Resumo dos requisitos das probas microbiolóxicas
24/01/2024 15:14:33
Os requisitos e pasos paraensaios microbiolóxicosson os seguintes:
Requisitos de operación aséptica:
1.Debes levar roupa de traballo e gorro de traballo ao inocular bacterias.
2. Ao inocular as mostras de alimentos, débense levar roupa de traballo, gorras e zapatillas especiais, que se colocarán na sala de amortiguación da sala estéril e se usarán despois da desinfección UV antes do traballo.
3. Ao inocular as mostras de alimentos, lave as mans con xabón antes de entrar na sala estéril e, a continuación, limpa as mans cunha bóla de algodón ao 75 %.
4. As pallas, pratos planos e medios de cultivo empregados para a inoculación deberán esterilizarse e esterilizarse. Os envases non utilizados non deben deixarse sen usar despois de abrir o paquete. Os utensilios metálicos deben ser esterilizados en autoclave ou queimados tres veces con alcohol ao 95 % antes do seu uso.
5. Ao sacar a palla do paquete, a punta da palla non debe tocar as partes expostas. Cando se utiliza a palla para inocular o tubo de ensaio ou a placa, a punta da palla non debe tocar o bordo da probeta ou a placa.
6. A inoculación das mostras e a transferencia de bacterias deben facerse diante dunha lámpada de alcohol. Ao inocular bacterias ou mostras, a palla debe esterilizarse á chama despois de sacala do envase e abrir o tapón da probeta.
7. Antes de inocular bacterias, todos os fíos metálicos do bucle de inoculación e da agulla deben queimarse cunha chama e, se é necesario, queimar a conexión entre o bucle, a agulla e a vara. O bucle de inoculación para inocular as bacterias da tuberculose e as bacterias virulentas debe ferverse en auga fervendo durante 5 minutos e despois queimarse.
8. Ao chupar líquido bacteriano ou mostras cunha palla, utiliza a punta de goma correspondente para chupalo e non o chupa directamente coa boca.
Requisitos de uso da sala estéril:
1. As fiestras que dan ao exterior da sala estéril deberán estar con dobre acristalamento e seladas. Non se deben abrir a vontade. Debe haber unha sala de amortiguación e unha porta corredeira correspondente ao tamaño da sala estéril. Tamén debería haber unha pequena fiestra de 0,5 ~ 0,7 m2. En preparación para pasar elementos despois de entrar na sala estéril.
2. A sala estéril debe manterse limpa. Despois do traballo, débese desinfectar cunha solución de xabón de cresol do 2% ao 3%, limpar a superficie de traballo e non almacenar elementos non relacionados co experimento.
3. A porta da sala estéril debe estar ben pechada antes e despois do uso e a lámpada ultravioleta debe estar acesa. Se se usa unha lámpada ultravioleta suspendida para interiores para a desinfección, é necesaria unha lámpada ultravioleta de 30 W. A distancia é de 1,0 m e o tempo de irradiación non é inferior a 30 minutos. Cando se usan lámpadas ultravioleta, debe prestarse atención a Operar directamente baixo luz ultravioleta para evitar danos. A lámpada debe ser limpada suavemente cunha bóla de algodón con alcohol cada dúas semanas para eliminar o po e a graxa e reducir o impacto da penetración dos ultravioletas.
4. Ao procesar e inocular mostras de alimentos, entrar na sala estéril para a operación e non se lles permite entrar nin saír a vontade. Se hai que pasar elementos, pódense pasar pola pequena ventá.
5. Se hai que instalar aire acondicionado na sala estéril, debe haber un dispositivo de filtrado.
Requisitos de desinfección e esterilización
Cristalería, utensilios metálicos e medios de cultivo utilizadosensaios microbiolóxicos, os cultivos contaminados e inoculados, etc. deben esterilizarse antes do seu uso. Métodos de esterilización de vapor por calor seco e calor húmido.
1. Preparación antes da esterilización
(1) Todos os artigos que deben esterilizarse deben lavarse e secarse primeiro. Os utensilios de vidro como as pallas e os pratos planos deben estar ben embalados con papel. Se se usan tubos metálicos, deben abrirse os orificios de ventilación dos mesmos.
(2) Envolve o tapón do matraz triangular que contén o medio de cultivo en papel, cubra o tubo de ensaio e saque o núcleo da xiringa e envólvelo con gasa.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: os artigos non deben estar saturados e non poden tocar as catro paredes da caixa.
(2) Olla de vapor grande de alta presión: coloca os artigos esterilizados, envólveos por separado e colócaos directamente no cilindro de esterilización. Non saturar os elementos.
3. Inspección de equipos
(1) Comprobe se o interruptor da porta é flexible, se o anel de goma está danado e se está plano.
(2) Comprobe se o manómetro permanece na posición cero cando se esgota o vapor, pecha a porta e a tapa, ventila o vapor ou a calor e observa se hai fugas de aire, se as condicións marcadas polo manómetro e o termómetro coinciden e se a canalización está bloqueada.
(3) Para esterilizadores con dispositivos de control automático de programas electrónicos, o programa especificado debe comprobarse antes de usar para ver se cumpre os requisitos para a esterilización.
4. Tratamento de esterilización
(1) Método de esterilización por calor seco:
Este método é adecuado para elementos que non danan, se deterioran ou se evaporan en condicións de calor seca. Úsase máis habitualmente para esterilizar vidro, produtos metálicos, produtos cerámicos, etc.
①Os instrumentos e utensilios deben lavarse antes de secar - cocer para evitar que a sucidade adherida á superficie se carbonice.
