सूक्ष्मजीवविज्ञानी परीक्षण आवश्यकताओं का सारांश
2024-01-24 15:14:33
के लिए आवश्यकताएँ और कदमसूक्ष्मजीवविज्ञानी परीक्षणइस प्रकार हैं:
एसेप्टिक ऑपरेशन आवश्यकताएँ:
1. बैक्टीरिया का टीका लगाते समय आपको काम के कपड़े और काम की टोपी पहननी चाहिए।
2. भोजन के नमूनों का टीकाकरण करते समय, विशेष काम के कपड़े, टोपी और चप्पलें पहननी चाहिए, जिन्हें बाँझ कमरे के बफर रूम में रखा जाना चाहिए और काम से पहले यूवी कीटाणुशोधन के बाद उपयोग किया जाना चाहिए।
3. भोजन के नमूनों का टीकाकरण करते समय, बाँझ कमरे में प्रवेश करने से पहले अपने हाथों को साबुन से धोएं, और फिर 75% अल्कोहल कॉटन बॉल से अपने हाथों को साफ करें।
4. टीकाकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले स्ट्रॉ, फ्लैट डिश और कल्चर मीडिया को कीटाणुरहित और कीटाणुरहित किया जाना चाहिए। अप्रयुक्त कंटेनरों को पैकेज खोलने के बाद अप्रयुक्त नहीं छोड़ा जाना चाहिए। उपयोग से पहले धातु के बर्तनों को 95% अल्कोहल के साथ तीन बार ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए या जलाया जाना चाहिए।
5. पुआल को पैकेज से बाहर निकालते समय, पुआल की नोक खुले भागों को नहीं छूनी चाहिए। टेस्ट ट्यूब या प्लेट को टीका लगाने के लिए पुआल का उपयोग करते समय, पुआल की नोक को टेस्ट ट्यूब या प्लेट के किनारे को नहीं छूना चाहिए।
6. नमूनों का टीकाकरण और बैक्टीरिया का स्थानांतरण अल्कोहल लैंप के सामने किया जाना चाहिए। बैक्टीरिया या नमूनों का टीकाकरण करते समय, पुआल को पैकेज से बाहर निकालने और टेस्ट ट्यूब स्टॉपर खोलने के बाद लौ द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
7. बैक्टीरिया का टीका लगाने से पहले, टीका लूप और सुई के सभी धातु के तारों को लौ से जला देना चाहिए, और यदि आवश्यक हो, तो लूप, सुई और रॉड के बीच के कनेक्शन को जला देना चाहिए। तपेदिक बैक्टीरिया और विषैले बैक्टीरिया को टीका लगाने के लिए इनोक्यूलेशन लूप को उबलते पानी में 5 मिनट तक उबाला जाना चाहिए, और फिर आंच से जला देना चाहिए।
8. बैक्टीरिया के तरल पदार्थ या नमूनों को स्ट्रॉ से चूसते समय, इसे चूसने के लिए संबंधित रबर टिप का उपयोग करें, और इसे सीधे अपने मुंह से न चूसें।
बाँझ कमरे के उपयोग की आवश्यकताएँ:
1. स्टेराइल रूम के बाहर की ओर जाने वाली खिड़कियाँ डबल - शीशे वाली और सीलबंद होनी चाहिए। इन्हें मनमर्जी से नहीं खोला जाना चाहिए। स्टेराइल रूम के आकार के अनुरूप एक बफर रूम और स्लाइडिंग दरवाजा होना चाहिए। 0.5~0.7m2 की एक छोटी खिड़की भी होनी चाहिए। बाँझ कमरे में प्रवेश करने के बाद वस्तुओं को पारित करने की तैयारी में।
2. कीटाणुरहित कमरे को साफ रखना चाहिए। काम के बाद, इसे 2% से 3% क्रेसोल साबुन के घोल से कीटाणुरहित किया जाना चाहिए, काम की सतह को पोंछना चाहिए, और प्रयोग से संबंधित वस्तुओं को संग्रहीत नहीं किया जाना चाहिए।
3. उपयोग से पहले और बाद में स्टेराइल रूम का दरवाजा कसकर बंद कर देना चाहिए और पराबैंगनी लैंप चालू कर देना चाहिए। यदि कीटाणुशोधन के लिए एक इनडोर निलंबित पराबैंगनी लैंप का उपयोग किया जाता है, तो 30W पराबैंगनी लैंप की आवश्यकता होती है। दूरी 1.0 मीटर है, और विकिरण का समय 30 मिनट से कम नहीं है। पराबैंगनी लैंप का उपयोग करते समय, क्षति से बचने के लिए सीधे पराबैंगनी प्रकाश के तहत संचालन पर ध्यान देना चाहिए। पराबैंगनी प्रवेश के प्रभाव को कम करने के लिए धूल और ग्रीस को हटाने के लिए लैंप को हर दो सप्ताह में अल्कोहल कॉटन बॉल से धीरे से पोंछना चाहिए।
4. खाद्य नमूनों को संसाधित और टीका लगाते समय, ऑपरेशन के लिए बाँझ कमरे में प्रवेश करें और उन्हें इच्छानुसार प्रवेश करने या बाहर निकलने की अनुमति नहीं है। यदि वस्तुओं को आगे बढ़ाने की आवश्यकता है, तो उन्हें छोटी खिड़की से पारित किया जा सकता है।
5. यदि स्टेराइल रूम में एयर कंडीशनिंग स्थापित करने की आवश्यकता है, तो एक फ़िल्टरिंग डिवाइस होना चाहिए।
कीटाणुशोधन और बंध्याकरण आवश्यकताएँ
कांच के बर्तन, धातु के बर्तन और संस्कृति मीडिया के लिए उपयोग किया जाता हैसूक्ष्मजीवविज्ञानी परीक्षण, दूषित और टीकाकृत संस्कृतियाँ, आदि को उपयोग से पहले निष्फल किया जाना चाहिए। सूखी गर्मी और नम गर्मी दबाव भाप नसबंदी के तरीके।
1. नसबंदी से पहले तैयारी
(1) जिन सभी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने की आवश्यकता है उन्हें पहले धोया और सुखाया जाना चाहिए। कांच के बर्तन जैसे स्ट्रॉ और फ्लैट बर्तनों को कागज के साथ कसकर पैक किया जाना चाहिए। यदि धातु ट्यूबों का उपयोग किया जाता है, तो उन पर वेंटिलेशन छेद खोले जाने चाहिए।
(2) कल्चर माध्यम वाले त्रिकोणीय फ्लास्क के स्टॉपर को कागज में लपेटें, टेस्ट ट्यूब को ढकें, और सिरिंज के कोर को बाहर निकालें, और इसे धुंध से लपेटें।
2. स्थापित करें
(1) ड्राई हीट स्टरलाइज़र: सामान बहुत ज्यादा भरा हुआ नहीं होना चाहिए और बॉक्स की चार दीवारों को नहीं छूना चाहिए।
(2) बड़ा हाई-प्रेशर स्टीम कुकर: स्टरलाइज़्ड वस्तुओं को रखें, उन्हें अलग से लपेटें, और सीधे स्टरलाइज़ेशन सिलेंडर में डालें। सामान बहुत ज़्यादा न रखें.
