Resumen de los requisitos de pruebas microbiológicas.
2024-01-24 15:14:33
Los requisitos y pasos parapruebas microbiológicasson los siguientes:
Requisitos de operación aséptica:
1. Debe usar ropa de trabajo y gorro de trabajo al inocular bacterias.
2. Al inocular muestras de alimentos, se debe usar ropa de trabajo especial, gorros y pantuflas, que deben colocarse en la sala intermedia de la sala estéril y usarse después de la desinfección UV antes del trabajo.
3. Al inocular muestras de alimentos, lávese las manos con jabón antes de ingresar a la habitación esterilizada y luego límpielas con una bola de algodón con alcohol al 75%.
4. Las pajitas, platos planos y medios de cultivo utilizados para la inoculación deberán estar esterilizados y esterilizados. Los envases no utilizados no deben dejarse sin utilizar después de abrir el paquete. Los utensilios de metal deben esterilizarse en autoclave o quemarse tres veces con alcohol al 95 % antes de su uso.
5. Al sacar la pajita del paquete, la punta de la pajita no debe tocar las partes expuestas. Cuando se utiliza la pajita para inocular el tubo de ensayo o el plato, la punta de la pajita no debe tocar el borde del tubo de ensayo o del plato.
6. La inoculación de muestras y la transferencia de bacterias se deben realizar frente a una lámpara de alcohol. Al inocular bacterias o muestras, la pajita debe esterilizarse a la llama después de sacarla del paquete y abrir el tapón del tubo de ensayo.
7. Antes de inocular bacterias, todos los cables metálicos del asa de inoculación y la aguja deben quemarse con una llama y, si es necesario, quemar la conexión entre el asa, la aguja y la varilla. El asa de inoculación para inocular bacterias de la tuberculosis y bacterias virulentas debe hervirse en agua hirviendo durante 5 minutos y luego quemarse a la llama.
8. Cuando succione líquido bacteriano o muestras con una pajita, utilice la punta de goma correspondiente para chuparlo y no lo chupe directamente con la boca.
Requisitos de uso de salas estériles:
1. Las ventanas que dan al exterior de la sala estéril deben tener doble acristalamiento y estar selladas. No deben abrirse a voluntad. Debe haber una sala intermedia y una puerta corredera correspondiente al tamaño de la sala estéril. También debería haber una pequeña ventana de 0,5~0,7m2. En preparación para pasar artículos después de ingresar a la sala estéril.
2. La sala estéril debe mantenerse limpia. Después del trabajo, se debe desinfectar con una solución de jabón cresol del 2% al 3%, se debe limpiar la superficie de trabajo y no se deben almacenar elementos no relacionados con el experimento.
3. La puerta de la sala estéril debe cerrarse herméticamente antes y después de su uso y se debe encender la lámpara ultravioleta. Si se utiliza una lámpara ultravioleta suspendida interior para la desinfección, se requiere una lámpara ultravioleta de 30W. La distancia es de 1,0 my el tiempo de irradiación no es inferior a 30 minutos. Cuando utilice lámparas ultravioleta, se debe prestar atención a operar directamente bajo luz ultravioleta para evitar daños. La lámpara debe limpiarse suavemente con una bola de algodón con alcohol cada dos semanas para eliminar el polvo y la grasa y reducir el impacto de la penetración ultravioleta.
4. Al procesar e inocular muestras de alimentos, ingrese a la sala estéril para la operación y no se le permita entrar ni salir a voluntad. Si es necesario pasar objetos, se pueden pasar a través de la ventana pequeña.
5. Si es necesario instalar aire acondicionado en la sala estéril, debe haber un dispositivo de filtrado.
Requisitos de desinfección y esterilización
Cristalería, utensilios metálicos y medios de cultivo utilizados parapruebas microbiológicas, cultivos contaminados e inoculados, etc. deben esterilizarse antes de su uso. Métodos de esterilización por vapor a presión con calor seco y calor húmedo.
1. Preparación antes de la esterilización
(1) Todos los artículos que deban esterilizarse deben lavarse y secarse primero. Los vasos como pajitas y platos planos deben estar bien embalados con papel. Si se utilizan tubos metálicos, se deben abrir los orificios de ventilación.
(2) Envuelva el tapón del matraz triangular que contiene el medio de cultivo en papel, cubra el tubo de ensayo, saque el núcleo de la jeringa y envuélvalo con una gasa.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: Los artículos no deben estar abarrotados y no pueden tocar las cuatro paredes de la caja.
(2) Olla de vapor grande de alta presión: coloque los artículos esterilizados, envuélvalos por separado y colóquelos directamente en el cilindro de esterilización. No sobrecargues los artículos.
3. Inspección de equipos
(1) Compruebe si el interruptor de la puerta es flexible, si el anillo de goma está dañado y si está plano.
(2) Verifique si el manómetro permanece en la posición cero cuando se agota el vapor, cierre la puerta y la tapa, ventile el vapor o el calor y observe si hay fugas de aire, si las condiciones marcadas por el manómetro y el termómetro coinciden y si la tubería está bloqueada.
(3) Para esterilizadores con dispositivos electrónicos automáticos de control de programa, el programa especificado debe verificarse antes de su uso para ver si cumple con los requisitos de esterilización.
4. Tratamiento de esterilización
(1) Método de esterilización por calor seco:
Este método es adecuado para artículos que no se dañan, deterioran ni se evaporan en condiciones de calor seco. Se utiliza más comúnmente para esterilizar cristalería, productos metálicos, productos cerámicos, etc.
①Los instrumentos y utensilios deben lavarse antes de hornear en seco para evitar que la suciedad adherida a la superficie se carbonice.