② Durante a esterilización, os artigos non deben estar saturados, non contactar directamente co fondo e a parede da caixa e deixar ocos entre os elementos.
③ Durante a esterilización, pecha firmemente a porta, conecte a fonte de alimentación, abra o orificio de escape durante uns 30 minutos para eliminar o aire frío do esterilizador, axuste o indicador luminoso cando a temperatura sobe a 160 °C e manteña durante 1,5 a 2 horas.
④ Despois de completar a esterilización ou durante o proceso de aumento da temperatura, a porta debe abrirse a menos de 60 °C.
(2) Deben seguirse os seguintes pasos cando se utiliza unha ola a presión portátil ou un esterilizador de vapor a presión vertical:
① Engade 3 litros de auga ao corpo principal da ola a presión portátil e 16 litros de auga á ola a presión vertical (a cantidade de auga debe ser reabastecida cando se reutiliza, e a auga debe ser substituída se se volve turbia);
② Para unha ola a presión portátil, insira o tubo de escape da tapa superior no tubo cadrado da parede interior do barril de esterilización (non se deben utilizar esterilizadores sen mangueiras ou con mangueiras corroídas e rachadas);
③ Cubra a tapa superior e aperte ben para evitar fugas de aire; coloque o esterilizador na fonte de lume para quentar, acenda a ola a presión vertical e abra a chave de escape da tapa superior para deixar saír o aire (o aire de escape durante 10 a 15 minutos despois de que ferva a auga);
④Pecha a válvula de escape para elevar a presión do vapor aos requisitos especificados e mantelo durante o tempo especificado (dependendo da natureza dos artigos esterilizados e das circunstancias relevantes);
⑤ Despois de alcanzar o tempo especificado, para os elementos que precisan secar, abra inmediatamente a válvula de escape para descargar o vapor. Cando a presión volva a cero, arrefríea naturalmente a 60 °C e despois abra a tapa para sacar os elementos. Se é un elemento líquido, non abra a válvula de escape. A pota debe retirarse da fonte de calor inmediatamente e deixarse arrefriar de forma natural ata que a presión volva a cero e a temperatura descenda por debaixo dos 60 °C antes de abrir a tapa para sacar o contido para evitar a descompresión repentina do líquido pola ebulición violenta ou a explosión do recipiente.
(3) Siga os seguintes pasos para usar o esterilizador de vapor de ola a presión horizontal:
①Pecha a porta da pota firmemente, abre a chave de entrada de aire, introduce vapor na entreplanta para o prequecemento e o aire frío da entreplanta descargarase automaticamente a través da barreira de aire;
②Despois de que a capa intermedia alcance a temperatura predeterminada, abra a chave de entrada de aire da cámara da pota, introduza o vapor na cámara da pota e o aire frío da cámara da pota descargarase automaticamente a través do pararradeira da pota;
③Cando a presión e a temperatura na cámara da pota alcancen a presión especificada, axuste a válvula de entrada de aire para mantela constante;
④ Arrefria a temperatura de forma natural ou artificial ata 60 ℃ antes de abrir a porta para sacar os artigos. Non utilice o método de descarga rápida de vapor para evitar a caída repentina de presión, a ebulición violenta do líquido ou a explosión do recipiente;
⑤ Cando se utiliza un programa automático - esterilizador de vapor a presión controlada, despois de colocar os elementos e pechar a porta firmemente, débese premer o interruptor correspondente segundo a categoría dos artigos para que a esterilización poida realizarse automaticamente segundo os procedementos requiridos. Durante a esterilización, debe utilizarse o instrumento adxunto para rexistrar a temperatura e o tempo. Para futuras referencias, os requisitos operativos deben cumprir estrictamente as instrucións do fabricante;
5. Temperatura e tempo de esterilización
(1) A temperatura de esterilización do esterilizador de calor seco é de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura de esterilización e tempo do esterilizador de vapor a presión
Método de esterilización intermitente
1. Método de esterilización:
Use esterilización a vapor sen presión. Algunhas substancias son facilmente destruídas pola esterilización con vapor a alta presión, polo que este método pódese usar para esterilización.
(1) Coloque os elementos a esterilizar na pota, cubra a tapa superior, abra a saída de drenaxe e escorra a auga restante da pota.
(2) Peche a saída de drenaxe, abra a porta de entrada de aire e desinfecte durante 10 a 20 minutos segundo sexa necesario.
(3) Despois de completar a esterilización, pecha a porta de entrada de aire, saca os elementos e agarda a que se arrefríen a temperatura ambiente, colócaos nunha incubadora a 37 °C durante a noite e continúa esterilizando segundo o método anterior ao día seguinte. Fai isto tres veces para acadar o propósito da esterilización.
2. Como usar o coagulador de soro:
Cando o medio de cultivo contén ingredientes especiais como soro ou ovos, a calor alta destruirá os seus nutrientes. Polo tanto, pódese usar a baixa temperatura para coagular o soro e conseguir fins de esterilización:
(1) Cando se utilice soro esterilizado por este método en alícuotas, as operacións asépticas deben seguirse estrictamente e os tubos de ensaio e as placas tamén deben esterilizarse antes do seu uso;
(2) Facer o medio de cultivo nunha pendente ou capa alta segundo sexa necesario. Despois de engadir auga suficiente, conecte a fonte de alimentación, eleve a temperatura a 75 ~ 90 °C durante unha hora e despois esterilízaa. Colócao nunha incubadora a 37 °C durante a noite e despois esterilízao tres veces.
