor od 0,5 ~ 0,7 m2. U pripremi za polaganje predmeta nakon ulaska u sterilnu sobu.
2. Sterilnu prostoriju treba održavati čistom. Nakon rada potrebno ju je dezinficirati 2% do 3% otopinom krezolnog sapuna, radnu površinu obrisati, a predmete koji nisu vezani za pokus ne odlagati.
3. Vrata sterilne sobe treba dobro zatvoriti prije i poslije upotrebe, a ultraljubičastu lampu treba uključiti. Ako se za dezinfekciju koristi unutarnja viseća ultraljubičasta svjetiljka, potrebna je ultraljubičasta svjetiljka od 30 W. Udaljenost je 1,0 m, a vrijeme zračenja nije kraće od 30 minuta. Kada koristite ultraljubičaste svjetiljke, obratite pozornost da rade izravno pod ultraljubičastim svjetlom kako biste izbjegli oštećenje. Lampu je potrebno nježno obrisati alkoholnom vatom svaka dva tjedna kako bi se uklonila prašina i masnoća kako bi se smanjio utjecaj ultraljubičastog prodiranja.
4. Prilikom obrade i inokulacije uzoraka hrane, uđite u sterilnu prostoriju za rad i nije vam dopušteno ulaziti ili izlaziti po želji. Ako predmete treba prenijeti, mogu se pronijeti kroz mali prozor.
5. Ako u sterilnu prostoriju treba ugraditi klima uređaj, treba postojati uređaj za filtriranje.
Zahtjevi za dezinfekciju i sterilizaciju
Stakleno posuđe, metalno posuđe i mediji za kulturu koji se koriste zamikrobiološka ispitivanja, kontaminirane i inokulirane kulture itd. moraju se sterilizirati prije upotrebe. Metode sterilizacije parom pod pritiskom suhe topline i vlažne topline.
1. Priprema prije sterilizacije
(1) Sve predmete koje je potrebno sterilizirati treba prvo oprati i osušiti. Stakleno posuđe kao što su slamke i plosnate posude treba biti čvrsto nabijeno papirom. Ako se koriste metalne cijevi, potrebno je otvoriti ventilacijske otvore na njima.
(2) Zamotajte čep trokutaste tikvice u kojoj se nalazi medij kulture u papir, pokrijte epruvetu i izvucite jezgru štrcaljke te je omotajte gazom.
2. instalirati
(1) Sterilizator suhom toplinom: predmeti ne smiju biti pretrpani i ne smiju dodirivati četiri stijenke kutije.
(2) Veliki visokotlačni kuhalo na paru: Stavite sterilizirane predmete, zasebno ih zamotajte i stavite izravno u sterilizacijski cilindar. Nemojte pretrpavati predmete.
3. Pregled opreme
(1) Provjerite je li prekidač na vratima fleksibilan, je li gumeni prsten oštećen i je li ravan.
(2) Provjerite ostaje li manometar na nultom položaju kada je para iscrpljena, zatvorite vrata i poklopac, prozračite paru ili grijanje i promatrajte postoji li curenje zraka, podudaraju li se uvjeti označeni manometrom i termometrom i je li cjevovod blokiran.
(3) Za sterilizatore s uređajima za automatsko elektroničko upravljanje programom, navedeni program treba prije uporabe provjeriti zadovoljava li zahtjeve za sterilizaciju.
4. Tretman sterilizacije
(1) Metoda sterilizacije suhom toplinom:
Ova je metoda prikladna za predmete koji se ne oštećuju, kvare ili isparavaju u uvjetima suhe topline. Češće se koristi za sterilizaciju staklenog posuđa, metalnih proizvoda, keramičkih proizvoda itd.
①Instrumente i posuđe treba oprati prije suhog-pečenja kako bi se spriječilo karboniziranje prljavštine pričvršćene na površinu.
② Tijekom sterilizacije predmeti ne smiju biti prenatrpani, ne smiju izravno dodirivati dno i stijenku kutije i ostavljati praznine između predmeta.
③ Tijekom sterilizacije, čvrsto zatvorite vrata, spojite napajanje, otvorite ispušni otvor na oko 30 minuta kako biste uklonili hladan zrak u sterilizatoru, podesite indikatorsko svjetlo kada temperatura poraste na 160°C i održavajte je 1,5 do 2 sata.
④Nakon završetka sterilizacije ili tijekom procesa porasta temperature, vrata se moraju otvoriti ispod 60°C.
(2) Treba slijediti sljedeće korake kada koristite prijenosni ekspres lonac ili vertikalni tlačni parni sterilizator:
① Dodajte 3L vode u glavni dio prijenosnog ekspres lonca i 16L vode u okomiti ekspres lonac (količinu vode treba nadopuniti kada se ponovno koristi, a vodu je potrebno zamijeniti ako se zamuti);
② Za prijenosni ekspres lonac umetnite ispušnu cijev na gornjem poklopcu u četvrtastu cijev na unutarnjoj stijenci bačve za sterilizaciju (ne smiju se koristiti sterilizatori bez crijeva ili oni s korodiranim i napuklim crijevima);
③ Pokrijte gornji poklopac i čvrsto ga zategnite kako biste spriječili curenje zraka; stavite sterilizator na izvor vatre da se zagrije, uključite vertikalni ekspres lonac i otvorite ispušni ventil na gornjem poklopcu da izađe zrak (izduvajte zrak 10 do 15 minuta nakon što voda proključa));
④Zatvorite ispušni ventil kako biste podigli tlak pare na navedene zahtjeve i održavali ga određeno vrijeme (ovisno o prirodi steriliziranih predmeta i relevantnim okolnostima);
⑤ Nakon isteka navedenog vremena, za predmete koji se trebaju osušiti, odmah otvorite ispušni ventil za ispuštanje pare. Kada se tlak vrati na nulu, ohladite ga prirodnim putem na 60°C i zatim otvorite poklopac da izvadite predmete. Ako se radi o tekućini, nemojte otvarati ispušni ventil. Lonac treba odmah ukloniti s izvora topline i pustiti da se prirodno ohladi dok se tlak ne vrati na nulu i temperatura padne ispod 60°C prije otvaranja poklopca da izvadite sadržaj kako biste spriječili iznenadnu dekompresiju tekućine uslijed naglog vrenja ili eksplozije posude.