② Durante la esterilización, los artículos no deben estar abarrotados, no deben tocar directamente el fondo y la pared de la caja y dejar espacios entre los artículos.
③ Durante la esterilización, cierre bien la puerta, conecte la fuente de alimentación, abra el orificio de escape durante aproximadamente 30 minutos para eliminar el aire frío del esterilizador, ajuste la luz indicadora cuando la temperatura suba a 160 °C y manténgala durante 1,5 a 2 horas.
④Después de completar la esterilización o durante el proceso de aumento de temperatura, la puerta debe abrirse por debajo de 60°C.
(2) Se deben seguir los siguientes pasos cuando se utiliza una olla a presión portátil o un esterilizador de vapor a presión vertical:
① Agregue 3 litros de agua al cuerpo principal de la olla a presión portátil y 16 litros de agua a la olla a presión vertical (la cantidad de agua debe reponerse cuando se reutiliza y el agua debe reemplazarse si se vuelve turbia);
② Para una olla a presión portátil, inserte el tubo de escape en la cubierta superior en el tubo cuadrado en la pared interior del barril de esterilización (no se deben usar esterilizadores sin mangueras o con mangueras corroídas o agrietadas);
③ Cubra la cubierta superior y apriétela firmemente para evitar fugas de aire; coloque el esterilizador en la fuente de fuego para calentar, encienda la olla a presión vertical y abra la válvula de escape en la cubierta superior para dejar salir el aire (escape el aire durante 10 a 15 minutos después de que hierva el agua);
④Cerrar la válvula de escape para elevar la presión del vapor a los requisitos especificados y mantenerla durante el tiempo especificado (dependiendo de la naturaleza de los artículos esterilizados y las circunstancias relevantes);
⑤ Después de alcanzar el tiempo especificado, para los artículos que necesitan secarse, abra inmediatamente la válvula de escape para descargar el vapor. Cuando la presión vuelva a cero, enfríelo naturalmente a 60 °C y luego abra la tapa para sacar los artículos. Si es un artículo líquido, no abra la válvula de escape. La olla debe retirarse de la fuente de calor inmediatamente y dejarse enfriar naturalmente hasta que la presión vuelva a cero y la temperatura caiga por debajo de 60 °C antes de abrir la tapa para sacar el contenido y evitar la descompresión repentina del líquido debido a una ebullición violenta o una explosión del recipiente.
(3) Siga los siguientes pasos para utilizar el esterilizador a vapor de olla a presión horizontal:
①Cierre bien la puerta de la olla, abra la válvula de entrada de aire, introduzca vapor en el entrepiso para precalentarlo y el aire frío del entrepiso se descargará automáticamente a través de la barrera de aire;
②Después de que la capa intermedia alcance la temperatura predeterminada, abra la válvula de entrada de aire de la cámara de la olla, introduzca el vapor en la cámara de la olla y el aire frío en la cámara de la olla se descargará automáticamente a través del pararrayos de aire de la cámara de la olla;
③Cuando la presión y la temperatura en la cámara de la olla alcancen la presión especificada, ajuste la válvula de entrada de aire para mantenerla constante;
④ Enfríe la temperatura de forma natural o artificial a 60 ℃ antes de abrir la puerta para sacar los artículos. No utilice el método de descarga rápida de vapor para evitar una caída repentina de presión, una ebullición violenta del líquido o una explosión del recipiente;
⑤ Cuando se utiliza un esterilizador de vapor a presión controlado por programa automático, después de colocar los artículos y cerrar bien la puerta, se debe presionar el interruptor correspondiente según la categoría de los artículos para que la esterilización se pueda realizar automáticamente de acuerdo con los procedimientos requeridos. Durante la esterilización, se debe utilizar el instrumento adjunto para registrar la temperatura y el tiempo. Para referencia futura, los requisitos operativos deben estar estrictamente de acuerdo con las instrucciones del fabricante;
5. Temperatura y tiempo de esterilización.
(1) La temperatura de esterilización del esterilizador de calor seco es de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura de esterilización y tiempo del esterilizador de vapor a presión.
Método de esterilización intermitente.
1. Método de esterilización:
Utilice esterilización por vapor sin presión. Algunas sustancias se destruyen fácilmente mediante la esterilización con vapor a alta presión, por lo que este método se puede utilizar para la esterilización.
(1) Coloque los artículos a esterilizar en la olla, cubra la tapa superior, abra la salida de drenaje y drene el agua restante en la olla.
(2) Cierre la salida de drenaje, abra la puerta de entrada de aire y desinfecte durante 10 a 20 minutos según sea necesario.
(3) Una vez completada la esterilización, cierre la puerta de entrada de aire, saque los artículos y espere a que se enfríen a temperatura ambiente, colóquelos en una incubadora a 37 °C durante la noche y continúe esterilizando según el método anterior al día siguiente. Haga esto tres veces para lograr el propósito de la esterilización.
2. Cómo utilizar el suero coagulador:
Cuando el medio de cultivo contiene ingredientes especiales como suero o huevos, el calor elevado destruirá sus nutrientes. Por lo tanto, se puede utilizar baja temperatura para coagular el suero y lograr fines de esterilización:
(1) Cuando se utilice suero esterilizado mediante este método en alícuotas, se deben seguir estrictamente las operaciones asépticas y también se deben esterilizar los tubos y placas de ensayo antes de su uso;
(2) Haga que el medio de cultivo forme una pendiente o una capa alta según sea necesario. Después de agregar suficiente agua, conecte la fuente de alimentación, aumente la temperatura a 75 ~ 90 °C durante una hora y luego esterilícela. Colóquelo en una incubadora a 37°C durante la noche y luego esterilícelo tres veces.
