Rezumatul cerințelor de testare microbiologică
2024-01-24 15:14:33
Cerințele și pașii pentrutestarea microbiologicăsunt după cum urmează:
Cerințe de funcționare aseptică:
1.Trebuie să purtați haine de lucru și o șapcă de lucru atunci când inoculați bacterii.
2. La inocularea probelor de alimente, trebuie purtate haine de lucru speciale, bonete și papuci, care trebuie așezate în camera tampon a camerei sterile și utilizate după dezinfecția UV înainte de muncă.
3. Când inoculați probele de alimente, spălați-vă mâinile cu săpun înainte de a intra în camera sterilă, apoi ștergeți-vă mâinile cu o minge de bumbac cu alcool 75%.
4. Paiele, vasele plate și mediile de cultură folosite pentru inoculare trebuie să fie sterilizate și sterilizate. Recipientele neutilizate nu trebuie lăsate neutilizate după deschiderea ambalajului. Ustensilele metalice trebuie autoclavate sau arse de trei ori cu alcool 95% înainte de utilizare.
5. La scoaterea paiului din ambalaj, vârful paiului nu trebuie să atingă părțile expuse. Când folosiți paiul pentru inocularea eprubetei sau a plăcii, vârful paiului nu trebuie să atingă marginea eprubetei sau a plăcii.
6. Inocularea probelor și transferul bacteriilor trebuie făcute în fața unei lămpi cu alcool. La inocularea bacteriilor sau a probelor, paiele trebuie sterilizate la flacără după scoaterea din ambalaj și deschiderea dopului eprubetei.
7. Înainte de a inocula bacteriile, toate firele metalice ale ansei de inoculare și ale acului trebuie arse cu o flacără și, dacă este necesar, conexiunea dintre ansa, ac și tija ar trebui să fie arse. Bucla de inoculare pentru inocularea bacteriilor de tuberculoză și a bacteriilor virulente trebuie fiertă în apă clocotită timp de 5 minute, apoi arsă de flacără.
8. Când sugeți lichid bacterian sau probe cu un pai, utilizați vârful de cauciuc corespunzător pentru a-l suge și nu îl sugeți direct cu gura.
Cerințe de utilizare a camerei sterile:
1. Ferestrele care duc spre exteriorul camerei sterile trebuie să fie termopan și sigilate. Nu ar trebui să fie deschise după bunul plac. Ar trebui să existe o cameră tampon și o ușă glisantă corespunzătoare dimensiunii camerei sterile. Ar trebui să existe și o fereastră mică de 0,5 ~ 0,7 m2. În pregătirea pentru trecerea obiectelor după intrarea în camera sterilă.
2. Camera sterilă trebuie păstrată curată. După muncă, trebuie dezinfectat cu soluție de săpun crezol de 2% până la 3%, suprafața de lucru trebuie ștersă, iar articolele care nu au legătură cu experimentul nu trebuie depozitate.
3. Ușa camerei sterile trebuie închisă etanș înainte și după utilizare, iar lampa cu ultraviolete trebuie aprinsă. Dacă pentru dezinfecție se folosește o lampă cu ultraviolete suspendată de interior, este necesară o lampă cu ultraviolete de 30W. Distanța este de 1,0 m, iar timpul de iradiere nu este mai mic de 30 de minute. Când utilizați lămpi cu ultraviolete, trebuie acordată atenție să funcționeze direct sub lumină ultravioletă pentru a evita deteriorarea. Lampa trebuie șters ușor cu o minge de bumbac cu alcool la fiecare două săptămâni pentru a îndepărta praful și grăsimea pentru a reduce impactul pătrunderii ultravioletelor.
4. La prelucrarea și inocularea probelor alimentare, intrați în camera sterilă pentru operație și nu au voie să intre sau să iasă în voie. Dacă articolele trebuie să fie transmise, acestea pot fi trecute prin fereastra mică.
5. Dacă trebuie instalat aer condiționat în camera sterilă, ar trebui să existe un dispozitiv de filtrare.
Cerințe de dezinfecție și sterilizare
Sticlărie, ustensile metalice și medii de cultură utilizate pentrutestarea microbiologică, culturile contaminate și inoculate etc. trebuie sterilizate înainte de utilizare. Metode de sterilizare cu abur la căldură uscată și la căldură umedă sub presiune.
1. Pregătirea înainte de sterilizare
(1) Toate articolele care trebuie sterilizate trebuie mai întâi spălate și uscate. Articolele din sticlă, cum ar fi paiele și vasele plate, ar trebui să fie bine împachetate cu hârtie. Dacă se folosesc tuburi metalice, orificiile de ventilație de pe ele trebuie deschise.
(2) Înfășurați dopul balonului triunghiular care conține mediul de cultură în hârtie, acoperiți eprubeta și scoateți miezul seringii și înveliți-l cu tifon.
2. instalați
(1) Sterilizator cu căldură uscată: articolele nu trebuie să fie supraaglomerate și să nu atingă cei patru pereți ai cutiei.
(2) Arată mare cu abur de înaltă presiune: Așezați articolele sterilizate, împachetați-le separat și puneți-le direct în cilindrul de sterilizare. Nu supraaglomerați articolele.
3. Verificarea echipamentelor
(1) Verificați dacă comutatorul ușii este flexibil, dacă inelul de cauciuc este deteriorat și dacă este plat.
(2) Verificați dacă manometrul rămâne în poziția zero când aburul este evacuat, închideți ușa și capacul, ventilați aburul sau căldura și observați dacă există scurgeri de aer, dacă condițiile marcate de manometru și termometru se potrivesc și dacă conducta este blocată.
(3) Pentru sterilizatoarele cu dispozitive electronice automate de control al programului, programul specificat trebuie verificat înainte de utilizare pentru a vedea dacă îndeplinește cerințele pentru sterilizare.
4. Tratament de sterilizare
(1) Metoda de sterilizare la căldură uscată:
Această metodă este potrivită pentru articolele care nu deteriorează, nu se deteriorează sau se evaporă în condiții de căldură uscată. Este mai frecvent utilizat pentru sterilizarea articolelor din sticlă, produse metalice, produse ceramice etc.
