Ringkasan persyaratan pengujian mikrobiologi
2024-01-24 15:14:33
Persyaratan dan langkah-langkahnyapengujian mikrobiologiadalah sebagai berikut:
Persyaratan operasi aseptik:
1.Anda harus mengenakan pakaian kerja dan topi kerja saat melakukan inokulasi bakteri.
2. Saat melakukan inokulasi sampel makanan, pakaian kerja khusus, topi dan sandal harus dipakai, yang harus ditempatkan di ruang penyangga ruang steril dan digunakan setelah disinfeksi UV sebelum bekerja.
3. Saat menginokulasi sampel makanan, cuci tangan dengan sabun sebelum memasuki ruang steril, lalu bersihkan tangan dengan kapas alkohol 75%.
4. Sedotan, piring datar dan media kultur yang digunakan untuk inokulasi harus disterilkan dan disterilkan. Wadah yang tidak terpakai tidak boleh dibiarkan begitu saja setelah kemasan dibuka. Peralatan logam harus diautoklaf atau dibakar tiga kali dengan alkohol 95% sebelum digunakan.
5. Saat mengeluarkan sedotan dari kemasannya, ujung sedotan tidak boleh menyentuh bagian yang terbuka. Saat menggunakan sedotan untuk menginokulasi tabung reaksi atau piring, ujung sedotan tidak boleh menyentuh tepi tabung reaksi atau piring.
6. Inokulasi sampel dan pemindahan bakteri harus dilakukan di depan lampu alkohol. Saat menginokulasi bakteri atau sampel, sedotan harus disterilkan dengan api setelah dikeluarkan dari kemasan dan dibuka sumbat tabung reaksi.
7. Sebelum menginokulasi bakteri, semua kabel logam pada loop dan jarum inokulasi harus dibakar dengan api, dan jika perlu, sambungan antara loop, jarum dan batang harus dibakar. Lingkaran inokulasi untuk menginokulasi bakteri tuberkulosis dan bakteri virulen harus direbus dalam air mendidih selama 5 menit, kemudian dibakar dengan api.
8. Saat menyedot cairan atau sampel bakteri dengan sedotan, gunakan ujung karet yang sesuai untuk menyedotnya, dan jangan langsung menyedotnya dengan mulut.
Persyaratan penggunaan ruangan steril:
1. Jendela yang mengarah ke luar ruangan steril harus diberi kaca ganda dan tertutup rapat. Mereka tidak boleh dibuka sesuka hati. Harus tersedia ruang penyangga dan pintu geser yang sesuai dengan ukuran ruang steril. Juga harus ada jendela kecil berukuran 0,5~0,7m2. Sebagai persiapan penyerahan barang setelah masuk ruangan steril.
2. Ruangan steril harus dijaga kebersihannya. Setelah bekerja, permukaan kerja harus didesinfeksi dengan larutan sabun kresol 2% hingga 3%, permukaan kerja harus dibersihkan, dan barang-barang yang tidak terkait dengan percobaan tidak boleh disimpan.
3. Pintu ruang steril harus ditutup rapat sebelum dan sesudah digunakan, dan lampu ultraviolet harus dinyalakan. Jika lampu ultraviolet gantung dalam ruangan digunakan untuk desinfeksi, diperlukan lampu ultraviolet 30W. Jaraknya 1,0m, dan waktu penyinaran tidak kurang dari 30 menit. Saat menggunakan lampu ultraviolet, perhatian harus diberikan pada Operasikan langsung di bawah sinar ultraviolet untuk menghindari kerusakan. Lampu perlu diseka secara lembut dengan bola kapas beralkohol setiap dua minggu untuk menghilangkan debu dan lemak guna mengurangi dampak penetrasi sinar ultraviolet.
4. Saat memproses dan menginokulasi spesimen makanan, memasuki ruang steril untuk pengoperasian dan tidak diperbolehkan masuk atau keluar sesuka hati. Jika barang perlu diteruskan, barang tersebut dapat dilewatkan melalui jendela kecil.
5. Jika AC perlu dipasang di ruangan steril, harus ada alat penyaring.
Persyaratan Disinfeksi dan Sterilisasi
Peralatan gelas, peralatan logam dan media kultur digunakan untukpengujian mikrobiologi, kultur yang terkontaminasi dan diinokulasi, dll. harus disterilkan sebelum digunakan. Metode sterilisasi uap panas kering dan tekanan panas lembab.
1. Persiapan sebelum sterilisasi
(1) Semua barang yang akan disterilkan harus dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Peralatan gelas seperti sedotan dan piring datar harus dikemas rapat dengan kertas. Jika tabung logam digunakan, lubang ventilasi pada tabung tersebut harus dibuka.
(2) Bungkus sumbat labu segitiga berisi media kultur dengan kertas, tutup tabung reaksi, tarik keluar inti spuit, lalu bungkus dengan kain kasa.
2. pasang
(1) Alat sterilisasi panas kering: Barang tidak boleh terlalu penuh dan tidak boleh menyentuh keempat dinding kotak.
(2) Pemasak uap besar-bertekanan tinggi: Tempatkan barang-barang yang telah disterilkan, bungkus secara terpisah, dan masukkan langsung ke dalam silinder sterilisasi. Jangan membuat barang terlalu penuh.
3. Pemeriksaan peralatan
(1) Periksa apakah sakelar pintu fleksibel, apakah cincin karetnya rusak, dan apakah rata.
(2) Periksa apakah pengukur tekanan tetap pada posisi nol ketika uap habis, tutup pintu dan penutup, ventilasi uap atau panas, dan amati apakah ada kebocoran udara, apakah kondisi yang ditandai oleh pengukur tekanan dan termometer cocok, dan apakah pipa tersumbat.
(3) Untuk alat sterilisasi dengan perangkat kendali program elektronik otomatis, program yang ditentukan harus diperiksa sebelum digunakan untuk melihat apakah memenuhi persyaratan sterilisasi.
4. Perawatan sterilisasi
(1) Metode sterilisasi panas kering:
Metode ini cocok untuk barang yang tidak rusak, rusak, atau menguap dalam kondisi panas kering. Ini lebih umum digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas, produk logam, produk keramik, dll.