3. Hervir y desinfectar:
Puedes utilizar una olla hirviendo o un esterilizador hirviendo. Después de que el agua hierva, hiérvela durante 5 a 15 minutos. También puedes agregar ácido fénico al 2% al agua y hervirla durante 5 minutos. Agregue 0,02% de formaldehído y hiérvalo a 80°C durante 60 minutos para lograr el propósito de esterilización. Sin embargo, se puede lograr la esterilización por ebullición. Al utilizar potenciadores, se debe prestar atención a la corrosividad de los artículos.
4. Tratamiento de esterilización:
Después de la esterilización, los artículos ya están esterilizados en circunstancias normales. Deben inspeccionarse y colocarse cuidadosamente al sacarlos del esterilizador para evitar una recontaminación;
(1) Saque los artículos y verifique la integridad del embalaje inmediatamente. Si hay daños o se retira el tampón, no se puede utilizar como artículo esterilizado;
(2) Los artículos retirados no se pueden utilizar como artículos esterilizados si su embalaje está evidentemente empapado en agua;
(3) Se debe verificar el medio de cultivo o los reactivos para ver si cumplen con el color o el estado después de la esterilización. Aquellos que no cumplan con los requisitos deberán ser descartados;
(4) Para contenedores abiertos/cerrados, los orificios de la pantalla deben cerrarse al sacarlos;
(5) Si los artículos retirados caen al suelo, se extravían en un lugar sucio o se manchan con agua, se consideran contaminados y no pueden usarse como artículos esterilizados;
(6) Los artículos esterilizados calificados que se retiren deben almacenarse en una sala de almacenamiento o en un gabinete a prueba de polvo, y está estrictamente prohibido mezclarlos con artículos no esterilizados;
(7) Todos los artículos calificados deben estar marcados con la fecha de esterilización y la fecha de vencimiento;
(8) Después de completar cada lote de procesamiento de esterilización, registre el nombre, cantidad, temperatura, hora y operador de los productos esterilizados.
Requisitos para el tratamiento de residuos tóxicos y bacterianos.
Los equipos experimentales y los cultivos utilizados en experimentos microbiológicos no deben sacarse del laboratorio sin desinfectarse.
1. Los materiales y desechos cultivados contaminados deben colocarse en contenedores herméticos o cestas de alambre y almacenarse centralmente en lugares designados hasta que se esterilicen uniformemente en autoclave.
2. Los cultivos contaminados por microorganismos deben esterilizarse en autoclave a 121°C durante 30 minutos.
3. Después de su uso, las pajitas contaminadas deben colocarse en una solución de jabón creol al 5 % o una solución de ácido fénico, remojarse durante al menos 24 horas (el líquido desinfectante no debe ser inferior a la altura de remojo) y luego esterilizarse a alta presión a 121 °C durante 30 minutos.
4. El líquido para teñir y enjuagar manchas generalmente se puede verter directamente al alcantarillado. El líquido de enjuague para bacterias virulentas debe enjuagarse en un vaso de precipitados y esterilizarse a alta presión antes de verterse en el alcantarillado. Los portaobjetos teñidos se colocan en una solución de jabón cresol al 5%. Después de remojar en agua durante 24 horas, hervir y lavar. Los portaobjetos o platos utilizados para las pruebas de aglutinación deben esterilizarse en autoclave y luego lavarse.
5. Después de romper el cultivo, rocíe y remoje inmediatamente las partes contaminadas con una solución de jabón cresol al 5% o una solución de ácido carbólico, remoje durante media hora y luego limpie.
La ropa de trabajo contaminada o ropa de trabajo, gorros, máscaras, etc. usados para pruebas violentas deben colocarse en bolsas especiales de desinfección y esterilizarse a alta presión antes de lavarse.
Requisitos de preparación media
La calidad de la preparación del medio de cultivo afectará directamente el crecimiento de los microorganismos, porque varios microorganismos tienen diferentes necesidades nutricionales y diferentes propósitos de cultivo. Los requisitos de preparación para diversos medios de cultivo son los siguientes:
1. Pese los ingredientes según la fórmula del medio y luego disuélvalos en agua destilada. Se debe inspeccionar la calidad de los reactivos y medicamentos aplicados antes de su uso.
2. Medición y ajuste del pH: la medición del pH debe realizarse cuando el medio de cultivo se enfría a temperatura ambiente, porque existe una cierta diferencia de pH en condiciones de frío o calor. Cuando se complete la medición, agregue álcali o ácido según la cantidad calculada y mezcle bien. Debería hacerse la prueba nuevamente. El valor de pH del medio de cultivo debe ser preciso; de lo contrario, afectará el crecimiento de microorganismos o afectará la observación de los resultados. Sin embargo, cabe señalar que la esterilización a alta presión puede afectar la disminución o aumento del pH de algunos medios de cultivo, por lo que no es recomendable esterilizar a una presión demasiado alta o demasiadas veces para no afectar la calidad del medio de cultivo. Generalmente se añaden indicadores, desoxicolato de sodio, agar, etc. después de ajustar el pH.
3. El medio de cultivo debe mantenerse limpio para facilitar la observación del crecimiento bacteriano. Después de calentar y hervir el medio de cultivo, se puede filtrar con algodón absorbente o franela para eliminar los sedimentos. Si es necesario se puede clarificar con clara de huevo. Las tiras de agar utilizadas deben lavarse y secarse previamente. Antes de su uso, evitar afectar la transparencia debido a impurezas en el agar.