①Instrumentele și ustensilele trebuie spălate înainte de uscare - coacere pentru a preveni carbonizarea murdăriei atașată la suprafață.
② În timpul sterilizării, articolele nu trebuie să fie supraaglomerate, nu trebuie să contactați direct partea inferioară și peretele cutiei și să lăsați goluri între articole.
③ În timpul sterilizării, închideți ușa strâns, conectați sursa de alimentare, deschideți orificiul de evacuare timp de aproximativ 30 de minute pentru a elimina aerul rece din sterilizator, reglați indicatorul luminos când temperatura crește la 160 ° C și mențineți-l timp de 1,5 până la 2 ore.
④După finalizarea sterilizării sau în timpul procesului de creștere a temperaturii, ușa trebuie deschisă sub 60°C.
(2) Următorii pași trebuie urmați atunci când utilizați o oală sub presiune portabilă sau un sterilizator vertical cu abur sub presiune:
① Adăugați 3 L de apă în corpul principal al oalei sub presiune portabile și 16 L de apă în oala verticală sub presiune (cantitatea de apă trebuie completată când este reutilizată, iar apa trebuie înlocuită dacă devine tulbure);
② Pentru o oală sub presiune portabilă, introduceți țeava de evacuare de pe capacul superior în tubul pătrat de pe peretele interior al butoiului de sterilizare (nu trebuie folosite sterilizatoare fără furtunuri sau cele cu furtunuri corodate și crăpate);
③ Acoperiți capacul superior și strângeți-l strâns pentru a preveni scurgerile de aer; așezați sterilizatorul pe sursa de foc pentru a se încălzi, porniți oala sub presiune verticală și deschideți supapa de evacuare de pe capacul superior pentru a elibera aerul (aerul evacuat timp de 10 până la 15 minute după ce apa fierbe));
④ Închideți supapa de evacuare pentru a crește presiunea aburului la cerințele specificate și mențineți-o pentru timpul specificat (în funcție de natura articolelor sterilizate și de circumstanțele relevante);
⑤ După ce timpul specificat este atins, pentru articolele care trebuie uscate, deschideți imediat supapa de evacuare pentru a descărca aburul. Când presiunea revine la zero, răciți-o în mod natural la 60°C și apoi deschideți capacul pentru a scoate articolele. Dacă este un articol lichid, nu deschideți supapa de evacuare. Oala trebuie scoasă imediat din sursa de căldură și lăsată să se răcească în mod natural până când presiunea revine la zero și temperatura scade sub 60°C înainte de a deschide capacul pentru a scoate conținutul pentru a preveni decomprimarea bruscă a lichidului de la fierberea violentă sau explozia recipientului.
(3) Urmați următorii pași pentru a utiliza sterilizatorul cu abur pentru oala sub presiune orizontală:
①Închideți ermetic ușa oală, deschideți supapa de admisie a aerului, introduceți abur în mezanin pentru preîncălzire, iar aerul rece din mezanin va fi evacuat automat prin bariera de aer;
②După ce stratul intermediar atinge temperatura predeterminată, deschideți supapa de admisie a aerului din camera oală, introduceți aburul în camera oală, iar aerul rece din camera oală va fi evacuat automat prin opritorul de aer al camerei oală;
③Când presiunea și temperatura din camera oală ating presiunea specificată, reglați supapa de admisie a aerului pentru a o menține constantă;
④ Răciți temperatura în mod natural sau artificial la 60℃ înainte de a deschide ușa pentru a scoate articolele. Nu utilizați metoda de descărcare rapidă a aburului pentru a preveni scăderea bruscă a presiunii, fierberea violentă a lichidului sau explozia recipientului;
⑤ Când utilizați un program automat - sterilizator cu abur cu presiune controlată, după așezarea articolelor și închiderea ermetică a ușii, comutatorul corespunzător trebuie apăsat în funcție de categoria articolelor, astfel încât sterilizarea să poată fi efectuată automat conform procedurilor necesare. În timpul sterilizării, instrumentul atașat trebuie folosit pentru a înregistra temperatura și timpul. Pentru referințe viitoare, cerințele de operare ar trebui să fie strict în conformitate cu instrucțiunile producătorului;
5. Temperatura și timpul de sterilizare
(1) Temperatura de sterilizare a sterilizatorului cu căldură uscată este de 160 ℃, 1,5 ~ 2 ore.
(2) Temperatura de sterilizare și timpul sterilizatorului cu abur sub presiune
Metoda de sterilizare intermitentă
1. Metoda de sterilizare:
Utilizați sterilizarea cu abur fără presiune. Unele substanțe sunt ușor distruse prin sterilizarea cu abur de înaltă presiune, astfel încât această metodă poate fi utilizată pentru sterilizare.
(1) Puneți articolele de sterilizat în oală, acoperiți capacul superior, deschideți orificiul de scurgere și scurgeți apa rămasă în oală.
(2) Închideți orificiul de evacuare, deschideți ușa de admisie a aerului și dezinfectați timp de 10 până la 20 de minute după cum este necesar.
(3) După terminarea sterilizării, închideți ușa de admisie a aerului, scoateți articolele și așteptați să se răcească la temperatura camerei, puneți-le într-un incubator la 37°C peste noapte și continuați sterilizarea conform metodei de mai sus a doua zi. Faceți acest lucru de trei ori pentru a atinge scopul sterilizării.
2. Cum se utilizează coagulatorul seric:
Când mediul de cultură conține ingrediente speciale, cum ar fi ser sau ouă, căldura ridicată îi va distruge nutrienții. Prin urmare, temperatura scăzută poate fi utilizată pentru a coagula serul și a realiza scopuri de sterilizare:
(1) Când se utilizează ser sterilizat prin această metodă în alicote, operațiunile aseptice trebuie respectate cu strictețe, iar eprubetele și plăcile trebuie de asemenea sterilizate înainte de utilizare;
(2) Faceți mediul de cultură într-o pantă sau un strat înalt, după cum este necesar. După ce ați adăugat suficientă apă, conectați sursa de alimentare, ridicați temperatura la 75~90°C timp de o oră și apoi sterilizați-o. Puneți-l într-un incubator la 37°C peste noapte și apoi sterilizați-l de trei ori.
