Résumé des exigences en matière d'essais microbiologiques
2024-01-24 15:14:33
Les exigences et les étapes pourtests microbiologiquessont les suivants :
Exigences de fonctionnement aseptique :
1.Vous devez porter des vêtements de travail et une casquette de travail lors de l’inoculation des bactéries.
2. Lors de l'inoculation d'échantillons alimentaires, il faut porter des vêtements de travail spéciaux, des casquettes et des pantoufles, qui doivent être placés dans la salle tampon de la salle stérile et utilisés après désinfection UV avant le travail.
3. Lors de l'inoculation d'échantillons alimentaires, lavez-vous les mains avec du savon avant d'entrer dans la salle stérile, puis essuyez-vous les mains avec un coton imbibé d'alcool à 75 %.
4. Les pailles, les plats plats et les milieux de culture utilisés pour l'inoculation doivent être stérilisés et stérilisés. Les contenants inutilisés ne doivent pas être laissés inutilisés après ouverture de l’emballage. Les ustensiles en métal doivent être autoclavés ou brûlés trois fois avec de l'alcool à 95 % avant utilisation.
5. Lorsque vous retirez la paille de l'emballage, la pointe de la paille ne doit pas toucher les parties exposées. Lors de l'utilisation de la paillette pour inoculer le tube à essai ou la plaque, la pointe de la paille ne doit pas toucher le bord du tube à essai ou de la plaque.
6. L'inoculation des échantillons et le transfert des bactéries doivent être effectués devant une lampe à alcool. Lors de l'inoculation de bactéries ou d'échantillons, la paillette doit être stérilisée à la flamme après l'avoir sortie de l'emballage et ouvert le bouchon du tube à essai.
7. Avant d'inoculer les bactéries, tous les fils métalliques de l'anse et de l'aiguille d'inoculation doivent être brûlés avec une flamme et, si nécessaire, la connexion entre l'anse, l'aiguille et la tige doit être brûlée. La boucle d'inoculation pour inoculer les bactéries tuberculeuses et les bactéries virulentes doit être bouillie dans de l'eau bouillante pendant 5 minutes, puis brûlée par une flamme.
8. Lorsque vous aspirez un liquide bactérien ou des échantillons avec une paille, utilisez l'embout en caoutchouc correspondant pour l'aspirer et ne l'aspirez pas directement avec la bouche.
Exigences d'utilisation de la salle stérile :
1. Les fenêtres donnant sur l'extérieur de la salle stérile doivent être à double vitrage et scellées. Il ne faut pas les ouvrir à volonté. Il doit y avoir une salle tampon et une porte coulissante correspondant à la taille de la salle stérile. Il devrait également y avoir une petite fenêtre de 0,5 à 0,7 m2. En préparation pour le passage des objets après être entré dans la salle stérile.
2. La salle stérile doit être maintenue propre. Après le travail, il doit être désinfecté avec une solution de savon de crésol à 2% à 3%, la surface de travail doit être essuyée et les objets non liés à l'expérience ne doivent pas être stockés.
3. La porte de la salle stérile doit être bien fermée avant et après utilisation et la lampe ultraviolette doit être allumée. Si une lampe ultraviolette suspendue intérieure est utilisée pour la désinfection, une lampe ultraviolette de 30 W est requise. La distance est de 1,0 m et la durée d'irradiation n'est pas inférieure à 30 minutes. Lors de l'utilisation de lampes ultraviolettes, il convient de veiller à ce qu'elles fonctionnent directement sous la lumière ultraviolette pour éviter tout dommage. La lampe doit être doucement essuyée avec un coton imbibé d'alcool toutes les deux semaines pour éliminer la poussière et la graisse afin de réduire l'impact de la pénétration des ultraviolets.
4. Lors du traitement et de l'inoculation d'échantillons alimentaires, entrez dans la salle stérile pour l'opération et n'êtes pas autorisé à entrer ou à sortir à volonté. Si des objets doivent être transmis, ils peuvent être transmis par la petite fenêtre.
5. Si la salle stérile doit être équipée d’un système de climatisation, un dispositif de filtrage doit être prévu.
Exigences en matière de désinfection et de stérilisation
Verrerie, ustensiles métalliques et milieux de culture utilisés pourtests microbiologiques, les cultures contaminées et inoculées, etc. doivent être stérilisées avant utilisation. Méthodes de stérilisation à la vapeur par chaleur sèche et par chaleur humide.
1. Préparation avant stérilisation
(1) Tous les articles qui doivent être stérilisés doivent d’abord être lavés et séchés. Les verres tels que les pailles et les plats plats doivent être bien emballés dans du papier. Si des tubes métalliques sont utilisés, les trous de ventilation doivent être ouverts.
(2) Enveloppez le bouchon de la fiole triangulaire contenant le milieu de culture dans du papier, couvrez le tube à essai, retirez le noyau de la seringue et enveloppez-le de gaze.
2. installer
(1) Stérilisateur à chaleur sèche : Les articles ne doivent pas être surpeuplés et ne peuvent pas toucher les quatre parois de la boîte.
(2) Grand cuiseur vapeur haute pression : placez les articles stérilisés, enveloppez-les séparément et placez-les directement dans le cylindre de stérilisation. Ne surchargez pas les articles.
3. Inspection de l'équipement
(1) Vérifiez si l'interrupteur de porte est flexible, si l'anneau en caoutchouc est endommagé et s'il est plat.
(2) Vérifiez si le manomètre reste à la position zéro lorsque la vapeur est évacuée, fermez la porte et le couvercle, aérez la vapeur ou la chaleur, et observez s'il y a une fuite d'air, si les conditions marquées par le manomètre et le thermomètre correspondent et si la canalisation est bloquée.
(3) Pour les stérilisateurs équipés de dispositifs de contrôle électronique automatique du programme, le programme spécifié doit être vérifié avant utilisation pour voir s'il répond aux exigences de stérilisation.
4. Traitement de stérilisation
(1) Méthode de stérilisation par chaleur sèche :
Cette méthode convient aux articles qui ne s’endommagent pas, ne se détériorent pas ou ne s’évaporent pas dans des conditions de chaleur sèche. Il est plus couramment utilisé pour stériliser la verrerie, les produits métalliques, les produits céramiques, etc.