3. Ferva e desinfecta:
Podes usar unha pota fervendo ou un esterilizador fervendo. Despois de que a auga ferva, ferva durante 5 a 15 minutos. Tamén pode engadir ácido carbólico ao 2% á auga e ferva durante 5 minutos. Engade 0,02% de formaldehido e ferva a 80 °C durante 60 minutos para acadar o propósito da esterilización. Non obstante, pódese conseguir a esterilización por ebulición. Cando se usan potenciadores, débese prestar atención á corrosividade dos elementos.
4. Tratamento de esterilización:
Despois da esterilización, os artigos xa están estériles en circunstancias normais. Deben ser coidadosamente inspeccionados e colocados cando se sacan do esterilizador para evitar a súa nova contaminación;
(1) Saque os artigos e comprobe a integridade do envase inmediatamente. Se hai danos ou se elimina o tampón, non se pode usar como artigos estériles;
(2) Os artigos retirados non poden utilizarse como artigos estériles se o seu envase está obviamente empapado en auga;
(3) Débense comprobar o medio de cultivo ou os reactivos para ver se cumpren a cor ou o estado despois da esterilización. Deberán descartarse aqueles que non cumpran os requisitos;
(4) Para os recipientes abertos/pechados, os orificios da pantalla deben estar pechados ao sacalos;
(5) Se os elementos retirados caen ao chan, están fóra de lugar nun lugar sucio ou están manchados de auga, considéranse contaminados e non se poden utilizar como artigos estériles;
(6) Os artigos esterilizados cualificados retirados deben almacenarse no almacén ou no armario a proba de po, e está estrictamente prohibido mesturalos con artigos non esterilizados;
(7) Todos os artigos cualificados deben estar marcados coa data de esterilización e a data de caducidade;
(8) Despois de completar cada lote de procesamento de esterilización, rexistre o nome, a cantidade, a temperatura, o tempo e o operador dos produtos esterilizados.
Requisitos para o tratamento de residuos tóxicos e bacterianos
Os equipos e cultivos experimentais utilizados en experimentos microbiolóxicos non deben sacarse do laboratorio sen desinfección.
1. Os materiais contaminados cultivados e os residuos deben colocarse en recipientes estancos ou cestas de arame e almacenarse centralmente en lugares designados ata que sexan uniformemente esterilizados en autoclave.
2. Os cultivos contaminados por microorganismos deben ser esterilizados en autoclave a 121 °C durante 30 minutos.
3. Despois do uso, as pallas contaminadas deben colocarse en solución de xabón de criollo ao 5% ou solución de ácido carbólico, empapadas durante polo menos 24 horas (o líquido desinfectante non debe ser inferior á altura de remollo) e despois esterilizarse a alta presión a 121 °C durante 30 minutos.
4. O líquido para manchar e lavar os frotis xeralmente pódese lavar directamente ao sumidoiro. O fluído de lavado para bacterias virulentas debe lavarse nun vaso de precipitados e esterilizarse a alta presión antes de verterse no sumidoiro. As láminas manchadas colócanse nunha solución de xabón de cresol ao 5%. Despois de remollar en auga durante 24 horas, ferver e lavar. Os portas ou pratos utilizados para a proba de aglutinación deben ser esterilizados en autoclave e despois lavados.
5. Despois de romper o cultivo, pulveriza e remolla inmediatamente as partes contaminadas con solución de xabón de cresol ao 5% ou solución de ácido carbólico, remolla durante media hora e despois limpa.
A roupa de traballo contaminada ou a roupa de traballo, gorras, máscaras, etc. usadas para probas violentas debe colocarse en bolsas especiais de desinfección e esterilizarse a alta presión antes de ser lavada.
Requisitos de preparación medios
A calidade da preparación do medio de cultivo afectará directamente o crecemento dos microorganismos, porque varios microorganismos teñen diferentes requisitos nutricionais e diferentes fins de cultivo. Os requisitos de preparación para diversos medios de cultivo son os seguintes:
1. Pesar os ingredientes segundo a fórmula media e despois disolvelos en auga destilada. A calidade dos reactivos e medicamentos aplicados debe ser inspeccionado antes do uso.
2. Medición e axuste do pH: a medición do pH debe realizarse cando o medio de cultivo se arrefría a temperatura ambiente, porque hai unha certa diferenza de pH en condicións quentes ou frías. Cando remate a medición, engade álcali ou ácido segundo a cantidade calculada e mestura ben. Debe ser probado de novo. O valor do pH do medio de cultivo debe ser preciso, se non, afectará o crecemento de microorganismos ou afectará a observación dos resultados. Non obstante, cómpre ter en conta que a esterilización a alta-presión pode afectar á diminución ou aumento do pH dalgúns medios de cultivo, polo que non é recomendable esterilizar a presión demasiado elevada ou demasiadas veces para non afectar á calidade do medio de cultivo. Indicadores, desoxicolato de sodio, agar, etc son xeralmente Engádeo despois de axustar o pH.
3. O medio de cultivo debe manterse limpo para facilitar a observación do crecemento bacteriano. Despois de que o medio de cultivo se quenta e ferva, pódese filtrar con algodón absorbente ou franela para eliminar o sedimento. Se é necesario, pódese clarificar con clara de ovo. As tiras de agar utilizadas deben lavarse e secarse previamente. Antes do uso, evite afectar a transparencia debido ás impurezas do ágar.
4. Non se deben utilizar recipientes de ferro, cobre e outros para suxeitar o medio de cultivo. É mellor usar recipientes limpos de vidro duro neutro.