3. उपकरण निरीक्षण
(1) जांचें कि क्या दरवाज़ा स्विच लचीला है, क्या रबर की अंगूठी क्षतिग्रस्त है और क्या यह सपाट है।
(2) जाँच करें कि भाप समाप्त होने पर दबाव नापने का यंत्र शून्य स्थिति में रहता है या नहीं, दरवाज़ा और ढक्कन बंद करें, भाप या गर्मी को हवा दें, और देखें कि क्या हवा का रिसाव हो रहा है, क्या दबाव नापने का यंत्र और थर्मामीटर द्वारा चिह्नित स्थितियाँ मेल खाती हैं, और क्या पाइपलाइन अवरुद्ध है।
(3) स्वचालित इलेक्ट्रॉनिक प्रोग्राम नियंत्रण उपकरणों वाले स्टरलाइज़र के लिए, उपयोग से पहले निर्दिष्ट प्रोग्राम की जांच की जानी चाहिए कि यह स्टरलाइज़ेशन की आवश्यकताओं को पूरा करता है या नहीं।
4. बंध्याकरण उपचार
(1) सूखी गर्मी नसबंदी विधि:
यह विधि उन वस्तुओं के लिए उपयुक्त है जो शुष्क गर्मी की स्थिति में क्षतिग्रस्त, ख़राब या वाष्पित नहीं होती हैं। इसका उपयोग आमतौर पर कांच के बर्तनों, धातु उत्पादों, सिरेमिक उत्पादों आदि को स्टरलाइज़ करने के लिए किया जाता है।
①उपकरणों और बर्तनों को सुखाने/बेकिंग से पहले धोना चाहिए ताकि सतह पर लगी गंदगी को कार्बनीकृत होने से बचाया जा सके।
② स्टरलाइज़ेशन के दौरान, वस्तुओं को ज़्यादा भीड़ नहीं देनी चाहिए, सीधे बॉक्स के नीचे और दीवार से संपर्क न करें, और वस्तुओं के बीच अंतराल छोड़ दें।
③ स्टरलाइज़ेशन के दौरान, दरवाज़ा कसकर बंद करें, बिजली की आपूर्ति कनेक्ट करें, स्टरलाइज़र में ठंडी हवा को हटाने के लिए निकास छेद को लगभग 30 मिनट के लिए खोलें, तापमान 160 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ने पर संकेतक प्रकाश को समायोजित करें और इसे 1.5 से 2 घंटे तक बनाए रखें।
④नसबंदी पूरी होने के बाद या तापमान बढ़ने की प्रक्रिया के दौरान, दरवाजा 60°C से नीचे खोला जाना चाहिए।
(2) पोर्टेबल प्रेशर कुकर या वर्टिकल प्रेशर स्टीम स्टरलाइज़र का उपयोग करते समय निम्नलिखित चरणों का पालन किया जाना चाहिए:
① पोर्टेबल प्रेशर कुकर की मुख्य बॉडी में 3 लीटर पानी और वर्टिकल प्रेशर कुकर में 16 लीटर पानी डालें (पुन: उपयोग करने पर पानी की मात्रा को फिर से भरना चाहिए, और यदि पानी गंदला हो जाए तो उसे बदलना होगा);
② पोर्टेबल प्रेशर कुकर के लिए, शीर्ष कवर पर निकास पाइप को स्टरलाइज़ेशन बैरल की भीतरी दीवार पर वर्गाकार ट्यूब में डालें (बिना होज़ वाले या जंग लगे और टूटे हुए होज़ वाले स्टेरलाइज़र का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए);
③ हवा के रिसाव को रोकने के लिए शीर्ष कवर को ढकें और कसकर कस लें; स्टरलाइज़र को गर्म करने के लिए आग के स्रोत पर रखें, ऊर्ध्वाधर प्रेशर कुकर की शक्ति चालू करें, और हवा को बाहर निकालने के लिए शीर्ष कवर पर निकास वाल्व खोलें (पानी उबलने के बाद 10 से 15 मिनट के लिए हवा को बाहर निकालें);
④ भाप के दबाव को निर्दिष्ट आवश्यकताओं तक बढ़ाने और इसे निर्दिष्ट समय तक बनाए रखने के लिए निकास वाल्व को बंद करें (निष्फल वस्तुओं की प्रकृति और प्रासंगिक परिस्थितियों के आधार पर);
⑤ निर्दिष्ट समय पूरा होने के बाद, जिन वस्तुओं को सुखाने की आवश्यकता है, भाप निकालने के लिए तुरंत निकास वाल्व खोलें। जब दबाव शून्य हो जाए, तो इसे प्राकृतिक रूप से 60°C तक ठंडा करें और फिर वस्तुओं को बाहर निकालने के लिए ढक्कन खोलें। यदि यह एक तरल वस्तु है, तो निकास वाल्व न खोलें। बर्तन को गर्मी स्रोत से तुरंत हटा दिया जाना चाहिए और प्राकृतिक रूप से ठंडा होने दिया जाना चाहिए जब तक कि दबाव शून्य न हो जाए और सामग्री को बाहर निकालने के लिए ढक्कन खोलने से पहले तापमान 60 डिग्री सेल्सियस से नीचे न चला जाए, ताकि तरल पदार्थ के अचानक विघटन को हिंसक रूप से उबलने या कंटेनर के विस्फोट से रोका जा सके।
(3) क्षैतिज प्रेशर कुकर स्टीम स्टरलाइज़र का उपयोग करने के लिए निम्नलिखित चरणों का पालन करें:
① पॉट के दरवाजे को कसकर बंद करें, एयर इनलेट वाल्व खोलें, प्रीहीटिंग के लिए मेजेनाइन में भाप डालें, और मेजेनाइन में ठंडी हवा स्वचालित रूप से एयर बैरियर के माध्यम से डिस्चार्ज हो जाएगी;
② इंटरलेयर के पूर्व निर्धारित तापमान तक पहुंचने के बाद, पॉट चैम्बर के एयर इनलेट वाल्व को खोलें, भाप को पॉट चैम्बर में डालें, और पॉट चैम्बर में ठंडी हवा को पॉट चैम्बर एयर अरेस्टर के माध्यम से स्वचालित रूप से छुट्टी दे दी जाएगी;
③जब पॉट चैम्बर में दबाव और तापमान निर्दिष्ट दबाव तक पहुंच जाए, तो इसे स्थिर रखने के लिए एयर इनलेट वाल्व को समायोजित करें;
④ सामान बाहर निकालने के लिए दरवाजा खोलने से पहले तापमान को प्राकृतिक या कृत्रिम रूप से 60℃ तक ठंडा करें। अचानक दबाव गिरने, तरल के हिंसक उबलने या कंटेनर के विस्फोट को रोकने के लिए तीव्र भाप निर्वहन विधि का उपयोग न करें;
⑤ स्वचालित प्रोग्राम - नियंत्रित दबाव भाप स्टरलाइज़र का उपयोग करते समय, वस्तुओं को रखने और दरवाजे को कसकर बंद करने के बाद, वस्तुओं की श्रेणी के अनुसार संबंधित स्विच को दबाया जाना चाहिए ताकि आवश्यक प्रक्रियाओं के अनुसार नसबंदी स्वचालित रूप से की जा सके। नसबंदी के दौरान, तापमान और समय रिकॉर्ड करने के लिए संलग्न उपकरण का उपयोग किया जाना चाहिए। भविष्य के संदर्भ के लिए, परिचालन आवश्यकताएँ सख्ती से निर्माता के निर्देशों के अनुसार होनी चाहिए;
5. बंध्याकरण तापमान और समय
(1) ड्राई हीट स्टरलाइज़र का स्टरलाइज़ेशन तापमान 160℃, 1.5~2 घंटे है।
(2) प्रेशर स्टीम स्टरलाइज़र का स्टरलाइज़ेशन तापमान और समय
आंतरायिक नसबंदी विधि
1. बंध्याकरण विधि:
बिना दबाव के भाप स्टरलाइज़ेशन का उपयोग करें। कुछ पदार्थ उच्च दबाव वाली भाप स्टरलाइज़ेशन से आसानी से नष्ट हो जाते हैं, इसलिए इस विधि का उपयोग स्टरलाइज़ेशन के लिए किया जा सकता है।
(1) विसंक्रमित की जाने वाली वस्तुओं को बर्तन में रखें, ऊपरी ढक्कन को ढकें, नाली का आउटलेट खोलें, और बर्तन में बचा हुआ पानी निकाल दें।
(2) नाली के आउटलेट को बंद करें, हवा के प्रवेश द्वार को खोलें, और आवश्यकतानुसार 10 से 20 मिनट के लिए कीटाणुरहित करें।
(3) स्टरलाइज़ेशन पूरा होने के बाद, एयर इनलेट दरवाज़ा बंद करें, वस्तुओं को बाहर निकालें और कमरे के तापमान तक ठंडा होने की प्रतीक्षा करें, उन्हें रात भर 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें, और अगले दिन उपरोक्त विधि के अनुसार स्टरलाइज़ करना जारी रखें। नसबंदी के उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए ऐसा तीन बार करें।
2. सीरम कोगुलेटर का उपयोग कैसे करें:
जब संस्कृति माध्यम में सीरम या अंडे जैसे विशेष तत्व होते हैं, तो उच्च गर्मी इसके पोषक तत्वों को नष्ट कर देगी। इसलिए, कम तापमान का उपयोग सीरम को जमाने और नसबंदी उद्देश्यों को प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है:
(1) इस विधि द्वारा विसंक्रमित सीरम का उपयोग एलिकोट के लिए करते समय, सड़न रोकनेवाला संचालन का सख्ती से पालन किया जाना चाहिए, और उपयोग से पहले टेस्ट ट्यूब और प्लेटों को भी विसंक्रमित किया जाना चाहिए;
(2) आवश्यकतानुसार कल्चर माध्यम को ढलान या ऊंची परत में बनाएं। पर्याप्त पानी डालने के बाद, बिजली की आपूर्ति कनेक्ट करें, तापमान को एक घंटे के लिए 75~90°C तक बढ़ाएं और फिर इसे स्टरलाइज़ करें। इसे रात भर 37°C इनक्यूबेटर में रखें, और फिर इसे तीन बार स्टरलाइज़ करें।
3. उबालें और कीटाणुरहित करें:
आप उबलते बर्तन या उबलते स्टरलाइज़र का उपयोग कर सकते हैं। - पानी उबलने के बाद इसे 5 से 15 मिनट तक उबालें. आप पानी में 2% कार्बोलिक एसिड भी मिला सकते हैं और इसे 5 मिनट तक उबाल सकते हैं। स्टरलाइज़ेशन के उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए 0.02% फॉर्मेल्डिहाइड मिलाएं और इसे 80°C पर 60 मिनट तक उबालें। हालाँकि, उबालकर नसबंदी हासिल की जा सकती है। एन्हांसर का उपयोग करते समय, वस्तुओं की संक्षारण क्षमता पर ध्यान देना चाहिए।
4. बंध्याकरण उपचार:
नसबंदी के बाद, वस्तुएं सामान्य परिस्थितियों में पहले से ही रोगाणुहीन होती हैं। पुन: संदूषण से बचने के लिए स्टरलाइज़र से बाहर निकालते समय उनका सावधानीपूर्वक निरीक्षण किया जाना चाहिए और रखा जाना चाहिए;
(1) वस्तुओं को बाहर निकालें और पैकेजिंग की अखंडता की तुरंत जांच करें। यदि क्षति होती है या टैम्पोन हटा दिया जाता है, तो इसे बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है;
(2) बाहर निकाली गई वस्तुओं को बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है यदि उनकी पैकेजिंग स्पष्ट रूप से पानी में भिगोई गई हो;
(3) कल्चर माध्यम या अभिकर्मकों की जाँच यह देखने के लिए की जानी चाहिए कि क्या वे नसबंदी के बाद रंग या अवस्था से मिलते हैं। जो आवश्यकताओं को पूरा नहीं करते उन्हें त्याग दिया जाना चाहिए;
(4) खुले-बंद कंटेनरों के लिए, उन्हें बाहर निकालते समय स्क्रीन के छेद बंद होने चाहिए;
(5) यदि हटाई गई वस्तुएं जमीन पर गिर जाती हैं, किसी अशुद्ध स्थान पर रख दी जाती हैं, या पानी से दागदार हो जाती हैं, तो उन्हें दूषित माना जाता है और उन्हें बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है;
(6) निकाली गई योग्य निष्फल वस्तुओं को भंडारण कक्ष या धूलरोधी कैबिनेट में संग्रहित किया जाना चाहिए, और उन्हें असंक्रमित वस्तुओं के साथ मिलाना सख्त वर्जित है;
(7) सभी योग्य वस्तुओं पर नसबंदी तिथि और समाप्ति तिथि अंकित होनी चाहिए;
(8) स्टरलाइज़ेशन प्रसंस्करण के प्रत्येक बैच के पूरा होने के बाद, स्टरलाइज़्ड उत्पादों का नाम, मात्रा, तापमान, समय और ऑपरेटर रिकॉर्ड करें।
विषाक्त और जीवाणु अपशिष्ट के उपचार के लिए आवश्यकताएँ
सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगों में प्रयुक्त प्रायोगिक उपकरण और कल्चर को कीटाणुशोधन के बिना प्रयोगशाला से बाहर नहीं निकाला जाना चाहिए।
1. संवर्धित दूषित सामग्री और कचरे को तंग कंटेनरों या तार की टोकरियों में रखा जाना चाहिए और निर्दिष्ट स्थानों पर केंद्रीय रूप से संग्रहीत किया जाना चाहिए जब तक कि वे समान रूप से ऑटोक्लेव्ड न हो जाएं।
2. सूक्ष्मजीवों द्वारा दूषित कल्चर को 30 मिनट के लिए 121°C पर ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए।
3. उपयोग के बाद, दूषित भूसे को 5% क्रेओल साबुन समाधान या कार्बोलिक एसिड समाधान में रखा जाना चाहिए, कम से कम 24 घंटे तक भिगोया जाना चाहिए (कीटाणुनाशक तरल भिगोने की ऊंचाई से कम नहीं होना चाहिए), और फिर 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
4. दागों को दागने और धोने के लिए तरल को आम तौर पर सीधे सीवर में बहाया जा सकता है। विषैले जीवाणुओं के लिए धोने वाले द्रव को बीकर में प्रवाहित किया जाना चाहिए और सीवर में डालने से पहले उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए। दागदार स्लाइडों को 5% क्रेसोल साबुन के घोल में डाला जाता है। 24 घंटे तक पानी में भिगोने के बाद उबालकर धो लें। एग्लूटीनेशन परीक्षण के लिए उपयोग की जाने वाली स्लाइड या डिश को ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए और फिर धोया जाना चाहिए।
5. कल्चर को तोड़ने के बाद तुरंत दूषित हिस्सों पर 5% क्रेसोल साबुन के घोल या कार्बोलिक एसिड के घोल का छिड़काव करें और आधे घंटे तक भिगोकर रखें और फिर साफ कर लें।
हिंसक परीक्षणों के लिए पहने जाने वाले दूषित काम के कपड़े या काम के कपड़े, टोपी, मास्क आदि को विशेष कीटाणुशोधन बैग में रखा जाना चाहिए और धोने से पहले उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
मध्यम तैयारी आवश्यकताएँ
संस्कृति माध्यम की तैयारी की गुणवत्ता सीधे सूक्ष्मजीवों के विकास को प्रभावित करेगी, क्योंकि विभिन्न सूक्ष्मजीवों की अलग-अलग पोषण संबंधी आवश्यकताएं और अलग-अलग संस्कृति उद्देश्य होते हैं। विभिन्न संस्कृति मीडिया के लिए तैयारी आवश्यकताएँ इस प्रकार हैं:
1. सामग्री को मध्यम सूत्र के अनुसार तौलें, और फिर उन्हें आसुत जल में घोलें। उपयोग से पहले लागू अभिकर्मकों और दवाओं की गुणवत्ता का निरीक्षण किया जाना चाहिए।
2. पीएच माप और समायोजन: पीएच माप तब किया जाना चाहिए जब संस्कृति माध्यम को कमरे के तापमान तक ठंडा किया जाता है, क्योंकि गर्म या ठंडे परिस्थितियों में पीएच में एक निश्चित अंतर होता है। जब माप पूरा हो जाए तो गणना की गई मात्रा के अनुसार क्षार या अम्ल डालें और अच्छी तरह मिलाएँ। फिर से परीक्षण किया जाना चाहिए. संस्कृति माध्यम का पीएच मान सटीक होना चाहिए, अन्यथा यह सूक्ष्मजीवों के विकास को प्रभावित करेगा या परिणामों के अवलोकन को प्रभावित करेगा। हालाँकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि उच्च दबाव नसबंदी कुछ संस्कृति मीडिया के पीएच की कमी या वृद्धि को प्रभावित कर सकती है, इसलिए संस्कृति माध्यम की गुणवत्ता को प्रभावित करने से बचने के लिए बहुत अधिक दबाव या बहुत बार नसबंदी करने की सलाह नहीं दी जाती है। संकेतक, सोडियम डीऑक्सीकोलेट, एगर आदि आमतौर पर पीएच को समायोजित करने के बाद इसे जोड़ते हैं।