(3) Slijedite sljedeće korake za korištenje parnog sterilizatora vodoravnog ekspres lonca:
①Čvrsto zatvorite vrata lonca, otvorite ventil za dovod zraka, uvedite paru u međukatu za predgrijavanje, a hladan zrak u međukatu automatski će se ispustiti kroz zračnu barijeru;
②Nakon što međusloj dosegne unaprijed određenu temperaturu, otvorite ventil za dovod zraka u komoru lonca, uvedite paru u komoru lonca, a hladan zrak u komori lonca automatski će se ispustiti kroz odvodnik zraka u komori lonca;
③Kada tlak i temperatura u komori lonca dosegnu navedeni tlak, namjestite ventil za dovod zraka tako da bude konstantan;
④ Ohladite temperaturu prirodno ili umjetno na 60 ℃ prije otvaranja vrata da izvadite predmete. Nemojte koristiti metodu brzog ispuštanja pare kako biste spriječili nagli pad tlaka, snažno ključanje tekućine ili eksploziju spremnika;
⑤ Kada koristite automatski program-kontrolirani tlačni parni sterilizator, nakon postavljanja predmeta i čvrstog zatvaranja vrata, treba pritisnuti odgovarajući prekidač u skladu s kategorijom predmeta kako bi se sterilizacija mogla automatski provesti prema potrebnim postupcima. Tijekom sterilizacije potrebno je koristiti priključeni instrument za bilježenje temperature i vremena. Za buduću referencu, radni zahtjevi trebaju biti strogo u skladu s uputama proizvođača;
5. Temperatura i vrijeme sterilizacije
(1) Temperatura sterilizacije sterilizatora suhom toplinom je 160 ℃, 1,5~2h.
(2) Temperatura sterilizacije i vrijeme tlaka parnog sterilizatora
Metoda intermitentne sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Koristite sterilizaciju parom bez pritiska. Neke tvari lako se uništavaju sterilizacijom parom pod visokim-tlakom, pa se ova metoda može koristiti za sterilizaciju.
(1) Stavite predmete koje želite sterilizirati u lonac, pokrijte gornji poklopac, otvorite odvod i ispustite preostalu vodu u loncu.
(2) Zatvorite odvodni otvor, otvorite vrata za ulaz zraka i po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minuta.
(3) Nakon što je sterilizacija dovršena, zatvorite vrata za dovod zraka, izvadite predmete i pričekajte da se ohlade na sobnu temperaturu, stavite ih u inkubator na 37°C preko noći i nastavite sterilizirati prema gore navedenoj metodi sljedeći dan. Učinite to tri puta kako biste postigli svrhu sterilizacije.
2. Kako koristiti serumski koagulator:
Kada medij kulture sadrži posebne sastojke kao što su serum ili jaja, visoka temperatura će uništiti njegove hranjive tvari. Stoga se niska temperatura može koristiti za koagulaciju seruma i postizanje sterilizacijskih svrha:
(1) Kada se koristi serum steriliziran ovom metodom za alikvot, moraju se strogo pridržavati aseptičkih postupaka, a epruvete i ploče također moraju biti sterilizirane prije upotrebe;
(2) Napravite medij za kulturu u kosi ili visoki sloj prema potrebi. Nakon dodavanja dovoljno vode, spojite napajanje, povisite temperaturu na 75~90°C na jedan sat i zatim sterilizirajte. Stavite ga u inkubator na 37°C preko noći, a zatim sterilizirajte tri puta.
3. Prokuhajte i dezinficirajte:
Možete koristiti lonac za kuhanje ili sterilizator za kuhanje. Nakon što voda zavrije, kuhajte je 5 do 15 minuta. U vodu možete dodati i 2% karbolne kiseline i kuhati 5 minuta. Dodajte 0,02% formaldehida i kuhajte na 80°C 60 minuta kako biste postigli svrhu sterilizacije. Međutim, može se postići sterilizacija kuhanjem. Pri uporabi pojačivača treba obratiti pozornost na korozivnost predmeta.
4. Tretman sterilizacije:
Nakon sterilizacije, predmeti su već sterilni u normalnim okolnostima. Treba ih pažljivo pregledati i staviti kada se izvade iz sterilizatora kako bi se izbjegla ponovna kontaminacija;
(1) Odmah izvadite predmete i provjerite cjelovitost pakiranja. Ako postoji oštećenje ili je tampon uklonjen, ne može se koristiti kao sterilni predmet;
(2) Izvađeni predmeti ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti ako je njihova ambalaža očito natopljena vodom;
(3) Medij za kulturu ili reagense treba provjeriti da li zadovoljavaju boju ili stanje nakon sterilizacije. One koje ne ispunjavaju zahtjeve treba odbaciti;
(4) Za otvorene/zatvorene spremnike, otvori na rešetki trebaju biti zatvoreni kada se vade;
(5) Ako uklonjeni predmeti padnu na tlo, zagube se na nečistom mjestu ili se zamrljaju vodom, smatraju se kontaminiranima i ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti;
(6) Izvađeni kvalificirani sterilizirani predmeti trebaju biti pohranjeni u skladišnoj prostoriji ili ormaru otpornom na prašinu, a strogo ih je zabranjeno miješati s nesteriliziranim predmetima;
(7) Sve kvalificirane stavke trebaju biti označene datumom sterilizacije i rokom valjanosti;
(8) Nakon završetka svake serije sterilizacije, zabilježite naziv, količinu, temperaturu, vrijeme i operatera steriliziranih proizvoda.