①Les instruments et ustensiles doivent être lavés avant la cuisson à sec pour éviter que la saleté fixée à la surface ne soit carbonisée.
② Pendant la stérilisation, les articles ne doivent pas être surpeuplés, ne doivent pas entrer directement en contact avec le fond et la paroi de la boîte et laisser des espaces entre les articles.
③ Pendant la stérilisation, fermez hermétiquement la porte, branchez l'alimentation électrique, ouvrez le trou d'échappement pendant environ 30 minutes pour éliminer l'air froid du stérilisateur, réglez le voyant lorsque la température monte à 160 °C et maintenez-le pendant 1,5 à 2 heures.
④Une fois la stérilisation terminée ou pendant le processus de montée en température, la porte doit être ouverte en dessous de 60°C.
(2) Les étapes suivantes doivent être suivies lors de l’utilisation d’un autocuiseur portable ou d’un stérilisateur à vapeur sous pression vertical :
① Ajoutez 3 L d'eau au corps principal de l'autocuiseur portable et 16 L d'eau à l'autocuiseur vertical (la quantité d'eau doit être reconstituée lorsqu'elle est réutilisée, et l'eau doit être remplacée si elle devient trouble) ;
② Pour un autocuiseur portable, insérez le tuyau d'échappement sur le couvercle supérieur dans le tube carré sur la paroi intérieure du baril de stérilisation (les stérilisateurs sans tuyaux ou ceux avec des tuyaux corrodés et fissurés ne doivent pas être utilisés) ;
③ Couvrez le capot supérieur et serrez-le fermement pour éviter les fuites d'air ; placez le stérilisateur sur la source de feu pour chauffer, allumez l'autocuiseur vertical et ouvrez la soupape d'échappement sur le couvercle supérieur pour laisser sortir l'air (air évacué pendant 10 à 15 minutes après l'ébullition de l'eau) ;
④Fermez la soupape d'échappement pour augmenter la pression de vapeur aux exigences spécifiées et maintenez-la pendant la durée spécifiée (en fonction de la nature des articles stérilisés et des circonstances pertinentes) ;
⑤ Une fois le temps spécifié atteint, pour les articles qui doivent être séchés, ouvrez immédiatement la soupape d'échappement pour évacuer la vapeur. Lorsque la pression revient à zéro, refroidissez-le naturellement à 60°C puis ouvrez le couvercle pour sortir les articles. S'il s'agit d'un article liquide, n'ouvrez pas la soupape d'échappement. Le pot doit être immédiatement retiré de la source de chaleur et laissé refroidir naturellement jusqu'à ce que la pression revienne à zéro et que la température descende en dessous de 60 °C avant d'ouvrir le couvercle pour retirer le contenu afin d'éviter la décompression soudaine du liquide due à une violente ébullition ou une explosion du récipient.
(3) Suivez les étapes suivantes pour utiliser le stérilisateur à vapeur pour autocuiseur horizontal :
①Fermez hermétiquement la porte du pot, ouvrez la vanne d'entrée d'air, introduisez de la vapeur dans la mezzanine pour le préchauffage, et l'air froid de la mezzanine sera automatiquement évacué à travers le pare-air ;
②Une fois que l'intercalaire atteint la température prédéterminée, ouvrez la vanne d'entrée d'air de la chambre du pot, introduisez la vapeur dans la chambre du pot et l'air froid dans la chambre du pot sera automatiquement évacué par le pare-air de la chambre du pot ;
③Lorsque la pression et la température dans la chambre du pot atteignent la pression spécifiée, ajustez la vanne d'entrée d'air pour la maintenir constante ;
④ Refroidissez la température naturellement ou artificiellement à 60 ℃ avant d'ouvrir la porte pour sortir les articles. N'utilisez pas la méthode d'évacuation rapide de la vapeur pour éviter une chute de pression soudaine, une ébullition violente du liquide ou une explosion du récipient ;
⑤ Lors de l'utilisation d'un stérilisateur à vapeur à pression contrôlée par programme automatique, après avoir placé les articles et fermé hermétiquement la porte, l'interrupteur correspondant doit être enfoncé en fonction de la catégorie des articles afin que la stérilisation puisse être automatiquement effectuée selon les procédures requises. Pendant la stérilisation, l'instrument ci-joint doit être utilisé pour enregistrer la température et la durée. Pour référence future, les exigences de fonctionnement doivent être strictement conformes aux instructions du fabricant ;
5. Température et durée de stérilisation
(1) La température de stérilisation du stérilisateur à chaleur sèche est de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Température et durée de stérilisation du stérilisateur à vapeur sous pression
Méthode de stérilisation intermittente
1. Méthode de stérilisation :
Utilisez la stérilisation à la vapeur sans pression. Certaines substances sont facilement détruites par la stérilisation à la vapeur à haute pression, cette méthode peut donc être utilisée pour la stérilisation.
(1) Placez les articles à stériliser dans le pot, couvrez le couvercle supérieur, ouvrez la sortie de vidange et évacuez l'eau restante dans le pot.
(2) Fermez la sortie de vidange, ouvrez la porte d'entrée d'air et désinfectez pendant 10 à 20 minutes si nécessaire.
(3) Une fois la stérilisation terminée, fermez la porte d'entrée d'air, sortez les articles et attendez qu'ils refroidissent à température ambiante, mettez-les dans un incubateur à 37°C pendant la nuit et continuez à stériliser selon la méthode ci-dessus le lendemain. Faites cela trois fois pour atteindre l’objectif de stérilisation.
2. Comment utiliser le sérum coagulateur :
Lorsque le milieu de culture contient des ingrédients spéciaux tels que du sérum ou des œufs, une chaleur élevée détruira ses nutriments. Par conséquent, une basse température peut être utilisée pour coaguler le sérum et atteindre des objectifs de stérilisation :
(1) Lors de l'utilisation d'aliquotes de sérum stérilisé par cette méthode, les opérations aseptiques doivent être strictement suivies et les tubes à essai et les plaques doivent également être stérilisés avant utilisation ;
(2) Transformez le milieu de culture en une pente ou une couche élevée selon les besoins. Après avoir ajouté suffisamment d'eau, branchez l'alimentation électrique, augmentez la température à 75 ~ 90 °C pendant une heure, puis stérilisez-la. Placez-le dans un incubateur à 37°C pendant la nuit, puis stérilisez-le trois fois.