①Instrumen dan perkakas harus dicuci sebelum dikeringkan-dipanggang untuk mencegah kotoran yang menempel di permukaan menjadi karbonisasi.
② Selama sterilisasi, barang tidak boleh terlalu penuh, jangan menyentuh langsung bagian bawah dan dinding kotak, dan meninggalkan celah di antara barang.
③ Selama sterilisasi, tutup pintu rapat-rapat, sambungkan catu daya, buka lubang pembuangan selama kurang lebih 30 menit untuk menghilangkan udara dingin di dalam alat sterilisasi, sesuaikan lampu indikator saat suhu naik hingga 160°C, dan pertahankan selama 1,5 hingga 2 jam.
④Setelah sterilisasi selesai atau selama proses kenaikan suhu, pintu harus dibuka di bawah 60°C.
(2) Langkah-langkah berikut harus diikuti saat menggunakan alat penanak bertekanan portabel atau alat sterilisasi uap bertekanan vertikal:
① Tambahkan 3L air ke badan utama pressure cooker portabel, dan 16L air ke pressure cooker vertikal (jumlah air harus diisi ulang saat digunakan kembali, dan air perlu diganti jika menjadi keruh);
② Untuk panci presto portabel, masukkan pipa knalpot pada penutup atas ke dalam tabung persegi di dinding bagian dalam tabung sterilisasi (alat sterilisasi tanpa selang atau yang selangnya berkarat dan retak tidak boleh digunakan);
③ Tutup penutup atas dan kencangkan dengan erat untuk mencegah kebocoran udara; letakkan alat sterilisasi di atas sumber api untuk memanaskan, nyalakan daya panci bertekanan vertikal, dan buka katup buang pada penutup atas untuk mengeluarkan udara (buang udara selama 10 hingga 15 menit setelah air mendidih) );
④Tutup katup buang untuk menaikkan tekanan uap ke persyaratan yang ditentukan dan mempertahankannya selama waktu yang ditentukan (tergantung pada sifat barang yang disterilkan dan keadaan terkait);
⑤ Setelah waktu yang ditentukan tercapai, bagi barang yang perlu dikeringkan, segera buka katup buang untuk mengeluarkan uap. Saat tekanan kembali ke nol, dinginkan secara alami hingga 60°C lalu buka tutupnya untuk mengeluarkan item. Jika benda tersebut cair, jangan buka katup buang. Panci harus segera dikeluarkan dari sumber panas dan dibiarkan dingin secara alami hingga tekanan kembali ke nol dan suhu turun di bawah 60°C sebelum membuka tutupnya untuk mengeluarkan isinya guna mencegah dekompresi cairan secara tiba-tiba akibat perebusan hebat atau ledakan wadah.
(3) Ikuti langkah-langkah berikut untuk menggunakan alat sterilisasi uap panci bertekanan horizontal:
①Tutup pintu panci dengan rapat, buka katup saluran masuk udara, masukkan uap ke dalam mezzanine untuk pemanasan awal, dan udara dingin di mezzanine akan secara otomatis dikeluarkan melalui penghalang udara;
②Setelah interlayer mencapai suhu yang telah ditentukan, buka katup saluran masuk udara dari ruang panci, masukkan uap ke dalam ruang panci, dan udara dingin di dalam ruang panci akan secara otomatis dibuang melalui penahan udara ruang panci;
③Ketika tekanan dan suhu di dalam ruang panci mencapai tekanan yang ditentukan, sesuaikan katup saluran masuk udara agar tetap konstan;
④ Dinginkan suhu secara alami atau buatan hingga 60℃ sebelum membuka pintu untuk mengeluarkan barang. Jangan gunakan metode pelepasan uap cepat untuk mencegah penurunan tekanan secara tiba-tiba, cairan mendidih secara tiba-tiba, atau ledakan wadah;
⑤ Saat menggunakan program otomatis-alat sterilisasi uap bertekanan terkontrol, setelah meletakkan barang dan menutup pintu dengan rapat, sakelar yang sesuai harus ditekan sesuai dengan kategori barang sehingga sterilisasi dapat dilakukan secara otomatis sesuai dengan prosedur yang diperlukan. Selama sterilisasi, instrumen yang terpasang harus digunakan untuk mencatat suhu dan waktu. Untuk referensi di masa mendatang, persyaratan pengoperasian harus benar-benar sesuai dengan instruksi pabrik;
5. Suhu dan waktu sterilisasi
(1) Suhu sterilisasi alat sterilisasi panas kering adalah 160℃, 1,5~2 jam.
(2) Suhu sterilisasi dan waktu alat sterilisasi uap bertekanan
Metode sterilisasi intermiten
1. Metode sterilisasi:
Gunakan sterilisasi uap tanpa tekanan. Beberapa zat mudah rusak dengan sterilisasi uap bertekanan tinggi, sehingga cara ini dapat digunakan untuk sterilisasi.
(1) Masukkan barang-barang yang akan disterilkan ke dalam panci, tutup penutup atas, buka saluran pembuangan, dan tiriskan sisa air di dalam panci.
(2) Tutup saluran keluar pembuangan, buka pintu saluran masuk udara, dan desinfeksi selama 10 hingga 20 menit sesuai kebutuhan.
(3) Setelah sterilisasi selesai, tutup pintu saluran masuk udara, keluarkan barang dan tunggu hingga dingin hingga suhu kamar, masukkan ke dalam inkubator bersuhu 37°C semalaman, dan lanjutkan sterilisasi sesuai cara di atas keesokan harinya. Lakukan ini tiga kali untuk mencapai tujuan sterilisasi.
2. Cara menggunakan koagulator serum:
Jika media kultur mengandung bahan khusus seperti serum atau telur, suhu tinggi akan merusak nutrisinya. Oleh karena itu, suhu rendah dapat digunakan untuk mengentalkan serum dan mencapai tujuan sterilisasi:
(1) Saat menggunakan serum yang disterilkan dengan metode ini untuk alikuot, pengoperasian aseptik harus diikuti dengan ketat, dan tabung reaksi serta pelat juga harus disterilkan sebelum digunakan;
(2) Buatlah media budidaya menjadi lereng atau lapisan tinggi sesuai kebutuhan. Setelah menambahkan air secukupnya, sambungkan catu daya, naikkan suhu hingga 75~90°C selama satu jam, lalu sterilkan. Tempatkan dalam inkubator 37°C semalaman, lalu sterilkan tiga kali.