3. Fierbeți și dezinfectați:
Puteți folosi o oală de fierbere sau un sterilizator de fierbere. După ce apa fierbe, fierbeți-o timp de 5 până la 15 minute. De asemenea, puteți adăuga acid carbolic 2% în apă și o fierbeți timp de 5 minute. Adăugați 0,02% formaldehidă și fierbeți-o la 80°C timp de 60 de minute pentru a atinge scopul sterilizării. Cu toate acestea, se poate realiza sterilizarea prin fierbere. Când utilizați potențiatori, trebuie acordată atenție corozivității articolelor.
4. Tratament de sterilizare:
După sterilizare, articolele sunt deja sterile în circumstanțe normale. Acestea trebuie inspectate cu atenție și plasate atunci când sunt scoase din sterilizator pentru a evita recontaminarea;
(1) Scoateți articolele și verificați imediat integritatea ambalajului. Dacă există deteriorare sau tamponul este îndepărtat, acesta nu poate fi folosit ca articole sterile;
(2) Articolele scoase nu pot fi folosite ca articole sterile dacă ambalajul lor este în mod evident înmuiat în apă;
(3) Mediul de cultură sau reactivii trebuie verificați pentru a vedea dacă îndeplinesc culoarea sau starea după sterilizare. Cele care nu îndeplinesc cerințele trebuie aruncate;
(4) Pentru containerele deschise/închise, orificiile pentru ecran trebuie să fie închise atunci când le scoateți;
(5) În cazul în care obiectele îndepărtate cad la pământ, sunt deplasate greșit într-un loc necurat sau sunt pătate de apă, acestea sunt considerate contaminate și nu pot fi folosite ca articole sterile;
(6) Articolele sterilizate calificate scoase trebuie depozitate în camera de depozitare sau în dulap rezistent la praf și este strict interzisă amestecarea lor cu articole nesterilizate;
(7) Toate articolele calificate trebuie marcate cu data de sterilizare și data de expirare;
(8) După finalizarea fiecărui lot de procesare de sterilizare, înregistrați numele, cantitatea, temperatura, timpul și operatorul produselor sterilizate.
Cerințe pentru tratarea deșeurilor toxice și bacteriene
Echipamentele experimentale și culturile utilizate în experimentele microbiologice nu trebuie scoase din laborator fără dezinfecție.
1. Materialele și deșeurile contaminate de cultură trebuie plasate în recipiente etanșe sau coșuri de sârmă și depozitate central în locuri desemnate până când sunt autoclavate uniform.
2. Culturile contaminate cu microorganisme trebuie autoclavate la 121°C timp de 30 de minute.
3. După utilizare, paiele contaminate trebuie puse în soluție de săpun creol 5% sau soluție de acid carbolic, înmuiate timp de cel puțin 24 de ore (lichidul dezinfectant nu trebuie să fie mai mic decât înălțimea de înmuiere), apoi sterilizate la presiune mare la 121°C timp de 30 de minute.
4. Lichidul pentru colorarea și clătirea frotiurilor poate fi în general aruncat direct în canalizare. Lichidul de clătire pentru bacteriile virulente trebuie spălat într-un pahar și sterilizat la presiune mare înainte de a fi turnat în canalizare. Lamelele colorate sunt puse în soluție de săpun crezol 5%. După ce ați înmuiat în apă timp de 24 de ore, se fierbe și se spală. Lamele sau vasele folosite pentru testarea aglutinarii trebuie autoclavate si apoi spalate.
5. După spargerea culturii, pulverizați imediat și înmuiați părțile contaminate cu soluție de săpun cresol 5% sau soluție de acid carbolic, lăsați la macerat timp de jumătate de oră și apoi ștergeți.
Hainele de lucru contaminate sau hainele de lucru, bonetele, măștile etc. purtate pentru teste violente trebuie introduse în pungi speciale de dezinfecție și sterilizate la presiune mare înainte de a fi spălate.
Cerințe medii de pregătire
Calitatea pregătirii mediului de cultură va afecta direct creșterea microorganismelor, deoarece diferitele microorganisme au cerințe nutriționale diferite și scopuri de cultură diferite. Cerințele de pregătire pentru diferite medii de cultură sunt următoarele:
1. Cântăriți ingredientele conform formulei medii, apoi dizolvați-le în apă distilată. Calitatea reactivilor și a medicamentelor aplicate trebuie verificată înainte de utilizare.
2. Măsurarea și ajustarea pH-ului: măsurarea pH-ului trebuie efectuată atunci când mediul de cultură este răcit la temperatura camerei, deoarece există o anumită diferență de pH în condiții calde sau reci. Când măsurarea este finalizată, adăugați alcali sau acid conform cantității calculate și amestecați bine. Ar trebui testat din nou. Valoarea pH-ului mediului de cultură trebuie să fie precisă, altfel va afecta creșterea microorganismelor sau va afecta observarea rezultatelor. Totuși, trebuie menționat că sterilizarea la presiune înaltă poate afecta scăderea sau creșterea pH-ului unor medii de cultură, de aceea nu este indicată sterilizarea la o presiune prea mare sau de prea multe ori pentru a evita afectarea calității mediului de cultură. Indicatori, deoxicolat de sodiu, agar etc. sunt în general Adăugați-l după ajustarea pH-ului.
3. Mediul de cultură trebuie păstrat clar pentru a facilita observarea creșterii bacteriene. După ce mediul de cultură este încălzit și fiert, acesta poate fi filtrat cu bumbac absorbant sau flanel pentru a îndepărta sedimentul. Dacă este necesar, se poate limpezi cu albuș. Benzile de agar folosite trebuie spălate și uscate în prealabil. Înainte de utilizare, evitați afectarea transparenței din cauza impurităților din agar.