3. Faire bouillir et désinfecter :
Vous pouvez utiliser une marmite bouillante ou un stérilisateur bouillant. Une fois l'eau bouillie, faites-la bouillir pendant 5 à 15 minutes. Vous pouvez également ajouter 2 % d’acide carbolique à l’eau et la faire bouillir pendant 5 minutes. Ajoutez 0,02 % de formaldéhyde et faites-le bouillir à 80 °C pendant 60 minutes pour atteindre l'objectif de stérilisation. Cependant, une stérilisation par ébullition peut être réalisée. Lors de l'utilisation d'exhausteurs, il convient de prêter attention au caractère corrosif des objets.
4. Traitement de stérilisation :
Après stérilisation, les articles sont déjà stériles dans des circonstances normales. Ils doivent être soigneusement inspectés et placés une fois sortis du stérilisateur pour éviter toute re-contamination ;
(1) Sortez les articles et vérifiez immédiatement l'intégrité de l'emballage. S'il est endommagé ou si le tampon est retiré, il ne peut pas être utilisé comme article stérile ;
(2) Les articles retirés ne peuvent être utilisés comme articles stériles si leur emballage est manifestement trempé dans l'eau ;
(3) Le milieu de culture ou les réactifs doivent être vérifiés pour voir s'ils correspondent à la couleur ou à l'état après stérilisation. Ceux qui ne satisfont pas aux exigences doivent être éliminés ;
(4) Pour les conteneurs ouverts/fermés, les trous du tamis doivent être fermés lors de leur retrait ;
(5) Si les objets retirés tombent au sol, sont égarés dans un endroit impur ou sont tachés d'eau, ils sont considérés comme contaminés et ne peuvent pas être utilisés comme objets stériles ;
(6) Les articles stérilisés qualifiés retirés doivent être stockés dans la salle de stockage ou dans une armoire anti-poussière, et il est strictement interdit de les mélanger avec des articles non stérilisés ;
(7) Tous les articles qualifiés doivent être marqués de la date de stérilisation et de la date de péremption ;
(8) Une fois chaque lot de traitement de stérilisation terminé, enregistrez le nom, la quantité, la température, l'heure et l'opérateur des produits stérilisés.
Exigences pour le traitement des déchets toxiques et bactériens
Le matériel expérimental et les cultures utilisés dans les expériences microbiologiques ne doivent pas être sortis du laboratoire sans désinfection.
1. Les matériaux et déchets contaminés cultivés doivent être placés dans des conteneurs étanches ou des paniers métalliques et stockés de manière centralisée dans des endroits désignés jusqu'à ce qu'ils soient uniformément autoclavés.
2. Les cultures contaminées par des micro-organismes doivent être autoclavées à 121°C pendant 30 minutes.
3. Après utilisation, les pailles contaminées doivent être placées dans une solution de savon créol à 5 % ou une solution d'acide carbolique, trempées pendant au moins 24 heures (le liquide désinfectant ne doit pas être inférieur à la hauteur de trempage), puis stérilisées à haute pression à 121°C pendant 30 minutes.
4. Le liquide de coloration et de rinçage des frottis peut généralement être rejeté directement dans les égouts. Le liquide de rinçage des bactéries virulentes doit être rincé dans un bécher et stérilisé à haute pression avant d'être déversé à l'égout. Les lames colorées sont placées dans une solution de savon crésol à 5 %. Après avoir trempé dans l'eau pendant 24 heures, faites bouillir et lavez. Les lames ou boîtes utilisées pour les tests d'agglutination doivent être autoclavées puis lavées.
5. Après avoir brisé la culture, vaporisez et trempez immédiatement les parties contaminées avec une solution de savon de crésol à 5 % ou une solution d'acide carbolique, laissez tremper pendant une demi-heure puis essuyez.
Les vêtements de travail contaminés ou les vêtements de travail, casquettes, masques, etc. portés lors d'essais violents doivent être placés dans des sacs de désinfection spéciaux et stérilisés à haute pression avant d'être lavés.
Exigences de préparation moyennes
La qualité de la préparation du milieu de culture affectera directement la croissance des micro-organismes, car divers micro-organismes ont des besoins nutritionnels différents et des objectifs de culture différents. Les exigences de préparation des différents milieux de culture sont les suivantes :
1. Pesez les ingrédients selon la formule moyenne, puis dissolvez-les dans de l'eau distillée. La qualité des réactifs et des médicaments appliqués doit être inspectée avant utilisation.
2. Mesure et ajustement du pH : la mesure du pH doit être effectuée lorsque le milieu de culture est refroidi à température ambiante, car il existe une certaine différence de pH dans des conditions chaudes ou froides. Lorsque la mesure est terminée, ajoutez un alcali ou un acide selon la quantité calculée et mélangez bien. Devrait être testé à nouveau. La valeur du pH du milieu de culture doit être précise, sinon elle affectera la croissance des micro-organismes ou affectera l'observation des résultats. Cependant, il convient de noter que la stérilisation à haute pression peut affecter la diminution ou l'augmentation du pH de certains milieux de culture, il est donc déconseillé de stériliser à une pression trop élevée ou trop souvent pour éviter d'affecter la qualité du milieu de culture. Les indicateurs, le désoxycholate de sodium, l'agar, etc. sont généralement ajoutés après avoir ajusté le pH.
3. Le milieu de culture doit rester dégagé pour faciliter l’observation de la croissance bactérienne. Une fois le milieu de culture chauffé et bouilli, il peut être filtré avec du coton absorbant ou de la flanelle pour éliminer les sédiments. Si nécessaire, il peut être clarifié avec du blanc d'oeuf. Les bandelettes de gélose utilisées doivent être préalablement lavées et séchées. Avant utilisation, évitez d’altérer la transparence à cause des impuretés présentes dans la gélose.
