Riepilogo dei requisiti dei test microbiologici
2024-01-24 15:14:33
I requisiti e i passaggi pertest microbiologicisono i seguenti:
Requisiti operativi asettici:
1. Quando si inoculano i batteri è necessario indossare abiti da lavoro e un berretto da lavoro.
2. Quando si inoculano campioni alimentari, è necessario indossare indumenti da lavoro speciali, berretti e pantofole, che devono essere collocati nella stanza tampone della stanza sterile e utilizzati dopo la disinfezione UV prima del lavoro.
3. Quando si inoculano campioni alimentari, lavarsi le mani con sapone prima di entrare nella stanza sterile, quindi pulirle con un batuffolo di cotone con alcol al 75%.
4. Le cannucce, i piatti piani e i terreni di coltura utilizzati per l'inoculazione devono essere sterilizzati e sterilizzati. I contenitori non utilizzati non devono essere lasciati inutilizzati dopo l'apertura della confezione. Gli utensili in metallo devono essere autoclavati o bruciati tre volte con alcol al 95% prima dell'uso.
5. Quando si estrae la cannuccia dalla confezione, la punta della cannuccia non deve toccare le parti esposte. Quando si utilizza la cannuccia per inoculare la provetta o la piastra, la punta della cannuccia non deve toccare il bordo della provetta o della piastra.
6. L'inoculazione dei campioni e il trasferimento dei batteri devono essere effettuati davanti a una lampada ad alcool. Quando si inoculano batteri o campioni, la cannuccia deve essere sterilizzata alla fiamma dopo averla estratta dalla confezione e aperto il tappo della provetta.
7. Prima di inoculare i batteri, tutti i fili metallici dell'ansa di inoculazione e dell'ago devono essere bruciati con una fiamma e, se necessario, deve essere bruciato il collegamento tra l'ansa, l'ago e l'asta. L'ansa per inoculare i batteri della tubercolosi e i batteri virulenti deve essere bollita in acqua bollente per 5 minuti e quindi bruciata alla fiamma.
8. Quando si aspirano liquidi batterici o campioni con una cannuccia, utilizzare la punta di gomma corrispondente per aspirarli e non aspirarli direttamente con la bocca.
Requisiti per l'utilizzo della camera sterile:
1. Le finestre che conducono all'esterno della camera sterile devono essere dotate di doppi vetri e sigillate. Non dovrebbero essere aperti a piacimento. Dovrebbe esserci una stanza buffer e una porta scorrevole corrispondente alle dimensioni della stanza sterile. Dovrebbe esserci anche una piccola finestra di 0,5~0,7 m2. In preparazione al passaggio degli oggetti dopo essere entrati nella stanza sterile.
2. La stanza sterile deve essere mantenuta pulita. Dopo il lavoro, è necessario disinfettarlo con una soluzione di sapone cresolo al 2% - 3%, pulire la superficie di lavoro e non conservare oggetti non correlati all'esperimento.
3. La porta della stanza sterile deve essere chiusa ermeticamente prima e dopo l'uso e la lampada a raggi ultravioletti deve essere accesa. Se per la disinfezione viene utilizzata una lampada a raggi ultravioletti sospesa per interni, è necessaria una lampada a raggi ultravioletti da 30 W. La distanza è 1,0 me il tempo di irradiazione non è inferiore a 30 minuti. Quando si utilizzano lampade a raggi ultravioletti, è necessario prestare attenzione a operare direttamente sotto la luce ultravioletta per evitare danni. La lampada deve essere pulita delicatamente con un batuffolo di cotone imbevuto di alcol ogni due settimane per rimuovere polvere e grasso e ridurre l'impatto della penetrazione dei raggi ultravioletti.
4. Durante la lavorazione e l'inoculazione di campioni alimentari, entrare nella stanza sterile per l'operazione e non è consentito entrare o uscire a piacimento. Se è necessario consegnare degli oggetti, è possibile passarli attraverso la piccola finestra.
5. Se è necessario installare l'aria condizionata nella stanza sterile, è necessario che sia presente un dispositivo di filtraggio.
Requisiti di disinfezione e sterilizzazione
Vetreria, utensili metallici e terreni di coltura utilizzatitest microbiologici, le colture contaminate e inoculate, ecc. devono essere sterilizzate prima dell'uso. Metodi di sterilizzazione a vapore con calore secco e calore umido.
1. Preparazione prima della sterilizzazione
(1) Tutti gli articoli che necessitano di essere sterilizzati devono essere prima lavati e asciugati. Vetreria come cannucce e piatti piani devono essere imballati strettamente con carta. Se si utilizzano tubi metallici, i fori di ventilazione su di essi devono essere aperti.
(2) Avvolgere il tappo del matraccio triangolare contenente il terreno di coltura nella carta, coprire la provetta, estrarre il nucleo della siringa e avvolgerla con una garza.
2. installa
(1) Sterilizzatore a calore secco: gli articoli non devono essere sovraffollati e non possono toccare le quattro pareti della scatola.
(2) Pentola a vapore ad alta pressione grande: posizionare gli oggetti sterilizzati, avvolgerli separatamente e inserirli direttamente nel cilindro di sterilizzazione. Non sovraffollare gli articoli.
3. Ispezione dell'attrezzatura
(1) Controllare se l'interruttore della porta è flessibile, se l'anello di gomma è danneggiato e se è piatto.
(2) Controllare se il manometro rimane sulla posizione zero quando il vapore è scarico, chiudere lo sportello e il coperchio, ventilare il vapore o il calore e osservare se vi sono perdite d'aria, se le condizioni contrassegnate dal manometro e dal termometro corrispondono e se la tubazione è bloccata.
(3) Per gli sterilizzatori dotati di dispositivi di controllo elettronico automatico del programma, il programma specificato deve essere controllato prima dell'uso per verificare se soddisfa i requisiti per la sterilizzazione.
4. Trattamento di sterilizzazione
(1) Metodo di sterilizzazione a calore secco:
Questo metodo è adatto per articoli che non si danneggiano, si deteriorano o evaporano in condizioni di calore secco. È più comunemente usato per sterilizzare vetreria, prodotti in metallo, prodotti in ceramica, ecc.
