Povzetek zahtev za mikrobiološko testiranje
2024-01-24 15:14:33
Zahteve in koraki zamikrobiološko testiranjeso naslednji:
Zahteve za aseptično delovanje:
1. Pri inokulaciji bakterij morate nositi delovno obleko in delovno kapo.
2. Pri inokulaciji vzorcev živil je potrebno nositi posebno delovno obleko, kape in copate, ki jih odložimo v tamponski prostor sterilne sobe in uporabimo po UV dezinfekciji pred delom.
3. Pri inokulaciji vzorcev hrane si umijte roke z milom, preden vstopite v sterilno sobo, nato pa si roke obrišite z vato, raztopljeno v 75 % alkoholu.
4. Slamice, ploščate posode in gojišča, ki se uporabljajo za inokulacijo, je treba sterilizirati in sterilizirati. Neuporabljenih vsebnikov po odprtju embalaže ne smete pustiti neuporabljenih. Kovinski pribor je treba pred uporabo avtoklavirati ali trikrat sežgati s 95% alkoholom.
5. Ko jemljete slamico iz embalaže, se konica slamice ne sme dotikati izpostavljenih delov. Pri uporabi slamice za inokulacijo epruvete ali plošče se konica slamice ne sme dotikati roba epruvete ali plošče.
6. Inokulacijo vzorcev in prenos bakterij je treba opraviti pred alkoholno svetilko. Pri inokulaciji bakterij ali vzorcev je treba slamico sterilizirati s plamenom, potem ko jo vzamemo iz embalaže in odpremo zamašek epruvete.
7. Pred inokulacijo bakterij je treba vse kovinske žice inokulacijske zanke in igle zažgati s plamenom, po potrebi pa zažgati tudi povezavo med zanko, iglo in palico. Inokulacijsko zanko za inokulacijo bakterij tuberkuloze in virulentnih bakterij je treba 5 minut kuhati v vreli vodi in nato zažgati na plamenu.
8. Pri sesanju bakterijske tekočine ali vzorcev s slamico uporabite ustrezno gumijasto konico za sesanje in ne sesajte neposredno z usti.
Zahteve za uporabo sterilne sobe:
1. Okna, ki vodijo na zunanjo stran sterilne sobe, morajo biti dvojno zastekljena in zatesnjena. Ne smejo se poljubno odpirati. Tam mora biti tamponska soba in drsna vrata, ki ustrezajo velikosti sterilne sobe. Prav tako mora biti majhno okno 0,5 ~ 0,7 m2. Pri pripravi na predajo predmetov po vstopu v sterilno sobo.
2. Sterilni prostor mora biti čist. Po končanem delu ga razkužimo z 2 % do 3 % milno raztopino krezola, delovno površino obrišemo, predmetov, ki niso povezani s poskusom, ne odlagamo.
3. Vrata sterilne sobe je treba pred in po uporabi tesno zapreti in prižgati ultravijolično svetilko. Če se za dezinfekcijo uporablja notranja viseča ultravijolična svetilka, je potrebna ultravijolična svetilka z močjo 30 W. Razdalja je 1,0 m, čas obsevanja pa najmanj 30 minut. Pri uporabi ultravijoličnih žarnic bodite pozorni na delovanje neposredno pod ultravijolično svetlobo, da preprečite poškodbe. Svetilko je treba vsaka dva tedna nežno obrisati z alkoholno vato, da odstranite prah in maščobo ter zmanjšate vpliv ultravijoličnega prodiranja.
4. Pri obdelavi in inokulaciji vzorcev hrane vstopite v sterilno sobo za delovanje in vam ni dovoljeno vstopati ali izstopati po želji. Če je treba predmete predati naprej, jih lahko podate skozi majhno okence.
5. Če je treba v sterilni sobi namestiti klimatsko napravo, mora biti tam filtrirna naprava.
Zahteve za dezinfekcijo in sterilizacijo
Steklenina, kovinski pribor in gojišča, ki se uporabljajo zamikrobiološko testiranje, kontaminirane in cepljene kulture itd. je treba pred uporabo sterilizirati. Metode parne sterilizacije s suho toploto in tlakom z vlažno toploto.
1. Priprava pred sterilizacijo
(1) Vse predmete, ki jih je treba sterilizirati, je treba najprej oprati in posušiti. Stekleni izdelki, kot so slamice in ploščate posode, morajo biti tesno zapakirani s papirjem. Če uporabljate kovinske cevi, je treba prezračevalne luknje na njih odpreti.
(2) Zamašek trikotne bučke, ki vsebuje gojišče, zavijte v papir, pokrijte epruveto in izvlecite jedro brizge ter ga ovijte z gazo.