Zahtjevi za obradu toksičnog i bakterijskog otpada
Pokusni pribor i kulture koje se koriste u mikrobiološkim pokusima ne smiju se iznositi iz laboratorija bez dezinfekcije.
1. Uzgajani kontaminirani materijali i otpad trebaju se staviti u tijesne spremnike ili žičane košare i pohraniti centralno na određenim mjestima dok se jednoliko ne obrade u autoklavu.
2. Kulture kontaminirane mikroorganizmima moraju se autoklavirati na 121°C 30 minuta.
3. Nakon upotrebe, kontaminirane slamke treba staviti u 5% otopinu kreolnog sapuna ili otopinu karbolne kiseline, namakati najmanje 24 sata (tekućina za dezinfekciju ne smije biti niža od visine namakanja), a zatim sterilizirati pod visokim pritiskom na 121°C 30 minuta.
4. Tekućina za bojenje i ispiranje razmaza općenito se može isprati izravno u kanalizaciju. Tekućina za ispiranje virulentnih bakterija mora se isprati u čaši i sterilizirati pod visokim pritiskom prije nego što se izlije u kanalizaciju. Obojana stakalca stave se u 5% otopinu krezolnog sapuna. Nakon namakanja u vodi 24 sata, prokuhajte i operite. Stakalca ili zdjelice koje se koriste za testiranje aglutinacije moraju se sterilizirati u autoklavu i zatim oprati.
5. Nakon razbijanja kulture, kontaminirane dijelove odmah pošpricajte i natopite 5% otopinom krezolnog sapuna ili otopinom karbolne kiseline, potopite pola sata i zatim obrišite.
Kontaminirana radna odjeća ili radna odjeća, kape, maske itd. koja se nosi za nasilne testove treba staviti u posebne vrećice za dezinfekciju i sterilizirati pod visokim pritiskom prije pranja.
Srednji zahtjevi za pripremu
Kvaliteta pripreme medija kulture izravno će utjecati na rast mikroorganizama, jer različiti mikroorganizmi imaju različite prehrambene potrebe i različite svrhe kulture. Zahtjevi za pripremu različitih medija kulture su sljedeći:
1. Izvažite sastojke prema formuli medija, a zatim ih otopite u destiliranoj vodi. Kvalitetu primijenjenih reagensa i lijekova potrebno je provjeriti prije uporabe.
2. Mjerenje i podešavanje pH vrijednosti: mjerenje pH vrijednosti treba provoditi kada je medij za kulturu ohlađen na sobnu temperaturu, jer postoji određena razlika u pH u vrućim ili hladnim uvjetima. Kada je mjerenje završeno, dodajte lužinu ili kiselinu prema izračunatoj količini i dobro promiješajte. Trebalo bi ponovno testirati. pH vrijednost medija kulture mora biti točna, inače će utjecati na rast mikroorganizama ili utjecati na promatranje rezultata. Međutim, treba imati na umu da sterilizacija pod visokim-tlakom može utjecati na smanjenje ili povećanje pH-vrijednosti nekih medija kulture, stoga nije preporučljivo sterilizirati pod previsokim tlakom ili previše puta kako bi se izbjegao utjecaj na kvalitetu medija kulture. Indikatori, natrijev deoksikolat, agar, itd. općenito se dodaju nakon podešavanja pH.
3. Medij kulture mora biti čist kako bi se olakšalo promatranje rasta bakterija. Nakon što se medij kulture zagrije i prokuha, može se filtrirati upijajućom vatom ili flanelom kako bi se uklonio talog. Po potrebi se može bistriti bjelanjkom. Korištene trakice agara moraju se unaprijed oprati i osušiti. Prije upotrebe, izbjegavajte utjecati na prozirnost zbog nečistoća u agaru.
4. Željezni, bakreni i drugi spremnici ne smiju se koristiti za držanje medija kulture. Bolje je koristiti čiste posude od neutralnog tvrdog stakla.
5. Sterilizacija medija za kulturu ne smije samo postići svrhu potpune sterilizacije, već i paziti da se grijanjem ne smanji njegova hranjiva vrijednost. Općenito, dovoljna je 121°C tijekom 15 minuta. Podloge za kulturu koje sadrže tvari koje su netolerantne na visoku toplinu, kao što su šećeri i serum, želatina itd., treba sterilizirati metodom niske temperature ili intermitentnom metodom. Neki reagensi koji se ne mogu zagrijavati, poput kalijevog telurita, žumanjka, TTC-a, antibiotika itd., trebaju se ohladiti na oko 50°C nakon što se bazični agar obradi u autoklavu i zatim doda;
6. Nakon što se pripremi svaka serija medija kulture, potrebno je provesti sterilni test rasta i test rasta testiranih sojeva. Ako se radi o biokemijskom mediju kulture, koristite standardne bakterijske sojeve za inokulaciju i kulturu te promatrajte rezultate biokemijske reakcije. Trebao bi pokazati normalnu reakciju. Medij kulture ne smije se predugo čuvati. Po potrebi se može čuvati u hladnjaku na 4°C.