①Gli strumenti e gli utensili devono essere lavati prima della cottura a secco per evitare che lo sporco attaccato alla superficie venga carbonizzato.
② Durante la sterilizzazione, gli articoli non devono essere sovraffollati, non devono entrare in contatto diretto con il fondo e le pareti della scatola e lasciare spazi tra gli articoli.
③ Durante la sterilizzazione, chiudere bene la porta, collegare l'alimentazione, aprire il foro di scarico per circa 30 minuti per rimuovere l'aria fredda nello sterilizzatore, regolare la spia quando la temperatura sale a 160°C e mantenerla per 1,5 - 2 ore.
④Una volta completata la sterilizzazione o durante il processo di aumento della temperatura, la porta deve essere aperta a una temperatura inferiore a 60°C.
(2) Quando si utilizza una pentola a pressione portatile o uno sterilizzatore a vapore a pressione verticale è necessario seguire i seguenti passaggi:
① Aggiungere 3 litri di acqua al corpo principale della pentola a pressione portatile e 16 litri di acqua alla pentola a pressione verticale (la quantità di acqua deve essere reintegrata quando riutilizzata e l'acqua deve essere sostituita se diventa torbida);
② Per una pentola a pressione portatile, inserire il tubo di scarico sul coperchio superiore nel tubo quadrato sulla parete interna del barile di sterilizzazione (non devono essere utilizzati sterilizzatori senza tubo o con tubi corrosi e fessurati);
③ Coprire il coperchio superiore e serrarlo saldamente per evitare perdite d'aria; posizionare lo sterilizzatore sulla fonte di fuoco per riscaldarlo, accendere la pentola a pressione verticale e aprire la valvola di scarico sul coperchio superiore per far uscire l'aria (aria di scarico per 10-15 minuti dopo l'ebollizione dell'acqua));
④Chiudere la valvola di scarico per aumentare la pressione del vapore ai requisiti specificati e mantenerla per il tempo specificato (a seconda della natura degli articoli sterilizzati e delle circostanze pertinenti);
⑤ Una volta raggiunto il tempo specificato, per gli articoli che devono essere asciugati, aprire immediatamente la valvola di scarico per scaricare il vapore. Quando la pressione ritorna a zero, raffreddarla naturalmente a 60°C e quindi aprire il coperchio per estrarre gli oggetti. Se si tratta di un oggetto liquido, non aprire la valvola di scarico. La pentola va tolta immediatamente dalla fonte di calore e lasciata raffreddare naturalmente finché la pressione non ritorna a zero e la temperatura scende sotto i 60°C prima di aprire il coperchio per estrarre il contenuto per evitare la decompressione improvvisa del liquido dovuta a ebollizione violenta o esplosione del contenitore.
(3) Seguire i seguenti passaggi per utilizzare lo sterilizzatore a vapore per pentola a pressione orizzontale:
①Chiudere bene lo sportello della pentola, aprire la valvola di ingresso dell'aria, introdurre vapore nel soppalco per il preriscaldamento e l'aria fredda nel soppalco verrà automaticamente scaricata attraverso la barriera d'aria;
②Dopo che lo strato intermedio raggiunge la temperatura predeterminata, aprire la valvola di ingresso dell'aria della camera del vaso, introdurre il vapore nella camera del vaso e l'aria fredda nella camera del vaso verrà automaticamente scaricata attraverso il dispositivo di arresto dell'aria della camera del vaso;
③Quando la pressione e la temperatura nella camera del vaso raggiungono la pressione specificata, regolare la valvola di ingresso dell'aria per mantenerla costante;
④ Raffreddare la temperatura in modo naturale o artificiale a 60 ℃ prima di aprire la porta per estrarre gli oggetti. Non utilizzare il metodo di scarico rapido del vapore per evitare improvvise cadute di pressione, ebollizione violenta del liquido o esplosione del contenitore;
⑤ Quando si utilizza uno sterilizzatore a vapore a pressione controllata da programma automatico, dopo aver posizionato gli articoli e chiuso bene la porta, è necessario premere l'interruttore corrispondente in base alla categoria degli articoli in modo che la sterilizzazione possa essere eseguita automaticamente secondo le procedure richieste. Durante la sterilizzazione, lo strumento allegato deve essere utilizzato per registrare la temperatura e l'ora. Per riferimento futuro, i requisiti operativi dovrebbero essere rigorosamente conformi alle istruzioni del produttore;
5. Temperatura e tempo di sterilizzazione
(1) La temperatura di sterilizzazione dello sterilizzatore a calore secco è 160 ℃, 1,5 ~ 2 ore.
(2) Temperatura e tempo di sterilizzazione dello sterilizzatore a vapore a pressione
Metodo di sterilizzazione intermittente
1. Metodo di sterilizzazione:
Utilizzare la sterilizzazione a vapore senza pressione. Alcune sostanze vengono facilmente distrutte dalla sterilizzazione a vapore ad alta pressione, quindi questo metodo può essere utilizzato per la sterilizzazione.
(1) Posizionare gli oggetti da sterilizzare nella pentola, coprire il coperchio superiore, aprire l'uscita di scarico e scaricare l'acqua rimanente nella pentola.
(2) Chiudere l'uscita di scarico, aprire lo sportello di ingresso dell'aria e disinfettare per 10-20 minuti secondo necessità.
(3) Una volta completata la sterilizzazione, chiudere lo sportello di ingresso dell'aria, estrarre gli articoli e attendere che si raffreddino a temperatura ambiente, metterli in un'incubatrice a 37°C durante la notte e continuare a sterilizzare secondo il metodo sopra indicato il giorno successivo. Fatelo tre volte per raggiungere lo scopo della sterilizzazione.
2. Come utilizzare il coagulatore del siero:
Quando il terreno di coltura contiene ingredienti speciali come siero o uova, il calore elevato ne distruggerà i nutrienti. Pertanto, è possibile utilizzare la bassa temperatura per coagulare il siero e raggiungere scopi di sterilizzazione:
(1) Quando si utilizza siero sterilizzato con questo metodo per l'aliquota, è necessario seguire rigorosamente le operazioni asettiche e anche le provette e le piastre devono essere sterilizzate prima dell'uso;
(2) Trasformare il terreno di coltura in uno strato inclinato o alto come richiesto. Dopo aver aggiunto abbastanza acqua, collegare l'alimentatore, aumentare la temperatura a 75~90°C per un'ora e quindi sterilizzarlo. Mettilo in un'incubatrice a 37°C per una notte, quindi sterilizzalo tre volte.