4. Les récipients en fer, en cuivre et autres ne doivent pas être utilisés pour contenir le milieu de culture. Il est préférable d’utiliser des récipients en verre dur, neutres et propres.
5. La stérilisation du milieu de culture doit non seulement atteindre l'objectif d'une stérilisation complète, mais également veiller à ne pas réduire sa valeur nutritionnelle en raison du chauffage. Généralement, 121°C pendant 15 minutes suffit. Pour les milieux de culture contenant des substances intolérantes à la chaleur élevée telles que les sucres et le sérum, la gélatine, etc., doivent être stérilisés à basse température ou par méthode intermittente. Certains réactifs qui ne peuvent pas être chauffés, tels que le tellurite de potassium, le jaune d'œuf, le TTC, les antibiotiques, etc., doivent être refroidis à environ 50 °C après que la gélose basique ait été autoclavée puis ajoutée ;
6. Après la préparation de chaque lot de milieu de culture, un test de croissance stérile et un test de croissance des souches testées doivent être effectués. S'il s'agit d'un milieu de culture biochimique, utilisez des souches bactériennes standards pour l'inoculation et la culture, et observez les résultats de la réaction biochimique. Cela devrait montrer une réaction normale. Le milieu de culture ne doit pas être conservé trop longtemps. Si nécessaire, il peut être conservé au réfrigérateur à 4°C.
7. Il existe actuellement de nombreux types de milieux de culture secs. Chaque lot doit utiliser des souches standards pour les tests de croissance ou l’observation des réactions biochimiques. Différents milieux de culture ne peuvent être utilisés qu'après que le test de croissance des souches correspondantes soit bon. Ceux nouvellement achetés ou séchés qui ont été stockés pendant une longue période peuvent être utilisés. Le pH du milieu de culture doit également être mesuré lors de sa préparation, et le dosage et la méthode doivent être suivis conformément aux instructions du produit.
8. Les réactifs chimiques, les conditions de stérilisation, les résultats des tests de croissance des souches et le personnel de production utilisé dans chaque lot de milieux de culture préparés doivent être enregistrés pour enquête.
Exigences en matière de prélèvement et de traitement des échantillons
1. Les échantillons de contrôle prélevés doivent être représentatifs. Lors de l'échantillonnage, les matières premières, la transformation, le transport, les méthodes et conditions de stockage du lot de produits alimentaires, les conditions sanitaires environnementales environnantes, etc. doivent être étudiées en détail pour vérifier s'il existe des sources de contamination.
2. Selon le type et la quantité d'aliments, la quantité et la méthode d'échantillonnage doivent être effectuées conformément aux exigences des méthodes d'inspection standard.
3. Faites attention au fonctionnement aseptique lors de l'échantillonnage et le récipient doit être stérilisé pour éviter toute contamination microbienne dans l'environnement. Le récipient ne doit pas être stérilisé avec une solution de savon de créosal, ni avec de la chlorméthionine, de l'alcool ou d'autres désinfectants, et il ne doit pas contenir de tels désinfectants ou antibiotiques. Afin d'éviter de tuer les micro-organismes présents dans l'échantillon, les ciseaux, couteaux et cuillères utilisés doivent également être stérilisés avant utilisation.
4. Les échantillons doivent être envoyés à la salle d’inspection pour inspection immédiatement après leur prélèvement. Le processus d’inspection ne dépasse généralement pas 3 heures. Si la distance est longue, elle peut être stockée dans un environnement de 1 à 5 ℃. S’il doit être congelé, il doit être conservé congelé. Soumettre pour inspection.
5. Après avoir reçu l'échantillon, la salle d'inspection l'enregistrera (nom de l'échantillon, unité d'inspection, quantité, date, numéro, etc.) et observera l'apparence de l'échantillon. Si l’une des conditions suivantes est constatée, l’inspection peut être refusée :
(1) Les échantillons qui ont été stérilisés par des méthodes spéciales à haute pression, par ébullition ou par d'autres méthodes perdront leur importance en tant que représentation de l'aliment d'origine ;
(2) Des bouteilles et des sacs de nourriture ont été ouverts, de la viande cuite et ses produits, de la volaille cuite et d'autres aliments ont été brisés et incomplets, c'est-à-dire que la forme originale des aliments a été perdue (à l'exception des échantillons d'intoxication alimentaire) ;
(3) La quantité d'échantillonnage est insuffisante comme requis ;
Pour les échantillons soumis à l'inspection qui répondent aux exigences, la salle d'inspection doit immédiatement procéder à une inspection après les avoir reçus. Si les conditions ne sont pas remplies, ils doivent être conservés dans un réfrigérateur à 4°C, se préparer à créer les conditions à temps, puis procéder à une inspection.
6. Lors de l'inspection des échantillons, effectuez le traitement approprié en fonction de leurs différentes propriétés.
(1) Lors de l'inoculation d'échantillons liquides, ils doivent être soigneusement mélangés et inoculés en fonction de la quantité.
(2) Pour les échantillons solides, utilisez un couteau stérilisé pour découper 25 g de différentes parties, placez-les dans 225 ml de solution saline stérilisée ou d'autres solutions, écrasez et mélangez avec un homogénéisateur et inoculez en fonction de la quantité.
(3) Les bouteilles et les sacs de nourriture doivent être ouverts par stérilisation et les méthodes ci-dessus doivent être sélectionnées en fonction des caractéristiques avant l'inoculation.
Exigences en matière d’inspection, d’enregistrement et de déclaration des échantillons
1. Après avoir reçu l'échantillon, la salle d'inspection procédera d'abord à une inspection d'apparence et effectuera rapidement l'inspection conformément aux méthodes d'inspection standard nationales. Pendant le processus d'inspection, les opérations aseptiques doivent être effectuées avec soin, de manière responsable et strictement pour éviterrésultat du test microbiencontamination dans l’environnement.
2. Les méthodes utilisées pendant le processus d'inspection des échantillons, les phénomènes et les résultats qui se sont produits, etc. doivent être consignés dans des dossiers de test écrits comme base pour l'analyse et le jugement des résultats. Les enregistrements doivent être détaillés, clairs, authentiques, objectifs et ne doivent pas être altérés ou falsifiés.