2. namestite
(1) Sterilizator s suho vročino: Predmeti ne smejo biti prenatrpani in se ne smejo dotikati štirih sten škatle.
(2) Velik visokotlačni parni kuhalnik: položite sterilizirane predmete, jih ločeno zavijte in vstavite neposredno v sterilizacijski valj. Ne prenatrpajte predmetov.
3. Pregled opreme
(1) Preverite, ali je vratno stikalo prožno, ali je gumijasti obroč poškodovan in ali je ploščat.
(2) Preverite, ali manometer ostane na ničelnem položaju, ko je para izčrpana, zaprite vrata in pokrov, prezračite paro ali toploto in opazujte, ali pride do uhajanja zraka, ali se pogoji, označeni z manometrom in termometrom, ujemajo in ali je cevovod zamašen.
(3) Pri sterilizatorjih z napravami za avtomatsko elektronsko krmiljenje programa je treba navedeni program pred uporabo preveriti, ali izpolnjuje zahteve za sterilizacijo.
4. Sterilizacija
(1) Metoda sterilizacije s suho vročino:
Ta metoda je primerna za predmete, ki se ne poškodujejo, poslabšajo ali izhlapijo v pogojih suhe toplote. Pogosteje se uporablja za sterilizacijo steklovine, kovinskih izdelkov, keramičnih izdelkov itd.
①Instrumente in pripomočke je treba pred sušenjem-peko oprati, da preprečite karbonizacijo umazanije, pritrjene na površino.
② Med sterilizacijo predmeti ne smejo biti prenatrpani, ne smejo se neposredno dotikati dna in stene škatle in puščati vrzeli med predmeti.
③ Med sterilizacijo tesno zaprite vrata, priključite napajalnik, odprite izpušno odprtino za približno 30 minut, da odstranite hladen zrak v sterilizatorju, nastavite indikatorsko lučko, ko temperatura naraste na 160 °C, in jo vzdržujte 1,5 do 2 uri.
④Po končani sterilizaciji ali med postopkom dviga temperature je treba vrata odpreti pod 60 °C.
(2) Pri uporabi prenosnega tlačnega lonca ali navpičnega tlačnega parnega sterilizatorja je treba upoštevati naslednje korake:
① Dodajte 3 L vode v glavno ohišje prenosnega lonca na pritisk in 16 L vode v navpični lonec na pritisk (količino vode je treba dopolniti ob ponovni uporabi in vodo je treba zamenjati, če postane motna);
② Pri prenosnem loncu na pritisk vstavite izpušno cev na zgornjem pokrovu v kvadratno cev na notranji steni sterilizacijskega soda (sterilizatorjev brez cevi ali tistih s korodirano in počeno cevjo ne smete uporabljati);
③ Pokrijte zgornji pokrov in ga trdno privijte, da preprečite uhajanje zraka; postavite sterilizator na vir ognja, da se segreje, vklopite navpični lonec na pritisk in odprite izpušni ventil na zgornjem pokrovu, da izpustite zrak (izpušni zrak 10 do 15 minut po tem, ko voda zavre));
④Zaprite izpušni ventil, da dvignete tlak pare na določene zahteve in ga ohranite določen čas (odvisno od narave steriliziranih predmetov in ustreznih okoliščin);
⑤ Ko je dosežen določen čas, za predmete, ki jih je treba posušiti, takoj odprite izpušni ventil, da izpustite paro. Ko se tlak vrne na nič, jo naravno ohladite na 60 °C in nato odprite pokrov, da vzamete predmete ven. Če gre za tekočino, ne odpirajte izpušnega ventila. Lonec je treba takoj odstraniti iz vira toplote in pustiti, da se naravno ohladi, dokler se tlak ne vrne na nič in temperatura pade pod 60 °C, preden odprete pokrov, da odstranite vsebino, da preprečite nenadno dekompresijo tekočine zaradi močnega vrenja ali eksplozije posode.