3. Bollire e disinfettare:
Puoi usare una pentola bollente o uno sterilizzatore bollente. Dopo che l'acqua bolle, farla bollire per 5-15 minuti. Puoi anche aggiungere il 2% di acido fenico all'acqua e farla bollire per 5 minuti. Aggiungere lo 0,02% di formaldeide e far bollire a 80°C per 60 minuti per raggiungere lo scopo della sterilizzazione. Tuttavia, è possibile ottenere la sterilizzazione mediante bollitura. Quando si utilizzano potenziatori, è necessario prestare attenzione alla corrosività degli articoli.
4. Trattamento di sterilizzazione:
Dopo la sterilizzazione, gli articoli sono già sterili in circostanze normali. Devono essere attentamente ispezionati e posizionati quando vengono estratti dallo sterilizzatore per evitare la ricontaminazione;
(1) Estrarre gli articoli e verificare immediatamente l'integrità dell'imballaggio. Se è danneggiato o il tampone viene rimosso, non può essere utilizzato come articolo sterile;
(2) Gli articoli prelevati non possono essere utilizzati come articoli sterili se la loro confezione è evidentemente immersa nell'acqua;
(3) Il terreno di coltura o i reagenti devono essere controllati per vedere se soddisfano il colore o lo stato dopo la sterilizzazione. Quelli che non soddisfano i requisiti dovrebbero essere scartati;
(4) Per i contenitori apri-chiudi, i fori dello schermo devono essere chiusi quando li si estrae;
(5) Se gli oggetti rimossi cadono a terra, vengono smarriti in un luogo sporco o sono macchiati d'acqua, sono considerati contaminati e non possono essere utilizzati come articoli sterili;
(6) Gli articoli sterilizzati qualificati prelevati devono essere conservati nel magazzino o nell'armadio antipolvere ed è severamente vietato mescolarli con articoli non sterilizzati;
(7) Tutti gli articoli qualificati devono essere contrassegnati con la data di sterilizzazione e la data di scadenza;
(8) Al termine di ogni lotto di processo di sterilizzazione, registrare il nome, la quantità, la temperatura, l'ora e l'operatore dei prodotti sterilizzati.
Requisiti per il trattamento dei rifiuti tossici e batterici
Le attrezzature sperimentali e le colture utilizzate negli esperimenti microbiologici non devono essere portate fuori dal laboratorio senza disinfezione.
1. I materiali e i rifiuti coltivati contaminati devono essere collocati in contenitori stretti o cestelli metallici e conservati centralmente in luoghi designati finché non vengono sterilizzati in autoclave in modo uniforme.
2. Le colture contaminate da microrganismi devono essere autoclavate a 121°C per 30 minuti.
3. Dopo l'uso, le cannucce contaminate devono essere poste in una soluzione di sapone creolo al 5% o in una soluzione di acido carbolico, immerse per almeno 24 ore (il liquido disinfettante non deve essere inferiore all'altezza di immersione) e quindi sterilizzate ad alta pressione a 121°C per 30 minuti.
4. Il liquido per la colorazione e il risciacquo degli strisci può generalmente essere scaricato direttamente nella fogna. Il liquido di lavaggio per i batteri virulenti deve essere scaricato in un bicchiere e sterilizzato ad alta pressione prima di essere versato nella fogna. I vetrini colorati vengono immersi in una soluzione di sapone cresolo al 5%. Dopo l'immersione in acqua per 24 ore, far bollire e lavare. I vetrini o le piastre utilizzate per i test di agglutinazione devono essere autoclavati e poi lavati.
5. Dopo aver rotto la coltura, spruzzare e immergere immediatamente le parti contaminate con una soluzione di sapone cresolo al 5% o una soluzione di acido carbolico, immergere per mezz'ora e quindi pulire.
Gli indumenti da lavoro contaminati o gli indumenti da lavoro, berretti, maschere, ecc. indossati per prove violente devono essere riposti in appositi sacchetti di disinfezione e sterilizzati ad alta pressione prima di essere lavati.
Requisiti di preparazione medi
La qualità della preparazione del terreno di coltura influenzerà direttamente la crescita dei microrganismi, poiché i vari microrganismi hanno esigenze nutrizionali e scopi di coltura diversi. I requisiti di preparazione per i vari terreni di coltura sono i seguenti:
1. Pesare gli ingredienti secondo la formula media, quindi scioglierli in acqua distillata. La qualità dei reagenti e dei farmaci applicati deve essere ispezionata prima dell'uso.
2. Misurazione e regolazione del pH: la misurazione del pH deve essere effettuata quando il terreno di coltura è raffreddato a temperatura ambiente, poiché esiste una certa differenza di pH in condizioni calde o fredde. Una volta completata la misurazione, aggiungere alcali o acido in base alla quantità calcolata e mescolare bene. Dovrebbe essere testato di nuovo. Il valore del pH del terreno di coltura deve essere accurato, altrimenti influenzerà la crescita dei microrganismi o influenzerà l'osservazione dei risultati. Tuttavia, va notato che la sterilizzazione ad alta pressione può influenzare la diminuzione o l'aumento del pH di alcuni terreni di coltura, quindi non è consigliabile sterilizzare ad una pressione troppo elevata o troppe volte per evitare di compromettere la qualità del terreno di coltura. Gli indicatori, il desossicolato di sodio, l'agar, ecc. vengono generalmente aggiunti dopo aver regolato il pH.
3. Il terreno di coltura deve essere mantenuto pulito per facilitare l'osservazione della crescita batterica. Dopo che il terreno di coltura è stato riscaldato e bollito, può essere filtrato con cotone assorbente o flanella per rimuovere i sedimenti. Se necessario si può chiarificare con albume d'uovo. Le strisce di agar utilizzate devono essere preventivamente lavate e asciugate. Prima dell'uso, evitare di alterare la trasparenza a causa delle impurità presenti nell'agar.
