Mikrobiológiai vizsgálati követelmények összefoglalása
2024-01-24 15:14:33
A követelmények és lépésekmikrobiológiai vizsgálata következők:
Aszeptikus működési követelmények:
1.A baktériumok beoltásakor munkaruhát és munkasapkát kell viselnie.
2. Élelmiszerminták beoltásakor speciális munkaruhát, sapkát, papucsot kell viselni, melyet a steril helyiség pufferhelyiségében kell elhelyezni, és a munka előtt UV fertőtlenítés után felhasználni.
3. Élelmiszerminták beoltásakor mosson kezet szappannal, mielőtt belép a steril helyiségbe, majd törölje le a kezét egy 75%-os alkoholos vattakoronggal.
4. Az oltáshoz használt szívószálakat, lapos edényeket és táptalajokat sterilizálni és sterilizálni kell. A fel nem használt tartályokat a csomagolás felbontása után nem szabad kihasználatlanul hagyni. A fém edényeket használat előtt autoklávozni kell, vagy háromszor elégetni 95%-os alkohollal.
5. Amikor kiveszi a szívószálat a csomagolásból, a szívószál hegye nem érhet hozzá a szabadon lévő részekhez. Ha a szívószálat a kémcső vagy a lemez beoltására használjuk, a szívószál hegye nem érintheti a kémcső vagy a lemez szélét.
6. A minták beoltását és a baktériumok átvitelét alkohollámpa előtt kell végezni. Baktériumok vagy minták beoltásakor a szívószálat a csomagolásból való kivétel és a kémcsődugó kinyitása után lánggal sterilizálni kell.
7. Baktériumok beoltása előtt az oltóhurok és tű összes fémhuzalát lánggal kell megégetni, és szükség esetén a hurok, tű és rúd csatlakozását meg kell égetni. A tuberkulózisbaktériumok és virulens baktériumok beoltására szolgáló oltóhurkot forrásban lévő vízben 5 percig forralni kell, majd lánggal meg kell égetni.
8. Baktériumfolyadék vagy minta szívószállal történő felszívásakor használja a megfelelő gumihegyet a szíváshoz, és ne szívja közvetlenül a szájával.
A steril helyiség használatának követelményei:
1. A steril helyiségből kifelé vezető ablakokat dupla üvegezésűek és le kell zárni. Nem szabad tetszés szerint kinyitni. Legyen a steril helyiség méretének megfelelő pufferhelyiség és tolóajtó. Legyen egy kis ablak is, 0,5–0,7 m2. Felkészülés a tárgyak átadására a steril helyiségbe való belépés után.
2. A steril helyiséget tisztán kell tartani. Munkavégzés után 2-3%-os krezolos szappanoldattal fertőtleníteni kell, a munkafelületet le kell törölni, a kísérlethez nem kapcsolódó tárgyakat nem szabad tárolni.
3. A steril helyiség ajtaját használat előtt és után szorosan be kell zárni, és fel kell kapcsolni az ultraibolya lámpát. Ha beltéri felfüggesztett ultraibolya lámpát használnak a fertőtlenítéshez, akkor 30 W-os ultraibolya lámpára van szükség. A távolság 1,0 m, a besugárzási idő pedig nem kevesebb, mint 30 perc. Ultraibolya lámpák használatakor ügyeljen arra, hogy a károsodás elkerülése érdekében közvetlenül ultraibolya fény alatt működjön. A lámpát kéthetente óvatosan le kell törölni egy alkoholos vattakoronggal, hogy eltávolítsa a port és a zsírt, hogy csökkentse az ultraibolya behatolás hatását.
4. Élelmiszerminták feldolgozása és beoltása során menjen be a steril helyiségbe, és tetszés szerint nem léphet be vagy onnan ki. Ha tárgyakat kell továbbadni, akkor azokat a kis ablakon át lehet adni.
5. Ha légkondicionálást kell beszerelni a steril helyiségbe, akkor legyen szűrőberendezés.
Fertőtlenítési és sterilizálási követelmények
Ehhez használt üvegedények, fémedények és táptalajokmikrobiológiai vizsgálat, a szennyezett és beoltott kultúrákat stb. használat előtt sterilizálni kell. Száraz hő és nedves hőnyomásos gőzsterilizálási módszerek.
1. Sterilizálás előtti előkészítés
(1) Minden sterilizálandó tárgyat először ki kell mosni és meg kell szárítani. Az üvegedényeket, például a szívószálakat és a lapos edényeket szorosan be kell csomagolni papírral. Fémcsövek használata esetén a rajtuk lévő szellőzőnyílásokat ki kell nyitni.
(2) Tekerje papírba a táptalajt tartalmazó háromszöglombik dugóját, fedje le a kémcsövet, és húzza ki a fecskendő magját, és tekerje be gézzel.
2. telepíteni
(1) Száraz hővel sterilizáló: A tárgyak nem lehetnek túlzsúfolva, és nem érinthetik meg a doboz négy falát.
(2) Nagy, nagynyomású gőzfőző: Helyezze be a sterilizált tárgyakat, csomagolja be őket külön, és tegye közvetlenül a sterilizáló hengerbe. Ne zsúfolja túl az elemeket.
3. Berendezés ellenőrzés
(1) Ellenőrizze, hogy az ajtókapcsoló rugalmas-e, nem sérült-e meg a gumigyűrű, és hogy lapos-e.
(2) Ellenőrizze, hogy a nyomásmérő nulla pozícióban marad-e, amikor a gőz kiürül, zárja be az ajtót és a fedelet, szellőztesse ki a gőzt vagy a hőt, és figyelje meg, hogy nincs-e levegőszivárgás, a nyomásmérő és a hőmérő által jelzett feltételek megegyeznek-e, és nincs-e elzárva a csővezeték.
(3) Automatikus elektronikus programvezérlő eszközökkel rendelkező sterilizátorok esetén a megadott programot használat előtt ellenőrizni kell, hogy megfelel-e a sterilizálási követelményeknek.
4. Sterilizációs kezelés
(1) Száraz hővel történő sterilizálási módszer:
Ez a módszer olyan tárgyakhoz alkalmas, amelyek nem károsodnak, nem romlanak el vagy párolognak el száraz hő mellett. Gyakrabban használják üvegáruk, fémtermékek, kerámiatermékek stb. sterilizálására.