3. Rebus dan desinfeksi:
Anda bisa menggunakan panci mendidih atau alat sterilisasi mendidih. Setelah air mendidih, rebus selama 5 hingga 15 menit. Anda juga bisa menambahkan 2% asam karbolik ke dalam air dan merebusnya selama 5 menit. Tambahkan formaldehida 0,02% dan rebus pada suhu 80°C selama 60 menit untuk mencapai tujuan sterilisasi. Namun, sterilisasi dengan perebusan dapat dilakukan. Saat menggunakan penambah, perhatian harus diberikan pada sifat korosif barang.
4. Perawatan sterilisasi:
Setelah sterilisasi, barang sudah steril dalam keadaan normal. Mereka harus diperiksa dan ditempatkan dengan hati-hati ketika dikeluarkan dari alat sterilisasi untuk menghindari kontaminasi ulang;
(1) Keluarkan barang dan segera periksa integritas kemasannya. Jika ada kerusakan atau tampon dilepas, tidak dapat digunakan sebagai barang steril;
(2) Barang yang dikeluarkan tidak dapat digunakan sebagai barang steril apabila kemasannya jelas-jelas terendam air;
(3) Media kultur atau reagen harus diperiksa apakah warna atau kondisinya sesuai setelah sterilisasi. Yang tidak memenuhi persyaratan harus dibuang;
(4) Untuk wadah buka-tutup, lubang kasa harus ditutup saat dikeluarkan;
(5) Apabila barang yang dipindahkan jatuh ke tanah, salah taruh di tempat yang najis, atau terkena air, maka dianggap terkontaminasi dan tidak dapat digunakan sebagai barang steril;
(6) Barang-barang yang telah disterilkan dan memenuhi syarat yang dikeluarkan hendaknya disimpan di ruang penyimpanan atau lemari tahan debu, dan dilarang keras mencampurkannya dengan barang-barang yang tidak disterilkan;
(7) Semua barang yang memenuhi syarat harus ditandai dengan tanggal sterilisasi dan tanggal kadaluwarsa;
(8) Setelah setiap batch proses sterilisasi selesai, catat nama, jumlah, suhu, waktu, dan operator produk yang disterilkan.
Persyaratan untuk pengolahan limbah beracun dan bakteri
Peralatan percobaan dan kultur yang digunakan dalam percobaan mikrobiologi tidak boleh dikeluarkan dari laboratorium tanpa disinfeksi.
1. Bahan dan limbah budidaya yang terkontaminasi harus ditempatkan dalam wadah rapat atau keranjang kawat dan disimpan secara terpusat di lokasi yang ditentukan sampai semuanya diautoklaf secara merata.
2. Kultur yang terkontaminasi mikroorganisme harus diautoklaf pada suhu 121°C selama 30 menit.
3. Setelah digunakan, sedotan yang terkontaminasi harus dimasukkan ke dalam larutan sabun kreol 5% atau larutan asam karbol, direndam minimal 24 jam (cairan disinfektan tidak boleh lebih rendah dari ketinggian perendaman), kemudian disterilkan dengan tekanan tinggi pada suhu 121°C selama 30 menit.
4. Cairan untuk pewarnaan dan pembilasan noda umumnya dapat dialirkan langsung ke saluran pembuangan. Cairan pembilas bakteri mematikan harus dibilas dalam gelas kimia dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dialirkan ke saluran pembuangan. Kaca objek yang telah diwarnai dimasukkan ke dalam larutan sabun kresol 5%. Setelah direndam dalam air selama 24 jam, rebus dan cuci bersih. Kaca objek atau cawan yang digunakan untuk pengujian aglutinasi harus diautoklaf dan kemudian dicuci.
5. Setelah kultur pecah, segera semprot dan rendam bagian yang terkontaminasi dengan larutan sabun kresol 5% atau larutan asam karbol, rendam selama setengah jam lalu lap hingga bersih.
Pakaian kerja atau pakaian kerja, topi, masker, dll. yang terkontaminasi yang dikenakan untuk pengujian kekerasan harus ditempatkan dalam kantong desinfeksi khusus dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dicuci.
Persyaratan persiapan sedang
Kualitas penyiapan media kultur akan berpengaruh langsung terhadap pertumbuhan mikroorganisme, karena berbagai mikroorganisme mempunyai kebutuhan nutrisi yang berbeda dan tujuan kultur yang berbeda. Persyaratan persiapan berbagai media kultur adalah sebagai berikut:
1. Timbang bahan sesuai formula medium, lalu larutkan dalam air suling. Kualitas reagen dan obat yang digunakan harus diperiksa sebelum digunakan.
2. Pengukuran dan penyesuaian pH: Pengukuran pH sebaiknya dilakukan pada saat media kultur didinginkan hingga suhu kamar, karena terdapat perbedaan pH tertentu dalam kondisi panas atau dingin. Setelah pengukuran selesai, tambahkan alkali atau asam sesuai jumlah yang dihitung dan aduk rata. Harus diuji lagi. Nilai pH media kultur harus akurat, jika tidak maka akan mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme atau mempengaruhi pengamatan hasil. Namun perlu diperhatikan bahwa sterilisasi bertekanan tinggi dapat mempengaruhi penurunan atau peningkatan pH beberapa media kultur, sehingga tidak disarankan untuk mensterilkan dengan tekanan yang terlalu tinggi atau terlalu sering agar tidak mempengaruhi kualitas media kultur. Indikator, natrium deoksikolat, agar, dll. umumnya ditambahkan setelah penyesuaian pH.
3. Media kultur harus tetap bersih untuk memudahkan pengamatan pertumbuhan bakteri. Setelah media kultur dipanaskan dan direbus, dapat disaring dengan kapas penyerap atau kain flanel untuk menghilangkan endapan. Jika perlu bisa diperjelas dengan putih telur. Potongan agar-agar yang digunakan harus dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Sebelum digunakan, hindari mempengaruhi transparansi karena kotoran di dalam agar.