3. जीवाणु विकास के अवलोकन को सुविधाजनक बनाने के लिए संवर्धन माध्यम को साफ़ रखने की आवश्यकता है। कल्चर माध्यम को गर्म करने और उबालने के बाद, तलछट को हटाने के लिए इसे अवशोषक कपास या फलालैन से फ़िल्टर किया जा सकता है। यदि आवश्यक हो, तो इसे अंडे की सफेदी से स्पष्ट किया जा सकता है। उपयोग की जाने वाली अगर स्ट्रिप्स को पहले से धोया और सुखाया जाना चाहिए। उपयोग से पहले, अगर में अशुद्धियों के कारण पारदर्शिता को प्रभावित होने से बचें।
4. कल्चर माध्यम को रखने के लिए लोहे, तांबे और अन्य कंटेनरों का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए। स्वच्छ तटस्थ कठोर कांच के कंटेनरों का उपयोग करना बेहतर है।
5. संवर्धन माध्यम के बंध्याकरण से न केवल पूर्ण बंध्याकरण का उद्देश्य प्राप्त होना चाहिए, बल्कि इस बात पर भी ध्यान देना चाहिए कि गर्म करने के कारण इसके पोषण मूल्य में कमी न हो। आम तौर पर 15 मिनट के लिए 121°C पर्याप्त होता है। उच्च ताप के प्रति असहिष्णु पदार्थ जैसे शर्करा और सीरम, जिलेटिन आदि युक्त कल्चर मीडिया को कम तापमान या आंतरायिक विधि द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए। कुछ अभिकर्मकों को गर्म नहीं किया जा सकता है, जैसे पोटेशियम टेलराइट, अंडे की जर्दी, टीटीसी, एंटीबायोटिक्स इत्यादि, मूल एगर को ऑटोक्लेव्ड करने के बाद लगभग 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाना चाहिए और फिर जोड़ा जाना चाहिए;
6. कल्चर मीडिया का प्रत्येक बैच तैयार होने के बाद, एक बाँझ विकास परीक्षण और परीक्षण किए गए उपभेदों का विकास परीक्षण किया जाना चाहिए। यदि यह एक जैव रासायनिक संस्कृति माध्यम है, तो टीकाकरण और संस्कृति के लिए मानक जीवाणु उपभेदों का उपयोग करें, और जैव रासायनिक प्रतिक्रिया परिणामों का निरीक्षण करें। इसे सामान्य प्रतिक्रिया दिखानी चाहिए. कल्चर माध्यम को बहुत अधिक समय तक संग्रहित नहीं किया जाना चाहिए। यदि आवश्यक हो, तो इसे 4°C रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जा सकता है।
7. वर्तमान समय में शुष्क संस्कृति माध्यम कई प्रकार के हैं। प्रत्येक बैच को विकास परीक्षण या जैव रासायनिक प्रतिक्रिया अवलोकन के लिए मानक उपभेदों का उपयोग करने की आवश्यकता होती है। संबंधित उपभेदों का विकास परीक्षण अच्छा होने के बाद ही विभिन्न संस्कृति माध्यमों का उपयोग किया जा सकता है। नई खरीदी गई या लंबे समय से संग्रहीत सूखी वस्तुओं का उपयोग किया जा सकता है। इसे तैयार करते समय कल्चर माध्यम का पीएच भी मापा जाना चाहिए, और उत्पाद निर्देशों के अनुसार खुराक और विधि का पालन किया जाना चाहिए।
8. तैयार संस्कृति मीडिया के प्रत्येक बैच में उपयोग किए जाने वाले रासायनिक अभिकर्मकों, नसबंदी की स्थिति, तनाव वृद्धि परीक्षण के परिणाम और उत्पादन कर्मियों को जांच के लिए दर्ज किया जाना चाहिए।
नमूना संग्रह और प्रसंस्करण आवश्यकताएँ
1. एकत्र किए गए निरीक्षण नमूने प्रतिनिधि होने चाहिए। नमूना लेते समय, कच्चे माल, प्रसंस्करण, परिवहन, भंडारण के तरीकों और भोजन के बैच की स्थितियों, आसपास के पर्यावरणीय स्वास्थ्य स्थितियों आदि की विस्तार से जांच की जानी चाहिए ताकि यह जांचा जा सके कि संदूषण के कोई स्रोत हैं या नहीं।
2. भोजन के प्रकार और मात्रा के अनुसार नमूनाकरण मात्रा और विधि मानक निरीक्षण विधियों की आवश्यकताओं के अनुसार की जानी चाहिए।
3. नमूना लेते समय सड़न रोकनेवाला ऑपरेशन पर ध्यान दें, और पर्यावरण में माइक्रोबियल संदूषण से बचने के लिए कंटेनर को निष्फल किया जाना चाहिए। कंटेनर को क्रेओसल साबुन के घोल से कीटाणुरहित नहीं किया जाना चाहिए, क्लोरमेथिओनिन, अल्कोहल और अन्य कीटाणुनाशकों से कीटाणुरहित नहीं किया जाना चाहिए, और इसमें ऐसे कीटाणुनाशक या एंटीबायोटिक्स नहीं होने चाहिए। नमूने में सूक्ष्मजीवों को मारने से बचने के लिए, उपयोग की जाने वाली कैंची, चाकू और चम्मच को भी उपयोग से पहले निष्फल किया जाना चाहिए।
4. नमूने एकत्र करने के तुरंत बाद निरीक्षण के लिए निरीक्षण कक्ष में भेजे जाने चाहिए। निरीक्षण प्रक्रिया आम तौर पर 3 घंटे से अधिक नहीं होती है। यदि दूरी लंबी है, तो इसे 1~5℃ के वातावरण में संग्रहित किया जा सकता है। यदि इसे जमाना हो तो इसे जमी हुई अवस्था में ही रखना चाहिए। निरीक्षण हेतु प्रस्तुत करें।
5. नमूना प्राप्त करने के बाद, निरीक्षण कक्ष इसे पंजीकृत करेगा (नमूना नाम, निरीक्षण के लिए इकाई, मात्रा, तिथि, संख्या, आदि) और नमूने की उपस्थिति का निरीक्षण करेगा। यदि निम्नलिखित में से कोई भी स्थिति पाई जाती है, तो निरीक्षण से इनकार किया जा सकता है:
(1) विशेष उच्च दबाव, उबालने या अन्य तरीकों से निष्फल किए गए नमूने मूल भोजन का प्रतिनिधित्व करने में अपना महत्व खो देंगे;
(2) भोजन की बोतलें और बैग खुल गए हैं, पका हुआ मांस और उसके उत्पाद, पके हुए मुर्गे और अन्य खाद्य पदार्थ टूट गए हैं और अधूरे हैं, यानी, मूल भोजन का आकार खो गया है (खाद्य विषाक्तता के नमूनों को छोड़कर);
(3) नमूना मात्रा आवश्यकतानुसार अपर्याप्त है;
निरीक्षण के लिए प्रस्तुत किए गए नमूनों के लिए जो आवश्यकताओं को पूरा करते हैं, निरीक्षण कक्ष को उन्हें प्राप्त करने के तुरंत बाद निरीक्षण करना चाहिए। यदि शर्तें पूरी नहीं होती हैं, तो उन्हें 4°C रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाना चाहिए, समय पर स्थितियां बनाने के लिए तैयार होना चाहिए और फिर निरीक्षण करना चाहिए।
6. नमूनों का निरीक्षण करते समय, उनके विभिन्न गुणों के अनुसार उचित प्रसंस्करण करें।
(1) तरल नमूनों को टीका लगाते समय, उन्हें अच्छी तरह से मिलाया जाना चाहिए और मात्रा के अनुसार टीका लगाया जाना चाहिए।
(2) ठोस नमूनों के लिए, 25 ग्राम अलग-अलग हिस्सों को काटने के लिए एक निष्फल चाकू का उपयोग करें, उन्हें 225 एमएल निष्फल खारा या अन्य समाधान में रखें, क्रश करें और एक होमोजेनाइज़र के साथ मिलाएं, और मात्रा के अनुसार टीका लगाएं।
(3) भोजन की बोतलों और थैलियों को स्टरलाइज़ करके खोला जाना चाहिए, और टीकाकरण से पहले विशेषताओं के अनुसार उपरोक्त विधियों का चयन किया जाना चाहिए।
नमूना निरीक्षण, रिकॉर्डिंग और रिपोर्टिंग आवश्यकताएँ
1. नमूना प्राप्त करने के बाद, निरीक्षण कक्ष पहले एक उपस्थिति निरीक्षण करेगा और तुरंत राष्ट्रीय मानक निरीक्षण विधियों के अनुसार निरीक्षण करेगा। निरीक्षण प्रक्रिया के दौरान, सड़न रोकनेवाला संचालन सावधानी से, जिम्मेदारी से और सख्ती से किया जाना चाहिए ताकि इससे बचा जा सकेमाइक्रोबियल परीक्षण परिणामपर्यावरण में प्रदूषण.