4. Per contenere il terreno di coltura non devono essere utilizzati contenitori di ferro, rame e altri. È preferibile utilizzare contenitori di vetro duro neutro pulito.
5. La sterilizzazione del terreno di coltura non deve solo raggiungere lo scopo di completa sterilizzazione, ma anche prestare attenzione a non ridurne il valore nutritivo a causa del riscaldamento. In genere sono sufficienti 121°C per 15 minuti. I terreni di coltura contenenti sostanze intolleranti al calore elevato come zuccheri e siero, gelatina, ecc., devono essere sterilizzati a bassa temperatura o con metodo intermittente. Alcuni reagenti che non possono essere riscaldati, come il tellurito di potassio, il tuorlo d'uovo, il TTC, gli antibiotici, ecc., dovrebbero essere raffreddati a circa 50°C dopo che l'agar basico è stato autoclavato e quindi aggiunti;
6. Dopo aver preparato ciascun lotto di terreni di coltura, è necessario eseguire un test di crescita sterile e un test di crescita dei ceppi testati. Se si tratta di un terreno di coltura biochimico, utilizzare ceppi batterici standard per l'inoculazione e la coltura e osservare i risultati della reazione biochimica. Dovrebbe mostrare una reazione normale. Il terreno di coltura non deve essere conservato troppo a lungo. Se necessario può essere conservato in frigorifero a 4°C.
7. Attualmente esistono molti tipi di terreni di coltura secchi. Ogni lotto deve utilizzare ceppi standard per test di crescita o osservazione di reazioni biochimiche. Vari terreni di coltura possono essere utilizzati solo dopo che il test di crescita dei ceppi corrispondenti è risultato positivo. È possibile utilizzare quelli appena acquistati o essiccati che sono stati conservati per lungo tempo. Durante la preparazione è necessario misurare anche il pH del terreno di coltura e seguire il dosaggio e il metodo secondo le istruzioni del prodotto.
8. I reagenti chimici, le condizioni di sterilizzazione, i risultati dei test di crescita dei ceppi e il personale di produzione utilizzati in ciascun lotto di terreni di coltura preparati devono essere registrati per eventuali indagini.
Requisiti per la raccolta e il trattamento dei campioni
1. I campioni di ispezione raccolti devono essere rappresentativi. Durante il campionamento, le materie prime, la lavorazione, il trasporto, i metodi di conservazione e le condizioni del lotto di cibo, le condizioni di salute ambientale circostante, ecc. dovrebbero essere studiati in dettaglio per verificare se esistono fonti di contaminazione.
2. A seconda del tipo e della quantità di cibo, la quantità e il metodo di campionamento devono essere eseguiti in conformità con i requisiti dei metodi di ispezione standard.
3. Prestare attenzione al funzionamento asettico durante il campionamento e il contenitore deve essere sterilizzato per evitare la contaminazione microbica nell'ambiente. Il contenitore non deve essere sterilizzato con soluzione di sapone creosa, sterilizzazione con clormetionina, alcool e altri disinfettanti e non deve contenere tali disinfettanti o antibiotici. Per evitare la morte dei microrganismi presenti nel campione, anche le forbici, i coltelli e i cucchiai utilizzati devono essere sterilizzati prima dell'uso.
4. I campioni devono essere inviati alla sala di ispezione per l'ispezione immediatamente dopo la raccolta. Il processo di ispezione generalmente non supera le 3 ore. Se la distanza è lunga, può essere conservata in un ambiente con temperatura compresa tra 1 e 5 ℃. Se deve essere congelato, deve essere conservato congelato. Presentare per ispezione.
5. Dopo aver ricevuto il campione, la sala di ispezione lo registrerà (nome del campione, unità di ispezione, quantità, data, numero, ecc.) e osserverà l'aspetto del campione. Se viene riscontrata una delle seguenti condizioni, l'ispezione può essere rifiutata:
(1) I campioni che sono stati sterilizzati mediante metodi speciali ad alta pressione, bollitura o altri metodi perderanno il loro significato nel rappresentare l'alimento originale;
(2) Bottiglie e sacchetti di cibo sono stati aperti, carne cotta e suoi prodotti, pollame cotto e altri alimenti sono stati rotti e incompleti, ovvero la forma originale del cibo è andata perduta (ad eccezione dei campioni di intossicazione alimentare);
(3) La quantità di campionamento è insufficiente rispetto a quanto richiesto;
Per i campioni presentati per l'ispezione che soddisfano i requisiti, la sala di ispezione deve condurre immediatamente l'ispezione dopo averli ricevuti. Se le condizioni non sono soddisfatte, devono essere conservate in un frigorifero a 4°C, prepararsi a creare le condizioni in tempo e quindi condurre l'ispezione.
6. Quando si ispezionano i campioni, eseguire l'elaborazione appropriata in base alle loro diverse proprietà.
(1) Quando si inoculano campioni liquidi, è necessario miscelarli accuratamente e inocularli in base alla quantità.
(2) Per i campioni solidi, utilizzare un coltello sterilizzato per ritagliare 25 g di parti diverse, collocarle in 225 ml di soluzione salina sterilizzata o altre soluzioni, frantumare e mescolare con un omogeneizzatore e inoculare in base alla quantità.
(3) Le bottiglie e i sacchetti degli alimenti devono essere aperti mediante sterilizzazione e i metodi sopra indicati devono essere selezionati in base alle caratteristiche prima dell'inoculazione.
Requisiti di ispezione, registrazione e reporting dei campioni
1. Dopo aver ricevuto il campione, la sala di ispezione effettuerà innanzitutto un'ispezione estetica e condurrà tempestivamente l'ispezione in conformità con i metodi di ispezione standard nazionali. Durante il processo di ispezione, le operazioni asettiche devono essere eseguite con attenzione, responsabilità e rigorosamente da evitarerisultato del test microbicocontaminazione nell’ambiente.
2. I metodi utilizzati durante il processo di ispezione del campione, i fenomeni e i risultati che si sono verificati, ecc. devono essere scritti in registrazioni scritte di prova come base per l'analisi e il giudizio dei risultati. I documenti devono essere dettagliati, chiari, autentici, oggettivi e non devono essere alterati o contraffatti.