4. Wadah besi, tembaga dan lainnya tidak boleh digunakan untuk menampung media budidaya. Lebih baik menggunakan wadah kaca keras netral yang bersih.
5. Sterilisasi media kultur tidak hanya harus mencapai tujuan sterilisasi menyeluruh, tetapi juga memperhatikan agar nilai gizinya tidak berkurang akibat pemanasan. Umumnya, suhu 121°C selama 15 menit sudah cukup. Untuk media kultur yang mengandung zat yang tidak tahan terhadap panas tinggi seperti gula dan serum, agar-agar, dll, sebaiknya disterilkan dengan suhu rendah atau metode intermiten. Beberapa reagen yang tidak dapat dipanaskan, seperti kalium telurit, kuning telur, TTC, antibiotik, dll., harus didinginkan hingga sekitar 50°C setelah agar dasar diautoklaf dan kemudian ditambahkan;
6. Setelah setiap batch media kultur disiapkan, uji pertumbuhan steril dan uji pertumbuhan strain yang diuji harus dilakukan. Jika itu adalah media kultur biokimia, gunakan strain bakteri standar untuk inokulasi dan kultur, dan amati hasil reaksi biokimianya. Ini harus menunjukkan reaksi normal. Media budidaya sebaiknya tidak disimpan terlalu lama. Jika perlu, dapat disimpan di lemari es bersuhu 4°C.
7. Saat ini media budidaya kering banyak sekali macamnya. Setiap batch perlu menggunakan strain standar untuk uji pertumbuhan atau pengamatan reaksi biokimia. Berbagai media kultur hanya dapat digunakan setelah uji pertumbuhan strain yang bersangkutan baik. Yang baru dibeli atau dikeringkan dan sudah disimpan lama bisa digunakan. PH media kultur juga harus diukur saat menyiapkannya, dan dosis serta metode harus diikuti sesuai dengan petunjuk produk.
8. Reagen kimia, kondisi sterilisasi, hasil uji pertumbuhan regangan, dan personel produksi yang digunakan dalam setiap batch media kultur yang disiapkan harus dicatat untuk penyelidikan.
Persyaratan pengumpulan dan pemrosesan sampel
1. Sampel pemeriksaan yang dikumpulkan harus representatif. Saat pengambilan sampel, bahan mentah, pemrosesan, transportasi, metode penyimpanan dan kondisi kumpulan makanan, kondisi kesehatan lingkungan sekitar, dll. harus diselidiki secara rinci untuk memeriksa apakah terdapat sumber kontaminasi.
2. Menurut jenis dan jumlah makanan, jumlah dan metode pengambilan sampel harus dilakukan sesuai dengan persyaratan metode pemeriksaan standar.
3. Perhatikan pengoperasian aseptik saat pengambilan sampel, dan wadah harus disterilkan untuk menghindari kontaminasi mikroba di lingkungan. Wadah tidak boleh disterilkan dengan larutan sabun kreosal, disterilkan dengan klormetionin, alkohol, dan disinfektan lainnya, serta tidak boleh mengandung disinfektan atau antibiotik tersebut. Untuk menghindari terbunuhnya mikroorganisme pada sampel, gunting, pisau, dan sendok yang digunakan juga harus disterilkan sebelum digunakan.
4. Sampel harus dikirim ke ruang inspeksi untuk diperiksa segera setelah pengumpulan. Proses pemeriksaan umumnya tidak melebihi 3 jam. Jika jaraknya jauh, dapat disimpan di lingkungan 1~5℃. Jika perlu dibekukan, sebaiknya disimpan dalam keadaan beku. Kirim untuk diperiksa.
5. Setelah menerima sampel, ruang pemeriksaan akan mendaftarkannya (nama sampel, unit pemeriksaan, jumlah, tanggal, nomor, dll) dan mengamati penampakan sampel. Jika salah satu kondisi berikut ditemukan, pemeriksaan dapat ditolak:
(1) Contoh yang telah disterilkan dengan tekanan tinggi khusus, perebusan atau cara lain akan kehilangan maknanya dalam mewakili pangan aslinya;
(2) Botol dan kantong makanan telah dibuka, daging matang dan hasil olahannya, unggas matang serta makanan lainnya telah pecah dan tidak lengkap, yaitu bentuk makanan asli telah hilang (kecuali contoh keracunan makanan);
(3) Jumlah pengambilan sampel tidak mencukupi sesuai kebutuhan;
Terhadap sampel yang diserahkan untuk pemeriksaan yang memenuhi persyaratan, ruang pemeriksaan harus segera melakukan pemeriksaan setelah menerimanya. Jika kondisinya tidak terpenuhi, sebaiknya disimpan dalam lemari es bersuhu 4°C, disiapkan untuk menciptakan kondisi tepat waktu, dan kemudian dilakukan pemeriksaan.
6. Saat memeriksa sampel, lakukan pemrosesan yang sesuai sesuai dengan sifat-sifatnya yang berbeda.
(1) Saat menginokulasi sampel cair, sampel harus dicampur secara menyeluruh dan diinokulasi sesuai dengan jumlahnya.
(2) Untuk sampel padat, gunakan pisau yang telah disterilkan untuk memotong 25g bagian yang berbeda, masukkan ke dalam 225mL larutan garam steril atau larutan lain, hancurkan dan campur dengan homogenizer, dan inokulasi sesuai jumlahnya.
(3) Botol dan kantong makanan harus dibuka dengan cara sterilisasi, dan cara di atas harus dipilih sesuai dengan karakteristiknya sebelum inokulasi.
Persyaratan pemeriksaan sampel, pencatatan dan pelaporan
1. Setelah menerima sampel, ruang inspeksi terlebih dahulu akan melakukan inspeksi penampilan dan segera melakukan inspeksi sesuai dengan metode inspeksi standar nasional. Selama proses pemeriksaan, operasi aseptik harus dilakukan dengan hati-hati, bertanggung jawab, dan ketat untuk menghindarinyahasil uji mikrobakontaminasi pada lingkungan.
2. Cara-cara yang digunakan selama proses pemeriksaan sampel, fenomena dan hasil yang terjadi, dan lain-lain harus dicatat dalam catatan pengujian tertulis sebagai dasar analisis dan penilaian hasil. Catatan harus rinci, jelas, otentik, obyektif, dan tidak boleh diubah atau dipalsukan.