①A műszereket és edényeket száraz sütés előtt ki kell mosni, nehogy a felületre tapadt szennyeződés elszenesedjen.
② A sterilizálás során a tárgyak nem lehetnek túlzsúfolva, ne érjenek közvetlenül a doboz aljához és falához, és ne hagyjanak réseket a tárgyak között.
③ Sterilizálás közben szorosan zárja be az ajtót, csatlakoztassa a tápegységet, nyissa ki a kipufogónyílást körülbelül 30 percre, hogy eltávolítsa a sterilizátorban lévő hideg levegőt, állítsa be a jelzőfényt, ha a hőmérséklet 160 °C-ra emelkedik, és tartsa fenn 1,5-2 órán keresztül.
④A sterilizálás befejezése után vagy a hőmérséklet-emelkedési folyamat során az ajtót 60°C alatt ki kell nyitni.
(2) A következő lépéseket kell követni, ha hordozható kukta vagy függőleges nyomású gőzsterilizátort használ:
① Adjon hozzá 3 l vizet a hordozható kukta testéhez, és 16 l vizet a függőleges gyorsfőzőhöz (a vízmennyiséget újrafelhasználáskor pótolni kell, és a vizet ki kell cserélni, ha zavarossá válik);
② Hordozható kukta esetén illessze be a felső burkolat kipufogócsövét a sterilizáló hordó belső falán lévő négyzet alakú csőbe (tömlő nélküli vagy korrodált és repedezett tömlővel rendelkező sterilizátorokat nem szabad használni);
③ Fedje le a felső fedelet, és húzza meg szorosan, hogy megakadályozza a levegő szivárgását; helyezze a sterilizátort a tűzforrásra, hogy felmelegedjen, kapcsolja be a függőleges kukta teljesítményét, és nyissa ki a felső fedél kipufogószelepét, hogy kiengedje a levegőt (az elszívott levegő 10-15 percig a víz felforrása után) );
④ Zárja el a kipufogószelepet, hogy a gőznyomást a megadott követelményekre emelje, és tartsa fenn a megadott ideig (a sterilizált cikkek jellegétől és a releváns körülményektől függően);
⑤ A megadott idő letelte után a szárítandó ruhadaraboknál azonnal nyissa ki a kipufogószelepet a gőz kiürítéséhez. Amikor a nyomás visszaáll nullára, természetesen hűtse le 60°C-ra, majd nyissa ki a fedelet, hogy kivehesse az elemeket. Ha folyékony tárgyról van szó, ne nyissa ki a kipufogószelepet. Az edényt azonnal el kell távolítani a hőforrásról, és hagyni kell természetes módon kihűlni, amíg a nyomás nullára nem esik, és a hőmérséklet 60 °C alá csökken, mielőtt kinyitná a fedőt, hogy kivegye a tartalmát, hogy megakadályozza a folyadék hirtelen dekompresszióját az edény heves felforrása vagy felrobbanása miatt.
(3) Kövesse az alábbi lépéseket a vízszintes gyorsfőző gőzsterilizáló használatához:
① Zárja be szorosan az edény ajtaját, nyissa ki a levegő bemeneti szelepet, vezesse be a gőzt a mezzanine-ba az előmelegítéshez, és a mezzanine hideg levegője automatikusan távozik a légzáron keresztül;
② Miután a közbenső réteg elérte az előre meghatározott hőmérsékletet, nyissa ki az edénykamra levegőbemeneti szelepét, vezesse be a gőzt az edénykamrába, és az edénykamrában lévő hideg levegő automatikusan kiürül az edénykamra léglevezetőjén keresztül;
③ Amikor a nyomás és a hőmérséklet az edénykamrában eléri a megadott nyomást, állítsa be a levegőbemeneti szelepet, hogy az állandó maradjon;
④ Hűtse le a hőmérsékletet természetesen vagy mesterségesen 60 ℃-ra, mielőtt kinyitná az ajtót a tárgyak kivételéhez. Ne használja a gyors gőzürítési módszert a hirtelen nyomásesés, a folyadék heves forrásának vagy a tartály felrobbanásának elkerülésére;
⑤ Automatikus programvezérelt nyomású gőzsterilizáló használatakor a cikkek elhelyezése és az ajtó szoros bezárása után a megfelelő kapcsolót kell megnyomni a cikkek kategóriájának megfelelően, hogy a sterilizálás automatikusan elvégezhető legyen a szükséges eljárások szerint. A sterilizálás során a mellékelt műszerrel kell rögzíteni a hőmérsékletet és az időt. A jövőbeni hivatkozás érdekében az üzemeltetési követelményeknek szigorúan meg kell felelniük a gyártó utasításainak;
5. Sterilizálási hőmérséklet és idő
(1) A száraz hősterilizáló sterilizálási hőmérséklete 160 ℃, 1,5 ~ 2 óra.
(2) A nyomás alatti gőzsterilizátor sterilizálási hőmérséklete és ideje
Időszakos sterilizálási módszer
1. Sterilizálási módszer:
Használjon nyomás nélküli gőzsterilizálást. Egyes anyagok könnyen megsemmisülnek a nagynyomású gőzsterilizálással, így ez a módszer alkalmas a sterilizálásra.
(1) Helyezze a sterilizálandó tárgyakat az edénybe, fedje le a felső fedelet, nyissa ki a lefolyónyílást, és engedje le az edényben lévő maradék vizet.
(2) Zárja el a lefolyó kimenetet, nyissa ki a levegő bemeneti ajtót, és szükség szerint fertőtlenítsen 10-20 percig.
(3) A sterilizálás befejezése után zárja be a levegőbemeneti ajtót, vegye ki a tárgyakat, és várja meg, amíg lehűl szobahőmérsékletre, helyezze őket egy éjszakára 37 °C-os inkubátorba, és másnap folytassa a sterilizálást a fenti módszer szerint. Ezt háromszor végezze el a sterilizálás céljának elérése érdekében.
2. A szérum koagulátor használata:
Ha a táptalaj speciális összetevőket, például szérumot vagy tojást tartalmaz, a magas hő tönkreteszi a tápanyagait. Ezért alacsony hőmérsékleten a szérum koagulálható és sterilizálási célok érhetők el:
(1) Ha ezzel a módszerrel sterilizált szérumot használunk aliquot adagolására, szigorúan be kell tartani az aszeptikus műveleteket, és a kémcsöveket és a lemezeket is sterilizálni kell használat előtt;
(2) Szükség szerint alakítsa ki a táptalajt lejtős vagy magas rétegűvé. Elegendő víz hozzáadása után csatlakoztassa a tápegységet, emelje a hőmérsékletet 75-90°C-ra egy órára, majd sterilizálja. Helyezze egy éjszakára 37°C-os inkubátorba, majd sterilizálja háromszor.
