Ringkasan keperluan ujian mikrobiologi
2024-01-24 15:14:33
Keperluan dan langkah untukujian mikrobiologiadalah seperti berikut:
Keperluan operasi aseptik:
1. Anda mesti memakai pakaian kerja dan topi kerja semasa menyuntik bakteria.
2. Apabila menyuntik sampel makanan, pakaian kerja khas, topi dan selipar mesti dipakai, yang harus diletakkan di dalam bilik penampan bilik steril dan digunakan selepas pembasmian kuman UV sebelum bekerja.
3. Apabila menyuntik sampel makanan, basuh tangan anda dengan sabun sebelum memasuki bilik steril, dan kemudian lap tangan anda dengan kapas alkohol 75%.
4. Penyedut minuman, pinggan rata dan media kultur yang digunakan untuk inokulasi mestilah disterilkan dan disterilkan. Bekas yang tidak digunakan tidak boleh dibiarkan tidak digunakan selepas membuka bungkusan. Perkakas logam hendaklah diautoklaf atau dibakar tiga kali dengan alkohol 95% sebelum digunakan.
5. Apabila mengeluarkan straw dari bungkusan, hujung straw tidak boleh menyentuh bahagian yang terdedah. Apabila menggunakan straw untuk menyuntik tabung uji atau plat, hujung straw tidak boleh menyentuh tepi tabung uji atau plat.
6. Inokulasi sampel dan pemindahan bakteria mesti dilakukan di hadapan lampu alkohol. Apabila menyuntik bakteria atau sampel, straw mesti disterilkan dengan nyalaan selepas mengeluarkannya dari bungkusan dan membuka penyumbat tabung uji.
7. Sebelum menyuntik bakteria, semua wayar logam gelung inokulasi dan jarum hendaklah dibakar dengan api, dan jika perlu, sambungan antara gelung, jarum dan rod hendaklah dibakar. Gelung inokulasi untuk inokulasi bakteria tuberkulosis dan bakteria virulen hendaklah direbus dalam air mendidih selama 5 minit, dan kemudian dibakar dengan api.
8. Apabila menghisap cecair bakteria atau sampel dengan straw, gunakan hujung getah yang sepadan untuk menghisapnya, dan jangan sedut terus dengan mulut anda.
Keperluan penggunaan bilik steril:
1. Tingkap-tingkap yang menghala ke bahagian luar bilik steril hendaklah dilapisi kaca dan dimeteraikan. Mereka tidak boleh dibuka sesuka hati. Perlu ada bilik penampan dan pintu gelangsar yang sepadan dengan saiz bilik steril. Juga perlu ada tingkap kecil 0.5~0.7m2. Sebagai persediaan untuk menghantar barang selepas memasuki bilik steril.
2. Bilik steril hendaklah sentiasa bersih. Selepas bekerja, ia hendaklah dinyahjangkit dengan larutan sabun kresol 2% hingga 3%, permukaan kerja hendaklah disapu, dan barang yang tidak berkaitan dengan eksperimen tidak boleh disimpan.
3. Pintu bilik steril hendaklah ditutup rapat sebelum dan selepas digunakan, dan lampu ultraviolet hendaklah dihidupkan. Jika lampu ultraviolet terampai dalam bangunan digunakan untuk pembasmian kuman, lampu ultraviolet 30W diperlukan. Jaraknya ialah 1.0m, dan masa penyinaran tidak kurang daripada 30 minit. Apabila menggunakan lampu ultraviolet, perhatian harus diberikan untuk Beroperasi secara langsung di bawah cahaya ultraviolet untuk mengelakkan kerosakan. Lampu perlu disapu perlahan-lahan dengan bola kapas alkohol setiap dua minggu untuk mengeluarkan habuk dan gris untuk mengurangkan kesan penembusan ultraviolet.
4. Semasa memproses dan menyuntik spesimen makanan, masuk ke bilik steril untuk operasi dan tidak dibenarkan masuk atau keluar sesuka hati. Jika item perlu diteruskan, ia boleh dilalui melalui tingkap kecil.
5. Jika penyaman udara perlu dipasang di dalam bilik steril, perlu ada alat penapisan.
Keperluan Pembasmian Kuman dan Pensterilan
Barang kaca, perkakas logam dan media kultur yang digunakan untukujian mikrobiologi, kultur tercemar dan inokulasi, dsb. mesti disterilkan sebelum digunakan. Kaedah pensterilan wap tekanan haba kering dan lembap.
1. Penyediaan sebelum pensterilan
(1) Semua barang yang perlu disterilkan hendaklah dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Barangan kaca seperti penyedut minuman dan pinggan mangkuk leper hendaklah padat dengan kertas. Jika tiub logam digunakan, lubang pengudaraan padanya hendaklah dibuka.
(2) Balut penyumbat kelalang segi tiga yang mengandungi medium kultur dalam kertas, tutup tabung uji, dan tarik keluar inti picagari, dan balut dengan kain kasa.
2. pasang
(1) Pensteril haba kering: Barangan tidak boleh terlalu sesak dan tidak boleh menyentuh empat dinding kotak.
(2) Pemasak wap tekanan tinggi yang besar: Letakkan barang yang telah disterilkan, bungkusnya secara berasingan, dan masukkan terus ke dalam silinder pensterilan. Jangan terlalu sesak barang.
3. Pemeriksaan peralatan
(1) Periksa sama ada suis pintu adalah fleksibel, sama ada gelang getah rosak dan sama ada ia rata.
(2) Periksa sama ada tolok tekanan kekal pada kedudukan sifar apabila stim habis, tutup pintu dan tutup, ventilasi stim atau haba, dan perhatikan sama ada terdapat kebocoran udara, sama ada keadaan yang ditandakan oleh tolok tekanan dan termometer sepadan, dan sama ada saluran paip tersumbat.
(3) Untuk pensteril dengan peranti kawalan program elektronik automatik, atur cara yang dinyatakan hendaklah diperiksa sebelum digunakan untuk melihat sama ada ia memenuhi keperluan pensterilan.
4. Rawatan pensterilan
(1) Kaedah pensterilan haba kering:
Kaedah ini sesuai untuk item yang tidak rosak, merosot, atau sejat di bawah keadaan haba kering. Ia lebih biasa digunakan untuk mensterilkan barangan kaca, produk logam, produk seramik, dsb.