Exigences de fonctionnement aseptique :
1.Vous devez porter des vêtements de travail et une casquette de travail lors de l’inoculation des bactéries.
2. Lors de l'inoculation d'échantillons alimentaires, il faut porter des vêtements de travail spéciaux, des casquettes et des pantoufles, qui doivent être placés dans la salle tampon de la salle stérile et utilisés après désinfection UV avant le travail.
3. Lors de l'inoculation d'échantillons alimentaires, lavez-vous les mains avec du savon avant d'entrer dans la salle stérile, puis essuyez-vous les mains avec un coton imbibé d'alcool à 75 %.
4. Les pailles, les plats plats et les milieux de culture utilisés pour l'inoculation doivent être stérilisés et stérilisés. Les contenants inutilisés ne doivent pas être laissés inutilisés après ouverture de l’emballage. Les ustensiles en métal doivent être autoclavés ou brûlés trois fois avec de l'alcool à 95 % avant utilisation.
5. Lorsque vous retirez la paille de l'emballage, la pointe de la paille ne doit pas toucher les parties exposées. Lors de l'utilisation de la paillette pour inoculer le tube à essai ou la plaque, la pointe de la paille ne doit pas toucher le bord du tube à essai ou de la plaque.
6. L'inoculation des échantillons et le transfert des bactéries doivent être effectués devant une lampe à alcool. Lors de l'inoculation de bactéries ou d'échantillons, la paillette doit être stérilisée à la flamme après l'avoir sortie de l'emballage et ouvert le bouchon du tube à essai.
7. Avant d'inoculer les bactéries, tous les fils métalliques de l'anse et de l'aiguille d'inoculation doivent être brûlés avec une flamme et, si nécessaire, la connexion entre l'anse, l'aiguille et la tige doit être brûlée. La boucle d'inoculation pour inoculer les bactéries tuberculeuses et les bactéries virulentes doit être bouillie dans de l'eau bouillante pendant 5 minutes, puis brûlée par une flamme.
8. Lorsque vous aspirez un liquide bactérien ou des échantillons avec une paille, utilisez l'embout en caoutchouc correspondant pour l'aspirer et ne l'aspirez pas directement avec la bouche.
Exigences d'utilisation de la salle stérile :
1. Les fenêtres donnant sur l'extérieur de la salle stérile doivent être à double vitrage et scellées. Il ne faut pas les ouvrir à volonté. Il doit y avoir une salle tampon et une porte coulissante correspondant à la taille de la salle stérile. Il devrait également y avoir une petite fenêtre de 0,5 à 0,7 m2. En préparation pour le passage des objets après être entré dans la salle stérile.
2. La salle stérile doit être maintenue propre. Après le travail, il doit être désinfecté avec une solution de savon de crésol à 2% à 3%, la surface de travail doit être essuyée et les objets non liés à l'expérience ne doivent pas être stockés.
3. La porte de la salle stérile doit être bien fermée avant et après utilisation et la lampe ultraviolette doit être allumée. Si une lampe ultraviolette suspendue intérieure est utilisée pour la désinfection, une lampe ultraviolette de 30 W est requise. La distance est de 1,0 m et la durée d'irradiation n'est pas inférieure à 30 minutes. Lors de l'utilisation de lampes ultraviolettes, il convient de veiller à ce qu'elles fonctionnent directement sous la lumière ultraviolette pour éviter tout dommage. La lampe doit être doucement essuyée avec un coton imbibé d'alcool toutes les deux semaines pour éliminer la poussière et la graisse afin de réduire l'impact de la pénétration des ultraviolets.
4. Lors du traitement et de l'inoculation d'échantillons alimentaires, entrez dans la salle stérile pour l'opération et n'êtes pas autorisé à entrer ou à sortir à volonté. Si des objets doivent être transmis, ils peuvent être transmis par la petite fenêtre.
5. Si la salle stérile doit être équipée d’un système de climatisation, un dispositif de filtrage doit être prévu.
Exigences en matière de désinfection et de stérilisation
Verrerie, ustensiles métalliques et milieux de culture utilisés pourtests microbiologiques, les cultures contaminées et inoculées, etc. doivent être stérilisées avant utilisation. Méthodes de stérilisation à la vapeur par chaleur sèche et par chaleur humide.
1. Préparation avant stérilisation
(1) Tous les articles qui doivent être stérilisés doivent d’abord être lavés et séchés. Les verres tels que les pailles et les plats plats doivent être bien emballés dans du papier. Si des tubes métalliques sont utilisés, les trous de ventilation doivent être ouverts.
(2) Enveloppez le bouchon de la fiole triangulaire contenant le milieu de culture dans du papier, couvrez le tube à essai, retirez le noyau de la seringue et enveloppez-le de gaze.
2. installer
(1) Stérilisateur à chaleur sèche : Les articles ne doivent pas être surpeuplés et ne peuvent pas toucher les quatre parois de la boîte.
(2) Grand cuiseur vapeur haute pression : placez les articles stérilisés, enveloppez-les séparément et placez-les directement dans le cylindre de stérilisation. Ne surchargez pas les articles.
3. Inspection de l'équipement
(1) Vérifiez si l'interrupteur de porte est flexible, si l'anneau en caoutchouc est endommagé et s'il est plat.
(2) Vérifiez si le manomètre reste à la position zéro lorsque la vapeur est évacuée, fermez la porte et le couvercle, aérez la vapeur ou la chaleur, et observez s'il y a une fuite d'air, si les conditions marquées par le manomètre et le thermomètre correspondent et si la canalisation est bloquée.
(3) Pour les stérilisateurs équipés de dispositifs de contrôle électronique automatique du programme, le programme spécifié doit être vérifié avant utilisation pour voir s'il répond aux exigences de stérilisation.
4. Traitement de stérilisation
(1) Méthode de stérilisation par chaleur sèche :
Cette méthode convient aux articles qui ne s’endommagent pas, ne se détériorent pas ou ne s’évaporent pas dans des conditions de chaleur sèche. Il est plus couramment utilisé pour stériliser la verrerie, les produits métalliques, les produits céramiques, etc.