4. Fierul, cuprul și alte recipiente nu trebuie folosite pentru a ține mediul de cultură. Este mai bine să folosiți recipiente curate din sticlă tare neutre.
5. Sterilizarea mediului de cultură nu trebuie doar să atingă scopul sterilizării complete, ci și să acorde atenție să nu reducă valoarea nutritivă a acestuia din cauza încălzirii. În general, 121°C timp de 15 minute este suficient. Pentru mediile de cultură care conțin substanțe care sunt intolerante la căldură ridicată, cum ar fi zaharurile și serul, gelatina etc., trebuie sterilizate prin temperatură joasă sau prin metoda intermitentă. Unii reactivi care nu pot fi încălziți, cum ar fi teluritul de potasiu, gălbenușul de ou, TTC, antibioticele etc., trebuie răciți la aproximativ 50°C după ce agarul bazic este autoclavat și apoi adăugat;
6. După ce fiecare lot de mediu de cultură este pregătit, trebuie efectuat un test de creștere steril și un test de creștere a tulpinilor testate. Dacă este un mediu de cultură biochimic, utilizați tulpini bacteriene standard pentru inoculare și cultură și observați rezultatele reacției biochimice. Ar trebui să arate o reacție normală. Mediul de cultură nu trebuie păstrat prea mult timp. Dacă este necesar, poate fi păstrat la frigider la 4°C.
7. În prezent, există multe tipuri de medii de cultură uscate. Fiecare lot trebuie să utilizeze tulpini standard pentru testul de creștere sau observarea reacțiilor biochimice. Diferite medii de cultură pot fi utilizate numai după ce testul de creștere al tulpinilor corespunzătoare este bun. Pot fi folosite cele proaspăt achiziționate sau uscate care au fost depozitate mult timp. La prepararea acestuia trebuie măsurat și pH-ul mediului de cultură, iar dozarea și metoda trebuie urmate conform instrucțiunilor produsului.
8. Reactivii chimici, condițiile de sterilizare, rezultatele testelor de creștere a tulpinilor și personalul de producție utilizat în fiecare lot de mediu de cultură preparat trebuie să fie înregistrate pentru investigare.
Cerințe de colectare și procesare a probelor
1. Probele de inspecție colectate trebuie să fie reprezentative. La prelevare de probe, materiile prime, procesarea, transportul, metodele și condițiile de depozitare ale lotului de alimente, condițiile de sănătate a mediului înconjurător etc. trebuie investigate în detaliu pentru a verifica dacă există surse de contaminare.
2. În funcție de tipul și cantitatea de alimente, cantitatea de eșantionare și metoda trebuie efectuate în conformitate cu cerințele metodelor standard de inspecție.
3. Acordați atenție funcționării aseptice la prelevare, iar recipientul trebuie sterilizat pentru a evita contaminarea microbiană a mediului. Recipientul nu trebuie sterilizat cu soluție de săpun creozal, sterilizare cu clormetionină, alcool și alți dezinfectanți și nu trebuie să conțină astfel de dezinfectanți sau antibiotice. Pentru a evita uciderea microorganismelor din probă, foarfecele, cuțitele și lingurile utilizate trebuie, de asemenea, să fie sterilizate înainte de utilizare.
4. Probele trebuie trimise la camera de inspecție pentru inspecție imediat după colectare. Procesul de inspecție nu depășește, în general, 3 ore. Dacă distanța este mare, poate fi stocată într-un mediu de 1 ~ 5℃. Dacă trebuie congelat, trebuie păstrat în stare congelată. Trimiteți pentru inspecție.
5. După primirea probei, camera de inspecție o va înregistra (numele eșantionului, unitatea de inspecție, cantitatea, data, numărul etc.) și va observa aspectul probei. Dacă se constată oricare dintre următoarele condiții, inspecția poate fi refuzată:
(1) Probele care au fost sterilizate prin metode speciale de înaltă presiune, fierbere sau alte metode își vor pierde semnificația în reprezentarea alimentului original;
(2) Au fost deschise sticle și pungi cu alimente, carnea gătită și produsele acesteia, carnea de pasăre gătită și alte alimente au fost sparte și incomplete, adică s-a pierdut forma originală a alimentului (cu excepția probelor de toxiinfecții alimentare);
(3) Cantitatea de eșantionare este insuficientă conform cerințelor;
Pentru mostrele prezentate pentru inspecție care îndeplinesc cerințele, camera de inspecție trebuie să efectueze imediat inspecția după primirea acestora. Dacă condițiile nu sunt îndeplinite, acestea trebuie păstrate într-un frigider la 4°C, pregătiți-vă pentru a crea condiții la timp și apoi efectuați inspecția.
6. La inspectarea probelor, efectuați o prelucrare adecvată în funcție de diferitele lor proprietăți.
(1) La inocularea probelor lichide, acestea trebuie bine amestecate și inoculate în funcție de cantitate.
(2) Pentru mostrele solide, utilizați un cuțit sterilizat pentru a tăia 25 g de părți diferite, puneți-le în 225 ml de soluție salină sterilizată sau alte soluții, zdrobiți și amestecați cu un omogenizator și inoculați în funcție de cantitate.
(3) Sticlele și pungile cu alimente trebuie deschise prin sterilizare, iar metodele de mai sus trebuie selectate în funcție de caracteristicile înainte de inoculare.
Cerințe de inspecție, înregistrare și raportare a probelor
1. După primirea probei, camera de inspecție va efectua mai întâi o inspecție a aspectului și va efectua prompt inspecția în conformitate cu metodele de inspecție standard naționale. În timpul procesului de inspecție, operațiunile aseptice trebuie efectuate cu atenție, în mod responsabil și strict de evitatrezultatul testului microbiancontaminarea mediului înconjurător.
2. Metodele utilizate în timpul procesului de inspecție a probelor, fenomenele și rezultatele care au avut loc etc. trebuie să fie înscrise în înregistrări scrise ale testului ca bază pentru analiza și judecata rezultatelor. Înregistrările trebuie să fie detaliate, clare, autentice, obiective și nu trebuie să fie modificate sau falsificate.