Requisiti operativi asettici:
1. Quando si inoculano i batteri è necessario indossare abiti da lavoro e un berretto da lavoro.
2. Quando si inoculano campioni alimentari, è necessario indossare indumenti da lavoro speciali, berretti e pantofole, che devono essere collocati nella stanza tampone della stanza sterile e utilizzati dopo la disinfezione UV prima del lavoro.
3. Quando si inoculano campioni alimentari, lavarsi le mani con sapone prima di entrare nella stanza sterile, quindi pulirle con un batuffolo di cotone con alcol al 75%.
4. Le cannucce, i piatti piani e i terreni di coltura utilizzati per l'inoculazione devono essere sterilizzati e sterilizzati. I contenitori non utilizzati non devono essere lasciati inutilizzati dopo l'apertura della confezione. Gli utensili in metallo devono essere autoclavati o bruciati tre volte con alcol al 95% prima dell'uso.
5. Quando si estrae la cannuccia dalla confezione, la punta della cannuccia non deve toccare le parti esposte. Quando si utilizza la cannuccia per inoculare la provetta o la piastra, la punta della cannuccia non deve toccare il bordo della provetta o della piastra.
6. L'inoculazione dei campioni e il trasferimento dei batteri devono essere effettuati davanti a una lampada ad alcool. Quando si inoculano batteri o campioni, la cannuccia deve essere sterilizzata alla fiamma dopo averla estratta dalla confezione e aperto il tappo della provetta.
7. Prima di inoculare i batteri, tutti i fili metallici dell'ansa di inoculazione e dell'ago devono essere bruciati con una fiamma e, se necessario, deve essere bruciato il collegamento tra l'ansa, l'ago e l'asta. L'ansa per inoculare i batteri della tubercolosi e i batteri virulenti deve essere bollita in acqua bollente per 5 minuti e quindi bruciata alla fiamma.
8. Quando si aspirano liquidi batterici o campioni con una cannuccia, utilizzare la punta di gomma corrispondente per aspirarli e non aspirarli direttamente con la bocca.
Requisiti per l'utilizzo della camera sterile:
1. Le finestre che conducono all'esterno della camera sterile devono essere dotate di doppi vetri e sigillate. Non dovrebbero essere aperti a piacimento. Dovrebbe esserci una stanza buffer e una porta scorrevole corrispondente alle dimensioni della stanza sterile. Dovrebbe esserci anche una piccola finestra di 0,5~0,7 m2. In preparazione al passaggio degli oggetti dopo essere entrati nella stanza sterile.
2. La stanza sterile deve essere mantenuta pulita. Dopo il lavoro, è necessario disinfettarlo con una soluzione di sapone cresolo al 2% - 3%, pulire la superficie di lavoro e non conservare oggetti non correlati all'esperimento.
3. La porta della stanza sterile deve essere chiusa ermeticamente prima e dopo l'uso e la lampada a raggi ultravioletti deve essere accesa. Se per la disinfezione viene utilizzata una lampada a raggi ultravioletti sospesa per interni, è necessaria una lampada a raggi ultravioletti da 30 W. La distanza è 1,0 me il tempo di irradiazione non è inferiore a 30 minuti. Quando si utilizzano lampade a raggi ultravioletti, è necessario prestare attenzione a operare direttamente sotto la luce ultravioletta per evitare danni. La lampada deve essere pulita delicatamente con un batuffolo di cotone imbevuto di alcol ogni due settimane per rimuovere polvere e grasso e ridurre l'impatto della penetrazione dei raggi ultravioletti.
4. Durante la lavorazione e l'inoculazione di campioni alimentari, entrare nella stanza sterile per l'operazione e non è consentito entrare o uscire a piacimento. Se è necessario consegnare degli oggetti, è possibile passarli attraverso la piccola finestra.
5. Se è necessario installare l'aria condizionata nella stanza sterile, è necessario che sia presente un dispositivo di filtraggio.
Requisiti di disinfezione e sterilizzazione
Vetreria, utensili metallici e terreni di coltura utilizzatitest microbiologici, le colture contaminate e inoculate, ecc. devono essere sterilizzate prima dell'uso. Metodi di sterilizzazione a vapore con calore secco e calore umido.
1. Preparazione prima della sterilizzazione
(1) Tutti gli articoli che necessitano di essere sterilizzati devono essere prima lavati e asciugati. Vetreria come cannucce e piatti piani devono essere imballati strettamente con carta. Se si utilizzano tubi metallici, i fori di ventilazione su di essi devono essere aperti.
(2) Avvolgere il tappo del matraccio triangolare contenente il terreno di coltura nella carta, coprire la provetta, estrarre il nucleo della siringa e avvolgerla con una garza.
2. installa
(1) Sterilizzatore a calore secco: gli articoli non devono essere sovraffollati e non possono toccare le quattro pareti della scatola.
(2) Pentola a vapore ad alta pressione grande: posizionare gli oggetti sterilizzati, avvolgerli separatamente e inserirli direttamente nel cilindro di sterilizzazione. Non sovraffollare gli articoli.
3. Ispezione dell'attrezzatura
(1) Controllare se l'interruttore della porta è flessibile, se l'anello di gomma è danneggiato e se è piatto.
(2) Controllare se il manometro rimane sulla posizione zero quando il vapore è scarico, chiudere lo sportello e il coperchio, ventilare il vapore o il calore e osservare se vi sono perdite d'aria, se le condizioni contrassegnate dal manometro e dal termometro corrispondono e se la tubazione è bloccata.
(3) Per gli sterilizzatori dotati di dispositivi di controllo elettronico automatico del programma, il programma specificato deve essere controllato prima dell'uso per verificare se soddisfa i requisiti per la sterilizzazione.
4. Trattamento di sterilizzazione
(1) Metodo di sterilizzazione a calore secco:
Questo metodo è adatto per articoli che non si danneggiano, si deteriorano o evaporano in condizioni di calore secco. È più comunemente usato per sterilizzare vetreria, prodotti in metallo, prodotti in ceramica, ecc.
①Gli strumenti e gli utensili devono essere lavati prima della cottura a secco per evitare che lo sporco attaccato alla superficie venga carbonizzato.