①Alat dan perkakas hendaklah dicuci sebelum dikeringkan-dibakar untuk mengelakkan kotoran yang melekat pada permukaan daripada berkarbonat.
② Semasa pensterilan, barang-barang tidak boleh terlalu sesak, jangan terus menyentuh bahagian bawah dan dinding kotak, dan biarkan celah antara item.
③ Semasa pensterilan, tutup pintu rapat-rapat, sambungkan bekalan kuasa, buka lubang ekzos selama kira-kira 30 minit untuk mengeluarkan udara sejuk dalam pensteril, laraskan lampu penunjuk apabila suhu meningkat kepada 160°C, dan simpan selama 1.5 hingga 2 jam.
④Selepas pensterilan selesai atau semasa proses kenaikan suhu, pintu mesti dibuka di bawah 60°C.
(2) Langkah berikut hendaklah diikuti apabila menggunakan periuk tekanan mudah alih atau pensteril stim tekanan menegak:
① Tambah 3L air ke badan utama periuk tekanan mudah alih, dan 16L air ke periuk tekanan menegak (jumlah air perlu diisi semula apabila digunakan semula, dan air perlu diganti jika ia menjadi keruh);
② Untuk periuk tekanan mudah alih, masukkan paip ekzos pada penutup atas ke dalam tiub segi empat sama pada dinding dalam tong pensterilan (pensteril tanpa hos atau hos yang berkarat dan retak tidak boleh digunakan);
③ Tutup penutup atas dan ketatkannya dengan ketat untuk mengelakkan kebocoran udara; letakkan pensteril pada sumber api untuk memanaskan, hidupkan kuasa periuk tekanan menegak, dan buka injap ekzos pada penutup atas untuk mengeluarkan udara (udara ekzos selama 10 hingga 15 minit selepas air mendidih) );
④Tutup injap ekzos untuk menaikkan tekanan stim kepada keperluan yang ditetapkan dan mengekalkannya untuk masa yang ditetapkan (bergantung pada jenis barang yang disterilkan dan keadaan yang berkaitan);
⑤ Selepas masa yang ditetapkan tercapai, untuk barang yang perlu dikeringkan, segera buka injap ekzos untuk mengeluarkan wap. Apabila tekanan kembali kepada sifar, sejukkan secara semula jadi kepada 60°C dan kemudian buka penutup untuk mengeluarkan item. Jika ia adalah barang cecair, jangan buka injap ekzos. Periuk hendaklah dikeluarkan dari sumber haba serta-merta dan dibiarkan sejuk secara semula jadi sehingga tekanan kembali kepada sifar dan suhu turun di bawah 60°C sebelum membuka penutup untuk mengeluarkan kandungannya bagi mengelakkan penyahmampatan mendadak cecair daripada mendidih atau letupan ganas bekas.
(3) Ikuti langkah berikut untuk menggunakan pensteril stim periuk tekanan mendatar:
①Tutup pintu periuk dengan ketat, buka injap masuk udara, masukkan wap ke dalam mezanin untuk pemanasan awal, dan udara sejuk di mezanin akan dilepaskan secara automatik melalui penghalang udara;
②Selepas interlayer mencapai suhu yang telah ditetapkan, buka injap masuk udara ruang periuk, masukkan wap ke dalam ruang periuk, dan udara sejuk dalam ruang periuk akan dilepaskan secara automatik melalui penangkap udara ruang periuk;
③Apabila tekanan dan suhu dalam ruang periuk mencapai tekanan yang ditetapkan, laraskan injap masuk udara untuk memastikan ia tetap;
④ Sejukkan suhu secara semula jadi atau buatan kepada 60℃ sebelum membuka pintu untuk mengeluarkan barang. Jangan gunakan kaedah pelepasan wap pantas untuk mengelakkan penurunan tekanan secara tiba-tiba, cecair mendidih yang ganas atau letupan bekas;
⑤ Apabila menggunakan program automatik-pensterilan stim tekanan terkawal, selepas meletakkan item dan menutup pintu dengan ketat, suis yang sepadan hendaklah ditekan mengikut kategori item supaya pensterilan boleh dijalankan secara automatik mengikut prosedur yang diperlukan. Semasa pensterilan, instrumen yang dipasang mesti digunakan untuk merekodkan suhu dan masa. Untuk rujukan masa hadapan, keperluan operasi hendaklah mengikut arahan pengilang;
5. Suhu dan masa pensterilan
(1) Suhu pensterilan pensteril haba kering ialah 160℃, 1.5~2j.
(2) Suhu pensterilan dan masa pensterilan stim tekanan
Kaedah pensterilan sekejap-sekejap
1. Kaedah pensterilan:
Gunakan pensterilan wap tanpa tekanan. Sesetengah bahan mudah dimusnahkan oleh pensterilan wap tekanan tinggi, jadi kaedah ini boleh digunakan untuk pensterilan.
(1) Letakkan barang yang hendak disterilkan di dalam periuk, tutup penutup atas, buka saluran keluar longkang, dan toskan baki air di dalam periuk.
(2) Tutup saluran keluar saliran, buka pintu masuk udara, dan nyah kuman selama 10 hingga 20 minit mengikut keperluan.
(3) Selepas pensterilan selesai, tutup pintu masuk udara, keluarkan barang-barang dan tunggu sejuk ke suhu bilik, masukkannya ke dalam inkubator 37°C semalaman, dan teruskan sterilkan mengikut kaedah di atas pada keesokan harinya. Lakukan ini tiga kali untuk mencapai tujuan pensterilan.
2. Cara menggunakan koagulator serum:
Apabila medium kultur mengandungi bahan-bahan istimewa seperti serum atau telur, haba yang tinggi akan memusnahkan khasiatnya. Oleh itu, suhu rendah boleh digunakan untuk membekukan serum dan mencapai tujuan pensterilan:
(1) Apabila menggunakan serum yang disterilkan dengan kaedah ini kepada aliquot, operasi aseptik mesti diikuti dengan ketat, dan tabung uji dan plat juga mesti disterilkan sebelum digunakan;
(2) Jadikan medium kultur menjadi cerun atau lapisan tinggi mengikut keperluan. Selepas menambah air yang mencukupi, sambungkan bekalan kuasa, naikkan suhu kepada 75~90°C selama satu jam dan kemudian sterilkannya. Letakkannya dalam inkubator 37°C semalaman, dan kemudian sterilkannya tiga kali.