2. नमूना निरीक्षण प्रक्रिया के दौरान उपयोग की जाने वाली विधियां, घटित घटनाएं और परिणाम आदि को परिणामों के विश्लेषण और निर्णय के आधार के रूप में लिखित परीक्षण रिकॉर्ड में लिखा जाना चाहिए। रिकॉर्ड विस्तृत, स्पष्ट, प्रामाणिक, वस्तुनिष्ठ होने चाहिए और उन्हें बदला या जाली नहीं बनाया जाना चाहिए।
एसेप्टिक ऑपरेशन आवश्यकताएँ:
1. बैक्टीरिया का टीका लगाते समय आपको काम के कपड़े और काम की टोपी पहननी चाहिए।
2. भोजन के नमूनों का टीकाकरण करते समय, विशेष काम के कपड़े, टोपी और चप्पलें पहननी चाहिए, जिन्हें बाँझ कमरे के बफर रूम में रखा जाना चाहिए और काम से पहले यूवी कीटाणुशोधन के बाद उपयोग किया जाना चाहिए।
3. भोजन के नमूनों का टीकाकरण करते समय, बाँझ कमरे में प्रवेश करने से पहले अपने हाथों को साबुन से धोएं, और फिर 75% अल्कोहल कॉटन बॉल से अपने हाथों को साफ करें।
4. टीकाकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले स्ट्रॉ, फ्लैट डिश और कल्चर मीडिया को कीटाणुरहित और कीटाणुरहित किया जाना चाहिए। अप्रयुक्त कंटेनरों को पैकेज खोलने के बाद अप्रयुक्त नहीं छोड़ा जाना चाहिए। उपयोग से पहले धातु के बर्तनों को 95% अल्कोहल के साथ तीन बार ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए या जलाया जाना चाहिए।
5. पुआल को पैकेज से बाहर निकालते समय, पुआल की नोक खुले भागों को नहीं छूनी चाहिए। टेस्ट ट्यूब या प्लेट को टीका लगाने के लिए पुआल का उपयोग करते समय, पुआल की नोक को टेस्ट ट्यूब या प्लेट के किनारे को नहीं छूना चाहिए।
6. नमूनों का टीकाकरण और बैक्टीरिया का स्थानांतरण अल्कोहल लैंप के सामने किया जाना चाहिए। बैक्टीरिया या नमूनों का टीकाकरण करते समय, पुआल को पैकेज से बाहर निकालने और टेस्ट ट्यूब स्टॉपर खोलने के बाद लौ द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
7. बैक्टीरिया का टीका लगाने से पहले, टीका लूप और सुई के सभी धातु के तारों को लौ से जला देना चाहिए, और यदि आवश्यक हो, तो लूप, सुई और रॉड के बीच के कनेक्शन को जला देना चाहिए। तपेदिक बैक्टीरिया और विषैले बैक्टीरिया को टीका लगाने के लिए इनोक्यूलेशन लूप को उबलते पानी में 5 मिनट तक उबाला जाना चाहिए, और फिर आंच से जला देना चाहिए।
8. बैक्टीरिया के तरल पदार्थ या नमूनों को स्ट्रॉ से चूसते समय, इसे चूसने के लिए संबंधित रबर टिप का उपयोग करें, और इसे सीधे अपने मुंह से न चूसें।
बाँझ कमरे के उपयोग की आवश्यकताएँ:
1. स्टेराइल रूम के बाहर की ओर जाने वाली खिड़कियाँ डबल - शीशे वाली और सीलबंद होनी चाहिए। इन्हें मनमर्जी से नहीं खोला जाना चाहिए। स्टेराइल रूम के आकार के अनुरूप एक बफर रूम और स्लाइडिंग दरवाजा होना चाहिए। 0.5~0.7m2 की एक छोटी खिड़की भी होनी चाहिए। बाँझ कमरे में प्रवेश करने के बाद वस्तुओं को पारित करने की तैयारी में।
2. कीटाणुरहित कमरे को साफ रखना चाहिए। काम के बाद, इसे 2% से 3% क्रेसोल साबुन के घोल से कीटाणुरहित किया जाना चाहिए, काम की सतह को पोंछना चाहिए, और प्रयोग से संबंधित वस्तुओं को संग्रहीत नहीं किया जाना चाहिए।
3. उपयोग से पहले और बाद में स्टेराइल रूम का दरवाजा कसकर बंद कर देना चाहिए और पराबैंगनी लैंप चालू कर देना चाहिए। यदि कीटाणुशोधन के लिए एक इनडोर निलंबित पराबैंगनी लैंप का उपयोग किया जाता है, तो 30W पराबैंगनी लैंप की आवश्यकता होती है। दूरी 1.0 मीटर है, और विकिरण का समय 30 मिनट से कम नहीं है। पराबैंगनी लैंप का उपयोग करते समय, क्षति से बचने के लिए सीधे पराबैंगनी प्रकाश के तहत संचालन पर ध्यान देना चाहिए। पराबैंगनी प्रवेश के प्रभाव को कम करने के लिए धूल और ग्रीस को हटाने के लिए लैंप को हर दो सप्ताह में अल्कोहल कॉटन बॉल से धीरे से पोंछना चाहिए।
4. खाद्य नमूनों को संसाधित और टीका लगाते समय, ऑपरेशन के लिए बाँझ कमरे में प्रवेश करें और उन्हें इच्छानुसार प्रवेश करने या बाहर निकलने की अनुमति नहीं है। यदि वस्तुओं को आगे बढ़ाने की आवश्यकता है, तो उन्हें छोटी खिड़की से पारित किया जा सकता है।
5. यदि स्टेराइल रूम में एयर कंडीशनिंग स्थापित करने की आवश्यकता है, तो एक फ़िल्टरिंग डिवाइस होना चाहिए।
कीटाणुशोधन और बंध्याकरण आवश्यकताएँ
कांच के बर्तन, धातु के बर्तन और संस्कृति मीडिया के लिए उपयोग किया जाता हैसूक्ष्मजीवविज्ञानी परीक्षण, दूषित और टीकाकृत संस्कृतियाँ, आदि को उपयोग से पहले निष्फल किया जाना चाहिए। सूखी गर्मी और नम गर्मी दबाव भाप नसबंदी के तरीके।
1. नसबंदी से पहले तैयारी
(1) जिन सभी वस्तुओं को कीटाणुरहित करने की आवश्यकता है उन्हें पहले धोया और सुखाया जाना चाहिए। कांच के बर्तन जैसे स्ट्रॉ और फ्लैट बर्तनों को कागज के साथ कसकर पैक किया जाना चाहिए। यदि धातु ट्यूबों का उपयोग किया जाता है, तो उन पर वेंटिलेशन छेद खोले जाने चाहिए।
(2) कल्चर माध्यम वाले त्रिकोणीय फ्लास्क के स्टॉपर को कागज में लपेटें, टेस्ट ट्यूब को ढकें, और सिरिंज के कोर को बाहर निकालें, और इसे धुंध से लपेटें।
2. स्थापित करें
(1) ड्राई हीट स्टरलाइज़र: सामान बहुत ज्यादा भरा हुआ नहीं होना चाहिए और बॉक्स की चार दीवारों को नहीं छूना चाहिए।
(2) बड़ा हाई-प्रेशर स्टीम कुकर: स्टरलाइज़्ड वस्तुओं को रखें, उन्हें अलग से लपेटें, और सीधे स्टरलाइज़ेशन सिलेंडर में डालें। सामान बहुत ज़्यादा न रखें.