Persyaratan operasi aseptik:
1.Anda harus mengenakan pakaian kerja dan topi kerja saat melakukan inokulasi bakteri.
2. Saat melakukan inokulasi sampel makanan, pakaian kerja khusus, topi dan sandal harus dipakai, yang harus ditempatkan di ruang penyangga ruang steril dan digunakan setelah disinfeksi UV sebelum bekerja.
3. Saat menginokulasi sampel makanan, cuci tangan dengan sabun sebelum memasuki ruang steril, lalu bersihkan tangan dengan kapas alkohol 75%.
4. Sedotan, piring datar dan media kultur yang digunakan untuk inokulasi harus disterilkan dan disterilkan. Wadah yang tidak terpakai tidak boleh dibiarkan begitu saja setelah kemasan dibuka. Peralatan logam harus diautoklaf atau dibakar tiga kali dengan alkohol 95% sebelum digunakan.
5. Saat mengeluarkan sedotan dari kemasannya, ujung sedotan tidak boleh menyentuh bagian yang terbuka. Saat menggunakan sedotan untuk menginokulasi tabung reaksi atau piring, ujung sedotan tidak boleh menyentuh tepi tabung reaksi atau piring.
6. Inokulasi sampel dan pemindahan bakteri harus dilakukan di depan lampu alkohol. Saat menginokulasi bakteri atau sampel, sedotan harus disterilkan dengan api setelah dikeluarkan dari kemasan dan dibuka sumbat tabung reaksi.
7. Sebelum menginokulasi bakteri, semua kabel logam pada loop dan jarum inokulasi harus dibakar dengan api, dan jika perlu, sambungan antara loop, jarum dan batang harus dibakar. Lingkaran inokulasi untuk menginokulasi bakteri tuberkulosis dan bakteri virulen harus direbus dalam air mendidih selama 5 menit, kemudian dibakar dengan api.
8. Saat menyedot cairan atau sampel bakteri dengan sedotan, gunakan ujung karet yang sesuai untuk menyedotnya, dan jangan langsung menyedotnya dengan mulut.
Persyaratan penggunaan ruangan steril:
1. Jendela yang mengarah ke luar ruangan steril harus diberi kaca ganda dan tertutup rapat. Mereka tidak boleh dibuka sesuka hati. Harus tersedia ruang penyangga dan pintu geser yang sesuai dengan ukuran ruang steril. Juga harus ada jendela kecil berukuran 0,5~0,7m2. Sebagai persiapan penyerahan barang setelah masuk ruangan steril.
2. Ruangan steril harus dijaga kebersihannya. Setelah bekerja, permukaan kerja harus didesinfeksi dengan larutan sabun kresol 2% hingga 3%, permukaan kerja harus dibersihkan, dan barang-barang yang tidak terkait dengan percobaan tidak boleh disimpan.
3. Pintu ruang steril harus ditutup rapat sebelum dan sesudah digunakan, dan lampu ultraviolet harus dinyalakan. Jika lampu ultraviolet gantung dalam ruangan digunakan untuk desinfeksi, diperlukan lampu ultraviolet 30W. Jaraknya 1,0m, dan waktu penyinaran tidak kurang dari 30 menit. Saat menggunakan lampu ultraviolet, perhatian harus diberikan pada Operasikan langsung di bawah sinar ultraviolet untuk menghindari kerusakan. Lampu perlu diseka secara lembut dengan bola kapas beralkohol setiap dua minggu untuk menghilangkan debu dan lemak guna mengurangi dampak penetrasi sinar ultraviolet.
4. Saat memproses dan menginokulasi spesimen makanan, memasuki ruang steril untuk pengoperasian dan tidak diperbolehkan masuk atau keluar sesuka hati. Jika barang perlu diteruskan, barang tersebut dapat dilewatkan melalui jendela kecil.
5. Jika AC perlu dipasang di ruangan steril, harus ada alat penyaring.
Persyaratan Disinfeksi dan Sterilisasi
Peralatan gelas, peralatan logam dan media kultur digunakan untukpengujian mikrobiologi, kultur yang terkontaminasi dan diinokulasi, dll. harus disterilkan sebelum digunakan. Metode sterilisasi uap panas kering dan tekanan panas lembab.
1. Persiapan sebelum sterilisasi
(1) Semua barang yang akan disterilkan harus dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Peralatan gelas seperti sedotan dan piring datar harus dikemas rapat dengan kertas. Jika tabung logam digunakan, lubang ventilasi pada tabung tersebut harus dibuka.
(2) Bungkus sumbat labu segitiga berisi media kultur dengan kertas, tutup tabung reaksi, tarik keluar inti spuit, lalu bungkus dengan kain kasa.
2. pasang
(1) Alat sterilisasi panas kering: Barang tidak boleh terlalu penuh dan tidak boleh menyentuh keempat dinding kotak.
(2) Pemasak uap besar-bertekanan tinggi: Tempatkan barang-barang yang telah disterilkan, bungkus secara terpisah, dan masukkan langsung ke dalam silinder sterilisasi. Jangan membuat barang terlalu penuh.
3. Pemeriksaan peralatan
(1) Periksa apakah sakelar pintu fleksibel, apakah cincin karetnya rusak, dan apakah rata.
(2) Periksa apakah pengukur tekanan tetap pada posisi nol ketika uap habis, tutup pintu dan penutup, ventilasi uap atau panas, dan amati apakah ada kebocoran udara, apakah kondisi yang ditandai oleh pengukur tekanan dan termometer cocok, dan apakah pipa tersumbat.
(3) Untuk alat sterilisasi dengan perangkat kendali program elektronik otomatis, program yang ditentukan harus diperiksa sebelum digunakan untuk melihat apakah memenuhi persyaratan sterilisasi.
4. Perawatan sterilisasi
(1) Metode sterilisasi panas kering:
Metode ini cocok untuk barang yang tidak rusak, rusak, atau menguap dalam kondisi panas kering. Ini lebih umum digunakan untuk mensterilkan peralatan gelas, produk logam, produk keramik, dll.
①Instrumen dan perkakas harus dicuci sebelum dikeringkan-dipanggang untuk mencegah kotoran yang menempel di permukaan menjadi karbonisasi.