② Durante la sterilizzazione, gli articoli non devono essere sovraffollati, non devono entrare in contatto diretto con il fondo e le pareti della scatola e lasciare spazi tra gli articoli.
③ Durante la sterilizzazione, chiudere bene la porta, collegare l'alimentazione, aprire il foro di scarico per circa 30 minuti per rimuovere l'aria fredda nello sterilizzatore, regolare la spia quando la temperatura sale a 160°C e mantenerla per 1,5 - 2 ore.
④Una volta completata la sterilizzazione o durante il processo di aumento della temperatura, la porta deve essere aperta a una temperatura inferiore a 60°C.
(2) Quando si utilizza una pentola a pressione portatile o uno sterilizzatore a vapore a pressione verticale è necessario seguire i seguenti passaggi:
① Aggiungere 3 litri di acqua al corpo principale della pentola a pressione portatile e 16 litri di acqua alla pentola a pressione verticale (la quantità di acqua deve essere reintegrata quando riutilizzata e l'acqua deve essere sostituita se diventa torbida);
② Per una pentola a pressione portatile, inserire il tubo di scarico sul coperchio superiore nel tubo quadrato sulla parete interna del barile di sterilizzazione (non devono essere utilizzati sterilizzatori senza tubo o con tubi corrosi e fessurati);
③ Coprire il coperchio superiore e serrarlo saldamente per evitare perdite d'aria; posizionare lo sterilizzatore sulla fonte di fuoco per riscaldarlo, accendere la pentola a pressione verticale e aprire la valvola di scarico sul coperchio superiore per far uscire l'aria (aria di scarico per 10-15 minuti dopo l'ebollizione dell'acqua));
④Chiudere la valvola di scarico per aumentare la pressione del vapore ai requisiti specificati e mantenerla per il tempo specificato (a seconda della natura degli articoli sterilizzati e delle circostanze pertinenti);
⑤ Una volta raggiunto il tempo specificato, per gli articoli che devono essere asciugati, aprire immediatamente la valvola di scarico per scaricare il vapore. Quando la pressione ritorna a zero, raffreddarla naturalmente a 60°C e quindi aprire il coperchio per estrarre gli oggetti. Se si tratta di un oggetto liquido, non aprire la valvola di scarico. La pentola va tolta immediatamente dalla fonte di calore e lasciata raffreddare naturalmente finché la pressione non ritorna a zero e la temperatura scende sotto i 60°C prima di aprire il coperchio per estrarre il contenuto per evitare la decompressione improvvisa del liquido dovuta a ebollizione violenta o esplosione del contenitore.
(3) Seguire i seguenti passaggi per utilizzare lo sterilizzatore a vapore per pentola a pressione orizzontale:
①Chiudere bene lo sportello della pentola, aprire la valvola di ingresso dell'aria, introdurre vapore nel soppalco per il preriscaldamento e l'aria fredda nel soppalco verrà automaticamente scaricata attraverso la barriera d'aria;
②Dopo che lo strato intermedio raggiunge la temperatura predeterminata, aprire la valvola di ingresso dell'aria della camera del vaso, introdurre il vapore nella camera del vaso e l'aria fredda nella camera del vaso verrà automaticamente scaricata attraverso il dispositivo di arresto dell'aria della camera del vaso;
③Quando la pressione e la temperatura nella camera del vaso raggiungono la pressione specificata, regolare la valvola di ingresso dell'aria per mantenerla costante;
④ Raffreddare la temperatura in modo naturale o artificiale a 60 ℃ prima di aprire la porta per estrarre gli oggetti. Non utilizzare il metodo di scarico rapido del vapore per evitare improvvise cadute di pressione, ebollizione violenta del liquido o esplosione del contenitore;
⑤ Quando si utilizza uno sterilizzatore a vapore a pressione controllata da programma automatico, dopo aver posizionato gli articoli e chiuso bene la porta, è necessario premere l'interruttore corrispondente in base alla categoria degli articoli in modo che la sterilizzazione possa essere eseguita automaticamente secondo le procedure richieste. Durante la sterilizzazione, lo strumento allegato deve essere utilizzato per registrare la temperatura e l'ora. Per riferimento futuro, i requisiti operativi dovrebbero essere rigorosamente conformi alle istruzioni del produttore;
5. Temperatura e tempo di sterilizzazione
(1) La temperatura di sterilizzazione dello sterilizzatore a calore secco è 160 ℃, 1,5 ~ 2 ore.
(2) Temperatura e tempo di sterilizzazione dello sterilizzatore a vapore a pressione
Metodo di sterilizzazione intermittente
1. Metodo di sterilizzazione:
Utilizzare la sterilizzazione a vapore senza pressione. Alcune sostanze vengono facilmente distrutte dalla sterilizzazione a vapore ad alta pressione, quindi questo metodo può essere utilizzato per la sterilizzazione.
(1) Posizionare gli oggetti da sterilizzare nella pentola, coprire il coperchio superiore, aprire l'uscita di scarico e scaricare l'acqua rimanente nella pentola.
(2) Chiudere l'uscita di scarico, aprire lo sportello di ingresso dell'aria e disinfettare per 10-20 minuti secondo necessità.
(3) Una volta completata la sterilizzazione, chiudere lo sportello di ingresso dell'aria, estrarre gli articoli e attendere che si raffreddino a temperatura ambiente, metterli in un'incubatrice a 37°C durante la notte e continuare a sterilizzare secondo il metodo sopra indicato il giorno successivo. Fatelo tre volte per raggiungere lo scopo della sterilizzazione.
2. Come utilizzare il coagulatore del siero:
Quando il terreno di coltura contiene ingredienti speciali come siero o uova, il calore elevato ne distruggerà i nutrienti. Pertanto, è possibile utilizzare la bassa temperatura per coagulare il siero e raggiungere scopi di sterilizzazione:
(1) Quando si utilizza siero sterilizzato con questo metodo per l'aliquota, è necessario seguire rigorosamente le operazioni asettiche e anche le provette e le piastre devono essere sterilizzate prima dell'uso;
(2) Trasformare il terreno di coltura in uno strato inclinato o alto come richiesto. Dopo aver aggiunto abbastanza acqua, collegare l'alimentatore, aumentare la temperatura a 75~90°C per un'ora e quindi sterilizzarlo. Mettilo in un'incubatrice a 37°C per una notte, quindi sterilizzalo tre volte.