5. A esterilización do medio de cultivo non só debe alcanzar o propósito da esterilización completa, senón que tamén debe prestar atención a non reducir o seu valor nutricional debido ao quecemento. Xeralmente, 121 °C durante 15 minutos é suficiente. Para os medios de cultivo que conteñan substancias que son intolerantes ao calor elevado, como azucres e soro, xelatina, etc., deben esterilizarse a baixa temperatura ou método intermitente. Algúns reactivos que non se poden quentar, como o telurito de potasio, xema de ovo, TTC, antibióticos, etc., deberían arrefriarse a uns 50 °C despois de que o agar básico estea esterilizado en autoclave e despois engadido;
6. Despois de preparar cada lote de medios de cultivo, debe realizarse unha proba de crecemento estéril e unha proba de crecemento das cepas probadas. Se é un medio de cultivo bioquímico, use cepas bacterianas estándar para a inoculación e o cultivo, e observe os resultados da reacción bioquímica. Debería mostrar unha reacción normal. O medio de cultivo non debe almacenarse durante moito tempo. Se é necesario, pódese almacenar nunha neveira a 4 °C.
7. Na actualidade, hai moitos tipos de medios de cultivo secos. Cada lote necesita utilizar cepas estándar para probas de crecemento ou observación de reaccións bioquímicas. Só se poden usar varios medios de cultivo despois de que a proba de crecemento das cepas correspondentes sexa boa. Pódense usar os recén comprados ou secos que levan moito tempo almacenados. Tamén se debe medir o pH do medio de cultivo ao preparalo e seguir a dosificación e o método segundo as instrucións do produto.
8. Os reactivos químicos, as condicións de esterilización, os resultados das probas de crecemento de cepas e o persoal de produción utilizados en cada lote de medios de cultivo preparados deben rexistrarse para consulta.
Requisitos de recollida e procesamento de mostras
1. As mostras de inspección recollidas deberán ser representativas. Durante a toma de mostras, débense investigar detalladamente as materias primas, o procesado, o transporte, os métodos de almacenamento e as condicións do lote de alimentos, as condicións de saúde ambiental circundante, etc., para comprobar se existen fontes de contaminación.
2. Segundo o tipo e a cantidade de alimento, a cantidade e o método de mostraxe deben realizarse de acordo cos requisitos dos métodos de inspección estándar.
3. Preste atención ao funcionamento aséptico ao tomar a mostra, e o recipiente debe esterilizarse para evitar a contaminación microbiana no medio ambiente. O recipiente non debe esterilizarse con solución de xabón creoal, esterilización con clormetionina, alcohol e outros desinfectantes, e non debe conter tales desinfectantes ou antibióticos. Para evitar a morte de microorganismos na mostra, as tesoiras, coitelos e culleres empregadas tamén deben esterilizarse antes do uso.
4. As mostras deben enviarse á sala de inspección para a súa inspección inmediatamente despois da recollida. O proceso de inspección xeralmente non supera as 3 horas. Se a distancia é longa, pódese almacenar nun ambiente de 1 ~ 5 ℃. Se é necesario conxelar, debe manterse en estado conxelado. Presentar para inspección.
5. Despois de recibir a mostra, a sala de inspección rexistraraa (nome da mostra, unidade para a inspección, cantidade, data, número, etc.) e observará o aspecto da mostra. Se se atopa algunha das seguintes condicións, a inspección poderá ser rexeitada:
(1) As mostras que foron esterilizadas mediante métodos especiais de alta presión, ebulición ou outros, perderán a súa importancia para representar o alimento orixinal;
(2) Abríronse botellas e bolsas de alimentos, a carne cocida e os seus produtos, as aves cocidas e outros alimentos romperon e quedaron incompletos, é dicir, perdeuse a forma orixinal dos alimentos (excepto as mostras de intoxicación alimentaria);
(3) A cantidade de mostraxe é insuficiente segundo se require;
Para as mostras presentadas para a inspección que cumpran os requisitos, a sala de inspección debe realizar a inspección inmediatamente despois de recibilas. Se non se cumpren as condicións, deben almacenarse nun frigorífico a 4 °C, prepararse para crear condicións a tempo e despois realizar a inspección.
6. Á hora de inspeccionar mostras, realizar un tratamento axeitado segundo as súas diferentes propiedades.
(1) Cando se inoculan mostras líquidas, deben mesturarse e inocularse completamente segundo a cantidade.
(2) Para as mostras sólidas, use un coitelo esterilizado para cortar 25 g de pezas diferentes, colócaas en 225 ml de solución salina esterilizada ou outras solucións, esmaga e mestúrase cun homoxeneizador e inocula segundo a cantidade.
(3) As botellas e bolsas de alimentos deben abrirse mediante esterilización e os métodos anteriores deben seleccionarse segundo as características antes da inoculación.
Requisitos de inspección, rexistro e informes de mostras
1. Despois de recibir a mostra, a sala de inspección realizará primeiro unha inspección de aparencia e realizará a inspección de inmediato de acordo cos métodos de inspección estándar nacionais. Durante o proceso de inspección, as operacións asépticas deben realizarse con coidado, responsabilidade e rigorosamente para evitarresultado da proba microbianacontaminación no medio ambiente.
2. Os métodos empregados durante o proceso de inspección da mostra, os fenómenos e resultados acontecidos, etc. deberán consignarse en actas de proba escritas como base para a análise e o xuízo dos resultados. Os rexistros deben ser detallados, claros, auténticos, obxectivos e non deben ser alterados nin falsificados.