①Les instruments et ustensiles doivent être lavés avant la cuisson à sec pour éviter que la saleté fixée à la surface ne soit carbonisée.
② Pendant la stérilisation, les articles ne doivent pas être surpeuplés, ne doivent pas entrer directement en contact avec le fond et la paroi de la boîte et laisser des espaces entre les articles.
③ Pendant la stérilisation, fermez hermétiquement la porte, branchez l'alimentation électrique, ouvrez le trou d'échappement pendant environ 30 minutes pour éliminer l'air froid du stérilisateur, réglez le voyant lorsque la température monte à 160 °C et maintenez-le pendant 1,5 à 2 heures.
④Une fois la stérilisation terminée ou pendant le processus de montée en température, la porte doit être ouverte en dessous de 60°C.
(2) Les étapes suivantes doivent être suivies lors de l’utilisation d’un autocuiseur portable ou d’un stérilisateur à vapeur sous pression vertical :
① Ajoutez 3 L d'eau au corps principal de l'autocuiseur portable et 16 L d'eau à l'autocuiseur vertical (la quantité d'eau doit être reconstituée lorsqu'elle est réutilisée, et l'eau doit être remplacée si elle devient trouble) ;
② Pour un autocuiseur portable, insérez le tuyau d'échappement sur le couvercle supérieur dans le tube carré sur la paroi intérieure du baril de stérilisation (les stérilisateurs sans tuyaux ou ceux avec des tuyaux corrodés et fissurés ne doivent pas être utilisés) ;
③ Couvrez le capot supérieur et serrez-le fermement pour éviter les fuites d'air ; placez le stérilisateur sur la source de feu pour chauffer, allumez l'autocuiseur vertical et ouvrez la soupape d'échappement sur le couvercle supérieur pour laisser sortir l'air (air évacué pendant 10 à 15 minutes après l'ébullition de l'eau) ;
④Fermez la soupape d'échappement pour augmenter la pression de vapeur aux exigences spécifiées et maintenez-la pendant la durée spécifiée (en fonction de la nature des articles stérilisés et des circonstances pertinentes) ;
⑤ Une fois le temps spécifié atteint, pour les articles qui doivent être séchés, ouvrez immédiatement la soupape d'échappement pour évacuer la vapeur. Lorsque la pression revient à zéro, refroidissez-le naturellement à 60°C puis ouvrez le couvercle pour sortir les articles. S'il s'agit d'un article liquide, n'ouvrez pas la soupape d'échappement. Le pot doit être immédiatement retiré de la source de chaleur et laissé refroidir naturellement jusqu'à ce que la pression revienne à zéro et que la température descende en dessous de 60 °C avant d'ouvrir le couvercle pour retirer le contenu afin d'éviter la décompression soudaine du liquide due à une violente ébullition ou une explosion du récipient.
(3) Suivez les étapes suivantes pour utiliser le stérilisateur à vapeur pour autocuiseur horizontal :
①Fermez hermétiquement la porte du pot, ouvrez la vanne d'entrée d'air, introduisez de la vapeur dans la mezzanine pour le préchauffage, et l'air froid de la mezzanine sera automatiquement évacué à travers le pare-air ;
②Une fois que l'intercalaire atteint la température prédéterminée, ouvrez la vanne d'entrée d'air de la chambre du pot, introduisez la vapeur dans la chambre du pot et l'air froid dans la chambre du pot sera automatiquement évacué par le pare-air de la chambre du pot ;
③Lorsque la pression et la température dans la chambre du pot atteignent la pression spécifiée, ajustez la vanne d'entrée d'air pour la maintenir constante ;
④ Refroidissez la température naturellement ou artificiellement à 60 ℃ avant d'ouvrir la porte pour sortir les articles. N'utilisez pas la méthode d'évacuation rapide de la vapeur pour éviter une chute de pression soudaine, une ébullition violente du liquide ou une explosion du récipient ;
⑤ Lors de l'utilisation d'un stérilisateur à vapeur à pression contrôlée par programme automatique, après avoir placé les articles et fermé hermétiquement la porte, l'interrupteur correspondant doit être enfoncé en fonction de la catégorie des articles afin que la stérilisation puisse être automatiquement effectuée selon les procédures requises. Pendant la stérilisation, l'instrument ci-joint doit être utilisé pour enregistrer la température et la durée. Pour référence future, les exigences de fonctionnement doivent être strictement conformes aux instructions du fabricant ;
5. Température et durée de stérilisation
(1) La température de stérilisation du stérilisateur à chaleur sèche est de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Température et durée de stérilisation du stérilisateur à vapeur sous pression
Méthode de stérilisation intermittente
1. Méthode de stérilisation :
Utilisez la stérilisation à la vapeur sans pression. Certaines substances sont facilement détruites par la stérilisation à la vapeur à haute pression, cette méthode peut donc être utilisée pour la stérilisation.
(1) Placez les articles à stériliser dans le pot, couvrez le couvercle supérieur, ouvrez la sortie de vidange et évacuez l'eau restante dans le pot.
(2) Fermez la sortie de vidange, ouvrez la porte d'entrée d'air et désinfectez pendant 10 à 20 minutes si nécessaire.
(3) Une fois la stérilisation terminée, fermez la porte d'entrée d'air, sortez les articles et attendez qu'ils refroidissent à température ambiante, mettez-les dans un incubateur à 37°C pendant la nuit et continuez à stériliser selon la méthode ci-dessus le lendemain. Faites cela trois fois pour atteindre l’objectif de stérilisation.
2. Comment utiliser le sérum coagulateur :
Lorsque le milieu de culture contient des ingrédients spéciaux tels que du sérum ou des œufs, une chaleur élevée détruira ses nutriments. Par conséquent, une basse température peut être utilisée pour coaguler le sérum et atteindre des objectifs de stérilisation :
(1) Lors de l'utilisation d'aliquotes de sérum stérilisé par cette méthode, les opérations aseptiques doivent être strictement suivies et les tubes à essai et les plaques doivent également être stérilisés avant utilisation ;
(2) Transformez le milieu de culture en une pente ou une couche élevée selon les besoins. Après avoir ajouté suffisamment d'eau, branchez l'alimentation électrique, augmentez la température à 75 ~ 90 °C pendant une heure, puis stérilisez-la. Placez-le dans un incubateur à 37°C pendant la nuit, puis stérilisez-le trois fois.