7. Trenutno postoji mnogo vrsta suhih medija za kulturu. Svaka serija mora koristiti standardne sojeve za test rasta ili promatranje biokemijske reakcije. Različite podloge za kulture mogu se koristiti tek nakon što je test rasta odgovarajućih sojeva dobar. Mogu se koristiti tek kupljene ili osušene koje su dugo stajale. Prilikom pripreme također treba izmjeriti pH medija za kulturu, a doziranje i način treba slijediti prema uputama za proizvod.
8. Kemijski reagensi, uvjeti sterilizacije, rezultati ispitivanja rasta soja i proizvodno osoblje korišteno u svakoj seriji pripremljenih medija kulture trebaju se zabilježiti radi ispitivanja.
Zahtjevi za prikupljanje i obradu uzoraka
1. Prikupljeni inspekcijski uzorci moraju biti reprezentativni. Prilikom uzorkovanja potrebno je detaljno ispitati sirovine, preradu, prijevoz, metode skladištenja i uvjete serije hrane, okolišne zdravstvene uvjete itd. kako bi se provjerilo postoje li izvori kontaminacije.
2. Prema vrsti i količini hrane, količinu i metodu uzorkovanja treba provesti u skladu sa zahtjevima standardnih metoda inspekcije.
3. Obratite pozornost na aseptičnost prilikom uzorkovanja, a spremnik mora biti steriliziran kako bi se izbjegla mikrobna kontaminacija u okolišu. Posuda se ne smije sterilizirati otopinom kreozalnog sapuna, sterilizacija klormetioninom, alkoholom i drugim dezinficijensima, te ne smije sadržavati takva dezinficijensa i antibiotike. Kako bi se izbjeglo uništavanje mikroorganizama u uzorku, škare, noževi i žlice također moraju biti sterilizirani prije upotrebe.
4. Uzorke treba poslati u prostoriju za inspekciju na pregled odmah nakon prikupljanja. Proces pregleda općenito ne traje duže od 3 sata. Ako je udaljenost velika, može se pohraniti u okruženju od 1~5 ℃. Ako ga treba zamrznuti, treba ga držati u smrznutom stanju. Predati na uvid.
5. Nakon primitka uzorka, inspekcijska soba će ga registrirati (naziv uzorka, jedinica za pregled, količina, datum, broj itd.) i promatrati izgled uzorka. Ako se utvrdi bilo koji od sljedećih uvjeta, pregled se može odbiti:
(1) Uzorci koji su sterilizirani posebnim visokim tlakom, kuhanjem ili drugim metodama izgubit će svoj značaj u predstavljanju izvorne hrane;
(2) Boce i vrećice s hranom su bile otvorene, kuhano meso i proizvodi od njega, kuhana perad i druge namirnice razbijene i nepotpune, odnosno hrana izgubljena u izvornom obliku (osim za uzorke trovanja hranom);
(3) Količina uzorkovanja nije dovoljna prema zahtjevima;
Za uzorke dostavljene na pregled koji zadovoljavaju zahtjeve, inspekcijska soba treba odmah nakon primitka izvršiti pregled. Ako uvjeti nisu ispunjeni, treba ih čuvati u hladnjaku na 4°C, na vrijeme pripremiti za stvaranje uvjeta, a zatim izvršiti pregled.
6. Prilikom pregledavanja uzoraka izvršiti odgovarajuću obradu prema njihovim različitim svojstvima.
(1) Prilikom inokulacije tekućih uzoraka potrebno ih je temeljito promiješati i inokulirati prema količini.
(2) Za čvrste uzorke, steriliziranim nožem izrežite 25 g različitih dijelova, stavite ih u 225 ml sterilizirane slane ili druge otopine, zdrobite i pomiješajte s homogenizatorom te inokulirajte prema količini.
(3) Boce i vrećice s hranom treba otvoriti sterilizacijom, a gore navedene metode treba odabrati prema karakteristikama prije inokulacije.
Zahtjevi za inspekciju uzoraka, bilježenje i izvješćivanje
1. Nakon primitka uzorka, inspekcijska soba će prvo izvršiti inspekciju izgleda i odmah izvršiti inspekciju u skladu s nacionalnim standardnim metodama inspekcije. Tijekom procesa inspekcije, aseptične operacije moraju se izvoditi pažljivo, odgovorno i strogo izbjegavatirezultat mikrobnog testakontaminacija u okolišu.
2. Metode korištene tijekom procesa inspekcije uzorka, pojave i rezultati koji su se dogodili itd. moraju biti zapisani u pisanim zapisnicima o ispitivanju kao osnova za analizu i prosudbu rezultata. Zapisi moraju biti detaljni, jasni, vjerodostojni, objektivni i ne smiju se mijenjati ili krivotvoriti.
Zahtjevi za aseptični rad:
1. Prilikom inokulacije bakterija morate nositi radnu odjeću i radnu kapu.
2. Prilikom inokulacije uzoraka hrane potrebno je nositi posebnu radnu odjeću, kape i papuče koje treba staviti u tampon prostoriju sterilne sobe i koristiti nakon UV dezinfekcije prije rada.
3. Prilikom inokulacije uzoraka hrane, operite ruke sapunom prije ulaska u sterilnu prostoriju, a zatim obrišite ruke vatom sa 75% alkohola.
4. Slamke, plosnate posude i podloge za kulture koje se koriste za inokulaciju moraju biti sterilizirane i sterilizirane. Neiskorišteni spremnici ne smiju ostati neiskorišteni nakon otvaranja pakiranja. Metalno posuđe prije upotrebe treba autoklavirati ili spaliti tri puta u 95% alkoholu.
5. Prilikom vađenja slamke iz pakiranja, vrh slamke ne smije dodirivati izložene dijelove. Kada koristite slamku za inokulaciju epruvete ili pločice, vrh slamke ne smije dodirivati rub epruvete ili pločice.