3. Forraljuk fel és fertőtlenítsük:
Használhat főzőedényt vagy forró sterilizálót. Miután a víz felforrt, forraljuk 5-15 percig. 2%-os karbolsavat is adhatunk a vízhez, és forraljuk 5 percig. Adjunk hozzá 0,02% formaldehidet, és forraljuk 80°C-on 60 percig, hogy elérjük a sterilizálás célját. A forrásban lévő sterilizálás azonban elérhető. Fokozószerek használatakor ügyelni kell a tárgyak maró hatására.
4. Sterilizációs kezelés:
A sterilizálás után a tárgyak normál körülmények között már sterilek. Gondosan meg kell vizsgálni és el kell helyezni, amikor kivesszük a sterilizátorból, hogy elkerüljük az újraszennyeződést;
(1) Vegye ki a tételeket, és azonnal ellenőrizze a csomagolás sértetlenségét. Sérülés vagy a tampon eltávolítása esetén nem használható steril tárgyként;
(2) A kivett tárgyak nem használhatók fel steril tárgyként, ha a csomagolásuk nyilvánvalóan vízbe ázott;
(3) A táptalajt vagy a reagenseket ellenőrizni kell, hogy megfelelnek-e a sterilizálás utáni színnek vagy állapotnak. Azokat, amelyek nem felelnek meg a követelményeknek, el kell dobni;
(4) Nyitott-zárt tartályok esetén a szitanyílásokat le kell zárni, amikor kiveszi őket;
(5) Ha az eltávolított tárgyak a földre esnek, tisztátalan helyre kerültek, vagy vízzel szennyezettek, szennyezettnek minősülnek, és nem használhatók steril tárgyként;
(6) A kivett minősített sterilizált tárgyakat a tárolóhelyiségben vagy porálló szekrényben kell tárolni, és szigorúan tilos azokat nem sterilizált tárgyakkal keverni;
(7) Minden minősített tételen fel kell tüntetni a sterilizálás dátumát és a lejárati dátumot;
(8) A sterilizálási folyamat minden egyes tétele után jegyezze fel a sterilizált termékek nevét, mennyiségét, hőmérsékletét, idejét és kezelőjét.
A mérgező és bakteriális hulladékok kezelésére vonatkozó követelmények
A mikrobiológiai kísérletekben használt kísérleti berendezéseket, tenyészeteket fertőtlenítés nélkül nem szabad kivinni a laboratóriumból.
1. A tenyésztett szennyezett anyagokat és hulladékokat szoros tárolóedényekbe vagy drótkosarakba kell helyezni, és központilag, a kijelölt helyeken kell tárolni, amíg egyenletesen autoklávozik.
2. A mikroorganizmusokkal szennyezett tenyészeteket 121°C-on 30 percig autoklávozni kell.
3. Használat után a szennyezett szívószálakat 5%-os kreol szappanoldatba vagy karbolsav oldatba kell helyezni, legalább 24 órán át áztatni (a fertőtlenítő folyadék nem lehet alacsonyabb az áztatási magasságnál), majd 30 percig nagy nyomáson, 121°C-on sterilizálni.
4. A festéshez és öblítéshez használt folyadék általában közvetlenül a csatornába öblíthető. A virulens baktériumok számára készült öblítőfolyadékot főzőpohárba kell öblíteni, és nagy nyomással sterilizálni kell, mielőtt a csatornába öntik. A megfestett tárgylemezeket 5%-os krezolos szappanoldatba helyezzük. 24 órás vízben áztatás után forraljuk fel és mossuk le. Az agglutinációs vizsgálathoz használt tárgylemezeket vagy edényeket autoklávozni kell, majd el kell mosni.
5. A tenyészet feltörése után azonnal permetezze be és áztassa be a szennyezett részeket 5%-os krezol-szappanoldattal vagy karbolsavoldattal, áztassa fél óráig, majd törölje le.
A szennyezett munkaruhát vagy az erőszakos vizsgálatokhoz viselt munkaruhát, sapkát, maszkot stb. speciális fertőtlenítő zsákokba kell helyezni, és mosás előtt nagy nyomáson sterilizálni kell.
Közepes előkészítési követelmények
A táptalaj elkészítésének minősége közvetlenül befolyásolja a mikroorganizmusok növekedését, mivel a különböző mikroorganizmusok eltérő táplálkozási igényekkel és eltérő tenyésztési célokkal rendelkeznek. A különböző táptalajok előkészítési követelményei a következők:
1. Mérjük le az összetevőket a közepes képlet szerint, majd oldjuk fel desztillált vízben. Az alkalmazott reagensek és gyógyszerek minőségét használat előtt ellenőrizni kell.
2. pH mérés és beállítás: A pH mérést akkor kell elvégezni, amikor a táptalajt szobahőmérsékletre hűtjük, mert meleg vagy hideg körülmények között bizonyos pH-különbség van. A mérés befejeztével adjon hozzá lúgot vagy savat a számított mennyiségnek megfelelően, és jól keverje össze. Újra tesztelni kellene. A táptalaj pH-értékének pontosnak kell lennie, különben befolyásolja a mikroorganizmusok szaporodását vagy befolyásolja az eredmények megfigyelését. Figyelembe kell azonban venni, hogy a nagynyomású sterilizálás befolyásolhatja egyes táptalajok pH-jának csökkenését vagy növekedését, ezért nem célszerű túl nagy nyomáson vagy túl sokszor sterilizálni, hogy elkerüljük a táptalaj minőségének befolyásolását. Indikátorok, nátrium-dezoxikolát, agar stb. általában a pH beállítása után adja hozzá.
3. A táptalajt tisztán kell tartani, hogy megkönnyítsük a baktériumok növekedésének megfigyelését. A táptalaj felmelegítése és forralása után nedvszívó pamuttal vagy flanellel szűrhető az üledék eltávolítása érdekében. Ha szükséges, tojásfehérjével deríthetjük. A felhasznált agarcsíkokat előzetesen ki kell mosni és meg kell szárítani. Használat előtt ne befolyásolja az átlátszóságot az agarban lévő szennyeződések miatt.