4. No se deben utilizar recipientes de hierro, cobre ni otros recipientes para contener el medio de cultivo. Es mejor utilizar recipientes limpios de vidrio duro y neutro.
5. La esterilización del medio de cultivo no solo debe lograr el propósito de una esterilización completa, sino también prestar atención a no reducir su valor nutricional debido al calentamiento. Generalmente, 121°C durante 15 minutos es suficiente. Para los medios de cultivo que contienen sustancias que son intolerantes a las altas temperaturas, como azúcares y suero, gelatina, etc., deben esterilizarse mediante un método intermitente o de baja temperatura. Algunos reactivos que no se pueden calentar, como el telurito potásico, la yema de huevo, el TTC, los antibióticos, etc., deben enfriarse a aproximadamente 50 °C después de esterilizar en autoclave el agar básico y luego agregarlo;
6. Después de preparar cada lote de medios de cultivo, se debe realizar una prueba de crecimiento estéril y una prueba de crecimiento de las cepas analizadas. Si se trata de un medio de cultivo bioquímico, utilice cepas bacterianas estándar para la inoculación y el cultivo y observe los resultados de la reacción bioquímica. Debería mostrar una reacción normal. El medio de cultivo no debe almacenarse por mucho tiempo. Si es necesario, se puede conservar en frigorífico a 4°C.
7. En la actualidad, existen muchos tipos de medios de cultivo secos. Cada lote debe utilizar cepas estándar para pruebas de crecimiento u observación de reacciones bioquímicas. Se pueden utilizar diversos medios de cultivo sólo después de que la prueba de crecimiento de las cepas correspondientes sea buena. Se pueden utilizar los recién comprados o secos que hayan estado almacenados durante mucho tiempo. También se debe medir el pH del medio de cultivo al prepararlo, y seguir la dosificación y método según las instrucciones del producto.
8. Se deben registrar para su consulta los reactivos químicos, las condiciones de esterilización, los resultados de las pruebas de crecimiento de cepas y el personal de producción utilizado en cada lote de medios de cultivo preparados.
Requisitos de recolección y procesamiento de muestras.
1. Las muestras de inspección recogidas deberán ser representativas. Al tomar muestras, se deben investigar en detalle las materias primas, el procesamiento, el transporte, los métodos y condiciones de almacenamiento del lote de alimentos, las condiciones de salud ambiental circundante, etc. para verificar si existen fuentes de contaminación.
2. Según el tipo y cantidad de alimento, la cantidad y el método de muestreo deben realizarse de acuerdo con los requisitos de los métodos de inspección estándar.
3. Preste atención al funcionamiento aséptico al tomar muestras y el recipiente debe esterilizarse para evitar la contaminación microbiana en el medio ambiente. El recipiente no debe esterilizarse con solución de jabón creosal, esterilización con clormetionina, alcohol y otros desinfectantes, y no debe contener dichos desinfectantes ni antibióticos. Para evitar matar los microorganismos de la muestra, las tijeras, cuchillos y cucharas utilizados también deben esterilizarse antes de su uso.
4. Las muestras deben enviarse a la sala de inspección para su inspección inmediatamente después de su recolección. El proceso de inspección generalmente no excede las 3 horas. Si la distancia es larga, se puede almacenar en un ambiente de 1~5 ℃. Si es necesario congelarlo, debe mantenerse congelado. Presentar para inspección.
5. Después de recibir la muestra, la sala de inspección la registrará (nombre de la muestra, unidad de inspección, cantidad, fecha, número, etc.) y observará la apariencia de la muestra. Si se encuentra alguna de las siguientes condiciones, se podrá rechazar la inspección:
(1) Las muestras que hayan sido esterilizadas mediante métodos especiales de alta presión, ebullición u otros métodos perderán su importancia en la representación del alimento original;
(2) Se han abierto botellas y bolsas de alimentos, la carne cocida y sus productos, las aves cocidas y otros alimentos se han roto y están incompletos, es decir, se ha perdido la forma original del alimento (excepto en el caso de muestras de intoxicación alimentaria);
(3) La cantidad de muestreo es insuficiente según lo requerido;
Para las muestras enviadas para inspección que cumplan con los requisitos, la sala de inspección debe realizar una inspección inmediatamente después de recibirlas. Si no se cumplen las condiciones, deben almacenarse en un refrigerador a 4°C, prepararse para crear las condiciones a tiempo y luego realizar una inspección.
6. Al inspeccionar muestras, realice el procesamiento adecuado según sus diferentes propiedades.
(1) Al inocular muestras líquidas, se deben mezclar e inocular completamente según la cantidad.
(2) Para muestras sólidas, utilice un cuchillo esterilizado para cortar 25 g de diferentes partes, colóquelas en 225 ml de solución salina esterilizada u otras soluciones, triture y mezcle con un homogeneizador e inocule según la cantidad.
(3) Los biberones y bolsas de alimentos deben abrirse mediante esterilización y los métodos anteriores deben seleccionarse de acuerdo con las características antes de la inoculación.
Requisitos de inspección, registro y presentación de informes de muestras
1. Después de recibir la muestra, la sala de inspección primero realizará una inspección de la apariencia y realizará la inspección de inmediato de acuerdo con los métodos de inspección estándar nacionales. Durante el proceso de inspección, las operaciones asépticas deben realizarse de manera cuidadosa, responsable y estricta para evitarresultado de la prueba microbianacontaminación en el medio ambiente.
2. Los métodos utilizados durante el proceso de inspección de la muestra, los fenómenos y resultados que ocurrieron, etc. deben escribirse en registros de prueba escritos como base para el análisis y juicio de los resultados. Los registros deben ser detallados, claros, auténticos, objetivos y no deben ser alterados ni falsificados.