6. Inokulacija uzoraka i prijenos bakterija moraju se obaviti ispred alkoholne lampe. Prilikom inokulacije bakterija ili uzoraka, slamku je potrebno sterilizirati plamenom nakon vađenja iz pakiranja i otvaranja čepa epruvete.
7. Prije inokulacije bakterija potrebno je sve metalne žice inokulacijske petlje i igle spaliti plamenom, a po potrebi i spoj između petlje, igle i štapića. Inokulacijsku petlju za cijepljenje bakterija tuberkuloze i virulentnih bakterija treba kuhati u kipućoj vodi 5 minuta, a zatim spaliti na plamenu.
8. Kada usisavate bakterijsku tekućinu ili uzorke slamkom, koristite odgovarajući gumeni vrh za usisavanje, a ne usisavajte izravno ustima.
Zahtjevi za korištenje sterilne sobe:
1. Prozori koji vode prema vanjskoj strani sterilne prostorije trebaju biti dvostruko ostakljeni i zabrtvljeni. Ne treba ih otvarati po volji. Treba postojati tampon prostorija i klizna vrata koja odgovaraju veličini sterilne sobe. Također bi trebao postojati mali prozor od 0,5 ~ 0,7 m2. U pripremi za polaganje predmeta nakon ulaska u sterilnu sobu.
2. Sterilnu prostoriju treba održavati čistom. Nakon rada potrebno ju je dezinficirati 2% do 3% otopinom krezolnog sapuna, radnu površinu obrisati, a predmete koji nisu vezani za pokus ne odlagati.
3. Vrata sterilne sobe treba dobro zatvoriti prije i poslije upotrebe, a ultraljubičastu lampu treba uključiti. Ako se za dezinfekciju koristi unutarnja viseća ultraljubičasta svjetiljka, potrebna je ultraljubičasta svjetiljka od 30 W. Udaljenost je 1,0 m, a vrijeme zračenja nije kraće od 30 minuta. Kada koristite ultraljubičaste svjetiljke, obratite pozornost da rade izravno pod ultraljubičastim svjetlom kako biste izbjegli oštećenje. Lampu je potrebno nježno obrisati alkoholnom vatom svaka dva tjedna kako bi se uklonila prašina i masnoća kako bi se smanjio utjecaj ultraljubičastog prodiranja.
4. Prilikom obrade i inokulacije uzoraka hrane, uđite u sterilnu prostoriju za rad i nije vam dopušteno ulaziti ili izlaziti po želji. Ako predmete treba prenijeti, mogu se pronijeti kroz mali prozor.
5. Ako u sterilnu prostoriju treba ugraditi klima uređaj, treba postojati uređaj za filtriranje.
Zahtjevi za dezinfekciju i sterilizaciju
Stakleno posuđe, metalno posuđe i mediji za kulturu koji se koriste zamikrobiološka ispitivanja, kontaminirane i inokulirane kulture itd. moraju se sterilizirati prije upotrebe. Metode sterilizacije parom pod pritiskom suhe topline i vlažne topline.
1. Priprema prije sterilizacije
(1) Sve predmete koje je potrebno sterilizirati treba prvo oprati i osušiti. Stakleno posuđe kao što su slamke i plosnate posude treba biti čvrsto nabijeno papirom. Ako se koriste metalne cijevi, potrebno je otvoriti ventilacijske otvore na njima.
(2) Zamotajte čep trokutaste tikvice u kojoj se nalazi medij kulture u papir, pokrijte epruvetu i izvucite jezgru štrcaljke te je omotajte gazom.
2. instalirati
(1) Sterilizator suhom toplinom: predmeti ne smiju biti pretrpani i ne smiju dodirivati četiri stijenke kutije.
(2) Veliki visokotlačni kuhalo na paru: Stavite sterilizirane predmete, zasebno ih zamotajte i stavite izravno u sterilizacijski cilindar. Nemojte pretrpavati predmete.
3. Pregled opreme
(1) Provjerite je li prekidač na vratima fleksibilan, je li gumeni prsten oštećen i je li ravan.
(2) Provjerite ostaje li manometar na nultom položaju kada je para iscrpljena, zatvorite vrata i poklopac, prozračite paru ili grijanje i promatrajte postoji li curenje zraka, podudaraju li se uvjeti označeni manometrom i termometrom i je li cjevovod blokiran.
(3) Za sterilizatore s uređajima za automatsko elektroničko upravljanje programom, navedeni program treba prije uporabe provjeriti zadovoljava li zahtjeve za sterilizaciju.
4. Tretman sterilizacije
(1) Metoda sterilizacije suhom toplinom:
Ova je metoda prikladna za predmete koji se ne oštećuju, kvare ili isparavaju u uvjetima suhe topline. Češće se koristi za sterilizaciju staklenog posuđa, metalnih proizvoda, keramičkih proizvoda itd.
①Instrumente i posuđe treba oprati prije suhog-pečenja kako bi se spriječilo karboniziranje prljavštine pričvršćene na površinu.
② Tijekom sterilizacije predmeti ne smiju biti prenatrpani, ne smiju izravno dodirivati dno i stijenku kutije i ostavljati praznine između predmeta.
③ Tijekom sterilizacije, čvrsto zatvorite vrata, spojite napajanje, otvorite ispušni otvor na oko 30 minuta kako biste uklonili hladan zrak u sterilizatoru, podesite indikatorsko svjetlo kada temperatura poraste na 160°C i održavajte je 1,5 do 2 sata.
④Nakon završetka sterilizacije ili tijekom procesa porasta temperature, vrata se moraju otvoriti ispod 60°C.