4. Vas-, réz- és egyéb edények nem használhatók a táptalaj tárolására. Jobb, ha tiszta, semleges keményüveg edényt használ.
5. A táptalaj sterilizálásának nemcsak a teljes sterilizálás célját kell elérnie, hanem arra is figyelni kell, hogy a tápérték a melegítés miatt ne csökkenjen. Általában 121°C 15 percig elegendő. A magas hőt nem tűrő anyagokat, például cukrot és szérumot, zselatint stb. tartalmazó táptalajokat alacsony hőmérsékleten vagy szakaszos módszerrel kell sterilizálni. Egyes nem melegíthető reagenseket, például kálium-telluritot, tojássárgáját, TTC-t, antibiotikumokat stb., le kell hűteni körülbelül 50 °C-ra az alapagar autoklávozása után, majd hozzáadni kell;
6. A táptalaj minden tételének elkészítése után steril növekedési tesztet és a vizsgált törzsek növekedési tesztjét kell elvégezni. Ha biokémiai táptalajról van szó, használjon standard baktériumtörzseket az oltáshoz és a tenyésztéshez, és figyelje meg a biokémiai reakció eredményeit. Normális reakciót kell mutatnia. A táptalajt nem szabad túl sokáig tárolni. Szükség esetén 4°C-os hűtőszekrényben is tárolható.
7. Jelenleg sokféle száraz táptalaj létezik. Minden tételben standard törzseket kell használni a növekedési teszthez vagy a biokémiai reakció megfigyeléséhez. Különféle táptalajok csak akkor használhatók, ha a megfelelő törzsek növekedési tesztje megfelelő. Használhatók az újonnan vásárolt vagy kiszáradtak, amelyeket sokáig tároltak. Elkészítésénél a táptalaj pH-ját is meg kell mérni, az adagolást és a módszert a termékismertető szerint kell követni.
8. A kémiai reagenseket, a sterilizálási körülményeket, a törzs növekedési vizsgálati eredményeit és az elkészített táptalaj minden egyes tételénél használt gyártó személyzetet lekérdezés céljából fel kell jegyezni.
Mintagyűjtési és -feldolgozási követelmények
1. Az ellenőrző mintáknak reprezentatívnak kell lenniük. A mintavételnél részletesen meg kell vizsgálni az élelmiszer tétel alapanyagait, feldolgozási, szállítási, tárolási módjait és körülményeit, a környező környezet-egészségügyi viszonyokat stb.
2. Az élelmiszer típusának és mennyiségének megfelelően a mintavételi mennyiséget és módszert a szabványos ellenőrzési módszerek követelményeinek megfelelően kell elvégezni.
3. A mintavétel során ügyeljen az aszeptikus működésre, és a tartályt sterilizálni kell a környezet mikrobiális szennyeződésének elkerülése érdekében. A tartályt nem szabad kreóz szappanoldattal, klórmetioninnal, alkohollal és egyéb fertőtlenítőszerrel sterilizálni, ilyen fertőtlenítőszert vagy antibiotikumot nem tartalmazhat. A mintában lévő mikroorganizmusok elpusztításának elkerülése érdekében a felhasznált ollót, kést és kanalat használat előtt sterilizálni kell.
4. A mintákat a begyűjtés után azonnal az ellenőrző helyiségbe kell küldeni ellenőrzésre. Az ellenőrzési folyamat általában nem haladja meg a 3 órát. Ha a távolság nagy, 1-5 ℃-os környezetben tárolható. Ha le kell fagyasztani, akkor fagyasztott állapotban kell tartani. Adja be ellenőrzésre.
5. A minta átvétele után a vizsgálóhelyiség nyilvántartásba veszi (minta neve, vizsgálati egysége, mennyisége, dátuma, száma stb.) és megfigyeli a minta megjelenését. Ha az alábbi feltételek bármelyike fennáll, az ellenőrzés megtagadható:
(1) Azok a minták, amelyeket speciálisan nagy nyomással, forralással vagy más módszerrel sterilizáltak, elvesztik jelentőségüket az eredeti élelmiszer reprezentációjában;
(2) Az élelmiszerek palackjait, zacskóit felbontották, a főtt húst és termékeit, a főtt baromfihúst és egyéb élelmiszereket megtörték és hiányosak, azaz az étel eredeti formája elveszett (kivéve az ételmérgezési mintákat);
(3) A mintavételi mennyiség nem elegendő a szükségesnek;
Az ellenőrzésre benyújtott, a követelményeknek megfelelő minták esetében az ellenőrző helyiség átvételét követően haladéktalanul vizsgálatot végez. Ha a feltételek nem teljesülnek, 4°C-os hűtőszekrényben kell tárolni, időben felkészülni a feltételek megteremtésére, majd elvégezni az ellenőrzést.
6. A minták vizsgálatakor a különböző tulajdonságaiknak megfelelő feldolgozást végezzen.
(1) A folyékony minták beoltásakor azokat alaposan össze kell keverni és a mennyiségnek megfelelően be kell oltani.
(2) Szilárd minták esetén sterilizált késsel vágjon ki 25 g különböző részeket, helyezze őket 225 ml sterilizált sóoldatba vagy más oldatba, törje össze és keverje össze homogenizátorral, és a mennyiségnek megfelelően oltsa be.
(3) Az élelmiszeres palackokat és zacskókat sterilizálással kell felnyitni, és a fenti módszereket az oltás előtt a jellemzőknek megfelelően kell kiválasztani.
Mintavizsgálati, rögzítési és jelentési követelmények
1. A minta átvétele után az ellenőrző helyiség először megjelenési vizsgálatot végez, és haladéktalanul elvégzi az ellenőrzést a nemzeti szabványos vizsgálati módszerek szerint. Az ellenőrzési folyamat során az aszeptikus műveleteket körültekintően, felelősségteljesen és szigorúan kerülni kellmikrobiális vizsgálat eredményeszennyeződés a környezetben.
2. A mintavételezési eljárás során alkalmazott módszereket, a fellépő jelenségeket, eredményeket stb. írásos vizsgálati jegyzőkönyvbe kell írni, az elemzés és az eredmények megítélésének alapjaként. A feljegyzéseknek részletesnek, világosnak, hitelesnek, tárgyilagosnak kell lenniük, azokat nem szabad megváltoztatni vagy hamisítani.