Cerințe de funcționare aseptică:
1.Trebuie să purtați haine de lucru și o șapcă de lucru atunci când inoculați bacterii.
2. La inocularea probelor de alimente, trebuie purtate haine de lucru speciale, bonete și papuci, care trebuie așezate în camera tampon a camerei sterile și utilizate după dezinfecția UV înainte de muncă.
3. Când inoculați probele de alimente, spălați-vă mâinile cu săpun înainte de a intra în camera sterilă, apoi ștergeți-vă mâinile cu o minge de bumbac cu alcool 75%.
4. Paiele, vasele plate și mediile de cultură folosite pentru inoculare trebuie să fie sterilizate și sterilizate. Recipientele neutilizate nu trebuie lăsate neutilizate după deschiderea ambalajului. Ustensilele metalice trebuie autoclavate sau arse de trei ori cu alcool 95% înainte de utilizare.
5. La scoaterea paiului din ambalaj, vârful paiului nu trebuie să atingă părțile expuse. Când folosiți paiul pentru inocularea eprubetei sau a plăcii, vârful paiului nu trebuie să atingă marginea eprubetei sau a plăcii.
6. Inocularea probelor și transferul bacteriilor trebuie făcute în fața unei lămpi cu alcool. La inocularea bacteriilor sau a probelor, paiele trebuie sterilizate la flacără după scoaterea din ambalaj și deschiderea dopului eprubetei.
7. Înainte de a inocula bacteriile, toate firele metalice ale ansei de inoculare și ale acului trebuie arse cu o flacără și, dacă este necesar, conexiunea dintre ansa, ac și tija ar trebui să fie arse. Bucla de inoculare pentru inocularea bacteriilor de tuberculoză și a bacteriilor virulente trebuie fiertă în apă clocotită timp de 5 minute, apoi arsă de flacără.
8. Când sugeți lichid bacterian sau probe cu un pai, utilizați vârful de cauciuc corespunzător pentru a-l suge și nu îl sugeți direct cu gura.
Cerințe de utilizare a camerei sterile:
1. Ferestrele care duc spre exteriorul camerei sterile trebuie să fie termopan și sigilate. Nu ar trebui să fie deschise după bunul plac. Ar trebui să existe o cameră tampon și o ușă glisantă corespunzătoare dimensiunii camerei sterile. Ar trebui să existe și o fereastră mică de 0,5 ~ 0,7 m2. În pregătirea pentru trecerea obiectelor după intrarea în camera sterilă.
2. Camera sterilă trebuie păstrată curată. După muncă, trebuie dezinfectat cu soluție de săpun crezol de 2% până la 3%, suprafața de lucru trebuie ștersă, iar articolele care nu au legătură cu experimentul nu trebuie depozitate.
3. Ușa camerei sterile trebuie închisă etanș înainte și după utilizare, iar lampa cu ultraviolete trebuie aprinsă. Dacă pentru dezinfecție se folosește o lampă cu ultraviolete suspendată de interior, este necesară o lampă cu ultraviolete de 30W. Distanța este de 1,0 m, iar timpul de iradiere nu este mai mic de 30 de minute. Când utilizați lămpi cu ultraviolete, trebuie acordată atenție să funcționeze direct sub lumină ultravioletă pentru a evita deteriorarea. Lampa trebuie șters ușor cu o minge de bumbac cu alcool la fiecare două săptămâni pentru a îndepărta praful și grăsimea pentru a reduce impactul pătrunderii ultravioletelor.
4. La prelucrarea și inocularea probelor alimentare, intrați în camera sterilă pentru operație și nu au voie să intre sau să iasă în voie. Dacă articolele trebuie să fie transmise, acestea pot fi trecute prin fereastra mică.
5. Dacă trebuie instalat aer condiționat în camera sterilă, ar trebui să existe un dispozitiv de filtrare.
Cerințe de dezinfecție și sterilizare
Sticlărie, ustensile metalice și medii de cultură utilizate pentrutestarea microbiologică, culturile contaminate și inoculate etc. trebuie sterilizate înainte de utilizare. Metode de sterilizare cu abur la căldură uscată și la căldură umedă sub presiune.
1. Pregătirea înainte de sterilizare
(1) Toate articolele care trebuie sterilizate trebuie mai întâi spălate și uscate. Articolele din sticlă, cum ar fi paiele și vasele plate, ar trebui să fie bine împachetate cu hârtie. Dacă se folosesc tuburi metalice, orificiile de ventilație de pe ele trebuie deschise.
(2) Înfășurați dopul balonului triunghiular care conține mediul de cultură în hârtie, acoperiți eprubeta și scoateți miezul seringii și înveliți-l cu tifon.
2. instalați
(1) Sterilizator cu căldură uscată: articolele nu trebuie să fie supraaglomerate și să nu atingă cei patru pereți ai cutiei.
(2) Arată mare cu abur de înaltă presiune: Așezați articolele sterilizate, împachetați-le separat și puneți-le direct în cilindrul de sterilizare. Nu supraaglomerați articolele.
3. Verificarea echipamentelor
(1) Verificați dacă comutatorul ușii este flexibil, dacă inelul de cauciuc este deteriorat și dacă este plat.
(2) Verificați dacă manometrul rămâne în poziția zero când aburul este evacuat, închideți ușa și capacul, ventilați aburul sau căldura și observați dacă există scurgeri de aer, dacă condițiile marcate de manometru și termometru se potrivesc și dacă conducta este blocată.
(3) Pentru sterilizatoarele cu dispozitive electronice automate de control al programului, programul specificat trebuie verificat înainte de utilizare pentru a vedea dacă îndeplinește cerințele pentru sterilizare.
4. Tratament de sterilizare
(1) Metoda de sterilizare la căldură uscată:
Această metodă este potrivită pentru articolele care nu deteriorează, nu se deteriorează sau se evaporă în condiții de căldură uscată. Este mai frecvent utilizat pentru sterilizarea articolelor din sticlă, produse metalice, produse ceramice etc.