(2) Treba slijediti sljedeće korake kada koristite prijenosni ekspres lonac ili vertikalni tlačni parni sterilizator:
① Dodajte 3L vode u glavni dio prijenosnog ekspres lonca i 16L vode u okomiti ekspres lonac (količinu vode treba nadopuniti kada se ponovno koristi, a vodu je potrebno zamijeniti ako se zamuti);
② Za prijenosni ekspres lonac umetnite ispušnu cijev na gornjem poklopcu u četvrtastu cijev na unutarnjoj stijenci bačve za sterilizaciju (ne smiju se koristiti sterilizatori bez crijeva ili oni s korodiranim i napuklim crijevima);
③ Pokrijte gornji poklopac i čvrsto ga zategnite kako biste spriječili curenje zraka; stavite sterilizator na izvor vatre da se zagrije, uključite vertikalni ekspres lonac i otvorite ispušni ventil na gornjem poklopcu da izađe zrak (izduvajte zrak 10 do 15 minuta nakon što voda proključa));
④Zatvorite ispušni ventil kako biste podigli tlak pare na navedene zahtjeve i održavali ga određeno vrijeme (ovisno o prirodi steriliziranih predmeta i relevantnim okolnostima);
⑤ Nakon isteka navedenog vremena, za predmete koji se trebaju osušiti, odmah otvorite ispušni ventil za ispuštanje pare. Kada se tlak vrati na nulu, ohladite ga prirodnim putem na 60°C i zatim otvorite poklopac da izvadite predmete. Ako se radi o tekućini, nemojte otvarati ispušni ventil. Lonac treba odmah ukloniti s izvora topline i pustiti da se prirodno ohladi dok se tlak ne vrati na nulu i temperatura padne ispod 60°C prije otvaranja poklopca da izvadite sadržaj kako biste spriječili iznenadnu dekompresiju tekućine uslijed naglog vrenja ili eksplozije posude.
(3) Slijedite sljedeće korake za korištenje parnog sterilizatora vodoravnog ekspres lonca:
①Čvrsto zatvorite vrata lonca, otvorite ventil za dovod zraka, uvedite paru u međukatu za predgrijavanje, a hladan zrak u međukatu automatski će se ispustiti kroz zračnu barijeru;
②Nakon što međusloj dosegne unaprijed određenu temperaturu, otvorite ventil za dovod zraka u komoru lonca, uvedite paru u komoru lonca, a hladan zrak u komori lonca automatski će se ispustiti kroz odvodnik zraka u komori lonca;
③Kada tlak i temperatura u komori lonca dosegnu navedeni tlak, namjestite ventil za dovod zraka tako da bude konstantan;
④ Ohladite temperaturu prirodno ili umjetno na 60 ℃ prije otvaranja vrata da izvadite predmete. Nemojte koristiti metodu brzog ispuštanja pare kako biste spriječili nagli pad tlaka, snažno ključanje tekućine ili eksploziju spremnika;
⑤ Kada koristite automatski program-kontrolirani tlačni parni sterilizator, nakon postavljanja predmeta i čvrstog zatvaranja vrata, treba pritisnuti odgovarajući prekidač u skladu s kategorijom predmeta kako bi se sterilizacija mogla automatski provesti prema potrebnim postupcima. Tijekom sterilizacije potrebno je koristiti priključeni instrument za bilježenje temperature i vremena. Za buduću referencu, radni zahtjevi trebaju biti strogo u skladu s uputama proizvođača;
5. Temperatura i vrijeme sterilizacije
(1) Temperatura sterilizacije sterilizatora suhom toplinom je 160 ℃, 1,5~2h.
(2) Temperatura sterilizacije i vrijeme tlaka parnog sterilizatora
Metoda intermitentne sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Koristite sterilizaciju parom bez pritiska. Neke tvari lako se uništavaju sterilizacijom parom pod visokim-tlakom, pa se ova metoda može koristiti za sterilizaciju.
(1) Stavite predmete koje želite sterilizirati u lonac, pokrijte gornji poklopac, otvorite odvod i ispustite preostalu vodu u loncu.
(2) Zatvorite odvodni otvor, otvorite vrata za ulaz zraka i po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minuta.
(3) Nakon što je sterilizacija dovršena, zatvorite vrata za dovod zraka, izvadite predmete i pričekajte da se ohlade na sobnu temperaturu, stavite ih u inkubator na 37°C preko noći i nastavite sterilizirati prema gore navedenoj metodi sljedeći dan. Učinite to tri puta kako biste postigli svrhu sterilizacije.
2. Kako koristiti serumski koagulator:
Kada medij kulture sadrži posebne sastojke kao što su serum ili jaja, visoka temperatura će uništiti njegove hranjive tvari. Stoga se niska temperatura može koristiti za koagulaciju seruma i postizanje sterilizacijskih svrha:
(1) Kada se koristi serum steriliziran ovom metodom za alikvot, moraju se strogo pridržavati aseptičkih postupaka, a epruvete i ploče također moraju biti sterilizirane prije upotrebe;
(2) Napravite medij za kulturu u kosi ili visoki sloj prema potrebi. Nakon dodavanja dovoljno vode, spojite napajanje, povisite temperaturu na 75~90°C na jedan sat i zatim sterilizirajte. Stavite ga u inkubator na 37°C preko noći, a zatim sterilizirajte tri puta.
3. Prokuhajte i dezinficirajte:
Možete koristiti lonac za kuhanje ili sterilizator za kuhanje. Nakon što voda zavrije, kuhajte je 5 do 15 minuta. U vodu možete dodati i 2% karbolne kiseline i kuhati 5 minuta. Dodajte 0,02% formaldehida i kuhajte na 80°C 60 minuta kako biste postigli svrhu sterilizacije. Međutim, može se postići sterilizacija kuhanjem. Pri uporabi pojačivača treba obratiti pozornost na korozivnost predmeta.