3. उपकरण निरीक्षण
(1) जांचें कि क्या दरवाज़ा स्विच लचीला है, क्या रबर की अंगूठी क्षतिग्रस्त है और क्या यह सपाट है।
(2) जाँच करें कि भाप समाप्त होने पर दबाव नापने का यंत्र शून्य स्थिति में रहता है या नहीं, दरवाज़ा और ढक्कन बंद करें, भाप या गर्मी को हवा दें, और देखें कि क्या हवा का रिसाव हो रहा है, क्या दबाव नापने का यंत्र और थर्मामीटर द्वारा चिह्नित स्थितियाँ मेल खाती हैं, और क्या पाइपलाइन अवरुद्ध है।
(3) स्वचालित इलेक्ट्रॉनिक प्रोग्राम नियंत्रण उपकरणों वाले स्टरलाइज़र के लिए, उपयोग से पहले निर्दिष्ट प्रोग्राम की जांच की जानी चाहिए कि यह स्टरलाइज़ेशन की आवश्यकताओं को पूरा करता है या नहीं।
4. बंध्याकरण उपचार
(1) सूखी गर्मी नसबंदी विधि:
यह विधि उन वस्तुओं के लिए उपयुक्त है जो शुष्क गर्मी की स्थिति में क्षतिग्रस्त, ख़राब या वाष्पित नहीं होती हैं। इसका उपयोग आमतौर पर कांच के बर्तनों, धातु उत्पादों, सिरेमिक उत्पादों आदि को स्टरलाइज़ करने के लिए किया जाता है।
①उपकरणों और बर्तनों को सुखाने/बेकिंग से पहले धोना चाहिए ताकि सतह पर लगी गंदगी को कार्बनीकृत होने से बचाया जा सके।
② स्टरलाइज़ेशन के दौरान, वस्तुओं को ज़्यादा भीड़ नहीं देनी चाहिए, सीधे बॉक्स के नीचे और दीवार से संपर्क न करें, और वस्तुओं के बीच अंतराल छोड़ दें।
③ स्टरलाइज़ेशन के दौरान, दरवाज़ा कसकर बंद करें, बिजली की आपूर्ति कनेक्ट करें, स्टरलाइज़र में ठंडी हवा को हटाने के लिए निकास छेद को लगभग 30 मिनट के लिए खोलें, तापमान 160 डिग्री सेल्सियस तक बढ़ने पर संकेतक प्रकाश को समायोजित करें और इसे 1.5 से 2 घंटे तक बनाए रखें।
④नसबंदी पूरी होने के बाद या तापमान बढ़ने की प्रक्रिया के दौरान, दरवाजा 60°C से नीचे खोला जाना चाहिए।
(2) पोर्टेबल प्रेशर कुकर या वर्टिकल प्रेशर स्टीम स्टरलाइज़र का उपयोग करते समय निम्नलिखित चरणों का पालन किया जाना चाहिए:
① पोर्टेबल प्रेशर कुकर की मुख्य बॉडी में 3 लीटर पानी और वर्टिकल प्रेशर कुकर में 16 लीटर पानी डालें (पुन: उपयोग करने पर पानी की मात्रा को फिर से भरना चाहिए, और यदि पानी गंदला हो जाए तो उसे बदलना होगा);
② पोर्टेबल प्रेशर कुकर के लिए, शीर्ष कवर पर निकास पाइप को स्टरलाइज़ेशन बैरल की भीतरी दीवार पर वर्गाकार ट्यूब में डालें (बिना होज़ वाले या जंग लगे और टूटे हुए होज़ वाले स्टेरलाइज़र का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए);
③ हवा के रिसाव को रोकने के लिए शीर्ष कवर को ढकें और कसकर कस लें; स्टरलाइज़र को गर्म करने के लिए आग के स्रोत पर रखें, ऊर्ध्वाधर प्रेशर कुकर की शक्ति चालू करें, और हवा को बाहर निकालने के लिए शीर्ष कवर पर निकास वाल्व खोलें (पानी उबलने के बाद 10 से 15 मिनट के लिए हवा को बाहर निकालें);
④ भाप के दबाव को निर्दिष्ट आवश्यकताओं तक बढ़ाने और इसे निर्दिष्ट समय तक बनाए रखने के लिए निकास वाल्व को बंद करें (निष्फल वस्तुओं की प्रकृति और प्रासंगिक परिस्थितियों के आधार पर);
⑤ निर्दिष्ट समय पूरा होने के बाद, जिन वस्तुओं को सुखाने की आवश्यकता है, भाप निकालने के लिए तुरंत निकास वाल्व खोलें। जब दबाव शून्य हो जाए, तो इसे प्राकृतिक रूप से 60°C तक ठंडा करें और फिर वस्तुओं को बाहर निकालने के लिए ढक्कन खोलें। यदि यह एक तरल वस्तु है, तो निकास वाल्व न खोलें। बर्तन को गर्मी स्रोत से तुरंत हटा दिया जाना चाहिए और प्राकृतिक रूप से ठंडा होने दिया जाना चाहिए जब तक कि दबाव शून्य न हो जाए और सामग्री को बाहर निकालने के लिए ढक्कन खोलने से पहले तापमान 60 डिग्री सेल्सियस से नीचे न चला जाए, ताकि तरल पदार्थ के अचानक विघटन को हिंसक रूप से उबलने या कंटेनर के विस्फोट से रोका जा सके।
(3) क्षैतिज प्रेशर कुकर स्टीम स्टरलाइज़र का उपयोग करने के लिए निम्नलिखित चरणों का पालन करें:
① पॉट के दरवाजे को कसकर बंद करें, एयर इनलेट वाल्व खोलें, प्रीहीटिंग के लिए मेजेनाइन में भाप डालें, और मेजेनाइन में ठंडी हवा स्वचालित रूप से एयर बैरियर के माध्यम से डिस्चार्ज हो जाएगी;
② इंटरलेयर के पूर्व निर्धारित तापमान तक पहुंचने के बाद, पॉट चैम्बर के एयर इनलेट वाल्व को खोलें, भाप को पॉट चैम्बर में डालें, और पॉट चैम्बर में ठंडी हवा को पॉट चैम्बर एयर अरेस्टर के माध्यम से स्वचालित रूप से छुट्टी दे दी जाएगी;
③जब पॉट चैम्बर में दबाव और तापमान निर्दिष्ट दबाव तक पहुंच जाए, तो इसे स्थिर रखने के लिए एयर इनलेट वाल्व को समायोजित करें;
④ सामान बाहर निकालने के लिए दरवाजा खोलने से पहले तापमान को प्राकृतिक या कृत्रिम रूप से 60℃ तक ठंडा करें। अचानक दबाव गिरने, तरल के हिंसक उबलने या कंटेनर के विस्फोट को रोकने के लिए तीव्र भाप निर्वहन विधि का उपयोग न करें;
⑤ स्वचालित प्रोग्राम - नियंत्रित दबाव भाप स्टरलाइज़र का उपयोग करते समय, वस्तुओं को रखने और दरवाजे को कसकर बंद करने के बाद, वस्तुओं की श्रेणी के अनुसार संबंधित स्विच को दबाया जाना चाहिए ताकि आवश्यक प्रक्रियाओं के अनुसार नसबंदी स्वचालित रूप से की जा सके। नसबंदी के दौरान, तापमान और समय रिकॉर्ड करने के लिए संलग्न उपकरण का उपयोग किया जाना चाहिए। भविष्य के संदर्भ के लिए, परिचालन आवश्यकताएँ सख्ती से निर्माता के निर्देशों के अनुसार होनी चाहिए;
5. बंध्याकरण तापमान और समय
(1) ड्राई हीट स्टरलाइज़र का स्टरलाइज़ेशन तापमान 160℃, 1.5~2 घंटे है।
(2) प्रेशर स्टीम स्टरलाइज़र का स्टरलाइज़ेशन तापमान और समय
आंतरायिक नसबंदी विधि
1. बंध्याकरण विधि:
बिना दबाव के भाप स्टरलाइज़ेशन का उपयोग करें। कुछ पदार्थ उच्च दबाव वाली भाप स्टरलाइज़ेशन से आसानी से नष्ट हो जाते हैं, इसलिए इस विधि का उपयोग स्टरलाइज़ेशन के लिए किया जा सकता है।
(1) विसंक्रमित की जाने वाली वस्तुओं को बर्तन में रखें, ऊपरी ढक्कन को ढकें, नाली का आउटलेट खोलें, और बर्तन में बचा हुआ पानी निकाल दें।
(2) नाली के आउटलेट को बंद करें, हवा के प्रवेश द्वार को खोलें, और आवश्यकतानुसार 10 से 20 मिनट के लिए कीटाणुरहित करें।
(3) स्टरलाइज़ेशन पूरा होने के बाद, एयर इनलेट दरवाज़ा बंद करें, वस्तुओं को बाहर निकालें और कमरे के तापमान तक ठंडा होने की प्रतीक्षा करें, उन्हें रात भर 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें, और अगले दिन उपरोक्त विधि के अनुसार स्टरलाइज़ करना जारी रखें। नसबंदी के उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए ऐसा तीन बार करें।
2. सीरम कोगुलेटर का उपयोग कैसे करें:
जब संस्कृति माध्यम में सीरम या अंडे जैसे विशेष तत्व होते हैं, तो उच्च गर्मी इसके पोषक तत्वों को नष्ट कर देगी। इसलिए, कम तापमान का उपयोग सीरम को जमाने और नसबंदी उद्देश्यों को प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है:
(1) इस विधि द्वारा विसंक्रमित सीरम का उपयोग एलिकोट के लिए करते समय, सड़न रोकनेवाला संचालन का सख्ती से पालन किया जाना चाहिए, और उपयोग से पहले टेस्ट ट्यूब और प्लेटों को भी विसंक्रमित किया जाना चाहिए;
(2) आवश्यकतानुसार कल्चर माध्यम को ढलान या ऊंची परत में बनाएं। पर्याप्त पानी डालने के बाद, बिजली की आपूर्ति कनेक्ट करें, तापमान को एक घंटे के लिए 75~90°C तक बढ़ाएं और फिर इसे स्टरलाइज़ करें। इसे रात भर 37°C इनक्यूबेटर में रखें, और फिर इसे तीन बार स्टरलाइज़ करें।
3. उबालें और कीटाणुरहित करें:
आप उबलते बर्तन या उबलते स्टरलाइज़र का उपयोग कर सकते हैं। - पानी उबलने के बाद इसे 5 से 15 मिनट तक उबालें. आप पानी में 2% कार्बोलिक एसिड भी मिला सकते हैं और इसे 5 मिनट तक उबाल सकते हैं। स्टरलाइज़ेशन के उद्देश्य को प्राप्त करने के लिए 0.02% फॉर्मेल्डिहाइड मिलाएं और इसे 80°C पर 60 मिनट तक उबालें। हालाँकि, उबालकर नसबंदी हासिल की जा सकती है। एन्हांसर का उपयोग करते समय, वस्तुओं की संक्षारण क्षमता पर ध्यान देना चाहिए।
4. बंध्याकरण उपचार:
नसबंदी के बाद, वस्तुएं सामान्य परिस्थितियों में पहले से ही रोगाणुहीन होती हैं। पुन: संदूषण से बचने के लिए स्टरलाइज़र से बाहर निकालते समय उनका सावधानीपूर्वक निरीक्षण किया जाना चाहिए और रखा जाना चाहिए;
(1) वस्तुओं को बाहर निकालें और पैकेजिंग की अखंडता की तुरंत जांच करें। यदि क्षति होती है या टैम्पोन हटा दिया जाता है, तो इसे बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है;
(2) बाहर निकाली गई वस्तुओं को बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है यदि उनकी पैकेजिंग स्पष्ट रूप से पानी में भिगोई गई हो;
(3) कल्चर माध्यम या अभिकर्मकों की जाँच यह देखने के लिए की जानी चाहिए कि क्या वे नसबंदी के बाद रंग या अवस्था से मिलते हैं। जो आवश्यकताओं को पूरा नहीं करते उन्हें त्याग दिया जाना चाहिए;
(4) खुले-बंद कंटेनरों के लिए, उन्हें बाहर निकालते समय स्क्रीन के छेद बंद होने चाहिए;
(5) यदि हटाई गई वस्तुएं जमीन पर गिर जाती हैं, किसी अशुद्ध स्थान पर रख दी जाती हैं, या पानी से दागदार हो जाती हैं, तो उन्हें दूषित माना जाता है और उन्हें बाँझ वस्तुओं के रूप में उपयोग नहीं किया जा सकता है;
(6) निकाली गई योग्य निष्फल वस्तुओं को भंडारण कक्ष या धूलरोधी कैबिनेट में संग्रहित किया जाना चाहिए, और उन्हें असंक्रमित वस्तुओं के साथ मिलाना सख्त वर्जित है;
(7) सभी योग्य वस्तुओं पर नसबंदी तिथि और समाप्ति तिथि अंकित होनी चाहिए;
(8) स्टरलाइज़ेशन प्रसंस्करण के प्रत्येक बैच के पूरा होने के बाद, स्टरलाइज़्ड उत्पादों का नाम, मात्रा, तापमान, समय और ऑपरेटर रिकॉर्ड करें।
विषाक्त और जीवाणु अपशिष्ट के उपचार के लिए आवश्यकताएँ
सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगों में प्रयुक्त प्रायोगिक उपकरण और कल्चर को कीटाणुशोधन के बिना प्रयोगशाला से बाहर नहीं निकाला जाना चाहिए।
1. संवर्धित दूषित सामग्री और कचरे को तंग कंटेनरों या तार की टोकरियों में रखा जाना चाहिए और निर्दिष्ट स्थानों पर केंद्रीय रूप से संग्रहीत किया जाना चाहिए जब तक कि वे समान रूप से ऑटोक्लेव्ड न हो जाएं।
2. सूक्ष्मजीवों द्वारा दूषित कल्चर को 30 मिनट के लिए 121°C पर ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए।
3. उपयोग के बाद, दूषित भूसे को 5% क्रेओल साबुन समाधान या कार्बोलिक एसिड समाधान में रखा जाना चाहिए, कम से कम 24 घंटे तक भिगोया जाना चाहिए (कीटाणुनाशक तरल भिगोने की ऊंचाई से कम नहीं होना चाहिए), और फिर 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
4. दागों को दागने और धोने के लिए तरल को आम तौर पर सीधे सीवर में बहाया जा सकता है। विषैले जीवाणुओं के लिए धोने वाले द्रव को बीकर में प्रवाहित किया जाना चाहिए और सीवर में डालने से पहले उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए। दागदार स्लाइडों को 5% क्रेसोल साबुन के घोल में डाला जाता है। 24 घंटे तक पानी में भिगोने के बाद उबालकर धो लें। एग्लूटीनेशन परीक्षण के लिए उपयोग की जाने वाली स्लाइड या डिश को ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए और फिर धोया जाना चाहिए।
5. कल्चर को तोड़ने के बाद तुरंत दूषित हिस्सों पर 5% क्रेसोल साबुन के घोल या कार्बोलिक एसिड के घोल का छिड़काव करें और आधे घंटे तक भिगोकर रखें और फिर साफ कर लें।
हिंसक परीक्षणों के लिए पहने जाने वाले दूषित काम के कपड़े या काम के कपड़े, टोपी, मास्क आदि को विशेष कीटाणुशोधन बैग में रखा जाना चाहिए और धोने से पहले उच्च दबाव द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए।
मध्यम तैयारी आवश्यकताएँ
संस्कृति माध्यम की तैयारी की गुणवत्ता सीधे सूक्ष्मजीवों के विकास को प्रभावित करेगी, क्योंकि विभिन्न सूक्ष्मजीवों की अलग-अलग पोषण संबंधी आवश्यकताएं और अलग-अलग संस्कृति उद्देश्य होते हैं। विभिन्न संस्कृति मीडिया के लिए तैयारी आवश्यकताएँ इस प्रकार हैं:
1. सामग्री को मध्यम सूत्र के अनुसार तौलें, और फिर उन्हें आसुत जल में घोलें। उपयोग से पहले लागू अभिकर्मकों और दवाओं की गुणवत्ता का निरीक्षण किया जाना चाहिए।
2. पीएच माप और समायोजन: पीएच माप तब किया जाना चाहिए जब संस्कृति माध्यम को कमरे के तापमान तक ठंडा किया जाता है, क्योंकि गर्म या ठंडे परिस्थितियों में पीएच में एक निश्चित अंतर होता है। जब माप पूरा हो जाए तो गणना की गई मात्रा के अनुसार क्षार या अम्ल डालें और अच्छी तरह मिलाएँ। फिर से परीक्षण किया जाना चाहिए. संस्कृति माध्यम का पीएच मान सटीक होना चाहिए, अन्यथा यह सूक्ष्मजीवों के विकास को प्रभावित करेगा या परिणामों के अवलोकन को प्रभावित करेगा। हालाँकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि उच्च दबाव नसबंदी कुछ संस्कृति मीडिया के पीएच की कमी या वृद्धि को प्रभावित कर सकती है, इसलिए संस्कृति माध्यम की गुणवत्ता को प्रभावित करने से बचने के लिए बहुत अधिक दबाव या बहुत बार नसबंदी करने की सलाह नहीं दी जाती है। संकेतक, सोडियम डीऑक्सीकोलेट, एगर आदि आमतौर पर पीएच को समायोजित करने के बाद इसे जोड़ते हैं।
3. जीवाणु विकास के अवलोकन को सुविधाजनक बनाने के लिए संवर्धन माध्यम को साफ़ रखने की आवश्यकता है। कल्चर माध्यम को गर्म करने और उबालने के बाद, तलछट को हटाने के लिए इसे अवशोषक कपास या फलालैन से फ़िल्टर किया जा सकता है। यदि आवश्यक हो, तो इसे अंडे की सफेदी से स्पष्ट किया जा सकता है। उपयोग की जाने वाली अगर स्ट्रिप्स को पहले से धोया और सुखाया जाना चाहिए। उपयोग से पहले, अगर में अशुद्धियों के कारण पारदर्शिता को प्रभावित होने से बचें।