①Instrumentele și ustensilele trebuie spălate înainte de uscare - coacere pentru a preveni carbonizarea murdăriei atașată la suprafață.
② În timpul sterilizării, articolele nu trebuie să fie supraaglomerate, nu trebuie să contactați direct partea inferioară și peretele cutiei și să lăsați goluri între articole.
③ În timpul sterilizării, închideți ușa strâns, conectați sursa de alimentare, deschideți orificiul de evacuare timp de aproximativ 30 de minute pentru a elimina aerul rece din sterilizator, reglați indicatorul luminos când temperatura crește la 160 ° C și mențineți-l timp de 1,5 până la 2 ore.
④După finalizarea sterilizării sau în timpul procesului de creștere a temperaturii, ușa trebuie deschisă sub 60°C.
(2) Următorii pași trebuie urmați atunci când utilizați o oală sub presiune portabilă sau un sterilizator vertical cu abur sub presiune:
① Adăugați 3 L de apă în corpul principal al oalei sub presiune portabile și 16 L de apă în oala verticală sub presiune (cantitatea de apă trebuie completată când este reutilizată, iar apa trebuie înlocuită dacă devine tulbure);
② Pentru o oală sub presiune portabilă, introduceți țeava de evacuare de pe capacul superior în tubul pătrat de pe peretele interior al butoiului de sterilizare (nu trebuie folosite sterilizatoare fără furtunuri sau cele cu furtunuri corodate și crăpate);
③ Acoperiți capacul superior și strângeți-l strâns pentru a preveni scurgerile de aer; așezați sterilizatorul pe sursa de foc pentru a se încălzi, porniți oala sub presiune verticală și deschideți supapa de evacuare de pe capacul superior pentru a elibera aerul (aerul evacuat timp de 10 până la 15 minute după ce apa fierbe));
④ Închideți supapa de evacuare pentru a crește presiunea aburului la cerințele specificate și mențineți-o pentru timpul specificat (în funcție de natura articolelor sterilizate și de circumstanțele relevante);
⑤ După ce timpul specificat este atins, pentru articolele care trebuie uscate, deschideți imediat supapa de evacuare pentru a descărca aburul. Când presiunea revine la zero, răciți-o în mod natural la 60°C și apoi deschideți capacul pentru a scoate articolele. Dacă este un articol lichid, nu deschideți supapa de evacuare. Oala trebuie scoasă imediat din sursa de căldură și lăsată să se răcească în mod natural până când presiunea revine la zero și temperatura scade sub 60°C înainte de a deschide capacul pentru a scoate conținutul pentru a preveni decomprimarea bruscă a lichidului de la fierberea violentă sau explozia recipientului.
(3) Urmați următorii pași pentru a utiliza sterilizatorul cu abur pentru oala sub presiune orizontală:
①Închideți ermetic ușa oală, deschideți supapa de admisie a aerului, introduceți abur în mezanin pentru preîncălzire, iar aerul rece din mezanin va fi evacuat automat prin bariera de aer;
②După ce stratul intermediar atinge temperatura predeterminată, deschideți supapa de admisie a aerului din camera oală, introduceți aburul în camera oală, iar aerul rece din camera oală va fi evacuat automat prin opritorul de aer al camerei oală;
③Când presiunea și temperatura din camera oală ating presiunea specificată, reglați supapa de admisie a aerului pentru a o menține constantă;
④ Răciți temperatura în mod natural sau artificial la 60℃ înainte de a deschide ușa pentru a scoate articolele. Nu utilizați metoda de descărcare rapidă a aburului pentru a preveni scăderea bruscă a presiunii, fierberea violentă a lichidului sau explozia recipientului;
⑤ Când utilizați un program automat - sterilizator cu abur cu presiune controlată, după așezarea articolelor și închiderea ermetică a ușii, comutatorul corespunzător trebuie apăsat în funcție de categoria articolelor, astfel încât sterilizarea să poată fi efectuată automat conform procedurilor necesare. În timpul sterilizării, instrumentul atașat trebuie folosit pentru a înregistra temperatura și timpul. Pentru referințe viitoare, cerințele de operare ar trebui să fie strict în conformitate cu instrucțiunile producătorului;
5. Temperatura și timpul de sterilizare
(1) Temperatura de sterilizare a sterilizatorului cu căldură uscată este de 160 ℃, 1,5 ~ 2 ore.
(2) Temperatura de sterilizare și timpul sterilizatorului cu abur sub presiune
Metoda de sterilizare intermitentă
1. Metoda de sterilizare:
Utilizați sterilizarea cu abur fără presiune. Unele substanțe sunt ușor distruse prin sterilizarea cu abur de înaltă presiune, astfel încât această metodă poate fi utilizată pentru sterilizare.
(1) Puneți articolele de sterilizat în oală, acoperiți capacul superior, deschideți orificiul de scurgere și scurgeți apa rămasă în oală.
(2) Închideți orificiul de evacuare, deschideți ușa de admisie a aerului și dezinfectați timp de 10 până la 20 de minute după cum este necesar.
(3) După terminarea sterilizării, închideți ușa de admisie a aerului, scoateți articolele și așteptați să se răcească la temperatura camerei, puneți-le într-un incubator la 37°C peste noapte și continuați sterilizarea conform metodei de mai sus a doua zi. Faceți acest lucru de trei ori pentru a atinge scopul sterilizării.
2. Cum se utilizează coagulatorul seric:
Când mediul de cultură conține ingrediente speciale, cum ar fi ser sau ouă, căldura ridicată îi va distruge nutrienții. Prin urmare, temperatura scăzută poate fi utilizată pentru a coagula serul și a realiza scopuri de sterilizare:
(1) Când se utilizează ser sterilizat prin această metodă în alicote, operațiunile aseptice trebuie respectate cu strictețe, iar eprubetele și plăcile trebuie de asemenea sterilizate înainte de utilizare;
(2) Faceți mediul de cultură într-o pantă sau un strat înalt, după cum este necesar. După ce ați adăugat suficientă apă, conectați sursa de alimentare, ridicați temperatura la 75~90°C timp de o oră și apoi sterilizați-o. Puneți-l într-un incubator la 37°C peste noapte și apoi sterilizați-l de trei ori.