4. Tretman sterilizacije:
Nakon sterilizacije, predmeti su već sterilni u normalnim okolnostima. Treba ih pažljivo pregledati i staviti kada se izvade iz sterilizatora kako bi se izbjegla ponovna kontaminacija;
(1) Odmah izvadite predmete i provjerite cjelovitost pakiranja. Ako postoji oštećenje ili je tampon uklonjen, ne može se koristiti kao sterilni predmet;
(2) Izvađeni predmeti ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti ako je njihova ambalaža očito natopljena vodom;
(3) Medij za kulturu ili reagense treba provjeriti da li zadovoljavaju boju ili stanje nakon sterilizacije. One koje ne ispunjavaju zahtjeve treba odbaciti;
(4) Za otvorene/zatvorene spremnike, otvori na rešetki trebaju biti zatvoreni kada se vade;
(5) Ako uklonjeni predmeti padnu na tlo, zagube se na nečistom mjestu ili se zamrljaju vodom, smatraju se kontaminiranima i ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti;
(6) Izvađeni kvalificirani sterilizirani predmeti trebaju biti pohranjeni u skladišnoj prostoriji ili ormaru otpornom na prašinu, a strogo ih je zabranjeno miješati s nesteriliziranim predmetima;
(7) Sve kvalificirane stavke trebaju biti označene datumom sterilizacije i rokom valjanosti;
(8) Nakon završetka svake serije sterilizacije, zabilježite naziv, količinu, temperaturu, vrijeme i operatera steriliziranih proizvoda.
Zahtjevi za obradu toksičnog i bakterijskog otpada
Pokusni pribor i kulture koje se koriste u mikrobiološkim pokusima ne smiju se iznositi iz laboratorija bez dezinfekcije.
1. Uzgajani kontaminirani materijali i otpad trebaju se staviti u tijesne spremnike ili žičane košare i pohraniti centralno na određenim mjestima dok se jednoliko ne obrade u autoklavu.
2. Kulture kontaminirane mikroorganizmima moraju se autoklavirati na 121°C 30 minuta.
3. Nakon upotrebe, kontaminirane slamke treba staviti u 5% otopinu kreolnog sapuna ili otopinu karbolne kiseline, namakati najmanje 24 sata (tekućina za dezinfekciju ne smije biti niža od visine namakanja), a zatim sterilizirati pod visokim pritiskom na 121°C 30 minuta.
4. Tekućina za bojenje i ispiranje razmaza općenito se može isprati izravno u kanalizaciju. Tekućina za ispiranje virulentnih bakterija mora se isprati u čaši i sterilizirati pod visokim pritiskom prije nego što se izlije u kanalizaciju. Obojana stakalca stave se u 5% otopinu krezolnog sapuna. Nakon namakanja u vodi 24 sata, prokuhajte i operite. Stakalca ili zdjelice koje se koriste za testiranje aglutinacije moraju se sterilizirati u autoklavu i zatim oprati.
5. Nakon razbijanja kulture, kontaminirane dijelove odmah pošpricajte i natopite 5% otopinom krezolnog sapuna ili otopinom karbolne kiseline, potopite pola sata i zatim obrišite.
Kontaminirana radna odjeća ili radna odjeća, kape, maske itd. koja se nosi za nasilne testove treba staviti u posebne vrećice za dezinfekciju i sterilizirati pod visokim pritiskom prije pranja.
Srednji zahtjevi za pripremu
Kvaliteta pripreme medija kulture izravno će utjecati na rast mikroorganizama, jer različiti mikroorganizmi imaju različite prehrambene potrebe i različite svrhe kulture. Zahtjevi za pripremu različitih medija kulture su sljedeći:
1. Izvažite sastojke prema formuli medija, a zatim ih otopite u destiliranoj vodi. Kvalitetu primijenjenih reagensa i lijekova potrebno je provjeriti prije uporabe.
2. Mjerenje i podešavanje pH vrijednosti: mjerenje pH vrijednosti treba provoditi kada je medij za kulturu ohlađen na sobnu temperaturu, jer postoji određena razlika u pH u vrućim ili hladnim uvjetima. Kada je mjerenje završeno, dodajte lužinu ili kiselinu prema izračunatoj količini i dobro promiješajte. Trebalo bi ponovno testirati. pH vrijednost medija kulture mora biti točna, inače će utjecati na rast mikroorganizama ili utjecati na promatranje rezultata. Međutim, treba imati na umu da sterilizacija pod visokim-tlakom može utjecati na smanjenje ili povećanje pH-vrijednosti nekih medija kulture, stoga nije preporučljivo sterilizirati pod previsokim tlakom ili previše puta kako bi se izbjegao utjecaj na kvalitetu medija kulture. Indikatori, natrijev deoksikolat, agar, itd. općenito se dodaju nakon podešavanja pH.
3. Medij kulture mora biti čist kako bi se olakšalo promatranje rasta bakterija. Nakon što se medij kulture zagrije i prokuha, može se filtrirati upijajućom vatom ili flanelom kako bi se uklonio talog. Po potrebi se može bistriti bjelanjkom. Korištene trakice agara moraju se unaprijed oprati i osušiti. Prije upotrebe, izbjegavajte utjecati na prozirnost zbog nečistoća u agaru.
4. Željezni, bakreni i drugi spremnici ne smiju se koristiti za držanje medija kulture. Bolje je koristiti čiste posude od neutralnog tvrdog stakla.