3. Rebus dan nyah kuman:
Anda boleh menggunakan periuk mendidih atau pensteril mendidih. Selepas air mendidih, rebus selama 5 hingga 15 minit. Anda juga boleh menambah 2% asid karbolik ke dalam air dan rebus selama 5 minit. Tambah 0.02% formaldehid dan rebus pada suhu 80°C selama 60 minit untuk mencapai tujuan pensterilan. Walau bagaimanapun, pensterilan mendidih boleh dicapai. Apabila menggunakan penambah, perhatian harus diberikan kepada kekakisan barang.
4. Rawatan pensterilan:
Selepas pensterilan, barangan sudah pun steril dalam keadaan biasa. Ia hendaklah diperiksa dengan teliti dan diletakkan apabila dikeluarkan daripada pensteril untuk mengelakkan pencemaran semula;
(1) Keluarkan barang dan semak integriti pembungkusan dengan segera. Jika terdapat kerosakan atau tampon dikeluarkan, ia tidak boleh digunakan sebagai barang steril;
(2) Barangan yang dibawa keluar tidak boleh digunakan sebagai barang steril jika bungkusannya jelas direndam dalam air;
(3) Medium kultur atau reagen hendaklah diperiksa untuk melihat sama ada ia memenuhi warna atau keadaan selepas pensterilan. Yang tidak memenuhi syarat hendaklah dibuang;
(4) Untuk bekas buka-tutup, lubang skrin hendaklah ditutup semasa mengeluarkannya;
(5) Jika barang yang dikeluarkan itu jatuh ke tanah, tersilap letak di tempat yang tidak bersih, atau dicemari dengan air, ia dianggap tercemar dan tidak boleh digunakan sebagai barang steril;
(6) Barangan steril yang layak dibawa keluar hendaklah disimpan di dalam bilik penyimpanan atau kabinet kalis habuk, dan dilarang sama sekali mencampurkannya dengan barang yang tidak disterilkan;
(7) Semua item yang layak hendaklah ditandakan dengan tarikh pensterilan dan tarikh luput;
(8) Selepas setiap kumpulan pemprosesan pensterilan selesai, rekodkan nama, kuantiti, suhu, masa, dan pengendali produk yang disterilkan.
Keperluan untuk rawatan sisa toksik dan bakteria
Peralatan dan kultur eksperimen yang digunakan dalam eksperimen mikrobiologi tidak boleh dibawa keluar dari makmal tanpa pembasmian kuman.
1. Bahan dan sisa tercemar yang dikultur hendaklah diletakkan di dalam bekas yang ketat atau bakul dawai dan disimpan secara berpusat di lokasi yang ditetapkan sehingga ia diautoklaf secara seragam.
2. Kultur yang tercemar oleh mikroorganisma mesti diautoklaf pada suhu 121°C selama 30 minit.
3. Selepas digunakan, penyedut minuman yang tercemar hendaklah diletakkan dalam larutan sabun kreol 5% atau larutan asid karbolik, direndam selama sekurang-kurangnya 24 jam (cecair pembasmi kuman tidak boleh lebih rendah daripada ketinggian rendaman), dan kemudian disterilkan dengan tekanan tinggi pada 121°C selama 30 minit.
4. Cecair untuk mengotorkan dan membilas calitan biasanya boleh disiram terus ke dalam pembetung. Cecair bilas untuk bakteria virulen mesti disiram dalam bikar dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dituangkan ke dalam pembetung. Slaid bernoda dimasukkan ke dalam larutan sabun kresol 5%. Selepas rendam dalam air selama 24 jam, rebus dan basuh. Slaid atau pinggan yang digunakan untuk ujian aglutinasi mesti diautoklaf dan kemudian dibasuh.
5. Selepas memecahkan biakan, segera sembur dan rendam bahagian yang tercemar dengan larutan sabun kresol 5% atau larutan asid karbolik, rendam selama setengah jam dan kemudian lap sehingga bersih.
Pakaian kerja atau pakaian kerja yang tercemar, topi, topeng, dsb. yang dipakai untuk ujian ganas hendaklah diletakkan di dalam beg pembasmian kuman khas dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dicuci.
Keperluan penyediaan sederhana
Kualiti penyediaan medium kultur akan secara langsung mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisma, kerana pelbagai mikroorganisma mempunyai keperluan pemakanan yang berbeza dan tujuan kultur yang berbeza. Keperluan penyediaan pelbagai media kultur adalah seperti berikut:
1. Timbang bahan mengikut formula sederhana, dan kemudian larutkan dalam air suling. Kualiti reagen dan ubat yang digunakan hendaklah diperiksa sebelum digunakan.
2. Pengukuran dan pelarasan pH: Pengukuran pH perlu dilakukan apabila medium kultur disejukkan ke suhu bilik, kerana terdapat perbezaan tertentu dalam pH dalam keadaan panas atau sejuk. Apabila ukuran selesai, tambah alkali atau asid mengikut jumlah yang dikira dan gaul rata. Patut diuji lagi. Nilai pH medium kultur mestilah tepat, jika tidak, ia akan menjejaskan pertumbuhan mikroorganisma atau menjejaskan pemerhatian keputusan. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa pensterilan tekanan tinggi boleh menjejaskan penurunan atau peningkatan pH sesetengah media kultur, jadi adalah tidak digalakkan untuk mensteril pada tekanan yang terlalu tinggi atau terlalu banyak kali untuk mengelakkan menjejaskan kualiti medium kultur. Penunjuk, natrium deoksikolat, agar-agar, dsb. biasanya Tambahnya selepas melaraskan pH.
3. Medium kultur perlu dipastikan jelas untuk memudahkan pemerhatian pertumbuhan bakteria. Selepas medium kultur dipanaskan dan direbus, ia boleh ditapis dengan kapas penyerap atau flanel untuk mengeluarkan sedimen. Jika perlu, ia boleh dijelaskan dengan putih telur. Jalur agar-agar yang digunakan mesti dibasuh dan dikeringkan terlebih dahulu. Sebelum digunakan, elakkan menjejaskan ketelusan akibat kekotoran dalam agar.
4. Besi, kuprum dan bekas lain tidak boleh digunakan untuk memegang medium kultur. Lebih baik menggunakan bekas kaca keras neutral yang bersih.