② Selama sterilisasi, barang tidak boleh terlalu penuh, jangan menyentuh langsung bagian bawah dan dinding kotak, dan meninggalkan celah di antara barang.
③ Selama sterilisasi, tutup pintu rapat-rapat, sambungkan catu daya, buka lubang pembuangan selama kurang lebih 30 menit untuk menghilangkan udara dingin di dalam alat sterilisasi, sesuaikan lampu indikator saat suhu naik hingga 160°C, dan pertahankan selama 1,5 hingga 2 jam.
④Setelah sterilisasi selesai atau selama proses kenaikan suhu, pintu harus dibuka di bawah 60°C.
(2) Langkah-langkah berikut harus diikuti saat menggunakan alat penanak bertekanan portabel atau alat sterilisasi uap bertekanan vertikal:
① Tambahkan 3L air ke badan utama pressure cooker portabel, dan 16L air ke pressure cooker vertikal (jumlah air harus diisi ulang saat digunakan kembali, dan air perlu diganti jika menjadi keruh);
② Untuk panci presto portabel, masukkan pipa knalpot pada penutup atas ke dalam tabung persegi di dinding bagian dalam tabung sterilisasi (alat sterilisasi tanpa selang atau yang selangnya berkarat dan retak tidak boleh digunakan);
③ Tutup penutup atas dan kencangkan dengan erat untuk mencegah kebocoran udara; letakkan alat sterilisasi di atas sumber api untuk memanaskan, nyalakan daya panci bertekanan vertikal, dan buka katup buang pada penutup atas untuk mengeluarkan udara (buang udara selama 10 hingga 15 menit setelah air mendidih) );
④Tutup katup buang untuk menaikkan tekanan uap ke persyaratan yang ditentukan dan mempertahankannya selama waktu yang ditentukan (tergantung pada sifat barang yang disterilkan dan keadaan terkait);
⑤ Setelah waktu yang ditentukan tercapai, bagi barang yang perlu dikeringkan, segera buka katup buang untuk mengeluarkan uap. Saat tekanan kembali ke nol, dinginkan secara alami hingga 60°C lalu buka tutupnya untuk mengeluarkan item. Jika benda tersebut cair, jangan buka katup buang. Panci harus segera dikeluarkan dari sumber panas dan dibiarkan dingin secara alami hingga tekanan kembali ke nol dan suhu turun di bawah 60°C sebelum membuka tutupnya untuk mengeluarkan isinya guna mencegah dekompresi cairan secara tiba-tiba akibat perebusan hebat atau ledakan wadah.
(3) Ikuti langkah-langkah berikut untuk menggunakan alat sterilisasi uap panci bertekanan horizontal:
①Tutup pintu panci dengan rapat, buka katup saluran masuk udara, masukkan uap ke dalam mezzanine untuk pemanasan awal, dan udara dingin di mezzanine akan secara otomatis dikeluarkan melalui penghalang udara;
②Setelah interlayer mencapai suhu yang telah ditentukan, buka katup saluran masuk udara dari ruang panci, masukkan uap ke dalam ruang panci, dan udara dingin di dalam ruang panci akan secara otomatis dibuang melalui penahan udara ruang panci;
③Ketika tekanan dan suhu di dalam ruang panci mencapai tekanan yang ditentukan, sesuaikan katup saluran masuk udara agar tetap konstan;
④ Dinginkan suhu secara alami atau buatan hingga 60℃ sebelum membuka pintu untuk mengeluarkan barang. Jangan gunakan metode pelepasan uap cepat untuk mencegah penurunan tekanan secara tiba-tiba, cairan mendidih secara tiba-tiba, atau ledakan wadah;
⑤ Saat menggunakan program otomatis-alat sterilisasi uap bertekanan terkontrol, setelah meletakkan barang dan menutup pintu dengan rapat, sakelar yang sesuai harus ditekan sesuai dengan kategori barang sehingga sterilisasi dapat dilakukan secara otomatis sesuai dengan prosedur yang diperlukan. Selama sterilisasi, instrumen yang terpasang harus digunakan untuk mencatat suhu dan waktu. Untuk referensi di masa mendatang, persyaratan pengoperasian harus benar-benar sesuai dengan instruksi pabrik;
5. Suhu dan waktu sterilisasi
(1) Suhu sterilisasi alat sterilisasi panas kering adalah 160℃, 1,5~2 jam.
(2) Suhu sterilisasi dan waktu alat sterilisasi uap bertekanan
Metode sterilisasi intermiten
1. Metode sterilisasi:
Gunakan sterilisasi uap tanpa tekanan. Beberapa zat mudah rusak dengan sterilisasi uap bertekanan tinggi, sehingga cara ini dapat digunakan untuk sterilisasi.
(1) Masukkan barang-barang yang akan disterilkan ke dalam panci, tutup penutup atas, buka saluran pembuangan, dan tiriskan sisa air di dalam panci.
(2) Tutup saluran keluar pembuangan, buka pintu saluran masuk udara, dan desinfeksi selama 10 hingga 20 menit sesuai kebutuhan.
(3) Setelah sterilisasi selesai, tutup pintu saluran masuk udara, keluarkan barang dan tunggu hingga dingin hingga suhu kamar, masukkan ke dalam inkubator bersuhu 37°C semalaman, dan lanjutkan sterilisasi sesuai cara di atas keesokan harinya. Lakukan ini tiga kali untuk mencapai tujuan sterilisasi.
2. Cara menggunakan koagulator serum:
Jika media kultur mengandung bahan khusus seperti serum atau telur, suhu tinggi akan merusak nutrisinya. Oleh karena itu, suhu rendah dapat digunakan untuk mengentalkan serum dan mencapai tujuan sterilisasi:
(1) Saat menggunakan serum yang disterilkan dengan metode ini untuk alikuot, pengoperasian aseptik harus diikuti dengan ketat, dan tabung reaksi serta pelat juga harus disterilkan sebelum digunakan;
(2) Buatlah media budidaya menjadi lereng atau lapisan tinggi sesuai kebutuhan. Setelah menambahkan air secukupnya, sambungkan catu daya, naikkan suhu hingga 75~90°C selama satu jam, lalu sterilkan. Tempatkan dalam inkubator 37°C semalaman, lalu sterilkan tiga kali.