)
)
Aszeptikus működési követelmények:
1.A baktériumok beoltásakor munkaruhát és munkasapkát kell viselnie.
2. Élelmiszerminták beoltásakor speciális munkaruhát, sapkát, papucsot kell viselni, melyet a steril helyiség pufferhelyiségében kell elhelyezni, és a munka előtt UV fertőtlenítés után felhasználni.
3. Élelmiszerminták beoltásakor mosson kezet szappannal, mielőtt belép a steril helyiségbe, majd törölje le a kezét egy 75%-os alkoholos vattakoronggal.
4. Az oltáshoz használt szívószálakat, lapos edényeket és táptalajokat sterilizálni és sterilizálni kell. A fel nem használt tartályokat a csomagolás felbontása után nem szabad kihasználatlanul hagyni. A fém edényeket használat előtt autoklávozni kell, vagy háromszor elégetni 95%-os alkohollal.
5. Amikor kiveszi a szívószálat a csomagolásból, a szívószál hegye nem érhet hozzá a szabadon lévő részekhez. Ha a szívószálat a kémcső vagy a lemez beoltására használjuk, a szívószál hegye nem érintheti a kémcső vagy a lemez szélét.
6. A minták beoltását és a baktériumok átvitelét alkohollámpa előtt kell végezni. Baktériumok vagy minták beoltásakor a szívószálat a csomagolásból való kivétel és a kémcsődugó kinyitása után lánggal sterilizálni kell.
7. Baktériumok beoltása előtt az oltóhurok és tű összes fémhuzalát lánggal kell megégetni, és szükség esetén a hurok, tű és rúd csatlakozását meg kell égetni. A tuberkulózisbaktériumok és virulens baktériumok beoltására szolgáló oltóhurkot forrásban lévő vízben 5 percig forralni kell, majd lánggal meg kell égetni.
8. Baktériumfolyadék vagy minta szívószállal történő felszívásakor használja a megfelelő gumihegyet a szíváshoz, és ne szívja közvetlenül a szájával.
A steril helyiség használatának követelményei:
1. A steril helyiségből kifelé vezető ablakokat dupla üvegezésűek és le kell zárni. Nem szabad tetszés szerint kinyitni. Legyen a steril helyiség méretének megfelelő pufferhelyiség és tolóajtó. Legyen egy kis ablak is, 0,5–0,7 m2. Felkészülés a tárgyak átadására a steril helyiségbe való belépés után.
2. A steril helyiséget tisztán kell tartani. Munkavégzés után 2-3%-os krezolos szappanoldattal fertőtleníteni kell, a munkafelületet le kell törölni, a kísérlethez nem kapcsolódó tárgyakat nem szabad tárolni.
3. A steril helyiség ajtaját használat előtt és után szorosan be kell zárni, és fel kell kapcsolni az ultraibolya lámpát. Ha beltéri felfüggesztett ultraibolya lámpát használnak a fertőtlenítéshez, akkor 30 W-os ultraibolya lámpára van szükség. A távolság 1,0 m, a besugárzási idő pedig nem kevesebb, mint 30 perc. Ultraibolya lámpák használatakor ügyeljen arra, hogy a károsodás elkerülése érdekében közvetlenül ultraibolya fény alatt működjön. A lámpát kéthetente óvatosan le kell törölni egy alkoholos vattakoronggal, hogy eltávolítsa a port és a zsírt, hogy csökkentse az ultraibolya behatolás hatását.
4. Élelmiszerminták feldolgozása és beoltása során menjen be a steril helyiségbe, és tetszés szerint nem léphet be vagy onnan ki. Ha tárgyakat kell továbbadni, akkor azokat a kis ablakon át lehet adni.
5. Ha légkondicionálást kell beszerelni a steril helyiségbe, akkor legyen szűrőberendezés.
Fertőtlenítési és sterilizálási követelmények
Ehhez használt üvegedények, fémedények és táptalajokmikrobiológiai vizsgálat, a szennyezett és beoltott kultúrákat stb. használat előtt sterilizálni kell. Száraz hő és nedves hőnyomásos gőzsterilizálási módszerek.
1. Sterilizálás előtti előkészítés
(1) Minden sterilizálandó tárgyat először ki kell mosni és meg kell szárítani. Az üvegedényeket, például a szívószálakat és a lapos edényeket szorosan be kell csomagolni papírral. Fémcsövek használata esetén a rajtuk lévő szellőzőnyílásokat ki kell nyitni.
(2) Tekerje papírba a táptalajt tartalmazó háromszöglombik dugóját, fedje le a kémcsövet, és húzza ki a fecskendő magját, és tekerje be gézzel.
2. telepíteni
(1) Száraz hővel sterilizáló: A tárgyak nem lehetnek túlzsúfolva, és nem érinthetik meg a doboz négy falát.
(2) Nagy, nagynyomású gőzfőző: Helyezze be a sterilizált tárgyakat, csomagolja be őket külön, és tegye közvetlenül a sterilizáló hengerbe. Ne zsúfolja túl az elemeket.
3. Berendezés ellenőrzés
(1) Ellenőrizze, hogy az ajtókapcsoló rugalmas-e, nem sérült-e meg a gumigyűrű, és hogy lapos-e.
(2) Ellenőrizze, hogy a nyomásmérő nulla pozícióban marad-e, amikor a gőz kiürül, zárja be az ajtót és a fedelet, szellőztesse ki a gőzt vagy a hőt, és figyelje meg, hogy nincs-e levegőszivárgás, a nyomásmérő és a hőmérő által jelzett feltételek megegyeznek-e, és nincs-e elzárva a csővezeték.
(3) Automatikus elektronikus programvezérlő eszközökkel rendelkező sterilizátorok esetén a megadott programot használat előtt ellenőrizni kell, hogy megfelel-e a sterilizálási követelményeknek.
4. Sterilizációs kezelés
(1) Száraz hővel történő sterilizálási módszer:
Ez a módszer olyan tárgyakhoz alkalmas, amelyek nem károsodnak, nem romlanak el vagy párolognak el száraz hő mellett. Gyakrabban használják üvegáruk, fémtermékek, kerámiatermékek stb. sterilizálására.
①A műszereket és edényeket száraz sütés előtt ki kell mosni, nehogy a felületre tapadt szennyeződés elszenesedjen.