5. Pensterilan medium kultur bukan sahaja mesti mencapai tujuan pensterilan lengkap, tetapi juga memberi perhatian untuk tidak mengurangkan nilai pemakanannya akibat pemanasan. Secara amnya, 121°C selama 15 minit sudah memadai. Untuk media kultur yang mengandungi bahan yang tidak tahan terhadap haba tinggi seperti gula dan serum , gelatin, dsb., hendaklah disterilkan dengan kaedah suhu rendah atau terputus-putus. Sesetengah reagen yang tidak boleh dipanaskan, seperti potassium tellurite, kuning telur, TTC, antibiotik, dsb., hendaklah disejukkan kepada kira-kira 50°C selepas agar asas diautoklaf dan kemudian ditambah;
6. Selepas setiap kumpulan media kultur disediakan, ujian pertumbuhan steril dan ujian pertumbuhan strain yang diuji hendaklah dilakukan. Jika ia adalah medium kultur biokimia, gunakan strain bakteria standard untuk inokulasi dan kultur, dan perhatikan keputusan tindak balas biokimia. Ia sepatutnya menunjukkan reaksi biasa. Media kultur tidak boleh disimpan terlalu lama. Jika perlu, ia boleh disimpan di dalam peti sejuk 4°C.
7. Pada masa ini, terdapat pelbagai jenis media kultur kering. Setiap kumpulan perlu menggunakan strain standard untuk ujian pertumbuhan atau pemerhatian tindak balas biokimia. Pelbagai media kultur boleh digunakan hanya selepas ujian pertumbuhan strain yang sepadan adalah baik. Yang baru dibeli atau kering yang disimpan lama boleh digunakan. pH medium kultur juga perlu diukur semasa menyediakannya, dan dos dan kaedah hendaklah diikuti mengikut arahan produk.
8. Reagen kimia, keadaan pensterilan, keputusan ujian pertumbuhan terikan, dan kakitangan pengeluaran yang digunakan dalam setiap kelompok media kultur yang disediakan hendaklah direkodkan untuk siasatan.
Keperluan pengumpulan dan pemprosesan sampel
1. Sampel pemeriksaan yang dikumpul mestilah representatif. Semasa pensampelan, bahan mentah, pemprosesan, pengangkutan, kaedah penyimpanan dan keadaan kumpulan makanan, keadaan kesihatan persekitaran di sekeliling, dll. hendaklah disiasat secara terperinci untuk memeriksa sama ada terdapat sebarang sumber pencemaran.
2. Mengikut jenis dan kuantiti makanan, kuantiti dan kaedah pensampelan hendaklah dijalankan mengikut keperluan kaedah pemeriksaan standard.
3. Beri perhatian kepada operasi aseptik semasa pensampelan, dan bekas mesti disterilkan untuk mengelakkan pencemaran mikrob dalam persekitaran. Bekas tidak boleh disterilkan dengan larutan sabun kreosal, pensterilan dengan chlormethionine, alkohol dan pembasmi kuman lain, dan ia tidak boleh mengandungi pembasmi kuman atau antibiotik tersebut. Untuk mengelakkan membunuh mikroorganisma dalam sampel, gunting, pisau, dan sudu yang digunakan juga mesti disterilkan sebelum digunakan.
4. Sampel hendaklah dihantar ke bilik pemeriksaan untuk diperiksa sejurus selepas pengumpulan. Proses pemeriksaan biasanya tidak melebihi 3 jam. Jika jaraknya jauh, ia boleh disimpan dalam persekitaran 1~5℃. Sekiranya perlu dibekukan, ia hendaklah disimpan dalam keadaan beku. Serahkan untuk pemeriksaan.
5. Selepas menerima sampel, bilik pemeriksaan akan mendaftarkannya (nama sampel, unit untuk pemeriksaan, kuantiti, tarikh, nombor, dll.) dan memerhatikan penampilan sampel. Jika mana-mana syarat berikut ditemui, pemeriksaan boleh ditolak:
(1) Sampel yang telah disterilkan dengan tekanan tinggi khas, pendidihan atau kaedah lain akan kehilangan kepentingannya dalam mewakili makanan asal;
(2) Botol dan beg makanan telah dibuka, daging masak dan produknya, ayam masak dan makanan lain telah dipecahkan dan tidak lengkap, iaitu bentuk makanan asal telah hilang (kecuali sampel keracunan makanan);
(3) Kuantiti persampelan tidak mencukupi seperti yang diperlukan;
Bagi sampel yang dihantar untuk pemeriksaan yang memenuhi keperluan, bilik pemeriksaan hendaklah segera menjalankan pemeriksaan selepas menerimanya. Jika syarat tidak dipenuhi, ia hendaklah disimpan dalam peti sejuk 4°C, bersedia untuk mencipta keadaan tepat pada masanya, dan kemudian menjalankan pemeriksaan.
6. Apabila memeriksa sampel, lakukan pemprosesan yang sesuai mengikut sifatnya yang berbeza.
(1) Apabila menyuntik sampel cecair, ia hendaklah dicampur dengan teliti dan disuntik mengikut jumlahnya.
(2) Untuk sampel pepejal, gunakan pisau yang disterilkan untuk memotong 25g bahagian yang berbeza, masukkannya ke dalam 225mL garam steril atau larutan lain, hancurkan dan campurkan dengan homogenizer, dan inokulasi mengikut jumlahnya.
(3) Botol dan beg makanan hendaklah dibuka dengan pensterilan, dan kaedah di atas hendaklah dipilih mengikut ciri-ciri sebelum inokulasi.
Keperluan pemeriksaan, merekod dan pelaporan sampel
1. Selepas menerima sampel, bilik pemeriksaan akan terlebih dahulu menjalankan pemeriksaan penampilan dan segera menjalankan pemeriksaan mengikut kaedah pemeriksaan standard kebangsaan. Semasa proses pemeriksaan, operasi aseptik mesti dilakukan dengan berhati-hati, bertanggungjawab, dan tegas untuk mengelakkankeputusan ujian mikrobpencemaran dalam persekitaran.
2. Kaedah yang digunakan semasa proses pemeriksaan sampel, fenomena dan keputusan yang berlaku, dsb. hendaklah ditulis dalam rekod ujian bertulis sebagai asas untuk analisis dan pertimbangan keputusan. Rekod mestilah terperinci, jelas, sahih, objektif, dan tidak boleh diubah atau dipalsukan.