4. कल्चर माध्यम को रखने के लिए लोहे, तांबे और अन्य कंटेनरों का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए। स्वच्छ तटस्थ कठोर कांच के कंटेनरों का उपयोग करना बेहतर है।
5. संवर्धन माध्यम के बंध्याकरण से न केवल पूर्ण बंध्याकरण का उद्देश्य प्राप्त होना चाहिए, बल्कि इस बात पर भी ध्यान देना चाहिए कि गर्म करने के कारण इसके पोषण मूल्य में कमी न हो। आम तौर पर 15 मिनट के लिए 121°C पर्याप्त होता है। उच्च ताप के प्रति असहिष्णु पदार्थ जैसे शर्करा और सीरम, जिलेटिन आदि युक्त कल्चर मीडिया को कम तापमान या आंतरायिक विधि द्वारा निष्फल किया जाना चाहिए। कुछ अभिकर्मकों को गर्म नहीं किया जा सकता है, जैसे पोटेशियम टेलराइट, अंडे की जर्दी, टीटीसी, एंटीबायोटिक्स इत्यादि, मूल एगर को ऑटोक्लेव्ड करने के बाद लगभग 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाना चाहिए और फिर जोड़ा जाना चाहिए;
6. कल्चर मीडिया का प्रत्येक बैच तैयार होने के बाद, एक बाँझ विकास परीक्षण और परीक्षण किए गए उपभेदों का विकास परीक्षण किया जाना चाहिए। यदि यह एक जैव रासायनिक संस्कृति माध्यम है, तो टीकाकरण और संस्कृति के लिए मानक जीवाणु उपभेदों का उपयोग करें, और जैव रासायनिक प्रतिक्रिया परिणामों का निरीक्षण करें। इसे सामान्य प्रतिक्रिया दिखानी चाहिए. कल्चर माध्यम को बहुत अधिक समय तक संग्रहित नहीं किया जाना चाहिए। यदि आवश्यक हो, तो इसे 4°C रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जा सकता है।
7. वर्तमान समय में शुष्क संस्कृति माध्यम कई प्रकार के हैं। प्रत्येक बैच को विकास परीक्षण या जैव रासायनिक प्रतिक्रिया अवलोकन के लिए मानक उपभेदों का उपयोग करने की आवश्यकता होती है। संबंधित उपभेदों का विकास परीक्षण अच्छा होने के बाद ही विभिन्न संस्कृति माध्यमों का उपयोग किया जा सकता है। नई खरीदी गई या लंबे समय से संग्रहीत सूखी वस्तुओं का उपयोग किया जा सकता है। इसे तैयार करते समय कल्चर माध्यम का पीएच भी मापा जाना चाहिए, और उत्पाद निर्देशों के अनुसार खुराक और विधि का पालन किया जाना चाहिए।
8. तैयार संस्कृति मीडिया के प्रत्येक बैच में उपयोग किए जाने वाले रासायनिक अभिकर्मकों, नसबंदी की स्थिति, तनाव वृद्धि परीक्षण के परिणाम और उत्पादन कर्मियों को जांच के लिए दर्ज किया जाना चाहिए।
नमूना संग्रह और प्रसंस्करण आवश्यकताएँ
1. एकत्र किए गए निरीक्षण नमूने प्रतिनिधि होने चाहिए। नमूना लेते समय, कच्चे माल, प्रसंस्करण, परिवहन, भंडारण के तरीकों और भोजन के बैच की स्थितियों, आसपास के पर्यावरणीय स्वास्थ्य स्थितियों आदि की विस्तार से जांच की जानी चाहिए ताकि यह जांचा जा सके कि संदूषण के कोई स्रोत हैं या नहीं।
2. भोजन के प्रकार और मात्रा के अनुसार नमूनाकरण मात्रा और विधि मानक निरीक्षण विधियों की आवश्यकताओं के अनुसार की जानी चाहिए।
3. नमूना लेते समय सड़न रोकनेवाला ऑपरेशन पर ध्यान दें, और पर्यावरण में माइक्रोबियल संदूषण से बचने के लिए कंटेनर को निष्फल किया जाना चाहिए। कंटेनर को क्रेओसल साबुन के घोल से कीटाणुरहित नहीं किया जाना चाहिए, क्लोरमेथिओनिन, अल्कोहल और अन्य कीटाणुनाशकों से कीटाणुरहित नहीं किया जाना चाहिए, और इसमें ऐसे कीटाणुनाशक या एंटीबायोटिक्स नहीं होने चाहिए। नमूने में सूक्ष्मजीवों को मारने से बचने के लिए, उपयोग की जाने वाली कैंची, चाकू और चम्मच को भी उपयोग से पहले निष्फल किया जाना चाहिए।
4. नमूने एकत्र करने के तुरंत बाद निरीक्षण के लिए निरीक्षण कक्ष में भेजे जाने चाहिए। निरीक्षण प्रक्रिया आम तौर पर 3 घंटे से अधिक नहीं होती है। यदि दूरी लंबी है, तो इसे 1~5℃ के वातावरण में संग्रहित किया जा सकता है। यदि इसे जमाना हो तो इसे जमी हुई अवस्था में ही रखना चाहिए। निरीक्षण हेतु प्रस्तुत करें।
5. नमूना प्राप्त करने के बाद, निरीक्षण कक्ष इसे पंजीकृत करेगा (नमूना नाम, निरीक्षण के लिए इकाई, मात्रा, तिथि, संख्या, आदि) और नमूने की उपस्थिति का निरीक्षण करेगा। यदि निम्नलिखित में से कोई भी स्थिति पाई जाती है, तो निरीक्षण से इनकार किया जा सकता है:
(1) विशेष उच्च दबाव, उबालने या अन्य तरीकों से निष्फल किए गए नमूने मूल भोजन का प्रतिनिधित्व करने में अपना महत्व खो देंगे;
(2) भोजन की बोतलें और बैग खुल गए हैं, पका हुआ मांस और उसके उत्पाद, पके हुए मुर्गे और अन्य खाद्य पदार्थ टूट गए हैं और अधूरे हैं, यानी, मूल भोजन का आकार खो गया है (खाद्य विषाक्तता के नमूनों को छोड़कर);
(3) नमूना मात्रा आवश्यकतानुसार अपर्याप्त है;
निरीक्षण के लिए प्रस्तुत किए गए नमूनों के लिए जो आवश्यकताओं को पूरा करते हैं, निरीक्षण कक्ष को उन्हें प्राप्त करने के तुरंत बाद निरीक्षण करना चाहिए। यदि शर्तें पूरी नहीं होती हैं, तो उन्हें 4°C रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाना चाहिए, समय पर स्थितियां बनाने के लिए तैयार होना चाहिए और फिर निरीक्षण करना चाहिए।
6. नमूनों का निरीक्षण करते समय, उनके विभिन्न गुणों के अनुसार उचित प्रसंस्करण करें।
(1) तरल नमूनों को टीका लगाते समय, उन्हें अच्छी तरह से मिलाया जाना चाहिए और मात्रा के अनुसार टीका लगाया जाना चाहिए।
(2) ठोस नमूनों के लिए, 25 ग्राम अलग-अलग हिस्सों को काटने के लिए एक निष्फल चाकू का उपयोग करें, उन्हें 225 एमएल निष्फल खारा या अन्य समाधान में रखें, क्रश करें और एक होमोजेनाइज़र के साथ मिलाएं, और मात्रा के अनुसार टीका लगाएं।
(3) भोजन की बोतलों और थैलियों को स्टरलाइज़ करके खोला जाना चाहिए, और टीकाकरण से पहले विशेषताओं के अनुसार उपरोक्त विधियों का चयन किया जाना चाहिए।
नमूना निरीक्षण, रिकॉर्डिंग और रिपोर्टिंग आवश्यकताएँ
1. नमूना प्राप्त करने के बाद, निरीक्षण कक्ष पहले एक उपस्थिति निरीक्षण करेगा और तुरंत राष्ट्रीय मानक निरीक्षण विधियों के अनुसार निरीक्षण करेगा। निरीक्षण प्रक्रिया के दौरान, सड़न रोकनेवाला संचालन सावधानी से, जिम्मेदारी से और सख्ती से किया जाना चाहिए ताकि इससे बचा जा सकेमाइक्रोबियल परीक्षण परिणामपर्यावरण में प्रदूषण.
2. नमूना निरीक्षण प्रक्रिया के दौरान उपयोग की जाने वाली विधियां, घटित घटनाएं और परिणाम आदि को परिणामों के विश्लेषण और निर्णय के आधार के रूप में लिखित परीक्षण रिकॉर्ड में लिखा जाना चाहिए। रिकॉर्ड विस्तृत, स्पष्ट, प्रामाणिक, वस्तुनिष्ठ होने चाहिए और उन्हें बदला या जाली नहीं बनाया जाना चाहिए।