3. Rebus dan desinfeksi:
Anda bisa menggunakan panci mendidih atau alat sterilisasi mendidih. Setelah air mendidih, rebus selama 5 hingga 15 menit. Anda juga bisa menambahkan 2% asam karbolik ke dalam air dan merebusnya selama 5 menit. Tambahkan formaldehida 0,02% dan rebus pada suhu 80°C selama 60 menit untuk mencapai tujuan sterilisasi. Namun, sterilisasi dengan perebusan dapat dilakukan. Saat menggunakan penambah, perhatian harus diberikan pada sifat korosif barang.
4. Perawatan sterilisasi:
Setelah sterilisasi, barang sudah steril dalam keadaan normal. Mereka harus diperiksa dan ditempatkan dengan hati-hati ketika dikeluarkan dari alat sterilisasi untuk menghindari kontaminasi ulang;
(1) Keluarkan barang dan segera periksa integritas kemasannya. Jika ada kerusakan atau tampon dilepas, tidak dapat digunakan sebagai barang steril;
(2) Barang yang dikeluarkan tidak dapat digunakan sebagai barang steril apabila kemasannya jelas-jelas terendam air;
(3) Media kultur atau reagen harus diperiksa apakah warna atau kondisinya sesuai setelah sterilisasi. Yang tidak memenuhi persyaratan harus dibuang;
(4) Untuk wadah buka-tutup, lubang kasa harus ditutup saat dikeluarkan;
(5) Apabila barang yang dipindahkan jatuh ke tanah, salah taruh di tempat yang najis, atau terkena air, maka dianggap terkontaminasi dan tidak dapat digunakan sebagai barang steril;
(6) Barang-barang yang telah disterilkan dan memenuhi syarat yang dikeluarkan hendaknya disimpan di ruang penyimpanan atau lemari tahan debu, dan dilarang keras mencampurkannya dengan barang-barang yang tidak disterilkan;
(7) Semua barang yang memenuhi syarat harus ditandai dengan tanggal sterilisasi dan tanggal kadaluwarsa;
(8) Setelah setiap batch proses sterilisasi selesai, catat nama, jumlah, suhu, waktu, dan operator produk yang disterilkan.
Persyaratan untuk pengolahan limbah beracun dan bakteri
Peralatan percobaan dan kultur yang digunakan dalam percobaan mikrobiologi tidak boleh dikeluarkan dari laboratorium tanpa disinfeksi.
1. Bahan dan limbah budidaya yang terkontaminasi harus ditempatkan dalam wadah rapat atau keranjang kawat dan disimpan secara terpusat di lokasi yang ditentukan sampai semuanya diautoklaf secara merata.
2. Kultur yang terkontaminasi mikroorganisme harus diautoklaf pada suhu 121°C selama 30 menit.
3. Setelah digunakan, sedotan yang terkontaminasi harus dimasukkan ke dalam larutan sabun kreol 5% atau larutan asam karbol, direndam minimal 24 jam (cairan disinfektan tidak boleh lebih rendah dari ketinggian perendaman), kemudian disterilkan dengan tekanan tinggi pada suhu 121°C selama 30 menit.
4. Cairan untuk pewarnaan dan pembilasan noda umumnya dapat dialirkan langsung ke saluran pembuangan. Cairan pembilas bakteri mematikan harus dibilas dalam gelas kimia dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dialirkan ke saluran pembuangan. Kaca objek yang telah diwarnai dimasukkan ke dalam larutan sabun kresol 5%. Setelah direndam dalam air selama 24 jam, rebus dan cuci bersih. Kaca objek atau cawan yang digunakan untuk pengujian aglutinasi harus diautoklaf dan kemudian dicuci.
5. Setelah kultur pecah, segera semprot dan rendam bagian yang terkontaminasi dengan larutan sabun kresol 5% atau larutan asam karbol, rendam selama setengah jam lalu lap hingga bersih.
Pakaian kerja atau pakaian kerja, topi, masker, dll. yang terkontaminasi yang dikenakan untuk pengujian kekerasan harus ditempatkan dalam kantong desinfeksi khusus dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dicuci.
Persyaratan persiapan sedang
Kualitas penyiapan media kultur akan berpengaruh langsung terhadap pertumbuhan mikroorganisme, karena berbagai mikroorganisme mempunyai kebutuhan nutrisi yang berbeda dan tujuan kultur yang berbeda. Persyaratan persiapan berbagai media kultur adalah sebagai berikut:
1. Timbang bahan sesuai formula medium, lalu larutkan dalam air suling. Kualitas reagen dan obat yang digunakan harus diperiksa sebelum digunakan.
2. Pengukuran dan penyesuaian pH: Pengukuran pH sebaiknya dilakukan pada saat media kultur didinginkan hingga suhu kamar, karena terdapat perbedaan pH tertentu dalam kondisi panas atau dingin. Setelah pengukuran selesai, tambahkan alkali atau asam sesuai jumlah yang dihitung dan aduk rata. Harus diuji lagi. Nilai pH media kultur harus akurat, jika tidak maka akan mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme atau mempengaruhi pengamatan hasil. Namun perlu diperhatikan bahwa sterilisasi bertekanan tinggi dapat mempengaruhi penurunan atau peningkatan pH beberapa media kultur, sehingga tidak disarankan untuk mensterilkan dengan tekanan yang terlalu tinggi atau terlalu sering agar tidak mempengaruhi kualitas media kultur. Indikator, natrium deoksikolat, agar, dll. umumnya ditambahkan setelah penyesuaian pH.
3. Media kultur harus tetap bersih untuk memudahkan pengamatan pertumbuhan bakteri. Setelah media kultur dipanaskan dan direbus, dapat disaring dengan kapas penyerap atau kain flanel untuk menghilangkan endapan. Jika perlu bisa diperjelas dengan putih telur. Potongan agar-agar yang digunakan harus dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Sebelum digunakan, hindari mempengaruhi transparansi karena kotoran di dalam agar.
4. Wadah besi, tembaga dan lainnya tidak boleh digunakan untuk menampung media budidaya. Lebih baik menggunakan wadah kaca keras netral yang bersih.