,
,
Keperluan operasi aseptik:
1. Anda mesti memakai pakaian kerja dan topi kerja semasa menyuntik bakteria.
2. Apabila menyuntik sampel makanan, pakaian kerja khas, topi dan selipar mesti dipakai, yang harus diletakkan di dalam bilik penampan bilik steril dan digunakan selepas pembasmian kuman UV sebelum bekerja.
3. Apabila menyuntik sampel makanan, basuh tangan anda dengan sabun sebelum memasuki bilik steril, dan kemudian lap tangan anda dengan kapas alkohol 75%.
4. Penyedut minuman, pinggan rata dan media kultur yang digunakan untuk inokulasi mestilah disterilkan dan disterilkan. Bekas yang tidak digunakan tidak boleh dibiarkan tidak digunakan selepas membuka bungkusan. Perkakas logam hendaklah diautoklaf atau dibakar tiga kali dengan alkohol 95% sebelum digunakan.
5. Apabila mengeluarkan straw dari bungkusan, hujung straw tidak boleh menyentuh bahagian yang terdedah. Apabila menggunakan straw untuk menyuntik tabung uji atau plat, hujung straw tidak boleh menyentuh tepi tabung uji atau plat.
6. Inokulasi sampel dan pemindahan bakteria mesti dilakukan di hadapan lampu alkohol. Apabila menyuntik bakteria atau sampel, straw mesti disterilkan dengan nyalaan selepas mengeluarkannya dari bungkusan dan membuka penyumbat tabung uji.
7. Sebelum menyuntik bakteria, semua wayar logam gelung inokulasi dan jarum hendaklah dibakar dengan api, dan jika perlu, sambungan antara gelung, jarum dan rod hendaklah dibakar. Gelung inokulasi untuk inokulasi bakteria tuberkulosis dan bakteria virulen hendaklah direbus dalam air mendidih selama 5 minit, dan kemudian dibakar dengan api.
8. Apabila menghisap cecair bakteria atau sampel dengan straw, gunakan hujung getah yang sepadan untuk menghisapnya, dan jangan sedut terus dengan mulut anda.
Keperluan penggunaan bilik steril:
1. Tingkap-tingkap yang menghala ke bahagian luar bilik steril hendaklah dilapisi kaca dan dimeteraikan. Mereka tidak boleh dibuka sesuka hati. Perlu ada bilik penampan dan pintu gelangsar yang sepadan dengan saiz bilik steril. Juga perlu ada tingkap kecil 0.5~0.7m2. Sebagai persediaan untuk menghantar barang selepas memasuki bilik steril.
2. Bilik steril hendaklah sentiasa bersih. Selepas bekerja, ia hendaklah dinyahjangkit dengan larutan sabun kresol 2% hingga 3%, permukaan kerja hendaklah disapu, dan barang yang tidak berkaitan dengan eksperimen tidak boleh disimpan.
3. Pintu bilik steril hendaklah ditutup rapat sebelum dan selepas digunakan, dan lampu ultraviolet hendaklah dihidupkan. Jika lampu ultraviolet terampai dalam bangunan digunakan untuk pembasmian kuman, lampu ultraviolet 30W diperlukan. Jaraknya ialah 1.0m, dan masa penyinaran tidak kurang daripada 30 minit. Apabila menggunakan lampu ultraviolet, perhatian harus diberikan untuk Beroperasi secara langsung di bawah cahaya ultraviolet untuk mengelakkan kerosakan. Lampu perlu disapu perlahan-lahan dengan bola kapas alkohol setiap dua minggu untuk mengeluarkan habuk dan gris untuk mengurangkan kesan penembusan ultraviolet.
4. Semasa memproses dan menyuntik spesimen makanan, masuk ke bilik steril untuk operasi dan tidak dibenarkan masuk atau keluar sesuka hati. Jika item perlu diteruskan, ia boleh dilalui melalui tingkap kecil.
5. Jika penyaman udara perlu dipasang di dalam bilik steril, perlu ada alat penapisan.
Keperluan Pembasmian Kuman dan Pensterilan
Barang kaca, perkakas logam dan media kultur yang digunakan untukujian mikrobiologi, kultur tercemar dan inokulasi, dsb. mesti disterilkan sebelum digunakan. Kaedah pensterilan wap tekanan haba kering dan lembap.
1. Penyediaan sebelum pensterilan
(1) Semua barang yang perlu disterilkan hendaklah dicuci dan dikeringkan terlebih dahulu. Barangan kaca seperti penyedut minuman dan pinggan mangkuk leper hendaklah padat dengan kertas. Jika tiub logam digunakan, lubang pengudaraan padanya hendaklah dibuka.
(2) Balut penyumbat kelalang segi tiga yang mengandungi medium kultur dalam kertas, tutup tabung uji, dan tarik keluar inti picagari, dan balut dengan kain kasa.
2. pasang
(1) Pensteril haba kering: Barangan tidak boleh terlalu sesak dan tidak boleh menyentuh empat dinding kotak.
(2) Pemasak wap tekanan tinggi yang besar: Letakkan barang yang telah disterilkan, bungkusnya secara berasingan, dan masukkan terus ke dalam silinder pensterilan. Jangan terlalu sesak barang.
3. Pemeriksaan peralatan
(1) Periksa sama ada suis pintu adalah fleksibel, sama ada gelang getah rosak dan sama ada ia rata.
(2) Periksa sama ada tolok tekanan kekal pada kedudukan sifar apabila stim habis, tutup pintu dan tutup, ventilasi stim atau haba, dan perhatikan sama ada terdapat kebocoran udara, sama ada keadaan yang ditandakan oleh tolok tekanan dan termometer sepadan, dan sama ada saluran paip tersumbat.
(3) Untuk pensteril dengan peranti kawalan program elektronik automatik, atur cara yang dinyatakan hendaklah diperiksa sebelum digunakan untuk melihat sama ada ia memenuhi keperluan pensterilan.
4. Rawatan pensterilan
(1) Kaedah pensterilan haba kering:
Kaedah ini sesuai untuk item yang tidak rosak, merosot, atau sejat di bawah keadaan haba kering. Ia lebih biasa digunakan untuk mensterilkan barangan kaca, produk logam, produk seramik, dsb.
①Alat dan perkakas hendaklah dicuci sebelum dikeringkan-dibakar untuk mengelakkan kotoran yang melekat pada permukaan daripada berkarbonat.