.
.
Requisitos de operación aséptica:
1.Debes levar roupa de traballo e gorro de traballo ao inocular bacterias.
2. Ao inocular as mostras de alimentos, débense levar roupa de traballo, gorras e zapatillas especiais, que se colocarán na sala de amortiguación da sala estéril e se usarán despois da desinfección UV antes do traballo.
3. Ao inocular as mostras de alimentos, lave as mans con xabón antes de entrar na sala estéril e, a continuación, limpa as mans cunha bóla de algodón ao 75 %.
4. As pallas, pratos planos e medios de cultivo empregados para a inoculación deberán esterilizarse e esterilizarse. Os envases non utilizados non deben deixarse sen usar despois de abrir o paquete. Os utensilios metálicos deben ser esterilizados en autoclave ou queimados tres veces con alcohol ao 95 % antes do seu uso.
5. Ao sacar a palla do paquete, a punta da palla non debe tocar as partes expostas. Cando se utiliza a palla para inocular o tubo de ensaio ou a placa, a punta da palla non debe tocar o bordo da probeta ou a placa.
6. A inoculación das mostras e a transferencia de bacterias deben facerse diante dunha lámpada de alcohol. Ao inocular bacterias ou mostras, a palla debe esterilizarse á chama despois de sacala do envase e abrir o tapón da probeta.
7. Antes de inocular bacterias, todos os fíos metálicos do bucle de inoculación e da agulla deben queimarse cunha chama e, se é necesario, queimar a conexión entre o bucle, a agulla e a vara. O bucle de inoculación para inocular as bacterias da tuberculose e as bacterias virulentas debe ferverse en auga fervendo durante 5 minutos e despois queimarse.
8. Ao chupar líquido bacteriano ou mostras cunha palla, utiliza a punta de goma correspondente para chupalo e non o chupa directamente coa boca.
Requisitos de uso da sala estéril:
1. As fiestras que dan ao exterior da sala estéril deberán estar con dobre acristalamento e seladas. Non se deben abrir a vontade. Debe haber unha sala de amortiguación e unha porta corredeira correspondente ao tamaño da sala estéril. Tamén debería haber unha pequena fiestra de 0,5 ~ 0,7 m2. En preparación para pasar elementos despois de entrar na sala estéril.
2. A sala estéril debe manterse limpa. Despois do traballo, débese desinfectar cunha solución de xabón de cresol do 2% ao 3%, limpar a superficie de traballo e non almacenar elementos non relacionados co experimento.
3. A porta da sala estéril debe estar ben pechada antes e despois do uso e a lámpada ultravioleta debe estar acesa. Se se usa unha lámpada ultravioleta suspendida para interiores para a desinfección, é necesaria unha lámpada ultravioleta de 30 W. A distancia é de 1,0 m e o tempo de irradiación non é inferior a 30 minutos. Cando se usan lámpadas ultravioleta, debe prestarse atención a Operar directamente baixo luz ultravioleta para evitar danos. A lámpada debe ser limpada suavemente cunha bóla de algodón con alcohol cada dúas semanas para eliminar o po e a graxa e reducir o impacto da penetración dos ultravioletas.
4. Ao procesar e inocular mostras de alimentos, entrar na sala estéril para a operación e non se lles permite entrar nin saír a vontade. Se hai que pasar elementos, pódense pasar pola pequena ventá.
5. Se hai que instalar aire acondicionado na sala estéril, debe haber un dispositivo de filtrado.
Requisitos de desinfección e esterilización
Cristalería, utensilios metálicos e medios de cultivo utilizadosensaios microbiolóxicos, os cultivos contaminados e inoculados, etc. deben esterilizarse antes do seu uso. Métodos de esterilización de vapor por calor seco e calor húmido.
1. Preparación antes da esterilización
(1) Todos os artigos que deben esterilizarse deben lavarse e secarse primeiro. Os utensilios de vidro como as pallas e os pratos planos deben estar ben embalados con papel. Se se usan tubos metálicos, deben abrirse os orificios de ventilación dos mesmos.
(2) Envolve o tapón do matraz triangular que contén o medio de cultivo en papel, cubra o tubo de ensaio e saque o núcleo da xiringa e envólvelo con gasa.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: os artigos non deben estar saturados e non poden tocar as catro paredes da caixa.
(2) Olla de vapor grande de alta presión: coloca os artigos esterilizados, envólveos por separado e colócaos directamente no cilindro de esterilización. Non saturar os elementos.
3. Inspección de equipos
(1) Comprobe se o interruptor da porta é flexible, se o anel de goma está danado e se está plano.
(2) Comprobe se o manómetro permanece na posición cero cando se esgota o vapor, pecha a porta e a tapa, ventila o vapor ou a calor e observa se hai fugas de aire, se as condicións marcadas polo manómetro e o termómetro coinciden e se a canalización está bloqueada.
(3) Para esterilizadores con dispositivos de control automático de programas electrónicos, o programa especificado debe comprobarse antes de usar para ver se cumpre os requisitos para a esterilización.
4. Tratamento de esterilización
(1) Método de esterilización por calor seco:
Este método é adecuado para elementos que non danan, se deterioran ou se evaporan en condicións de calor seca. Úsase máis habitualmente para esterilizar vidro, produtos metálicos, produtos cerámicos, etc.
①Os instrumentos e utensilios deben lavarse antes de secar - cocer para evitar que a sucidade adherida á superficie se carbonice.