Requisitos de operación aséptica:
1. Debe usar ropa de trabajo y gorro de trabajo al inocular bacterias.
2. Al inocular muestras de alimentos, se debe usar ropa de trabajo especial, gorros y pantuflas, que deben colocarse en la sala intermedia de la sala estéril y usarse después de la desinfección UV antes del trabajo.
3. Al inocular muestras de alimentos, lávese las manos con jabón antes de ingresar a la habitación esterilizada y luego límpielas con una bola de algodón con alcohol al 75%.
4. Las pajitas, platos planos y medios de cultivo utilizados para la inoculación deberán estar esterilizados y esterilizados. Los envases no utilizados no deben dejarse sin utilizar después de abrir el paquete. Los utensilios de metal deben esterilizarse en autoclave o quemarse tres veces con alcohol al 95 % antes de su uso.
5. Al sacar la pajita del paquete, la punta de la pajita no debe tocar las partes expuestas. Cuando se utiliza la pajita para inocular el tubo de ensayo o el plato, la punta de la pajita no debe tocar el borde del tubo de ensayo o del plato.
6. La inoculación de muestras y la transferencia de bacterias se deben realizar frente a una lámpara de alcohol. Al inocular bacterias o muestras, la pajita debe esterilizarse a la llama después de sacarla del paquete y abrir el tapón del tubo de ensayo.
7. Antes de inocular bacterias, todos los cables metálicos del asa de inoculación y la aguja deben quemarse con una llama y, si es necesario, quemar la conexión entre el asa, la aguja y la varilla. El asa de inoculación para inocular bacterias de la tuberculosis y bacterias virulentas debe hervirse en agua hirviendo durante 5 minutos y luego quemarse a la llama.
8. Cuando succione líquido bacteriano o muestras con una pajita, utilice la punta de goma correspondiente para chuparlo y no lo chupe directamente con la boca.
Requisitos de uso de salas estériles:
1. Las ventanas que dan al exterior de la sala estéril deben tener doble acristalamiento y estar selladas. No deben abrirse a voluntad. Debe haber una sala intermedia y una puerta corredera correspondiente al tamaño de la sala estéril. También debería haber una pequeña ventana de 0,5~0,7m2. En preparación para pasar artículos después de ingresar a la sala estéril.
2. La sala estéril debe mantenerse limpia. Después del trabajo, se debe desinfectar con una solución de jabón cresol del 2% al 3%, se debe limpiar la superficie de trabajo y no se deben almacenar elementos no relacionados con el experimento.
3. La puerta de la sala estéril debe cerrarse herméticamente antes y después de su uso y se debe encender la lámpara ultravioleta. Si se utiliza una lámpara ultravioleta suspendida interior para la desinfección, se requiere una lámpara ultravioleta de 30W. La distancia es de 1,0 my el tiempo de irradiación no es inferior a 30 minutos. Cuando utilice lámparas ultravioleta, se debe prestar atención a operar directamente bajo luz ultravioleta para evitar daños. La lámpara debe limpiarse suavemente con una bola de algodón con alcohol cada dos semanas para eliminar el polvo y la grasa y reducir el impacto de la penetración ultravioleta.
4. Al procesar e inocular muestras de alimentos, ingrese a la sala estéril para la operación y no se le permita entrar ni salir a voluntad. Si es necesario pasar objetos, se pueden pasar a través de la ventana pequeña.
5. Si es necesario instalar aire acondicionado en la sala estéril, debe haber un dispositivo de filtrado.
Requisitos de desinfección y esterilización
Cristalería, utensilios metálicos y medios de cultivo utilizados parapruebas microbiológicas, cultivos contaminados e inoculados, etc. deben esterilizarse antes de su uso. Métodos de esterilización por vapor a presión con calor seco y calor húmedo.
1. Preparación antes de la esterilización
(1) Todos los artículos que deban esterilizarse deben lavarse y secarse primero. Los vasos como pajitas y platos planos deben estar bien embalados con papel. Si se utilizan tubos metálicos, se deben abrir los orificios de ventilación.
(2) Envuelva el tapón del matraz triangular que contiene el medio de cultivo en papel, cubra el tubo de ensayo, saque el núcleo de la jeringa y envuélvalo con una gasa.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: Los artículos no deben estar abarrotados y no pueden tocar las cuatro paredes de la caja.
(2) Olla de vapor grande de alta presión: coloque los artículos esterilizados, envuélvalos por separado y colóquelos directamente en el cilindro de esterilización. No sobrecargues los artículos.
3. Inspección de equipos
(1) Compruebe si el interruptor de la puerta es flexible, si el anillo de goma está dañado y si está plano.
(2) Verifique si el manómetro permanece en la posición cero cuando se agota el vapor, cierre la puerta y la tapa, ventile el vapor o el calor y observe si hay fugas de aire, si las condiciones marcadas por el manómetro y el termómetro coinciden y si la tubería está bloqueada.
(3) Para esterilizadores con dispositivos electrónicos automáticos de control de programa, el programa especificado debe verificarse antes de su uso para ver si cumple con los requisitos de esterilización.
4. Tratamiento de esterilización
(1) Método de esterilización por calor seco:
Este método es adecuado para artículos que no se dañan, deterioran ni se evaporan en condiciones de calor seco. Se utiliza más comúnmente para esterilizar cristalería, productos metálicos, productos cerámicos, etc.
①Los instrumentos y utensilios deben lavarse antes de hornear en seco para evitar que la suciedad adherida a la superficie se carbonice.