② Semasa pensterilan, barang-barang tidak boleh terlalu sesak, jangan terus menyentuh bahagian bawah dan dinding kotak, dan biarkan celah antara item.
③ Semasa pensterilan, tutup pintu rapat-rapat, sambungkan bekalan kuasa, buka lubang ekzos selama kira-kira 30 minit untuk mengeluarkan udara sejuk dalam pensteril, laraskan lampu penunjuk apabila suhu meningkat kepada 160°C, dan simpan selama 1.5 hingga 2 jam.
④Selepas pensterilan selesai atau semasa proses kenaikan suhu, pintu mesti dibuka di bawah 60°C.
(2) Langkah berikut hendaklah diikuti apabila menggunakan periuk tekanan mudah alih atau pensteril stim tekanan menegak:
① Tambah 3L air ke badan utama periuk tekanan mudah alih, dan 16L air ke periuk tekanan menegak (jumlah air perlu diisi semula apabila digunakan semula, dan air perlu diganti jika ia menjadi keruh);
② Untuk periuk tekanan mudah alih, masukkan paip ekzos pada penutup atas ke dalam tiub segi empat sama pada dinding dalam tong pensterilan (pensteril tanpa hos atau hos yang berkarat dan retak tidak boleh digunakan);
③ Tutup penutup atas dan ketatkannya dengan ketat untuk mengelakkan kebocoran udara; letakkan pensteril pada sumber api untuk memanaskan, hidupkan kuasa periuk tekanan menegak, dan buka injap ekzos pada penutup atas untuk mengeluarkan udara (udara ekzos selama 10 hingga 15 minit selepas air mendidih) );
④Tutup injap ekzos untuk menaikkan tekanan stim kepada keperluan yang ditetapkan dan mengekalkannya untuk masa yang ditetapkan (bergantung pada jenis barang yang disterilkan dan keadaan yang berkaitan);
⑤ Selepas masa yang ditetapkan tercapai, untuk barang yang perlu dikeringkan, segera buka injap ekzos untuk mengeluarkan wap. Apabila tekanan kembali kepada sifar, sejukkan secara semula jadi kepada 60°C dan kemudian buka penutup untuk mengeluarkan item. Jika ia adalah barang cecair, jangan buka injap ekzos. Periuk hendaklah dikeluarkan dari sumber haba serta-merta dan dibiarkan sejuk secara semula jadi sehingga tekanan kembali kepada sifar dan suhu turun di bawah 60°C sebelum membuka penutup untuk mengeluarkan kandungannya bagi mengelakkan penyahmampatan mendadak cecair daripada mendidih atau letupan ganas bekas.
(3) Ikuti langkah berikut untuk menggunakan pensteril stim periuk tekanan mendatar:
①Tutup pintu periuk dengan ketat, buka injap masuk udara, masukkan wap ke dalam mezanin untuk pemanasan awal, dan udara sejuk di mezanin akan dilepaskan secara automatik melalui penghalang udara;
②Selepas interlayer mencapai suhu yang telah ditetapkan, buka injap masuk udara ruang periuk, masukkan wap ke dalam ruang periuk, dan udara sejuk dalam ruang periuk akan dilepaskan secara automatik melalui penangkap udara ruang periuk;
③Apabila tekanan dan suhu dalam ruang periuk mencapai tekanan yang ditetapkan, laraskan injap masuk udara untuk memastikan ia tetap;
④ Sejukkan suhu secara semula jadi atau buatan kepada 60℃ sebelum membuka pintu untuk mengeluarkan barang. Jangan gunakan kaedah pelepasan wap pantas untuk mengelakkan penurunan tekanan secara tiba-tiba, cecair mendidih yang ganas atau letupan bekas;
⑤ Apabila menggunakan program automatik-pensterilan stim tekanan terkawal, selepas meletakkan item dan menutup pintu dengan ketat, suis yang sepadan hendaklah ditekan mengikut kategori item supaya pensterilan boleh dijalankan secara automatik mengikut prosedur yang diperlukan. Semasa pensterilan, instrumen yang dipasang mesti digunakan untuk merekodkan suhu dan masa. Untuk rujukan masa hadapan, keperluan operasi hendaklah mengikut arahan pengilang;
5. Suhu dan masa pensterilan
(1) Suhu pensterilan pensteril haba kering ialah 160℃, 1.5~2j.
(2) Suhu pensterilan dan masa pensterilan stim tekanan
Kaedah pensterilan sekejap-sekejap
1. Kaedah pensterilan:
Gunakan pensterilan wap tanpa tekanan. Sesetengah bahan mudah dimusnahkan oleh pensterilan wap tekanan tinggi, jadi kaedah ini boleh digunakan untuk pensterilan.
(1) Letakkan barang yang hendak disterilkan di dalam periuk, tutup penutup atas, buka saluran keluar longkang, dan toskan baki air di dalam periuk.
(2) Tutup saluran keluar saliran, buka pintu masuk udara, dan nyah kuman selama 10 hingga 20 minit mengikut keperluan.
(3) Selepas pensterilan selesai, tutup pintu masuk udara, keluarkan barang-barang dan tunggu sejuk ke suhu bilik, masukkannya ke dalam inkubator 37°C semalaman, dan teruskan sterilkan mengikut kaedah di atas pada keesokan harinya. Lakukan ini tiga kali untuk mencapai tujuan pensterilan.
2. Cara menggunakan koagulator serum:
Apabila medium kultur mengandungi bahan-bahan istimewa seperti serum atau telur, haba yang tinggi akan memusnahkan khasiatnya. Oleh itu, suhu rendah boleh digunakan untuk membekukan serum dan mencapai tujuan pensterilan:
(1) Apabila menggunakan serum yang disterilkan dengan kaedah ini kepada aliquot, operasi aseptik mesti diikuti dengan ketat, dan tabung uji dan plat juga mesti disterilkan sebelum digunakan;
(2) Jadikan medium kultur menjadi cerun atau lapisan tinggi mengikut keperluan. Selepas menambah air yang mencukupi, sambungkan bekalan kuasa, naikkan suhu kepada 75~90°C selama satu jam dan kemudian sterilkannya. Letakkannya dalam inkubator 37°C semalaman, dan kemudian sterilkannya tiga kali.