3. Faire bouillir et désinfecter :
Vous pouvez utiliser une marmite bouillante ou un stérilisateur bouillant. Une fois l'eau bouillie, faites-la bouillir pendant 5 à 15 minutes. Vous pouvez également ajouter 2 % d’acide carbolique à l’eau et la faire bouillir pendant 5 minutes. Ajoutez 0,02 % de formaldéhyde et faites-le bouillir à 80 °C pendant 60 minutes pour atteindre l'objectif de stérilisation. Cependant, une stérilisation par ébullition peut être réalisée. Lors de l'utilisation d'exhausteurs, il convient de prêter attention au caractère corrosif des objets.
4. Traitement de stérilisation :
Après stérilisation, les articles sont déjà stériles dans des circonstances normales. Ils doivent être soigneusement inspectés et placés une fois sortis du stérilisateur pour éviter toute re-contamination ;
(1) Sortez les articles et vérifiez immédiatement l'intégrité de l'emballage. S'il est endommagé ou si le tampon est retiré, il ne peut pas être utilisé comme article stérile ;
(2) Les articles retirés ne peuvent être utilisés comme articles stériles si leur emballage est manifestement trempé dans l'eau ;
(3) Le milieu de culture ou les réactifs doivent être vérifiés pour voir s'ils correspondent à la couleur ou à l'état après stérilisation. Ceux qui ne satisfont pas aux exigences doivent être éliminés ;
(4) Pour les conteneurs ouverts/fermés, les trous du tamis doivent être fermés lors de leur retrait ;
(5) Si les objets retirés tombent au sol, sont égarés dans un endroit impur ou sont tachés d'eau, ils sont considérés comme contaminés et ne peuvent pas être utilisés comme objets stériles ;
(6) Les articles stérilisés qualifiés retirés doivent être stockés dans la salle de stockage ou dans une armoire anti-poussière, et il est strictement interdit de les mélanger avec des articles non stérilisés ;
(7) Tous les articles qualifiés doivent être marqués de la date de stérilisation et de la date de péremption ;
(8) Une fois chaque lot de traitement de stérilisation terminé, enregistrez le nom, la quantité, la température, l'heure et l'opérateur des produits stérilisés.
Exigences pour le traitement des déchets toxiques et bactériens
Le matériel expérimental et les cultures utilisés dans les expériences microbiologiques ne doivent pas être sortis du laboratoire sans désinfection.
1. Les matériaux et déchets contaminés cultivés doivent être placés dans des conteneurs étanches ou des paniers métalliques et stockés de manière centralisée dans des endroits désignés jusqu'à ce qu'ils soient uniformément autoclavés.
2. Les cultures contaminées par des micro-organismes doivent être autoclavées à 121°C pendant 30 minutes.
3. Après utilisation, les pailles contaminées doivent être placées dans une solution de savon créol à 5 % ou une solution d'acide carbolique, trempées pendant au moins 24 heures (le liquide désinfectant ne doit pas être inférieur à la hauteur de trempage), puis stérilisées à haute pression à 121°C pendant 30 minutes.
4. Le liquide de coloration et de rinçage des frottis peut généralement être rejeté directement dans les égouts. Le liquide de rinçage des bactéries virulentes doit être rincé dans un bécher et stérilisé à haute pression avant d'être déversé à l'égout. Les lames colorées sont placées dans une solution de savon crésol à 5 %. Après avoir trempé dans l'eau pendant 24 heures, faites bouillir et lavez. Les lames ou boîtes utilisées pour les tests d'agglutination doivent être autoclavées puis lavées.
5. Après avoir brisé la culture, vaporisez et trempez immédiatement les parties contaminées avec une solution de savon de crésol à 5 % ou une solution d'acide carbolique, laissez tremper pendant une demi-heure puis essuyez.
Les vêtements de travail contaminés ou les vêtements de travail, casquettes, masques, etc. portés lors d'essais violents doivent être placés dans des sacs de désinfection spéciaux et stérilisés à haute pression avant d'être lavés.
Exigences de préparation moyennes
La qualité de la préparation du milieu de culture affectera directement la croissance des micro-organismes, car divers micro-organismes ont des besoins nutritionnels différents et des objectifs de culture différents. Les exigences de préparation des différents milieux de culture sont les suivantes :
1. Pesez les ingrédients selon la formule moyenne, puis dissolvez-les dans de l'eau distillée. La qualité des réactifs et des médicaments appliqués doit être inspectée avant utilisation.
2. Mesure et ajustement du pH : la mesure du pH doit être effectuée lorsque le milieu de culture est refroidi à température ambiante, car il existe une certaine différence de pH dans des conditions chaudes ou froides. Lorsque la mesure est terminée, ajoutez un alcali ou un acide selon la quantité calculée et mélangez bien. Devrait être testé à nouveau. La valeur du pH du milieu de culture doit être précise, sinon elle affectera la croissance des micro-organismes ou affectera l'observation des résultats. Cependant, il convient de noter que la stérilisation à haute pression peut affecter la diminution ou l'augmentation du pH de certains milieux de culture, il est donc déconseillé de stériliser à une pression trop élevée ou trop souvent pour éviter d'affecter la qualité du milieu de culture. Les indicateurs, le désoxycholate de sodium, l'agar, etc. sont généralement ajoutés après avoir ajusté le pH.
3. Le milieu de culture doit rester dégagé pour faciliter l’observation de la croissance bactérienne. Une fois le milieu de culture chauffé et bouilli, il peut être filtré avec du coton absorbant ou de la flanelle pour éliminer les sédiments. Si nécessaire, il peut être clarifié avec du blanc d'oeuf. Les bandelettes de gélose utilisées doivent être préalablement lavées et séchées. Avant utilisation, évitez d’altérer la transparence à cause des impuretés présentes dans la gélose.