3. Bollire e disinfettare:
Puoi usare una pentola bollente o uno sterilizzatore bollente. Dopo che l'acqua bolle, farla bollire per 5-15 minuti. Puoi anche aggiungere il 2% di acido fenico all'acqua e farla bollire per 5 minuti. Aggiungere lo 0,02% di formaldeide e far bollire a 80°C per 60 minuti per raggiungere lo scopo della sterilizzazione. Tuttavia, è possibile ottenere la sterilizzazione mediante bollitura. Quando si utilizzano potenziatori, è necessario prestare attenzione alla corrosività degli articoli.
4. Trattamento di sterilizzazione:
Dopo la sterilizzazione, gli articoli sono già sterili in circostanze normali. Devono essere attentamente ispezionati e posizionati quando vengono estratti dallo sterilizzatore per evitare la ricontaminazione;
(1) Estrarre gli articoli e verificare immediatamente l'integrità dell'imballaggio. Se è danneggiato o il tampone viene rimosso, non può essere utilizzato come articolo sterile;
(2) Gli articoli prelevati non possono essere utilizzati come articoli sterili se la loro confezione è evidentemente immersa nell'acqua;
(3) Il terreno di coltura o i reagenti devono essere controllati per vedere se soddisfano il colore o lo stato dopo la sterilizzazione. Quelli che non soddisfano i requisiti dovrebbero essere scartati;
(4) Per i contenitori apri-chiudi, i fori dello schermo devono essere chiusi quando li si estrae;
(5) Se gli oggetti rimossi cadono a terra, vengono smarriti in un luogo sporco o sono macchiati d'acqua, sono considerati contaminati e non possono essere utilizzati come articoli sterili;
(6) Gli articoli sterilizzati qualificati prelevati devono essere conservati nel magazzino o nell'armadio antipolvere ed è severamente vietato mescolarli con articoli non sterilizzati;
(7) Tutti gli articoli qualificati devono essere contrassegnati con la data di sterilizzazione e la data di scadenza;
(8) Al termine di ogni lotto di processo di sterilizzazione, registrare il nome, la quantità, la temperatura, l'ora e l'operatore dei prodotti sterilizzati.
Requisiti per il trattamento dei rifiuti tossici e batterici
Le attrezzature sperimentali e le colture utilizzate negli esperimenti microbiologici non devono essere portate fuori dal laboratorio senza disinfezione.
1. I materiali e i rifiuti coltivati contaminati devono essere collocati in contenitori stretti o cestelli metallici e conservati centralmente in luoghi designati finché non vengono sterilizzati in autoclave in modo uniforme.
2. Le colture contaminate da microrganismi devono essere autoclavate a 121°C per 30 minuti.
3. Dopo l'uso, le cannucce contaminate devono essere poste in una soluzione di sapone creolo al 5% o in una soluzione di acido carbolico, immerse per almeno 24 ore (il liquido disinfettante non deve essere inferiore all'altezza di immersione) e quindi sterilizzate ad alta pressione a 121°C per 30 minuti.
4. Il liquido per la colorazione e il risciacquo degli strisci può generalmente essere scaricato direttamente nella fogna. Il liquido di lavaggio per i batteri virulenti deve essere scaricato in un bicchiere e sterilizzato ad alta pressione prima di essere versato nella fogna. I vetrini colorati vengono immersi in una soluzione di sapone cresolo al 5%. Dopo l'immersione in acqua per 24 ore, far bollire e lavare. I vetrini o le piastre utilizzate per i test di agglutinazione devono essere autoclavati e poi lavati.
5. Dopo aver rotto la coltura, spruzzare e immergere immediatamente le parti contaminate con una soluzione di sapone cresolo al 5% o una soluzione di acido carbolico, immergere per mezz'ora e quindi pulire.
Gli indumenti da lavoro contaminati o gli indumenti da lavoro, berretti, maschere, ecc. indossati per prove violente devono essere riposti in appositi sacchetti di disinfezione e sterilizzati ad alta pressione prima di essere lavati.
Requisiti di preparazione medi
La qualità della preparazione del terreno di coltura influenzerà direttamente la crescita dei microrganismi, poiché i vari microrganismi hanno esigenze nutrizionali e scopi di coltura diversi. I requisiti di preparazione per i vari terreni di coltura sono i seguenti:
1. Pesare gli ingredienti secondo la formula media, quindi scioglierli in acqua distillata. La qualità dei reagenti e dei farmaci applicati deve essere ispezionata prima dell'uso.
2. Misurazione e regolazione del pH: la misurazione del pH deve essere effettuata quando il terreno di coltura è raffreddato a temperatura ambiente, poiché esiste una certa differenza di pH in condizioni calde o fredde. Una volta completata la misurazione, aggiungere alcali o acido in base alla quantità calcolata e mescolare bene. Dovrebbe essere testato di nuovo. Il valore del pH del terreno di coltura deve essere accurato, altrimenti influenzerà la crescita dei microrganismi o influenzerà l'osservazione dei risultati. Tuttavia, va notato che la sterilizzazione ad alta pressione può influenzare la diminuzione o l'aumento del pH di alcuni terreni di coltura, quindi non è consigliabile sterilizzare ad una pressione troppo elevata o troppe volte per evitare di compromettere la qualità del terreno di coltura. Gli indicatori, il desossicolato di sodio, l'agar, ecc. vengono generalmente aggiunti dopo aver regolato il pH.
3. Il terreno di coltura deve essere mantenuto pulito per facilitare l'osservazione della crescita batterica. Dopo che il terreno di coltura è stato riscaldato e bollito, può essere filtrato con cotone assorbente o flanella per rimuovere i sedimenti. Se necessario si può chiarificare con albume d'uovo. Le strisce di agar utilizzate devono essere preventivamente lavate e asciugate. Prima dell'uso, evitare di alterare la trasparenza a causa delle impurità presenti nell'agar.