5. Sterilisasi media kultur tidak hanya harus mencapai tujuan sterilisasi menyeluruh, tetapi juga memperhatikan agar nilai gizinya tidak berkurang akibat pemanasan. Umumnya, suhu 121°C selama 15 menit sudah cukup. Untuk media kultur yang mengandung zat yang tidak tahan terhadap panas tinggi seperti gula dan serum, agar-agar, dll, sebaiknya disterilkan dengan suhu rendah atau metode intermiten. Beberapa reagen yang tidak dapat dipanaskan, seperti kalium telurit, kuning telur, TTC, antibiotik, dll., harus didinginkan hingga sekitar 50°C setelah agar dasar diautoklaf dan kemudian ditambahkan;
6. Setelah setiap batch media kultur disiapkan, uji pertumbuhan steril dan uji pertumbuhan strain yang diuji harus dilakukan. Jika itu adalah media kultur biokimia, gunakan strain bakteri standar untuk inokulasi dan kultur, dan amati hasil reaksi biokimianya. Ini harus menunjukkan reaksi normal. Media budidaya sebaiknya tidak disimpan terlalu lama. Jika perlu, dapat disimpan di lemari es bersuhu 4°C.
7. Saat ini media budidaya kering banyak sekali macamnya. Setiap batch perlu menggunakan strain standar untuk uji pertumbuhan atau pengamatan reaksi biokimia. Berbagai media kultur hanya dapat digunakan setelah uji pertumbuhan strain yang bersangkutan baik. Yang baru dibeli atau dikeringkan dan sudah disimpan lama bisa digunakan. PH media kultur juga harus diukur saat menyiapkannya, dan dosis serta metode harus diikuti sesuai dengan petunjuk produk.
8. Reagen kimia, kondisi sterilisasi, hasil uji pertumbuhan regangan, dan personel produksi yang digunakan dalam setiap batch media kultur yang disiapkan harus dicatat untuk penyelidikan.
Persyaratan pengumpulan dan pemrosesan sampel
1. Sampel pemeriksaan yang dikumpulkan harus representatif. Saat pengambilan sampel, bahan mentah, pemrosesan, transportasi, metode penyimpanan dan kondisi kumpulan makanan, kondisi kesehatan lingkungan sekitar, dll. harus diselidiki secara rinci untuk memeriksa apakah terdapat sumber kontaminasi.
2. Menurut jenis dan jumlah makanan, jumlah dan metode pengambilan sampel harus dilakukan sesuai dengan persyaratan metode pemeriksaan standar.
3. Perhatikan pengoperasian aseptik saat pengambilan sampel, dan wadah harus disterilkan untuk menghindari kontaminasi mikroba di lingkungan. Wadah tidak boleh disterilkan dengan larutan sabun kreosal, disterilkan dengan klormetionin, alkohol, dan disinfektan lainnya, serta tidak boleh mengandung disinfektan atau antibiotik tersebut. Untuk menghindari terbunuhnya mikroorganisme pada sampel, gunting, pisau, dan sendok yang digunakan juga harus disterilkan sebelum digunakan.
4. Sampel harus dikirim ke ruang inspeksi untuk diperiksa segera setelah pengumpulan. Proses pemeriksaan umumnya tidak melebihi 3 jam. Jika jaraknya jauh, dapat disimpan di lingkungan 1~5℃. Jika perlu dibekukan, sebaiknya disimpan dalam keadaan beku. Kirim untuk diperiksa.
5. Setelah menerima sampel, ruang pemeriksaan akan mendaftarkannya (nama sampel, unit pemeriksaan, jumlah, tanggal, nomor, dll) dan mengamati penampakan sampel. Jika salah satu kondisi berikut ditemukan, pemeriksaan dapat ditolak:
(1) Contoh yang telah disterilkan dengan tekanan tinggi khusus, perebusan atau cara lain akan kehilangan maknanya dalam mewakili pangan aslinya;
(2) Botol dan kantong makanan telah dibuka, daging matang dan hasil olahannya, unggas matang serta makanan lainnya telah pecah dan tidak lengkap, yaitu bentuk makanan asli telah hilang (kecuali contoh keracunan makanan);
(3) Jumlah pengambilan sampel tidak mencukupi sesuai kebutuhan;
Terhadap sampel yang diserahkan untuk pemeriksaan yang memenuhi persyaratan, ruang pemeriksaan harus segera melakukan pemeriksaan setelah menerimanya. Jika kondisinya tidak terpenuhi, sebaiknya disimpan dalam lemari es bersuhu 4°C, disiapkan untuk menciptakan kondisi tepat waktu, dan kemudian dilakukan pemeriksaan.
6. Saat memeriksa sampel, lakukan pemrosesan yang sesuai sesuai dengan sifat-sifatnya yang berbeda.
(1) Saat menginokulasi sampel cair, sampel harus dicampur secara menyeluruh dan diinokulasi sesuai dengan jumlahnya.
(2) Untuk sampel padat, gunakan pisau yang telah disterilkan untuk memotong 25g bagian yang berbeda, masukkan ke dalam 225mL larutan garam steril atau larutan lain, hancurkan dan campur dengan homogenizer, dan inokulasi sesuai jumlahnya.
(3) Botol dan kantong makanan harus dibuka dengan cara sterilisasi, dan cara di atas harus dipilih sesuai dengan karakteristiknya sebelum inokulasi.
Persyaratan pemeriksaan sampel, pencatatan dan pelaporan
1. Setelah menerima sampel, ruang inspeksi terlebih dahulu akan melakukan inspeksi penampilan dan segera melakukan inspeksi sesuai dengan metode inspeksi standar nasional. Selama proses pemeriksaan, operasi aseptik harus dilakukan dengan hati-hati, bertanggung jawab, dan ketat untuk menghindarinyahasil uji mikrobakontaminasi pada lingkungan.
2. Cara-cara yang digunakan selama proses pemeriksaan sampel, fenomena dan hasil yang terjadi, dan lain-lain harus dicatat dalam catatan pengujian tertulis sebagai dasar analisis dan penilaian hasil. Catatan harus rinci, jelas, otentik, obyektif, dan tidak boleh diubah atau dipalsukan.