3. Fierbeți și dezinfectați:
Puteți folosi o oală de fierbere sau un sterilizator de fierbere. După ce apa fierbe, fierbeți-o timp de 5 până la 15 minute. De asemenea, puteți adăuga acid carbolic 2% în apă și o fierbeți timp de 5 minute. Adăugați 0,02% formaldehidă și fierbeți-o la 80°C timp de 60 de minute pentru a atinge scopul sterilizării. Cu toate acestea, se poate realiza sterilizarea prin fierbere. Când utilizați potențiatori, trebuie acordată atenție corozivității articolelor.
4. Tratament de sterilizare:
După sterilizare, articolele sunt deja sterile în circumstanțe normale. Acestea trebuie inspectate cu atenție și plasate atunci când sunt scoase din sterilizator pentru a evita recontaminarea;
(1) Scoateți articolele și verificați imediat integritatea ambalajului. Dacă există deteriorare sau tamponul este îndepărtat, acesta nu poate fi folosit ca articole sterile;
(2) Articolele scoase nu pot fi folosite ca articole sterile dacă ambalajul lor este în mod evident înmuiat în apă;
(3) Mediul de cultură sau reactivii trebuie verificați pentru a vedea dacă îndeplinesc culoarea sau starea după sterilizare. Cele care nu îndeplinesc cerințele trebuie aruncate;
(4) Pentru containerele deschise/închise, orificiile pentru ecran trebuie să fie închise atunci când le scoateți;
(5) În cazul în care obiectele îndepărtate cad la pământ, sunt deplasate greșit într-un loc necurat sau sunt pătate de apă, acestea sunt considerate contaminate și nu pot fi folosite ca articole sterile;
(6) Articolele sterilizate calificate scoase trebuie depozitate în camera de depozitare sau în dulap rezistent la praf și este strict interzisă amestecarea lor cu articole nesterilizate;
(7) Toate articolele calificate trebuie marcate cu data de sterilizare și data de expirare;
(8) După finalizarea fiecărui lot de procesare de sterilizare, înregistrați numele, cantitatea, temperatura, timpul și operatorul produselor sterilizate.
Cerințe pentru tratarea deșeurilor toxice și bacteriene
Echipamentele experimentale și culturile utilizate în experimentele microbiologice nu trebuie scoase din laborator fără dezinfecție.
1. Materialele și deșeurile contaminate de cultură trebuie plasate în recipiente etanșe sau coșuri de sârmă și depozitate central în locuri desemnate până când sunt autoclavate uniform.
2. Culturile contaminate cu microorganisme trebuie autoclavate la 121°C timp de 30 de minute.
3. După utilizare, paiele contaminate trebuie puse în soluție de săpun creol 5% sau soluție de acid carbolic, înmuiate timp de cel puțin 24 de ore (lichidul dezinfectant nu trebuie să fie mai mic decât înălțimea de înmuiere), apoi sterilizate la presiune mare la 121°C timp de 30 de minute.
4. Lichidul pentru colorarea și clătirea frotiurilor poate fi în general aruncat direct în canalizare. Lichidul de clătire pentru bacteriile virulente trebuie spălat într-un pahar și sterilizat la presiune mare înainte de a fi turnat în canalizare. Lamelele colorate sunt puse în soluție de săpun crezol 5%. După ce ați înmuiat în apă timp de 24 de ore, se fierbe și se spală. Lamele sau vasele folosite pentru testarea aglutinarii trebuie autoclavate si apoi spalate.
5. După spargerea culturii, pulverizați imediat și înmuiați părțile contaminate cu soluție de săpun cresol 5% sau soluție de acid carbolic, lăsați la macerat timp de jumătate de oră și apoi ștergeți.
Hainele de lucru contaminate sau hainele de lucru, bonetele, măștile etc. purtate pentru teste violente trebuie introduse în pungi speciale de dezinfecție și sterilizate la presiune mare înainte de a fi spălate.
Cerințe medii de pregătire
Calitatea pregătirii mediului de cultură va afecta direct creșterea microorganismelor, deoarece diferitele microorganisme au cerințe nutriționale diferite și scopuri de cultură diferite. Cerințele de pregătire pentru diferite medii de cultură sunt următoarele:
1. Cântăriți ingredientele conform formulei medii, apoi dizolvați-le în apă distilată. Calitatea reactivilor și a medicamentelor aplicate trebuie verificată înainte de utilizare.
2. Măsurarea și ajustarea pH-ului: măsurarea pH-ului trebuie efectuată atunci când mediul de cultură este răcit la temperatura camerei, deoarece există o anumită diferență de pH în condiții calde sau reci. Când măsurarea este finalizată, adăugați alcali sau acid conform cantității calculate și amestecați bine. Ar trebui testat din nou. Valoarea pH-ului mediului de cultură trebuie să fie precisă, altfel va afecta creșterea microorganismelor sau va afecta observarea rezultatelor. Totuși, trebuie menționat că sterilizarea la presiune înaltă poate afecta scăderea sau creșterea pH-ului unor medii de cultură, de aceea nu este indicată sterilizarea la o presiune prea mare sau de prea multe ori pentru a evita afectarea calității mediului de cultură. Indicatori, deoxicolat de sodiu, agar etc. sunt în general Adăugați-l după ajustarea pH-ului.
3. Mediul de cultură trebuie păstrat clar pentru a facilita observarea creșterii bacteriene. După ce mediul de cultură este încălzit și fiert, acesta poate fi filtrat cu bumbac absorbant sau flanel pentru a îndepărta sedimentul. Dacă este necesar, se poate limpezi cu albuș. Benzile de agar folosite trebuie spălate și uscate în prealabil. Înainte de utilizare, evitați afectarea transparenței din cauza impurităților din agar.