② Durante la esterilización, los artículos no deben estar abarrotados, no deben tocar directamente el fondo y la pared de la caja y dejar espacios entre los artículos.
③ Durante la esterilización, cierre bien la puerta, conecte la fuente de alimentación, abra el orificio de escape durante aproximadamente 30 minutos para eliminar el aire frío del esterilizador, ajuste la luz indicadora cuando la temperatura suba a 160 °C y manténgala durante 1,5 a 2 horas.
④Después de completar la esterilización o durante el proceso de aumento de temperatura, la puerta debe abrirse por debajo de 60°C.
(2) Se deben seguir los siguientes pasos cuando se utiliza una olla a presión portátil o un esterilizador de vapor a presión vertical:
① Agregue 3 litros de agua al cuerpo principal de la olla a presión portátil y 16 litros de agua a la olla a presión vertical (la cantidad de agua debe reponerse cuando se reutiliza y el agua debe reemplazarse si se vuelve turbia);
② Para una olla a presión portátil, inserte el tubo de escape en la cubierta superior en el tubo cuadrado en la pared interior del barril de esterilización (no se deben usar esterilizadores sin mangueras o con mangueras corroídas o agrietadas);
③ Cubra la cubierta superior y apriétela firmemente para evitar fugas de aire; coloque el esterilizador en la fuente de fuego para calentar, encienda la olla a presión vertical y abra la válvula de escape en la cubierta superior para dejar salir el aire (escape el aire durante 10 a 15 minutos después de que hierva el agua);
④Cerrar la válvula de escape para elevar la presión del vapor a los requisitos especificados y mantenerla durante el tiempo especificado (dependiendo de la naturaleza de los artículos esterilizados y las circunstancias relevantes);
⑤ Después de alcanzar el tiempo especificado, para los artículos que necesitan secarse, abra inmediatamente la válvula de escape para descargar el vapor. Cuando la presión vuelva a cero, enfríelo naturalmente a 60 °C y luego abra la tapa para sacar los artículos. Si es un artículo líquido, no abra la válvula de escape. La olla debe retirarse de la fuente de calor inmediatamente y dejarse enfriar naturalmente hasta que la presión vuelva a cero y la temperatura caiga por debajo de 60 °C antes de abrir la tapa para sacar el contenido y evitar la descompresión repentina del líquido debido a una ebullición violenta o una explosión del recipiente.
(3) Siga los siguientes pasos para utilizar el esterilizador a vapor de olla a presión horizontal:
①Cierre bien la puerta de la olla, abra la válvula de entrada de aire, introduzca vapor en el entrepiso para precalentarlo y el aire frío del entrepiso se descargará automáticamente a través de la barrera de aire;
②Después de que la capa intermedia alcance la temperatura predeterminada, abra la válvula de entrada de aire de la cámara de la olla, introduzca el vapor en la cámara de la olla y el aire frío en la cámara de la olla se descargará automáticamente a través del pararrayos de aire de la cámara de la olla;
③Cuando la presión y la temperatura en la cámara de la olla alcancen la presión especificada, ajuste la válvula de entrada de aire para mantenerla constante;
④ Enfríe la temperatura de forma natural o artificial a 60 ℃ antes de abrir la puerta para sacar los artículos. No utilice el método de descarga rápida de vapor para evitar una caída repentina de presión, una ebullición violenta del líquido o una explosión del recipiente;
⑤ Cuando se utiliza un esterilizador de vapor a presión controlado por programa automático, después de colocar los artículos y cerrar bien la puerta, se debe presionar el interruptor correspondiente según la categoría de los artículos para que la esterilización se pueda realizar automáticamente de acuerdo con los procedimientos requeridos. Durante la esterilización, se debe utilizar el instrumento adjunto para registrar la temperatura y el tiempo. Para referencia futura, los requisitos operativos deben estar estrictamente de acuerdo con las instrucciones del fabricante;
5. Temperatura y tiempo de esterilización.
(1) La temperatura de esterilización del esterilizador de calor seco es de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura de esterilización y tiempo del esterilizador de vapor a presión.
Método de esterilización intermitente.
1. Método de esterilización:
Utilice esterilización por vapor sin presión. Algunas sustancias se destruyen fácilmente mediante la esterilización con vapor a alta presión, por lo que este método se puede utilizar para la esterilización.
(1) Coloque los artículos a esterilizar en la olla, cubra la tapa superior, abra la salida de drenaje y drene el agua restante en la olla.
(2) Cierre la salida de drenaje, abra la puerta de entrada de aire y desinfecte durante 10 a 20 minutos según sea necesario.
(3) Una vez completada la esterilización, cierre la puerta de entrada de aire, saque los artículos y espere a que se enfríen a temperatura ambiente, colóquelos en una incubadora a 37 °C durante la noche y continúe esterilizando según el método anterior al día siguiente. Haga esto tres veces para lograr el propósito de la esterilización.
2. Cómo utilizar el suero coagulador:
Cuando el medio de cultivo contiene ingredientes especiales como suero o huevos, el calor elevado destruirá sus nutrientes. Por lo tanto, se puede utilizar baja temperatura para coagular el suero y lograr fines de esterilización:
(1) Cuando se utilice suero esterilizado mediante este método en alícuotas, se deben seguir estrictamente las operaciones asépticas y también se deben esterilizar los tubos y placas de ensayo antes de su uso;
(2) Haga que el medio de cultivo forme una pendiente o una capa alta según sea necesario. Después de agregar suficiente agua, conecte la fuente de alimentación, aumente la temperatura a 75 ~ 90 °C durante una hora y luego esterilícela. Colóquelo en una incubadora a 37°C durante la noche y luego esterilícelo tres veces.