3. Rebus dan nyah kuman:
Anda boleh menggunakan periuk mendidih atau pensteril mendidih. Selepas air mendidih, rebus selama 5 hingga 15 minit. Anda juga boleh menambah 2% asid karbolik ke dalam air dan rebus selama 5 minit. Tambah 0.02% formaldehid dan rebus pada suhu 80°C selama 60 minit untuk mencapai tujuan pensterilan. Walau bagaimanapun, pensterilan mendidih boleh dicapai. Apabila menggunakan penambah, perhatian harus diberikan kepada kekakisan barang.
4. Rawatan pensterilan:
Selepas pensterilan, barangan sudah pun steril dalam keadaan biasa. Ia hendaklah diperiksa dengan teliti dan diletakkan apabila dikeluarkan daripada pensteril untuk mengelakkan pencemaran semula;
(1) Keluarkan barang dan semak integriti pembungkusan dengan segera. Jika terdapat kerosakan atau tampon dikeluarkan, ia tidak boleh digunakan sebagai barang steril;
(2) Barangan yang dibawa keluar tidak boleh digunakan sebagai barang steril jika bungkusannya jelas direndam dalam air;
(3) Medium kultur atau reagen hendaklah diperiksa untuk melihat sama ada ia memenuhi warna atau keadaan selepas pensterilan. Yang tidak memenuhi syarat hendaklah dibuang;
(4) Untuk bekas buka-tutup, lubang skrin hendaklah ditutup semasa mengeluarkannya;
(5) Jika barang yang dikeluarkan itu jatuh ke tanah, tersilap letak di tempat yang tidak bersih, atau dicemari dengan air, ia dianggap tercemar dan tidak boleh digunakan sebagai barang steril;
(6) Barangan steril yang layak dibawa keluar hendaklah disimpan di dalam bilik penyimpanan atau kabinet kalis habuk, dan dilarang sama sekali mencampurkannya dengan barang yang tidak disterilkan;
(7) Semua item yang layak hendaklah ditandakan dengan tarikh pensterilan dan tarikh luput;
(8) Selepas setiap kumpulan pemprosesan pensterilan selesai, rekodkan nama, kuantiti, suhu, masa, dan pengendali produk yang disterilkan.
Keperluan untuk rawatan sisa toksik dan bakteria
Peralatan dan kultur eksperimen yang digunakan dalam eksperimen mikrobiologi tidak boleh dibawa keluar dari makmal tanpa pembasmian kuman.
1. Bahan dan sisa tercemar yang dikultur hendaklah diletakkan di dalam bekas yang ketat atau bakul dawai dan disimpan secara berpusat di lokasi yang ditetapkan sehingga ia diautoklaf secara seragam.
2. Kultur yang tercemar oleh mikroorganisma mesti diautoklaf pada suhu 121°C selama 30 minit.
3. Selepas digunakan, penyedut minuman yang tercemar hendaklah diletakkan dalam larutan sabun kreol 5% atau larutan asid karbolik, direndam selama sekurang-kurangnya 24 jam (cecair pembasmi kuman tidak boleh lebih rendah daripada ketinggian rendaman), dan kemudian disterilkan dengan tekanan tinggi pada 121°C selama 30 minit.
4. Cecair untuk mengotorkan dan membilas calitan biasanya boleh disiram terus ke dalam pembetung. Cecair bilas untuk bakteria virulen mesti disiram dalam bikar dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dituangkan ke dalam pembetung. Slaid bernoda dimasukkan ke dalam larutan sabun kresol 5%. Selepas rendam dalam air selama 24 jam, rebus dan basuh. Slaid atau pinggan yang digunakan untuk ujian aglutinasi mesti diautoklaf dan kemudian dibasuh.
5. Selepas memecahkan biakan, segera sembur dan rendam bahagian yang tercemar dengan larutan sabun kresol 5% atau larutan asid karbolik, rendam selama setengah jam dan kemudian lap sehingga bersih.
Pakaian kerja atau pakaian kerja yang tercemar, topi, topeng, dsb. yang dipakai untuk ujian ganas hendaklah diletakkan di dalam beg pembasmian kuman khas dan disterilkan dengan tekanan tinggi sebelum dicuci.
Keperluan penyediaan sederhana
Kualiti penyediaan medium kultur akan secara langsung mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisma, kerana pelbagai mikroorganisma mempunyai keperluan pemakanan yang berbeza dan tujuan kultur yang berbeza. Keperluan penyediaan pelbagai media kultur adalah seperti berikut:
1. Timbang bahan mengikut formula sederhana, dan kemudian larutkan dalam air suling. Kualiti reagen dan ubat yang digunakan hendaklah diperiksa sebelum digunakan.
2. Pengukuran dan pelarasan pH: Pengukuran pH perlu dilakukan apabila medium kultur disejukkan ke suhu bilik, kerana terdapat perbezaan tertentu dalam pH dalam keadaan panas atau sejuk. Apabila ukuran selesai, tambah alkali atau asid mengikut jumlah yang dikira dan gaul rata. Patut diuji lagi. Nilai pH medium kultur mestilah tepat, jika tidak, ia akan menjejaskan pertumbuhan mikroorganisma atau menjejaskan pemerhatian keputusan. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa pensterilan tekanan tinggi boleh menjejaskan penurunan atau peningkatan pH sesetengah media kultur, jadi adalah tidak digalakkan untuk mensteril pada tekanan yang terlalu tinggi atau terlalu banyak kali untuk mengelakkan menjejaskan kualiti medium kultur. Penunjuk, natrium deoksikolat, agar-agar, dsb. biasanya Tambahnya selepas melaraskan pH.
3. Medium kultur perlu dipastikan jelas untuk memudahkan pemerhatian pertumbuhan bakteria. Selepas medium kultur dipanaskan dan direbus, ia boleh ditapis dengan kapas penyerap atau flanel untuk mengeluarkan sedimen. Jika perlu, ia boleh dijelaskan dengan putih telur. Jalur agar-agar yang digunakan mesti dibasuh dan dikeringkan terlebih dahulu. Sebelum digunakan, elakkan menjejaskan ketelusan akibat kekotoran dalam agar.
4. Besi, kuprum dan bekas lain tidak boleh digunakan untuk memegang medium kultur. Lebih baik menggunakan bekas kaca keras neutral yang bersih.