4. Fierul, cuprul și alte recipiente nu trebuie folosite pentru a ține mediul de cultură. Este mai bine să folosiți recipiente curate din sticlă tare neutre.
5. Sterilizarea mediului de cultură nu trebuie doar să atingă scopul sterilizării complete, ci și să acorde atenție să nu reducă valoarea nutritivă a acestuia din cauza încălzirii. În general, 121°C timp de 15 minute este suficient. Pentru mediile de cultură care conțin substanțe care sunt intolerante la căldură ridicată, cum ar fi zaharurile și serul, gelatina etc., trebuie sterilizate prin temperatură joasă sau prin metoda intermitentă. Unii reactivi care nu pot fi încălziți, cum ar fi teluritul de potasiu, gălbenușul de ou, TTC, antibioticele etc., trebuie răciți la aproximativ 50°C după ce agarul bazic este autoclavat și apoi adăugat;
6. După ce fiecare lot de mediu de cultură este pregătit, trebuie efectuat un test de creștere steril și un test de creștere a tulpinilor testate. Dacă este un mediu de cultură biochimic, utilizați tulpini bacteriene standard pentru inoculare și cultură și observați rezultatele reacției biochimice. Ar trebui să arate o reacție normală. Mediul de cultură nu trebuie păstrat prea mult timp. Dacă este necesar, poate fi păstrat la frigider la 4°C.
7. În prezent, există multe tipuri de medii de cultură uscate. Fiecare lot trebuie să utilizeze tulpini standard pentru testul de creștere sau observarea reacțiilor biochimice. Diferite medii de cultură pot fi utilizate numai după ce testul de creștere al tulpinilor corespunzătoare este bun. Pot fi folosite cele proaspăt achiziționate sau uscate care au fost depozitate mult timp. La prepararea acestuia trebuie măsurat și pH-ul mediului de cultură, iar dozarea și metoda trebuie urmate conform instrucțiunilor produsului.
8. Reactivii chimici, condițiile de sterilizare, rezultatele testelor de creștere a tulpinilor și personalul de producție utilizat în fiecare lot de mediu de cultură preparat trebuie să fie înregistrate pentru investigare.
Cerințe de colectare și procesare a probelor
1. Probele de inspecție colectate trebuie să fie reprezentative. La prelevare de probe, materiile prime, procesarea, transportul, metodele și condițiile de depozitare ale lotului de alimente, condițiile de sănătate a mediului înconjurător etc. trebuie investigate în detaliu pentru a verifica dacă există surse de contaminare.
2. În funcție de tipul și cantitatea de alimente, cantitatea de eșantionare și metoda trebuie efectuate în conformitate cu cerințele metodelor standard de inspecție.
3. Acordați atenție funcționării aseptice la prelevare, iar recipientul trebuie sterilizat pentru a evita contaminarea microbiană a mediului. Recipientul nu trebuie sterilizat cu soluție de săpun creozal, sterilizare cu clormetionină, alcool și alți dezinfectanți și nu trebuie să conțină astfel de dezinfectanți sau antibiotice. Pentru a evita uciderea microorganismelor din probă, foarfecele, cuțitele și lingurile utilizate trebuie, de asemenea, să fie sterilizate înainte de utilizare.
4. Probele trebuie trimise la camera de inspecție pentru inspecție imediat după colectare. Procesul de inspecție nu depășește, în general, 3 ore. Dacă distanța este mare, poate fi stocată într-un mediu de 1 ~ 5℃. Dacă trebuie congelat, trebuie păstrat în stare congelată. Trimiteți pentru inspecție.
5. După primirea probei, camera de inspecție o va înregistra (numele eșantionului, unitatea de inspecție, cantitatea, data, numărul etc.) și va observa aspectul probei. Dacă se constată oricare dintre următoarele condiții, inspecția poate fi refuzată:
(1) Probele care au fost sterilizate prin metode speciale de înaltă presiune, fierbere sau alte metode își vor pierde semnificația în reprezentarea alimentului original;
(2) Au fost deschise sticle și pungi cu alimente, carnea gătită și produsele acesteia, carnea de pasăre gătită și alte alimente au fost sparte și incomplete, adică s-a pierdut forma originală a alimentului (cu excepția probelor de toxiinfecții alimentare);
(3) Cantitatea de eșantionare este insuficientă conform cerințelor;
Pentru mostrele prezentate pentru inspecție care îndeplinesc cerințele, camera de inspecție trebuie să efectueze imediat inspecția după primirea acestora. Dacă condițiile nu sunt îndeplinite, acestea trebuie păstrate într-un frigider la 4°C, pregătiți-vă pentru a crea condiții la timp și apoi efectuați inspecția.
6. La inspectarea probelor, efectuați o prelucrare adecvată în funcție de diferitele lor proprietăți.
(1) La inocularea probelor lichide, acestea trebuie bine amestecate și inoculate în funcție de cantitate.
(2) Pentru mostrele solide, utilizați un cuțit sterilizat pentru a tăia 25 g de părți diferite, puneți-le în 225 ml de soluție salină sterilizată sau alte soluții, zdrobiți și amestecați cu un omogenizator și inoculați în funcție de cantitate.
(3) Sticlele și pungile cu alimente trebuie deschise prin sterilizare, iar metodele de mai sus trebuie selectate în funcție de caracteristicile înainte de inoculare.
Cerințe de inspecție, înregistrare și raportare a probelor
1. După primirea probei, camera de inspecție va efectua mai întâi o inspecție a aspectului și va efectua prompt inspecția în conformitate cu metodele de inspecție standard naționale. În timpul procesului de inspecție, operațiunile aseptice trebuie efectuate cu atenție, în mod responsabil și strict de evitatrezultatul testului microbiancontaminarea mediului înconjurător.
2. Metodele utilizate în timpul procesului de inspecție a probelor, fenomenele și rezultatele care au avut loc etc. trebuie să fie înscrise în înregistrări scrise ale testului ca bază pentru analiza și judecata rezultatelor. Înregistrările trebuie să fie detaliate, clare, autentice, obiective și nu trebuie să fie modificate sau falsificate.