4. Per contenere il terreno di coltura non devono essere utilizzati contenitori di ferro, rame e altri. È preferibile utilizzare contenitori di vetro duro neutro pulito.
5. La sterilizzazione del terreno di coltura non deve solo raggiungere lo scopo di completa sterilizzazione, ma anche prestare attenzione a non ridurne il valore nutritivo a causa del riscaldamento. In genere sono sufficienti 121°C per 15 minuti. I terreni di coltura contenenti sostanze intolleranti al calore elevato come zuccheri e siero, gelatina, ecc., devono essere sterilizzati a bassa temperatura o con metodo intermittente. Alcuni reagenti che non possono essere riscaldati, come il tellurito di potassio, il tuorlo d'uovo, il TTC, gli antibiotici, ecc., dovrebbero essere raffreddati a circa 50°C dopo che l'agar basico è stato autoclavato e quindi aggiunti;
6. Dopo aver preparato ciascun lotto di terreni di coltura, è necessario eseguire un test di crescita sterile e un test di crescita dei ceppi testati. Se si tratta di un terreno di coltura biochimico, utilizzare ceppi batterici standard per l'inoculazione e la coltura e osservare i risultati della reazione biochimica. Dovrebbe mostrare una reazione normale. Il terreno di coltura non deve essere conservato troppo a lungo. Se necessario può essere conservato in frigorifero a 4°C.
7. Attualmente esistono molti tipi di terreni di coltura secchi. Ogni lotto deve utilizzare ceppi standard per test di crescita o osservazione di reazioni biochimiche. Vari terreni di coltura possono essere utilizzati solo dopo che il test di crescita dei ceppi corrispondenti è risultato positivo. È possibile utilizzare quelli appena acquistati o essiccati che sono stati conservati per lungo tempo. Durante la preparazione è necessario misurare anche il pH del terreno di coltura e seguire il dosaggio e il metodo secondo le istruzioni del prodotto.
8. I reagenti chimici, le condizioni di sterilizzazione, i risultati dei test di crescita dei ceppi e il personale di produzione utilizzati in ciascun lotto di terreni di coltura preparati devono essere registrati per eventuali indagini.
Requisiti per la raccolta e il trattamento dei campioni
1. I campioni di ispezione raccolti devono essere rappresentativi. Durante il campionamento, le materie prime, la lavorazione, il trasporto, i metodi di conservazione e le condizioni del lotto di cibo, le condizioni di salute ambientale circostante, ecc. dovrebbero essere studiati in dettaglio per verificare se esistono fonti di contaminazione.
2. A seconda del tipo e della quantità di cibo, la quantità e il metodo di campionamento devono essere eseguiti in conformità con i requisiti dei metodi di ispezione standard.
3. Prestare attenzione al funzionamento asettico durante il campionamento e il contenitore deve essere sterilizzato per evitare la contaminazione microbica nell'ambiente. Il contenitore non deve essere sterilizzato con soluzione di sapone creosa, sterilizzazione con clormetionina, alcool e altri disinfettanti e non deve contenere tali disinfettanti o antibiotici. Per evitare la morte dei microrganismi presenti nel campione, anche le forbici, i coltelli e i cucchiai utilizzati devono essere sterilizzati prima dell'uso.
4. I campioni devono essere inviati alla sala di ispezione per l'ispezione immediatamente dopo la raccolta. Il processo di ispezione generalmente non supera le 3 ore. Se la distanza è lunga, può essere conservata in un ambiente con temperatura compresa tra 1 e 5 ℃. Se deve essere congelato, deve essere conservato congelato. Presentare per ispezione.
5. Dopo aver ricevuto il campione, la sala di ispezione lo registrerà (nome del campione, unità di ispezione, quantità, data, numero, ecc.) e osserverà l'aspetto del campione. Se viene riscontrata una delle seguenti condizioni, l'ispezione può essere rifiutata:
(1) I campioni che sono stati sterilizzati mediante metodi speciali ad alta pressione, bollitura o altri metodi perderanno il loro significato nel rappresentare l'alimento originale;
(2) Bottiglie e sacchetti di cibo sono stati aperti, carne cotta e suoi prodotti, pollame cotto e altri alimenti sono stati rotti e incompleti, ovvero la forma originale del cibo è andata perduta (ad eccezione dei campioni di intossicazione alimentare);
(3) La quantità di campionamento è insufficiente rispetto a quanto richiesto;
Per i campioni presentati per l'ispezione che soddisfano i requisiti, la sala di ispezione deve condurre immediatamente l'ispezione dopo averli ricevuti. Se le condizioni non sono soddisfatte, devono essere conservate in un frigorifero a 4°C, prepararsi a creare le condizioni in tempo e quindi condurre l'ispezione.
6. Quando si ispezionano i campioni, eseguire l'elaborazione appropriata in base alle loro diverse proprietà.
(1) Quando si inoculano campioni liquidi, è necessario miscelarli accuratamente e inocularli in base alla quantità.
(2) Per i campioni solidi, utilizzare un coltello sterilizzato per ritagliare 25 g di parti diverse, collocarle in 225 ml di soluzione salina sterilizzata o altre soluzioni, frantumare e mescolare con un omogeneizzatore e inoculare in base alla quantità.
(3) Le bottiglie e i sacchetti degli alimenti devono essere aperti mediante sterilizzazione e i metodi sopra indicati devono essere selezionati in base alle caratteristiche prima dell'inoculazione.
Requisiti di ispezione, registrazione e reporting dei campioni
1. Dopo aver ricevuto il campione, la sala di ispezione effettuerà innanzitutto un'ispezione estetica e condurrà tempestivamente l'ispezione in conformità con i metodi di ispezione standard nazionali. Durante il processo di ispezione, le operazioni asettiche devono essere eseguite con attenzione, responsabilità e rigorosamente da evitarerisultato del test microbicocontaminazione nell’ambiente.
2. I metodi utilizzati durante il processo di ispezione del campione, i fenomeni e i risultati che si sono verificati, ecc. devono essere scritti in registrazioni scritte di prova come base per l'analisi e il giudizio dei risultati. I documenti devono essere dettagliati, chiari, autentici, oggettivi e non devono essere alterati o contraffatti.