② Durante a esterilización, os artigos non deben estar saturados, non contactar directamente co fondo e a parede da caixa e deixar ocos entre os elementos.
③ Durante a esterilización, pecha firmemente a porta, conecte a fonte de alimentación, abra o orificio de escape durante uns 30 minutos para eliminar o aire frío do esterilizador, axuste o indicador luminoso cando a temperatura sobe a 160 °C e manteña durante 1,5 a 2 horas.
④ Despois de completar a esterilización ou durante o proceso de aumento da temperatura, a porta debe abrirse a menos de 60 °C.
(2) Deben seguirse os seguintes pasos cando se utiliza unha ola a presión portátil ou un esterilizador de vapor a presión vertical:
① Engade 3 litros de auga ao corpo principal da ola a presión portátil e 16 litros de auga á ola a presión vertical (a cantidade de auga debe ser reabastecida cando se reutiliza, e a auga debe ser substituída se se volve turbia);
② Para unha ola a presión portátil, insira o tubo de escape da tapa superior no tubo cadrado da parede interior do barril de esterilización (non se deben utilizar esterilizadores sen mangueiras ou con mangueiras corroídas e rachadas);
③ Cubra a tapa superior e aperte ben para evitar fugas de aire; coloque o esterilizador na fonte de lume para quentar, acenda a ola a presión vertical e abra a chave de escape da tapa superior para deixar saír o aire (o aire de escape durante 10 a 15 minutos despois de que ferva a auga);
④Pecha a válvula de escape para elevar a presión do vapor aos requisitos especificados e mantelo durante o tempo especificado (dependendo da natureza dos artigos esterilizados e das circunstancias relevantes);
⑤ Despois de alcanzar o tempo especificado, para os elementos que precisan secar, abra inmediatamente a válvula de escape para descargar o vapor. Cando a presión volva a cero, arrefríea naturalmente a 60 °C e despois abra a tapa para sacar os elementos. Se é un elemento líquido, non abra a válvula de escape. A pota debe retirarse da fonte de calor inmediatamente e deixarse arrefriar de forma natural ata que a presión volva a cero e a temperatura descenda por debaixo dos 60 °C antes de abrir a tapa para sacar o contido para evitar a descompresión repentina do líquido pola ebulición violenta ou a explosión do recipiente.
(3) Siga os seguintes pasos para usar o esterilizador de vapor de ola a presión horizontal:
①Pecha a porta da pota firmemente, abre a chave de entrada de aire, introduce vapor na entreplanta para o prequecemento e o aire frío da entreplanta descargarase automaticamente a través da barreira de aire;
②Despois de que a capa intermedia alcance a temperatura predeterminada, abra a chave de entrada de aire da cámara da pota, introduza o vapor na cámara da pota e o aire frío da cámara da pota descargarase automaticamente a través do pararradeira da pota;
③Cando a presión e a temperatura na cámara da pota alcancen a presión especificada, axuste a válvula de entrada de aire para mantela constante;
④ Arrefria a temperatura de forma natural ou artificial ata 60 ℃ antes de abrir a porta para sacar os artigos. Non utilice o método de descarga rápida de vapor para evitar a caída repentina de presión, a ebulición violenta do líquido ou a explosión do recipiente;
⑤ Cando se utiliza un programa automático - esterilizador de vapor a presión controlada, despois de colocar os elementos e pechar a porta firmemente, débese premer o interruptor correspondente segundo a categoría dos artigos para que a esterilización poida realizarse automaticamente segundo os procedementos requiridos. Durante a esterilización, debe utilizarse o instrumento adxunto para rexistrar a temperatura e o tempo. Para futuras referencias, os requisitos operativos deben cumprir estrictamente as instrucións do fabricante;
5. Temperatura e tempo de esterilización
(1) A temperatura de esterilización do esterilizador de calor seco é de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura de esterilización e tempo do esterilizador de vapor a presión
Método de esterilización intermitente
1. Método de esterilización:
Use esterilización a vapor sen presión. Algunhas substancias son facilmente destruídas pola esterilización con vapor a alta presión, polo que este método pódese usar para esterilización.
(1) Coloque os elementos a esterilizar na pota, cubra a tapa superior, abra a saída de drenaxe e escorra a auga restante da pota.
(2) Peche a saída de drenaxe, abra a porta de entrada de aire e desinfecte durante 10 a 20 minutos segundo sexa necesario.
(3) Despois de completar a esterilización, pecha a porta de entrada de aire, saca os elementos e agarda a que se arrefríen a temperatura ambiente, colócaos nunha incubadora a 37 °C durante a noite e continúa esterilizando segundo o método anterior ao día seguinte. Fai isto tres veces para acadar o propósito da esterilización.
2. Como usar o coagulador de soro:
Cando o medio de cultivo contén ingredientes especiais como soro ou ovos, a calor alta destruirá os seus nutrientes. Polo tanto, pódese usar a baixa temperatura para coagular o soro e conseguir fins de esterilización:
(1) Cando se utilice soro esterilizado por este método en alícuotas, as operacións asépticas deben seguirse estrictamente e os tubos de ensaio e as placas tamén deben esterilizarse antes do seu uso;
(2) Facer o medio de cultivo nunha pendente ou capa alta segundo sexa necesario. Despois de engadir auga suficiente, conecte a fonte de alimentación, eleve a temperatura a 75 ~ 90 °C durante unha hora e despois esterilízaa. Colócao nunha incubadora a 37 °C durante a noite e despois esterilízao tres veces.