② A sterilizálás során a tárgyak nem lehetnek túlzsúfolva, ne érjenek közvetlenül a doboz aljához és falához, és ne hagyjanak réseket a tárgyak között.
③ Sterilizálás közben szorosan zárja be az ajtót, csatlakoztassa a tápegységet, nyissa ki a kipufogónyílást körülbelül 30 percre, hogy eltávolítsa a sterilizátorban lévő hideg levegőt, állítsa be a jelzőfényt, ha a hőmérséklet 160 °C-ra emelkedik, és tartsa fenn 1,5-2 órán keresztül.
④A sterilizálás befejezése után vagy a hőmérséklet-emelkedési folyamat során az ajtót 60°C alatt ki kell nyitni.
(2) A következő lépéseket kell követni, ha hordozható kukta vagy függőleges nyomású gőzsterilizátort használ:
① Adjon hozzá 3 l vizet a hordozható kukta testéhez, és 16 l vizet a függőleges gyorsfőzőhöz (a vízmennyiséget újrafelhasználáskor pótolni kell, és a vizet ki kell cserélni, ha zavarossá válik);
② Hordozható kukta esetén illessze be a felső burkolat kipufogócsövét a sterilizáló hordó belső falán lévő négyzet alakú csőbe (tömlő nélküli vagy korrodált és repedezett tömlővel rendelkező sterilizátorokat nem szabad használni);
③ Fedje le a felső fedelet, és húzza meg szorosan, hogy megakadályozza a levegő szivárgását; helyezze a sterilizátort a tűzforrásra, hogy felmelegedjen, kapcsolja be a függőleges kukta teljesítményét, és nyissa ki a felső fedél kipufogószelepét, hogy kiengedje a levegőt (az elszívott levegő 10-15 percig a víz felforrása után) );
④ Zárja el a kipufogószelepet, hogy a gőznyomást a megadott követelményekre emelje, és tartsa fenn a megadott ideig (a sterilizált cikkek jellegétől és a releváns körülményektől függően);
⑤ A megadott idő letelte után a szárítandó ruhadaraboknál azonnal nyissa ki a kipufogószelepet a gőz kiürítéséhez. Amikor a nyomás visszaáll nullára, természetesen hűtse le 60°C-ra, majd nyissa ki a fedelet, hogy kivehesse az elemeket. Ha folyékony tárgyról van szó, ne nyissa ki a kipufogószelepet. Az edényt azonnal el kell távolítani a hőforrásról, és hagyni kell természetes módon kihűlni, amíg a nyomás nullára nem esik, és a hőmérséklet 60 °C alá csökken, mielőtt kinyitná a fedőt, hogy kivegye a tartalmát, hogy megakadályozza a folyadék hirtelen dekompresszióját az edény heves felforrása vagy felrobbanása miatt.
(3) Kövesse az alábbi lépéseket a vízszintes gyorsfőző gőzsterilizáló használatához:
① Zárja be szorosan az edény ajtaját, nyissa ki a levegő bemeneti szelepet, vezesse be a gőzt a mezzanine-ba az előmelegítéshez, és a mezzanine hideg levegője automatikusan távozik a légzáron keresztül;
② Miután a közbenső réteg elérte az előre meghatározott hőmérsékletet, nyissa ki az edénykamra levegőbemeneti szelepét, vezesse be a gőzt az edénykamrába, és az edénykamrában lévő hideg levegő automatikusan kiürül az edénykamra léglevezetőjén keresztül;
③ Amikor a nyomás és a hőmérséklet az edénykamrában eléri a megadott nyomást, állítsa be a levegőbemeneti szelepet, hogy az állandó maradjon;
④ Hűtse le a hőmérsékletet természetesen vagy mesterségesen 60 ℃-ra, mielőtt kinyitná az ajtót a tárgyak kivételéhez. Ne használja a gyors gőzürítési módszert a hirtelen nyomásesés, a folyadék heves forrásának vagy a tartály felrobbanásának elkerülésére;
⑤ Automatikus programvezérelt nyomású gőzsterilizáló használatakor a cikkek elhelyezése és az ajtó szoros bezárása után a megfelelő kapcsolót kell megnyomni a cikkek kategóriájának megfelelően, hogy a sterilizálás automatikusan elvégezhető legyen a szükséges eljárások szerint. A sterilizálás során a mellékelt műszerrel kell rögzíteni a hőmérsékletet és az időt. A jövőbeni hivatkozás érdekében az üzemeltetési követelményeknek szigorúan meg kell felelniük a gyártó utasításainak;
5. Sterilizálási hőmérséklet és idő
(1) A száraz hősterilizáló sterilizálási hőmérséklete 160 ℃, 1,5 ~ 2 óra.
(2) A nyomás alatti gőzsterilizátor sterilizálási hőmérséklete és ideje
Időszakos sterilizálási módszer
1. Sterilizálási módszer:
Használjon nyomás nélküli gőzsterilizálást. Egyes anyagok könnyen megsemmisülnek a nagynyomású gőzsterilizálással, így ez a módszer alkalmas a sterilizálásra.
(1) Helyezze a sterilizálandó tárgyakat az edénybe, fedje le a felső fedelet, nyissa ki a lefolyónyílást, és engedje le az edényben lévő maradék vizet.
(2) Zárja el a lefolyó kimenetet, nyissa ki a levegő bemeneti ajtót, és szükség szerint fertőtlenítsen 10-20 percig.
(3) A sterilizálás befejezése után zárja be a levegőbemeneti ajtót, vegye ki a tárgyakat, és várja meg, amíg lehűl szobahőmérsékletre, helyezze őket egy éjszakára 37 °C-os inkubátorba, és másnap folytassa a sterilizálást a fenti módszer szerint. Ezt háromszor végezze el a sterilizálás céljának elérése érdekében.
2. A szérum koagulátor használata:
Ha a táptalaj speciális összetevőket, például szérumot vagy tojást tartalmaz, a magas hő tönkreteszi a tápanyagait. Ezért alacsony hőmérsékleten a szérum koagulálható és sterilizálási célok érhetők el:
(1) Ha ezzel a módszerrel sterilizált szérumot használunk aliquot adagolására, szigorúan be kell tartani az aszeptikus műveleteket, és a kémcsöveket és a lemezeket is sterilizálni kell használat előtt;
(2) Szükség szerint alakítsa ki a táptalajt lejtős vagy magas rétegűvé. Elegendő víz hozzáadása után csatlakoztassa a tápegységet, emelje a hőmérsékletet 75-90°C-ra egy órára, majd sterilizálja. Helyezze egy éjszakára 37°C-os inkubátorba, majd sterilizálja háromszor.