5. Sterilizacija medija za kulturu ne smije samo postići svrhu potpune sterilizacije, već i paziti da se grijanjem ne smanji njegova hranjiva vrijednost. Općenito, dovoljna je 121°C tijekom 15 minuta. Podloge za kulturu koje sadrže tvari koje su netolerantne na visoku toplinu, kao što su šećeri i serum, želatina itd., treba sterilizirati metodom niske temperature ili intermitentnom metodom. Neki reagensi koji se ne mogu zagrijavati, poput kalijevog telurita, žumanjka, TTC-a, antibiotika itd., trebaju se ohladiti na oko 50°C nakon što se bazični agar obradi u autoklavu i zatim doda;
6. Nakon što se pripremi svaka serija medija kulture, potrebno je provesti sterilni test rasta i test rasta testiranih sojeva. Ako se radi o biokemijskom mediju kulture, koristite standardne bakterijske sojeve za inokulaciju i kulturu te promatrajte rezultate biokemijske reakcije. Trebao bi pokazati normalnu reakciju. Medij kulture ne smije se predugo čuvati. Po potrebi se može čuvati u hladnjaku na 4°C.
7. Trenutno postoji mnogo vrsta suhih medija za kulturu. Svaka serija mora koristiti standardne sojeve za test rasta ili promatranje biokemijske reakcije. Različite podloge za kulture mogu se koristiti tek nakon što je test rasta odgovarajućih sojeva dobar. Mogu se koristiti tek kupljene ili osušene koje su dugo stajale. Prilikom pripreme također treba izmjeriti pH medija za kulturu, a doziranje i način treba slijediti prema uputama za proizvod.
8. Kemijski reagensi, uvjeti sterilizacije, rezultati ispitivanja rasta soja i proizvodno osoblje korišteno u svakoj seriji pripremljenih medija kulture trebaju se zabilježiti radi ispitivanja.
Zahtjevi za prikupljanje i obradu uzoraka
1. Prikupljeni inspekcijski uzorci moraju biti reprezentativni. Prilikom uzorkovanja potrebno je detaljno ispitati sirovine, preradu, prijevoz, metode skladištenja i uvjete serije hrane, okolišne zdravstvene uvjete itd. kako bi se provjerilo postoje li izvori kontaminacije.
2. Prema vrsti i količini hrane, količinu i metodu uzorkovanja treba provesti u skladu sa zahtjevima standardnih metoda inspekcije.
3. Obratite pozornost na aseptičnost prilikom uzorkovanja, a spremnik mora biti steriliziran kako bi se izbjegla mikrobna kontaminacija u okolišu. Posuda se ne smije sterilizirati otopinom kreozalnog sapuna, sterilizacija klormetioninom, alkoholom i drugim dezinficijensima, te ne smije sadržavati takva dezinficijensa i antibiotike. Kako bi se izbjeglo uništavanje mikroorganizama u uzorku, škare, noževi i žlice također moraju biti sterilizirani prije upotrebe.
4. Uzorke treba poslati u prostoriju za inspekciju na pregled odmah nakon prikupljanja. Proces pregleda općenito ne traje duže od 3 sata. Ako je udaljenost velika, može se pohraniti u okruženju od 1~5 ℃. Ako ga treba zamrznuti, treba ga držati u smrznutom stanju. Predati na uvid.
5. Nakon primitka uzorka, inspekcijska soba će ga registrirati (naziv uzorka, jedinica za pregled, količina, datum, broj itd.) i promatrati izgled uzorka. Ako se utvrdi bilo koji od sljedećih uvjeta, pregled se može odbiti:
(1) Uzorci koji su sterilizirani posebnim visokim tlakom, kuhanjem ili drugim metodama izgubit će svoj značaj u predstavljanju izvorne hrane;
(2) Boce i vrećice s hranom su bile otvorene, kuhano meso i proizvodi od njega, kuhana perad i druge namirnice razbijene i nepotpune, odnosno hrana izgubljena u izvornom obliku (osim za uzorke trovanja hranom);
(3) Količina uzorkovanja nije dovoljna prema zahtjevima;
Za uzorke dostavljene na pregled koji zadovoljavaju zahtjeve, inspekcijska soba treba odmah nakon primitka izvršiti pregled. Ako uvjeti nisu ispunjeni, treba ih čuvati u hladnjaku na 4°C, na vrijeme pripremiti za stvaranje uvjeta, a zatim izvršiti pregled.
6. Prilikom pregledavanja uzoraka izvršiti odgovarajuću obradu prema njihovim različitim svojstvima.
(1) Prilikom inokulacije tekućih uzoraka potrebno ih je temeljito promiješati i inokulirati prema količini.
(2) Za čvrste uzorke, steriliziranim nožem izrežite 25 g različitih dijelova, stavite ih u 225 ml sterilizirane slane ili druge otopine, zdrobite i pomiješajte s homogenizatorom te inokulirajte prema količini.
(3) Boce i vrećice s hranom treba otvoriti sterilizacijom, a gore navedene metode treba odabrati prema karakteristikama prije inokulacije.
Zahtjevi za inspekciju uzoraka, bilježenje i izvješćivanje
1. Nakon primitka uzorka, inspekcijska soba će prvo izvršiti inspekciju izgleda i odmah izvršiti inspekciju u skladu s nacionalnim standardnim metodama inspekcije. Tijekom procesa inspekcije, aseptične operacije moraju se izvoditi pažljivo, odgovorno i strogo izbjegavatirezultat mikrobnog testakontaminacija u okolišu.
2. Metode korištene tijekom procesa inspekcije uzorka, pojave i rezultati koji su se dogodili itd. moraju biti zapisani u pisanim zapisnicima o ispitivanju kao osnova za analizu i prosudbu rezultata. Zapisi moraju biti detaljni, jasni, vjerodostojni, objektivni i ne smiju se mijenjati ili krivotvoriti.