3. Ferva e desinfecta:
Podes usar unha pota fervendo ou un esterilizador fervendo. Despois de que a auga ferva, ferva durante 5 a 15 minutos. Tamén pode engadir ácido carbólico ao 2% á auga e ferva durante 5 minutos. Engade 0,02% de formaldehido e ferva a 80 °C durante 60 minutos para acadar o propósito da esterilización. Non obstante, pódese conseguir a esterilización por ebulición. Cando se usan potenciadores, débese prestar atención á corrosividade dos elementos.
4. Tratamento de esterilización:
Despois da esterilización, os artigos xa están estériles en circunstancias normais. Deben ser coidadosamente inspeccionados e colocados cando se sacan do esterilizador para evitar a súa nova contaminación;
(1) Saque os artigos e comprobe a integridade do envase inmediatamente. Se hai danos ou se elimina o tampón, non se pode usar como artigos estériles;
(2) Os artigos retirados non poden utilizarse como artigos estériles se o seu envase está obviamente empapado en auga;
(3) Débense comprobar o medio de cultivo ou os reactivos para ver se cumpren a cor ou o estado despois da esterilización. Deberán descartarse aqueles que non cumpran os requisitos;
(4) Para os recipientes abertos/pechados, os orificios da pantalla deben estar pechados ao sacalos;
(5) Se os elementos retirados caen ao chan, están fóra de lugar nun lugar sucio ou están manchados de auga, considéranse contaminados e non se poden utilizar como artigos estériles;
(6) Os artigos esterilizados cualificados retirados deben almacenarse no almacén ou no armario a proba de po, e está estrictamente prohibido mesturalos con artigos non esterilizados;
(7) Todos os artigos cualificados deben estar marcados coa data de esterilización e a data de caducidade;
(8) Despois de completar cada lote de procesamento de esterilización, rexistre o nome, a cantidade, a temperatura, o tempo e o operador dos produtos esterilizados.
Requisitos para o tratamento de residuos tóxicos e bacterianos
Os equipos e cultivos experimentais utilizados en experimentos microbiolóxicos non deben sacarse do laboratorio sen desinfección.
1. Os materiais contaminados cultivados e os residuos deben colocarse en recipientes estancos ou cestas de arame e almacenarse centralmente en lugares designados ata que sexan uniformemente esterilizados en autoclave.
2. Os cultivos contaminados por microorganismos deben ser esterilizados en autoclave a 121 °C durante 30 minutos.
3. Despois do uso, as pallas contaminadas deben colocarse en solución de xabón de criollo ao 5% ou solución de ácido carbólico, empapadas durante polo menos 24 horas (o líquido desinfectante non debe ser inferior á altura de remollo) e despois esterilizarse a alta presión a 121 °C durante 30 minutos.
4. O líquido para manchar e lavar os frotis xeralmente pódese lavar directamente ao sumidoiro. O fluído de lavado para bacterias virulentas debe lavarse nun vaso de precipitados e esterilizarse a alta presión antes de verterse no sumidoiro. As láminas manchadas colócanse nunha solución de xabón de cresol ao 5%. Despois de remollar en auga durante 24 horas, ferver e lavar. Os portas ou pratos utilizados para a proba de aglutinación deben ser esterilizados en autoclave e despois lavados.
5. Despois de romper o cultivo, pulveriza e remolla inmediatamente as partes contaminadas con solución de xabón de cresol ao 5% ou solución de ácido carbólico, remolla durante media hora e despois limpa.
A roupa de traballo contaminada ou a roupa de traballo, gorras, máscaras, etc. usadas para probas violentas debe colocarse en bolsas especiais de desinfección e esterilizarse a alta presión antes de ser lavada.
Requisitos de preparación medios
A calidade da preparación do medio de cultivo afectará directamente o crecemento dos microorganismos, porque varios microorganismos teñen diferentes requisitos nutricionais e diferentes fins de cultivo. Os requisitos de preparación para diversos medios de cultivo son os seguintes:
1. Pesar os ingredientes segundo a fórmula media e despois disolvelos en auga destilada. A calidade dos reactivos e medicamentos aplicados debe ser inspeccionado antes do uso.
2. Medición e axuste do pH: a medición do pH debe realizarse cando o medio de cultivo se arrefría a temperatura ambiente, porque hai unha certa diferenza de pH en condicións quentes ou frías. Cando remate a medición, engade álcali ou ácido segundo a cantidade calculada e mestura ben. Debe ser probado de novo. O valor do pH do medio de cultivo debe ser preciso, se non, afectará o crecemento de microorganismos ou afectará a observación dos resultados. Non obstante, cómpre ter en conta que a esterilización a alta-presión pode afectar á diminución ou aumento do pH dalgúns medios de cultivo, polo que non é recomendable esterilizar a presión demasiado elevada ou demasiadas veces para non afectar á calidade do medio de cultivo. Indicadores, desoxicolato de sodio, agar, etc son xeralmente Engádeo despois de axustar o pH.
3. O medio de cultivo debe manterse limpo para facilitar a observación do crecemento bacteriano. Despois de que o medio de cultivo se quenta e ferva, pódese filtrar con algodón absorbente ou franela para eliminar o sedimento. Se é necesario, pódese clarificar con clara de ovo. As tiras de agar utilizadas deben lavarse e secarse previamente. Antes do uso, evite afectar a transparencia debido ás impurezas do ágar.
4. Non se deben utilizar recipientes de ferro, cobre e outros para suxeitar o medio de cultivo. É mellor usar recipientes limpos de vidro duro neutro.