3. Forraljuk fel és fertőtlenítsük:
Használhat főzőedényt vagy forró sterilizálót. Miután a víz felforrt, forraljuk 5-15 percig. 2%-os karbolsavat is adhatunk a vízhez, és forraljuk 5 percig. Adjunk hozzá 0,02% formaldehidet, és forraljuk 80°C-on 60 percig, hogy elérjük a sterilizálás célját. A forrásban lévő sterilizálás azonban elérhető. Fokozószerek használatakor ügyelni kell a tárgyak maró hatására.
4. Sterilizációs kezelés:
A sterilizálás után a tárgyak normál körülmények között már sterilek. Gondosan meg kell vizsgálni és el kell helyezni, amikor kivesszük a sterilizátorból, hogy elkerüljük az újraszennyeződést;
(1) Vegye ki a tételeket, és azonnal ellenőrizze a csomagolás sértetlenségét. Sérülés vagy a tampon eltávolítása esetén nem használható steril tárgyként;
(2) A kivett tárgyak nem használhatók fel steril tárgyként, ha a csomagolásuk nyilvánvalóan vízbe ázott;
(3) A táptalajt vagy a reagenseket ellenőrizni kell, hogy megfelelnek-e a sterilizálás utáni színnek vagy állapotnak. Azokat, amelyek nem felelnek meg a követelményeknek, el kell dobni;
(4) Nyitott-zárt tartályok esetén a szitanyílásokat le kell zárni, amikor kiveszi őket;
(5) Ha az eltávolított tárgyak a földre esnek, tisztátalan helyre kerültek, vagy vízzel szennyezettek, szennyezettnek minősülnek, és nem használhatók steril tárgyként;
(6) A kivett minősített sterilizált tárgyakat a tárolóhelyiségben vagy porálló szekrényben kell tárolni, és szigorúan tilos azokat nem sterilizált tárgyakkal keverni;
(7) Minden minősített tételen fel kell tüntetni a sterilizálás dátumát és a lejárati dátumot;
(8) A sterilizálási folyamat minden egyes tétele után jegyezze fel a sterilizált termékek nevét, mennyiségét, hőmérsékletét, idejét és kezelőjét.
A mérgező és bakteriális hulladékok kezelésére vonatkozó követelmények
A mikrobiológiai kísérletekben használt kísérleti berendezéseket, tenyészeteket fertőtlenítés nélkül nem szabad kivinni a laboratóriumból.
1. A tenyésztett szennyezett anyagokat és hulladékokat szoros tárolóedényekbe vagy drótkosarakba kell helyezni, és központilag, a kijelölt helyeken kell tárolni, amíg egyenletesen autoklávozik.
2. A mikroorganizmusokkal szennyezett tenyészeteket 121°C-on 30 percig autoklávozni kell.
3. Használat után a szennyezett szívószálakat 5%-os kreol szappanoldatba vagy karbolsav oldatba kell helyezni, legalább 24 órán át áztatni (a fertőtlenítő folyadék nem lehet alacsonyabb az áztatási magasságnál), majd 30 percig nagy nyomáson, 121°C-on sterilizálni.
4. A festéshez és öblítéshez használt folyadék általában közvetlenül a csatornába öblíthető. A virulens baktériumok számára készült öblítőfolyadékot főzőpohárba kell öblíteni, és nagy nyomással sterilizálni kell, mielőtt a csatornába öntik. A megfestett tárgylemezeket 5%-os krezolos szappanoldatba helyezzük. 24 órás vízben áztatás után forraljuk fel és mossuk le. Az agglutinációs vizsgálathoz használt tárgylemezeket vagy edényeket autoklávozni kell, majd el kell mosni.
5. A tenyészet feltörése után azonnal permetezze be és áztassa be a szennyezett részeket 5%-os krezol-szappanoldattal vagy karbolsavoldattal, áztassa fél óráig, majd törölje le.
A szennyezett munkaruhát vagy az erőszakos vizsgálatokhoz viselt munkaruhát, sapkát, maszkot stb. speciális fertőtlenítő zsákokba kell helyezni, és mosás előtt nagy nyomáson sterilizálni kell.
Közepes előkészítési követelmények
A táptalaj elkészítésének minősége közvetlenül befolyásolja a mikroorganizmusok növekedését, mivel a különböző mikroorganizmusok eltérő táplálkozási igényekkel és eltérő tenyésztési célokkal rendelkeznek. A különböző táptalajok előkészítési követelményei a következők:
1. Mérjük le az összetevőket a közepes képlet szerint, majd oldjuk fel desztillált vízben. Az alkalmazott reagensek és gyógyszerek minőségét használat előtt ellenőrizni kell.
2. pH mérés és beállítás: A pH mérést akkor kell elvégezni, amikor a táptalajt szobahőmérsékletre hűtjük, mert meleg vagy hideg körülmények között bizonyos pH-különbség van. A mérés befejeztével adjon hozzá lúgot vagy savat a számított mennyiségnek megfelelően, és jól keverje össze. Újra tesztelni kellene. A táptalaj pH-értékének pontosnak kell lennie, különben befolyásolja a mikroorganizmusok szaporodását vagy befolyásolja az eredmények megfigyelését. Figyelembe kell azonban venni, hogy a nagynyomású sterilizálás befolyásolhatja egyes táptalajok pH-jának csökkenését vagy növekedését, ezért nem célszerű túl nagy nyomáson vagy túl sokszor sterilizálni, hogy elkerüljük a táptalaj minőségének befolyásolását. Indikátorok, nátrium-dezoxikolát, agar stb. általában a pH beállítása után adja hozzá.
3. A táptalajt tisztán kell tartani, hogy megkönnyítsük a baktériumok növekedésének megfigyelését. A táptalaj felmelegítése és forralása után nedvszívó pamuttal vagy flanellel szűrhető az üledék eltávolítása érdekében. Ha szükséges, tojásfehérjével deríthetjük. A felhasznált agarcsíkokat előzetesen ki kell mosni és meg kell szárítani. Használat előtt ne befolyásolja az átlátszóságot az agarban lévő szennyeződések miatt.