3. Hervir y desinfectar:
Puedes utilizar una olla hirviendo o un esterilizador hirviendo. Después de que el agua hierva, hiérvela durante 5 a 15 minutos. También puedes agregar ácido fénico al 2% al agua y hervirla durante 5 minutos. Agregue 0,02% de formaldehído y hiérvalo a 80°C durante 60 minutos para lograr el propósito de esterilización. Sin embargo, se puede lograr la esterilización por ebullición. Al utilizar potenciadores, se debe prestar atención a la corrosividad de los artículos.
4. Tratamiento de esterilización:
Después de la esterilización, los artículos ya están esterilizados en circunstancias normales. Deben inspeccionarse y colocarse cuidadosamente al sacarlos del esterilizador para evitar una recontaminación;
(1) Saque los artículos y verifique la integridad del embalaje inmediatamente. Si hay daños o se retira el tampón, no se puede utilizar como artículo esterilizado;
(2) Los artículos retirados no se pueden utilizar como artículos esterilizados si su embalaje está evidentemente empapado en agua;
(3) Se debe verificar el medio de cultivo o los reactivos para ver si cumplen con el color o el estado después de la esterilización. Aquellos que no cumplan con los requisitos deberán ser descartados;
(4) Para contenedores abiertos/cerrados, los orificios de la pantalla deben cerrarse al sacarlos;
(5) Si los artículos retirados caen al suelo, se extravían en un lugar sucio o se manchan con agua, se consideran contaminados y no pueden usarse como artículos esterilizados;
(6) Los artículos esterilizados calificados que se retiren deben almacenarse en una sala de almacenamiento o en un gabinete a prueba de polvo, y está estrictamente prohibido mezclarlos con artículos no esterilizados;
(7) Todos los artículos calificados deben estar marcados con la fecha de esterilización y la fecha de vencimiento;
(8) Después de completar cada lote de procesamiento de esterilización, registre el nombre, cantidad, temperatura, hora y operador de los productos esterilizados.
Requisitos para el tratamiento de residuos tóxicos y bacterianos.
Los equipos experimentales y los cultivos utilizados en experimentos microbiológicos no deben sacarse del laboratorio sin desinfectarse.
1. Los materiales y desechos cultivados contaminados deben colocarse en contenedores herméticos o cestas de alambre y almacenarse centralmente en lugares designados hasta que se esterilicen uniformemente en autoclave.
2. Los cultivos contaminados por microorganismos deben esterilizarse en autoclave a 121°C durante 30 minutos.
3. Después de su uso, las pajitas contaminadas deben colocarse en una solución de jabón creol al 5 % o una solución de ácido fénico, remojarse durante al menos 24 horas (el líquido desinfectante no debe ser inferior a la altura de remojo) y luego esterilizarse a alta presión a 121 °C durante 30 minutos.
4. El líquido para teñir y enjuagar manchas generalmente se puede verter directamente al alcantarillado. El líquido de enjuague para bacterias virulentas debe enjuagarse en un vaso de precipitados y esterilizarse a alta presión antes de verterse en el alcantarillado. Los portaobjetos teñidos se colocan en una solución de jabón cresol al 5%. Después de remojar en agua durante 24 horas, hervir y lavar. Los portaobjetos o platos utilizados para las pruebas de aglutinación deben esterilizarse en autoclave y luego lavarse.
5. Después de romper el cultivo, rocíe y remoje inmediatamente las partes contaminadas con una solución de jabón cresol al 5% o una solución de ácido carbólico, remoje durante media hora y luego limpie.
La ropa de trabajo contaminada o ropa de trabajo, gorros, máscaras, etc. usados para pruebas violentas deben colocarse en bolsas especiales de desinfección y esterilizarse a alta presión antes de lavarse.
Requisitos de preparación media
La calidad de la preparación del medio de cultivo afectará directamente el crecimiento de los microorganismos, porque varios microorganismos tienen diferentes necesidades nutricionales y diferentes propósitos de cultivo. Los requisitos de preparación para diversos medios de cultivo son los siguientes:
1. Pese los ingredientes según la fórmula del medio y luego disuélvalos en agua destilada. Se debe inspeccionar la calidad de los reactivos y medicamentos aplicados antes de su uso.
2. Medición y ajuste del pH: la medición del pH debe realizarse cuando el medio de cultivo se enfría a temperatura ambiente, porque existe una cierta diferencia de pH en condiciones de frío o calor. Cuando se complete la medición, agregue álcali o ácido según la cantidad calculada y mezcle bien. Debería hacerse la prueba nuevamente. El valor de pH del medio de cultivo debe ser preciso; de lo contrario, afectará el crecimiento de microorganismos o afectará la observación de los resultados. Sin embargo, cabe señalar que la esterilización a alta presión puede afectar la disminución o aumento del pH de algunos medios de cultivo, por lo que no es recomendable esterilizar a una presión demasiado alta o demasiadas veces para no afectar la calidad del medio de cultivo. Generalmente se añaden indicadores, desoxicolato de sodio, agar, etc. después de ajustar el pH.
3. El medio de cultivo debe mantenerse limpio para facilitar la observación del crecimiento bacteriano. Después de calentar y hervir el medio de cultivo, se puede filtrar con algodón absorbente o franela para eliminar los sedimentos. Si es necesario se puede clarificar con clara de huevo. Las tiras de agar utilizadas deben lavarse y secarse previamente. Antes de su uso, evitar afectar la transparencia debido a impurezas en el agar.
4. No se deben utilizar recipientes de hierro, cobre ni otros recipientes para contener el medio de cultivo. Es mejor utilizar recipientes limpios de vidrio duro y neutro.