5. A esterilización do medio de cultivo non só debe alcanzar o propósito da esterilización completa, senón que tamén debe prestar atención a non reducir o seu valor nutricional debido ao quecemento. Xeralmente, 121 °C durante 15 minutos é suficiente. Para os medios de cultivo que conteñan substancias que son intolerantes ao calor elevado, como azucres e soro, xelatina, etc., deben esterilizarse a baixa temperatura ou método intermitente. Algúns reactivos que non se poden quentar, como o telurito de potasio, xema de ovo, TTC, antibióticos, etc., deberían arrefriarse a uns 50 °C despois de que o agar básico estea esterilizado en autoclave e despois engadido;
6. Despois de preparar cada lote de medios de cultivo, debe realizarse unha proba de crecemento estéril e unha proba de crecemento das cepas probadas. Se é un medio de cultivo bioquímico, use cepas bacterianas estándar para a inoculación e o cultivo, e observe os resultados da reacción bioquímica. Debería mostrar unha reacción normal. O medio de cultivo non debe almacenarse durante moito tempo. Se é necesario, pódese almacenar nunha neveira a 4 °C.
7. Na actualidade, hai moitos tipos de medios de cultivo secos. Cada lote necesita utilizar cepas estándar para probas de crecemento ou observación de reaccións bioquímicas. Só se poden usar varios medios de cultivo despois de que a proba de crecemento das cepas correspondentes sexa boa. Pódense usar os recén comprados ou secos que levan moito tempo almacenados. Tamén se debe medir o pH do medio de cultivo ao preparalo e seguir a dosificación e o método segundo as instrucións do produto.
8. Os reactivos químicos, as condicións de esterilización, os resultados das probas de crecemento de cepas e o persoal de produción utilizados en cada lote de medios de cultivo preparados deben rexistrarse para consulta.
Requisitos de recollida e procesamento de mostras
1. As mostras de inspección recollidas deberán ser representativas. Durante a toma de mostras, débense investigar detalladamente as materias primas, o procesado, o transporte, os métodos de almacenamento e as condicións do lote de alimentos, as condicións de saúde ambiental circundante, etc., para comprobar se existen fontes de contaminación.
2. Segundo o tipo e a cantidade de alimento, a cantidade e o método de mostraxe deben realizarse de acordo cos requisitos dos métodos de inspección estándar.
3. Preste atención ao funcionamento aséptico ao tomar a mostra, e o recipiente debe esterilizarse para evitar a contaminación microbiana no medio ambiente. O recipiente non debe esterilizarse con solución de xabón creoal, esterilización con clormetionina, alcohol e outros desinfectantes, e non debe conter tales desinfectantes ou antibióticos. Para evitar a morte de microorganismos na mostra, as tesoiras, coitelos e culleres empregadas tamén deben esterilizarse antes do uso.
4. As mostras deben enviarse á sala de inspección para a súa inspección inmediatamente despois da recollida. O proceso de inspección xeralmente non supera as 3 horas. Se a distancia é longa, pódese almacenar nun ambiente de 1 ~ 5 ℃. Se é necesario conxelar, debe manterse en estado conxelado. Presentar para inspección.
5. Despois de recibir a mostra, a sala de inspección rexistraraa (nome da mostra, unidade para a inspección, cantidade, data, número, etc.) e observará o aspecto da mostra. Se se atopa algunha das seguintes condicións, a inspección poderá ser rexeitada:
(1) As mostras que foron esterilizadas mediante métodos especiais de alta presión, ebulición ou outros, perderán a súa importancia para representar o alimento orixinal;
(2) Abríronse botellas e bolsas de alimentos, a carne cocida e os seus produtos, as aves cocidas e outros alimentos romperon e quedaron incompletos, é dicir, perdeuse a forma orixinal dos alimentos (excepto as mostras de intoxicación alimentaria);
(3) A cantidade de mostraxe é insuficiente segundo se require;
Para as mostras presentadas para a inspección que cumpran os requisitos, a sala de inspección debe realizar a inspección inmediatamente despois de recibilas. Se non se cumpren as condicións, deben almacenarse nun frigorífico a 4 °C, prepararse para crear condicións a tempo e despois realizar a inspección.
6. Á hora de inspeccionar mostras, realizar un tratamento axeitado segundo as súas diferentes propiedades.
(1) Cando se inoculan mostras líquidas, deben mesturarse e inocularse completamente segundo a cantidade.
(2) Para as mostras sólidas, use un coitelo esterilizado para cortar 25 g de pezas diferentes, colócaas en 225 ml de solución salina esterilizada ou outras solucións, esmaga e mestúrase cun homoxeneizador e inocula segundo a cantidade.
(3) As botellas e bolsas de alimentos deben abrirse mediante esterilización e os métodos anteriores deben seleccionarse segundo as características antes da inoculación.
Requisitos de inspección, rexistro e informes de mostras
1. Despois de recibir a mostra, a sala de inspección realizará primeiro unha inspección de aparencia e realizará a inspección de inmediato de acordo cos métodos de inspección estándar nacionais. Durante o proceso de inspección, as operacións asépticas deben realizarse con coidado, responsabilidade e rigorosamente para evitarresultado da proba microbianacontaminación no medio ambiente.
2. Os métodos empregados durante o proceso de inspección da mostra, os fenómenos e resultados acontecidos, etc. deberán consignarse en actas de proba escritas como base para a análise e o xuízo dos resultados. Os rexistros deben ser detallados, claros, auténticos, obxectivos e non deben ser alterados nin falsificados.
.
.