(3) Sledite naslednjim korakom za uporabo parnega sterilizatorja z vodoravnim tlačnim loncem:
①Trdno zaprite vrata lonca, odprite ventil za dovod zraka, vnesite paro v medetažo za predgretje in hladen zrak v medetažo bo samodejno izpuščen skozi zračno pregrado;
②Ko vmesni sloj doseže vnaprej določeno temperaturo, odprite ventil za dovod zraka v komoro lonca, vnesite paro v komoro lonca in hladen zrak v komori lonca se bo samodejno izpustil skozi odvodnik zraka v komori lonca;
③Ko tlak in temperatura v komori lonca dosežeta določen tlak, prilagodite dovodni ventil zraka, da ostane konstanten;
④ Ohladite naravno ali umetno temperaturo na 60 ℃, preden odprete vrata in vzamete ven predmete. Ne uporabljajte metode hitrega izpusta pare, da preprečite nenaden padec tlaka, močno vrenje tekočine ali eksplozijo posode;
⑤ Ko uporabljate samodejni program - parni sterilizator z nadzorovanim tlakom, morate po namestitvi predmetov in tesnem zapiranju vrat pritisniti ustrezno stikalo glede na kategorijo predmetov, tako da se lahko sterilizacija samodejno izvede v skladu z zahtevanimi postopki. Med sterilizacijo je treba s priloženim instrumentom beležiti temperaturo in čas. Za prihodnjo uporabo morajo biti zahteve glede delovanja strogo v skladu z navodili proizvajalca;
5. Temperatura in čas sterilizacije
(1) Sterilizacijska temperatura sterilizatorja s suho toploto je 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Sterilizacijska temperatura in čas tlačnega parnega sterilizatorja
Intermitentna metoda sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Uporabite sterilizacijo s paro brez pritiska. Nekatere snovi se zlahka uničijo pri sterilizaciji s paro pod visokim-tlakom, zato se ta metoda lahko uporablja za sterilizacijo.
(1) Predmete, ki jih želite sterilizirati, postavite v lonec, pokrijte zgornji pokrov, odprite odtočno odprtino in odcedite preostalo vodo v loncu.
(2) Zaprite odtočno odprtino, odprite vrata za dovod zraka in po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minut.
(3) Po končani sterilizaciji zaprite vrata za dovod zraka, vzemite predmete ven in počakajte, da se ohladijo na sobno temperaturo, jih čez noč postavite v inkubator pri 37 °C in naslednji dan nadaljujte s sterilizacijo po zgornji metodi. To naredite trikrat, da dosežete namen sterilizacije.
2. Kako uporabljati serumski koagulator:
Kadar gojišče vsebuje posebne sestavine, kot so serum ali jajca, visoka vročina uniči njegova hranila. Zato lahko nizko temperaturo uporabimo za koagulacijo seruma in doseganje namenov sterilizacije:
(1) Pri uporabi seruma, steriliziranega s to metodo za alikvot, je treba dosledno upoštevati aseptične postopke, pred uporabo pa je treba sterilizirati tudi epruvete in plošče;
(2) Gojišče postavite v nagnjeno ali visoko plast, kot je potrebno. Ko dodate dovolj vode, priključite napajalnik, dvignite temperaturo na 75~90°C za eno uro in nato sterilizirajte. Čez noč ga postavite v inkubator pri 37 °C in ga nato trikrat sterilizirajte.
3. Prekuhajte in razkužite:
Uporabite lahko kuhalno posodo ali kuhalni sterilizator. Ko voda zavre, jo kuhajte 5 do 15 minut. Vodi lahko dodamo tudi 2 % karbolno kislino in pustimo vreti 5 minut. Dodajte 0,02 % formaldehida in kuhajte pri 80 °C 60 minut, da dosežete namen sterilizacije. Vendar je mogoče doseči sterilizacijo z vrenjem. Pri uporabi ojačevalcev je treba biti pozoren na jedkost predmetov.
4. Sterilizacija:
Po sterilizaciji so predmeti v normalnih okoliščinah že sterilni. Ko jih vzamete iz sterilizatorja, jih je treba natančno pregledati in namestiti, da preprečite ponovno kontaminacijo;
(1) Predmete takoj vzemite ven in preverite celovitost embalaže. Če je tampon poškodovan ali je tampon odstranjen, ga ni mogoče uporabiti kot sterilnega predmeta;
(2) Izvzeti predmeti se ne morejo uporabljati kot sterilni predmeti, če je njihova embalaža očitno prepojena z vodo;
(3) Gojišče ali reagente je treba preveriti, ali ustrezajo barvi ali stanju po sterilizaciji. Tiste, ki ne izpolnjujejo zahtev, je treba zavreči;
(4) Pri odprtih/zaprtih posodah morajo biti odprtine na mrežici zaprte, ko jih jemljete ven;
(5) Če odstranjeni predmeti padejo na tla, so odloženi na nečisto mesto ali so umazani z vodo, se štejejo za kontaminirane in jih ni mogoče uporabiti kot sterilne predmete;
(6) Kvalificirane sterilizirane predmete je treba shraniti v skladišču ali v omari, odporni proti prahu, in strogo je prepovedano mešati jih z nesteriliziranimi predmeti;
(7) Vsi kvalificirani izdelki morajo biti označeni z datumom sterilizacije in datumom poteka;
(8) Ko je vsaka serija sterilizacijske obdelave končana, zabeležite ime, količino, temperaturo, čas in operaterja steriliziranih izdelkov.