4. Vas-, réz- és egyéb edények nem használhatók a táptalaj tárolására. Jobb, ha tiszta, semleges keményüveg edényt használ.
5. A táptalaj sterilizálásának nemcsak a teljes sterilizálás célját kell elérnie, hanem arra is figyelni kell, hogy a tápérték a melegítés miatt ne csökkenjen. Általában 121°C 15 percig elegendő. A magas hőt nem tűrő anyagokat, például cukrot és szérumot, zselatint stb. tartalmazó táptalajokat alacsony hőmérsékleten vagy szakaszos módszerrel kell sterilizálni. Egyes nem melegíthető reagenseket, például kálium-telluritot, tojássárgáját, TTC-t, antibiotikumokat stb., le kell hűteni körülbelül 50 °C-ra az alapagar autoklávozása után, majd hozzáadni kell;
6. A táptalaj minden tételének elkészítése után steril növekedési tesztet és a vizsgált törzsek növekedési tesztjét kell elvégezni. Ha biokémiai táptalajról van szó, használjon standard baktériumtörzseket az oltáshoz és a tenyésztéshez, és figyelje meg a biokémiai reakció eredményeit. Normális reakciót kell mutatnia. A táptalajt nem szabad túl sokáig tárolni. Szükség esetén 4°C-os hűtőszekrényben is tárolható.
7. Jelenleg sokféle száraz táptalaj létezik. Minden tételben standard törzseket kell használni a növekedési teszthez vagy a biokémiai reakció megfigyeléséhez. Különféle táptalajok csak akkor használhatók, ha a megfelelő törzsek növekedési tesztje megfelelő. Használhatók az újonnan vásárolt vagy kiszáradtak, amelyeket sokáig tároltak. Elkészítésénél a táptalaj pH-ját is meg kell mérni, az adagolást és a módszert a termékismertető szerint kell követni.
8. A kémiai reagenseket, a sterilizálási körülményeket, a törzs növekedési vizsgálati eredményeit és az elkészített táptalaj minden egyes tételénél használt gyártó személyzetet lekérdezés céljából fel kell jegyezni.
Mintagyűjtési és -feldolgozási követelmények
1. Az ellenőrző mintáknak reprezentatívnak kell lenniük. A mintavételnél részletesen meg kell vizsgálni az élelmiszer tétel alapanyagait, feldolgozási, szállítási, tárolási módjait és körülményeit, a környező környezet-egészségügyi viszonyokat stb.
2. Az élelmiszer típusának és mennyiségének megfelelően a mintavételi mennyiséget és módszert a szabványos ellenőrzési módszerek követelményeinek megfelelően kell elvégezni.
3. A mintavétel során ügyeljen az aszeptikus működésre, és a tartályt sterilizálni kell a környezet mikrobiális szennyeződésének elkerülése érdekében. A tartályt nem szabad kreóz szappanoldattal, klórmetioninnal, alkohollal és egyéb fertőtlenítőszerrel sterilizálni, ilyen fertőtlenítőszert vagy antibiotikumot nem tartalmazhat. A mintában lévő mikroorganizmusok elpusztításának elkerülése érdekében a felhasznált ollót, kést és kanalat használat előtt sterilizálni kell.
4. A mintákat a begyűjtés után azonnal az ellenőrző helyiségbe kell küldeni ellenőrzésre. Az ellenőrzési folyamat általában nem haladja meg a 3 órát. Ha a távolság nagy, 1-5 ℃-os környezetben tárolható. Ha le kell fagyasztani, akkor fagyasztott állapotban kell tartani. Adja be ellenőrzésre.
5. A minta átvétele után a vizsgálóhelyiség nyilvántartásba veszi (minta neve, vizsgálati egysége, mennyisége, dátuma, száma stb.) és megfigyeli a minta megjelenését. Ha az alábbi feltételek bármelyike fennáll, az ellenőrzés megtagadható:
(1) Azok a minták, amelyeket speciálisan nagy nyomással, forralással vagy más módszerrel sterilizáltak, elvesztik jelentőségüket az eredeti élelmiszer reprezentációjában;
(2) Az élelmiszerek palackjait, zacskóit felbontották, a főtt húst és termékeit, a főtt baromfihúst és egyéb élelmiszereket megtörték és hiányosak, azaz az étel eredeti formája elveszett (kivéve az ételmérgezési mintákat);
(3) A mintavételi mennyiség nem elegendő a szükségesnek;
Az ellenőrzésre benyújtott, a követelményeknek megfelelő minták esetében az ellenőrző helyiség átvételét követően haladéktalanul vizsgálatot végez. Ha a feltételek nem teljesülnek, 4°C-os hűtőszekrényben kell tárolni, időben felkészülni a feltételek megteremtésére, majd elvégezni az ellenőrzést.
6. A minták vizsgálatakor a különböző tulajdonságaiknak megfelelő feldolgozást végezzen.
(1) A folyékony minták beoltásakor azokat alaposan össze kell keverni és a mennyiségnek megfelelően be kell oltani.
(2) Szilárd minták esetén sterilizált késsel vágjon ki 25 g különböző részeket, helyezze őket 225 ml sterilizált sóoldatba vagy más oldatba, törje össze és keverje össze homogenizátorral, és a mennyiségnek megfelelően oltsa be.
(3) Az élelmiszeres palackokat és zacskókat sterilizálással kell felnyitni, és a fenti módszereket az oltás előtt a jellemzőknek megfelelően kell kiválasztani.
Mintavizsgálati, rögzítési és jelentési követelmények
1. A minta átvétele után az ellenőrző helyiség először megjelenési vizsgálatot végez, és haladéktalanul elvégzi az ellenőrzést a nemzeti szabványos vizsgálati módszerek szerint. Az ellenőrzési folyamat során az aszeptikus műveleteket körültekintően, felelősségteljesen és szigorúan kerülni kellmikrobiális vizsgálat eredményeszennyeződés a környezetben.
2. A mintavételezési eljárás során alkalmazott módszereket, a fellépő jelenségeket, eredményeket stb. írásos vizsgálati jegyzőkönyvbe kell írni, az elemzés és az eredmények megítélésének alapjaként. A feljegyzéseknek részletesnek, világosnak, hitelesnek, tárgyilagosnak kell lenniük, azokat nem szabad megváltoztatni vagy hamisítani.
)
)