5. La esterilización del medio de cultivo no solo debe lograr el propósito de una esterilización completa, sino también prestar atención a no reducir su valor nutricional debido al calentamiento. Generalmente, 121°C durante 15 minutos es suficiente. Para los medios de cultivo que contienen sustancias que son intolerantes a las altas temperaturas, como azúcares y suero, gelatina, etc., deben esterilizarse mediante un método intermitente o de baja temperatura. Algunos reactivos que no se pueden calentar, como el telurito potásico, la yema de huevo, el TTC, los antibióticos, etc., deben enfriarse a aproximadamente 50 °C después de esterilizar en autoclave el agar básico y luego agregarlo;
6. Después de preparar cada lote de medios de cultivo, se debe realizar una prueba de crecimiento estéril y una prueba de crecimiento de las cepas analizadas. Si se trata de un medio de cultivo bioquímico, utilice cepas bacterianas estándar para la inoculación y el cultivo y observe los resultados de la reacción bioquímica. Debería mostrar una reacción normal. El medio de cultivo no debe almacenarse por mucho tiempo. Si es necesario, se puede conservar en frigorífico a 4°C.
7. En la actualidad, existen muchos tipos de medios de cultivo secos. Cada lote debe utilizar cepas estándar para pruebas de crecimiento u observación de reacciones bioquímicas. Se pueden utilizar diversos medios de cultivo sólo después de que la prueba de crecimiento de las cepas correspondientes sea buena. Se pueden utilizar los recién comprados o secos que hayan estado almacenados durante mucho tiempo. También se debe medir el pH del medio de cultivo al prepararlo, y seguir la dosificación y método según las instrucciones del producto.
8. Se deben registrar para su consulta los reactivos químicos, las condiciones de esterilización, los resultados de las pruebas de crecimiento de cepas y el personal de producción utilizado en cada lote de medios de cultivo preparados.
Requisitos de recolección y procesamiento de muestras.
1. Las muestras de inspección recogidas deberán ser representativas. Al tomar muestras, se deben investigar en detalle las materias primas, el procesamiento, el transporte, los métodos y condiciones de almacenamiento del lote de alimentos, las condiciones de salud ambiental circundante, etc. para verificar si existen fuentes de contaminación.
2. Según el tipo y cantidad de alimento, la cantidad y el método de muestreo deben realizarse de acuerdo con los requisitos de los métodos de inspección estándar.
3. Preste atención al funcionamiento aséptico al tomar muestras y el recipiente debe esterilizarse para evitar la contaminación microbiana en el medio ambiente. El recipiente no debe esterilizarse con solución de jabón creosal, esterilización con clormetionina, alcohol y otros desinfectantes, y no debe contener dichos desinfectantes ni antibióticos. Para evitar matar los microorganismos de la muestra, las tijeras, cuchillos y cucharas utilizados también deben esterilizarse antes de su uso.
4. Las muestras deben enviarse a la sala de inspección para su inspección inmediatamente después de su recolección. El proceso de inspección generalmente no excede las 3 horas. Si la distancia es larga, se puede almacenar en un ambiente de 1~5 ℃. Si es necesario congelarlo, debe mantenerse congelado. Presentar para inspección.
5. Después de recibir la muestra, la sala de inspección la registrará (nombre de la muestra, unidad de inspección, cantidad, fecha, número, etc.) y observará la apariencia de la muestra. Si se encuentra alguna de las siguientes condiciones, se podrá rechazar la inspección:
(1) Las muestras que hayan sido esterilizadas mediante métodos especiales de alta presión, ebullición u otros métodos perderán su importancia en la representación del alimento original;
(2) Se han abierto botellas y bolsas de alimentos, la carne cocida y sus productos, las aves cocidas y otros alimentos se han roto y están incompletos, es decir, se ha perdido la forma original del alimento (excepto en el caso de muestras de intoxicación alimentaria);
(3) La cantidad de muestreo es insuficiente según lo requerido;
Para las muestras enviadas para inspección que cumplan con los requisitos, la sala de inspección debe realizar una inspección inmediatamente después de recibirlas. Si no se cumplen las condiciones, deben almacenarse en un refrigerador a 4°C, prepararse para crear las condiciones a tiempo y luego realizar una inspección.
6. Al inspeccionar muestras, realice el procesamiento adecuado según sus diferentes propiedades.
(1) Al inocular muestras líquidas, se deben mezclar e inocular completamente según la cantidad.
(2) Para muestras sólidas, utilice un cuchillo esterilizado para cortar 25 g de diferentes partes, colóquelas en 225 ml de solución salina esterilizada u otras soluciones, triture y mezcle con un homogeneizador e inocule según la cantidad.
(3) Los biberones y bolsas de alimentos deben abrirse mediante esterilización y los métodos anteriores deben seleccionarse de acuerdo con las características antes de la inoculación.
Requisitos de inspección, registro y presentación de informes de muestras
1. Después de recibir la muestra, la sala de inspección primero realizará una inspección de la apariencia y realizará la inspección de inmediato de acuerdo con los métodos de inspección estándar nacionales. Durante el proceso de inspección, las operaciones asépticas deben realizarse de manera cuidadosa, responsable y estricta para evitarresultado de la prueba microbianacontaminación en el medio ambiente.
2. Los métodos utilizados durante el proceso de inspección de la muestra, los fenómenos y resultados que ocurrieron, etc. deben escribirse en registros de prueba escritos como base para el análisis y juicio de los resultados. Los registros deben ser detallados, claros, auténticos, objetivos y no deben ser alterados ni falsificados.