4. Les récipients en fer, en cuivre et autres ne doivent pas être utilisés pour contenir le milieu de culture. Il est préférable d’utiliser des récipients en verre dur, neutres et propres.
5. La stérilisation du milieu de culture doit non seulement atteindre l'objectif d'une stérilisation complète, mais également veiller à ne pas réduire sa valeur nutritionnelle en raison du chauffage. Généralement, 121°C pendant 15 minutes suffit. Pour les milieux de culture contenant des substances intolérantes à la chaleur élevée telles que les sucres et le sérum, la gélatine, etc., doivent être stérilisés à basse température ou par méthode intermittente. Certains réactifs qui ne peuvent pas être chauffés, tels que le tellurite de potassium, le jaune d'œuf, le TTC, les antibiotiques, etc., doivent être refroidis à environ 50 °C après que la gélose basique ait été autoclavée puis ajoutée ;
6. Après la préparation de chaque lot de milieu de culture, un test de croissance stérile et un test de croissance des souches testées doivent être effectués. S'il s'agit d'un milieu de culture biochimique, utilisez des souches bactériennes standards pour l'inoculation et la culture, et observez les résultats de la réaction biochimique. Cela devrait montrer une réaction normale. Le milieu de culture ne doit pas être conservé trop longtemps. Si nécessaire, il peut être conservé au réfrigérateur à 4°C.
7. Il existe actuellement de nombreux types de milieux de culture secs. Chaque lot doit utiliser des souches standards pour les tests de croissance ou l’observation des réactions biochimiques. Différents milieux de culture ne peuvent être utilisés qu'après que le test de croissance des souches correspondantes soit bon. Ceux nouvellement achetés ou séchés qui ont été stockés pendant une longue période peuvent être utilisés. Le pH du milieu de culture doit également être mesuré lors de sa préparation, et le dosage et la méthode doivent être suivis conformément aux instructions du produit.
8. Les réactifs chimiques, les conditions de stérilisation, les résultats des tests de croissance des souches et le personnel de production utilisé dans chaque lot de milieux de culture préparés doivent être enregistrés pour enquête.
Exigences en matière de prélèvement et de traitement des échantillons
1. Les échantillons de contrôle prélevés doivent être représentatifs. Lors de l'échantillonnage, les matières premières, la transformation, le transport, les méthodes et conditions de stockage du lot de produits alimentaires, les conditions sanitaires environnementales environnantes, etc. doivent être étudiées en détail pour vérifier s'il existe des sources de contamination.
2. Selon le type et la quantité d'aliments, la quantité et la méthode d'échantillonnage doivent être effectuées conformément aux exigences des méthodes d'inspection standard.
3. Faites attention au fonctionnement aseptique lors de l'échantillonnage et le récipient doit être stérilisé pour éviter toute contamination microbienne dans l'environnement. Le récipient ne doit pas être stérilisé avec une solution de savon de créosal, ni avec de la chlorméthionine, de l'alcool ou d'autres désinfectants, et il ne doit pas contenir de tels désinfectants ou antibiotiques. Afin d'éviter de tuer les micro-organismes présents dans l'échantillon, les ciseaux, couteaux et cuillères utilisés doivent également être stérilisés avant utilisation.
4. Les échantillons doivent être envoyés à la salle d’inspection pour inspection immédiatement après leur prélèvement. Le processus d’inspection ne dépasse généralement pas 3 heures. Si la distance est longue, elle peut être stockée dans un environnement de 1 à 5 ℃. S’il doit être congelé, il doit être conservé congelé. Soumettre pour inspection.
5. Après avoir reçu l'échantillon, la salle d'inspection l'enregistrera (nom de l'échantillon, unité d'inspection, quantité, date, numéro, etc.) et observera l'apparence de l'échantillon. Si l’une des conditions suivantes est constatée, l’inspection peut être refusée :
(1) Les échantillons qui ont été stérilisés par des méthodes spéciales à haute pression, par ébullition ou par d'autres méthodes perdront leur importance en tant que représentation de l'aliment d'origine ;
(2) Des bouteilles et des sacs de nourriture ont été ouverts, de la viande cuite et ses produits, de la volaille cuite et d'autres aliments ont été brisés et incomplets, c'est-à-dire que la forme originale des aliments a été perdue (à l'exception des échantillons d'intoxication alimentaire) ;
(3) La quantité d'échantillonnage est insuffisante comme requis ;
Pour les échantillons soumis à l'inspection qui répondent aux exigences, la salle d'inspection doit immédiatement procéder à une inspection après les avoir reçus. Si les conditions ne sont pas remplies, ils doivent être conservés dans un réfrigérateur à 4°C, se préparer à créer les conditions à temps, puis procéder à une inspection.
6. Lors de l'inspection des échantillons, effectuez le traitement approprié en fonction de leurs différentes propriétés.
(1) Lors de l'inoculation d'échantillons liquides, ils doivent être soigneusement mélangés et inoculés en fonction de la quantité.
(2) Pour les échantillons solides, utilisez un couteau stérilisé pour découper 25 g de différentes parties, placez-les dans 225 ml de solution saline stérilisée ou d'autres solutions, écrasez et mélangez avec un homogénéisateur et inoculez en fonction de la quantité.
(3) Les bouteilles et les sacs de nourriture doivent être ouverts par stérilisation et les méthodes ci-dessus doivent être sélectionnées en fonction des caractéristiques avant l'inoculation.
Exigences en matière d’inspection, d’enregistrement et de déclaration des échantillons
1. Après avoir reçu l'échantillon, la salle d'inspection procédera d'abord à une inspection d'apparence et effectuera rapidement l'inspection conformément aux méthodes d'inspection standard nationales. Pendant le processus d'inspection, les opérations aseptiques doivent être effectuées avec soin, de manière responsable et strictement pour éviterrésultat du test microbiencontamination dans l’environnement.
2. Les méthodes utilisées pendant le processus d'inspection des échantillons, les phénomènes et les résultats qui se sont produits, etc. doivent être consignés dans des dossiers de test écrits comme base pour l'analyse et le jugement des résultats. Les enregistrements doivent être détaillés, clairs, authentiques, objectifs et ne doivent pas être altérés ou falsifiés.