5. Pensterilan medium kultur bukan sahaja mesti mencapai tujuan pensterilan lengkap, tetapi juga memberi perhatian untuk tidak mengurangkan nilai pemakanannya akibat pemanasan. Secara amnya, 121°C selama 15 minit sudah memadai. Untuk media kultur yang mengandungi bahan yang tidak tahan terhadap haba tinggi seperti gula dan serum , gelatin, dsb., hendaklah disterilkan dengan kaedah suhu rendah atau terputus-putus. Sesetengah reagen yang tidak boleh dipanaskan, seperti potassium tellurite, kuning telur, TTC, antibiotik, dsb., hendaklah disejukkan kepada kira-kira 50°C selepas agar asas diautoklaf dan kemudian ditambah;
6. Selepas setiap kumpulan media kultur disediakan, ujian pertumbuhan steril dan ujian pertumbuhan strain yang diuji hendaklah dilakukan. Jika ia adalah medium kultur biokimia, gunakan strain bakteria standard untuk inokulasi dan kultur, dan perhatikan keputusan tindak balas biokimia. Ia sepatutnya menunjukkan reaksi biasa. Media kultur tidak boleh disimpan terlalu lama. Jika perlu, ia boleh disimpan di dalam peti sejuk 4°C.
7. Pada masa ini, terdapat pelbagai jenis media kultur kering. Setiap kumpulan perlu menggunakan strain standard untuk ujian pertumbuhan atau pemerhatian tindak balas biokimia. Pelbagai media kultur boleh digunakan hanya selepas ujian pertumbuhan strain yang sepadan adalah baik. Yang baru dibeli atau kering yang disimpan lama boleh digunakan. pH medium kultur juga perlu diukur semasa menyediakannya, dan dos dan kaedah hendaklah diikuti mengikut arahan produk.
8. Reagen kimia, keadaan pensterilan, keputusan ujian pertumbuhan terikan, dan kakitangan pengeluaran yang digunakan dalam setiap kelompok media kultur yang disediakan hendaklah direkodkan untuk siasatan.
Keperluan pengumpulan dan pemprosesan sampel
1. Sampel pemeriksaan yang dikumpul mestilah representatif. Semasa pensampelan, bahan mentah, pemprosesan, pengangkutan, kaedah penyimpanan dan keadaan kumpulan makanan, keadaan kesihatan persekitaran di sekeliling, dll. hendaklah disiasat secara terperinci untuk memeriksa sama ada terdapat sebarang sumber pencemaran.
2. Mengikut jenis dan kuantiti makanan, kuantiti dan kaedah pensampelan hendaklah dijalankan mengikut keperluan kaedah pemeriksaan standard.
3. Beri perhatian kepada operasi aseptik semasa pensampelan, dan bekas mesti disterilkan untuk mengelakkan pencemaran mikrob dalam persekitaran. Bekas tidak boleh disterilkan dengan larutan sabun kreosal, pensterilan dengan chlormethionine, alkohol dan pembasmi kuman lain, dan ia tidak boleh mengandungi pembasmi kuman atau antibiotik tersebut. Untuk mengelakkan membunuh mikroorganisma dalam sampel, gunting, pisau, dan sudu yang digunakan juga mesti disterilkan sebelum digunakan.
4. Sampel hendaklah dihantar ke bilik pemeriksaan untuk diperiksa sejurus selepas pengumpulan. Proses pemeriksaan biasanya tidak melebihi 3 jam. Jika jaraknya jauh, ia boleh disimpan dalam persekitaran 1~5℃. Sekiranya perlu dibekukan, ia hendaklah disimpan dalam keadaan beku. Serahkan untuk pemeriksaan.
5. Selepas menerima sampel, bilik pemeriksaan akan mendaftarkannya (nama sampel, unit untuk pemeriksaan, kuantiti, tarikh, nombor, dll.) dan memerhatikan penampilan sampel. Jika mana-mana syarat berikut ditemui, pemeriksaan boleh ditolak:
(1) Sampel yang telah disterilkan dengan tekanan tinggi khas, pendidihan atau kaedah lain akan kehilangan kepentingannya dalam mewakili makanan asal;
(2) Botol dan beg makanan telah dibuka, daging masak dan produknya, ayam masak dan makanan lain telah dipecahkan dan tidak lengkap, iaitu bentuk makanan asal telah hilang (kecuali sampel keracunan makanan);
(3) Kuantiti persampelan tidak mencukupi seperti yang diperlukan;
Bagi sampel yang dihantar untuk pemeriksaan yang memenuhi keperluan, bilik pemeriksaan hendaklah segera menjalankan pemeriksaan selepas menerimanya. Jika syarat tidak dipenuhi, ia hendaklah disimpan dalam peti sejuk 4°C, bersedia untuk mencipta keadaan tepat pada masanya, dan kemudian menjalankan pemeriksaan.
6. Apabila memeriksa sampel, lakukan pemprosesan yang sesuai mengikut sifatnya yang berbeza.
(1) Apabila menyuntik sampel cecair, ia hendaklah dicampur dengan teliti dan disuntik mengikut jumlahnya.
(2) Untuk sampel pepejal, gunakan pisau yang disterilkan untuk memotong 25g bahagian yang berbeza, masukkannya ke dalam 225mL garam steril atau larutan lain, hancurkan dan campurkan dengan homogenizer, dan inokulasi mengikut jumlahnya.
(3) Botol dan beg makanan hendaklah dibuka dengan pensterilan, dan kaedah di atas hendaklah dipilih mengikut ciri-ciri sebelum inokulasi.
Keperluan pemeriksaan, merekod dan pelaporan sampel
1. Selepas menerima sampel, bilik pemeriksaan akan terlebih dahulu menjalankan pemeriksaan penampilan dan segera menjalankan pemeriksaan mengikut kaedah pemeriksaan standard kebangsaan. Semasa proses pemeriksaan, operasi aseptik mesti dilakukan dengan berhati-hati, bertanggungjawab, dan tegas untuk mengelakkankeputusan ujian mikrobpencemaran dalam persekitaran.
2. Kaedah yang digunakan semasa proses pemeriksaan sampel, fenomena dan keputusan yang berlaku, dsb. hendaklah ditulis dalam rekod ujian bertulis sebagai asas untuk analisis dan pertimbangan keputusan. Rekod mestilah terperinci, jelas, sahih, objektif, dan tidak boleh diubah atau dipalsukan.
,
,