Zahteve za obdelavo strupenih in bakterijskih odpadkov
Eksperimentalne opreme in kultur, ki se uporabljajo v mikrobioloških poskusih, ne smete odnašati iz laboratorija brez razkuževanja.
1. Gojene kontaminirane materiale in odpadke je treba dati v tesne posode ali žične košare in jih shraniti centralno na določenih lokacijah, dokler niso enakomerno obdelani v avtoklavu.
2. Kulture, kontaminirane z mikroorganizmi, je treba 30 minut avtoklavirati pri 121 °C.
3. Po uporabi je treba kontaminirane slamice dati v 5-odstotno raztopino kreolnega mila ali raztopino karbolne kisline, namakati vsaj 24 ur (razkužilna tekočina ne sme biti nižja od višine namakanja) in nato 30 minut sterilizirati pod visokim pritiskom pri 121 °C.
4. Tekočino za barvanje in izpiranje razmazov lahko na splošno splaknete neposredno v kanalizacijo. Tekočino za izpiranje virulentnih bakterij je treba splakniti v čašo in sterilizirati pod visokim pritiskom, preden jo zlijemo v kanalizacijo. Obarvana stekelca damo v 5 % raztopino krezolnega mila. Po 24-urnem namakanju v vodi zavrite in operite. Predmetna stekelca ali posode, uporabljene za aglutinacijski test, je treba avtoklavirati in nato oprati.
5. Po zlomu kulture takoj poškropite in namočite kontaminirane dele s 5 % raztopino krezolnega mila ali raztopino karbolne kisline, namakajte pol ure in nato obrišite.
Kontaminirana delovna oblačila ali delovna oblačila, kape, maske itd., ki se uporabljajo za nasilne teste, je treba pred pranjem dati v posebne dezinfekcijske vrečke in sterilizirati pod visokim pritiskom.
Srednje zahtevne priprave
Kakovost priprave gojišča bo neposredno vplivala na rast mikroorganizmov, saj imajo različni mikroorganizmi različne prehranske zahteve in različne namene kulture. Zahteve za pripravo različnih gojišč kulture so naslednje:
1. Sestavine stehtajte po formuli medija in jih nato raztopite v destilirani vodi. Pred uporabo je treba preveriti kakovost uporabljenih reagentov in zdravil.
2. Merjenje pH in nastavitev: Merjenje pH je treba opraviti, ko je gojišče ohlajeno na sobno temperaturo, ker obstaja določena razlika v pH v vročih ali hladnih pogojih. Ko je meritev končana, dodamo lužino ali kislino glede na izračunano količino in dobro premešamo. Ponovno bi bilo treba testirati. Vrednost pH gojišča mora biti točna, sicer bo vplivala na rast mikroorganizmov ali vplivala na opazovanje rezultatov. Vendar je treba opozoriti, da lahko visokotlačna sterilizacija vpliva na znižanje ali povečanje pH nekaterih gojišč, zato ni priporočljivo sterilizirati pri previsokem tlaku ali prevečkrat, da ne bi vplivali na kakovost gojišča. Indikatorji, natrijev deoksiholat, agar itd. so na splošno dodani po prilagoditvi pH.
3. Gojišče mora biti čisto, da se olajša opazovanje rasti bakterij. Ko se gojišče segreje in zavre, ga lahko filtriramo z vpojno vato ali flanelo, da odstranimo usedlino. Po potrebi lahko zbistrimo z beljakom. Uporabljene trakove agarja je treba vnaprej oprati in posušiti. Pred uporabo ne smete vplivati na prosojnost zaradi nečistoč v agarju.
4. Za shranjevanje gojišča ne smete uporabljati železnih, bakrenih in drugih posod. Bolje je, da uporabite čiste posode iz nevtralnega trdega stekla.
5. Sterilizacija gojišča ne sme doseči le namena popolne sterilizacije, temveč tudi paziti, da se zaradi segrevanja ne zmanjša njegova hranilna vrednost. Na splošno zadostuje 121 °C za 15 minut. Za gojišča, ki vsebujejo snovi, ki so intolerantne na visoko vročino, kot so sladkorji in serum, želatina itd., je treba sterilizirati z nizko temperaturo ali intermitentno metodo. Nekatere reagente, ki jih ni mogoče segrevati, kot so kalijev telurit, jajčni rumenjak, TTC, antibiotiki itd., je treba ohladiti na približno 50 °C, potem ko je osnovni agar avtoklaviran in nato dodan;
6. Po pripravi vsake serije gojišča je treba izvesti sterilni test rasti in test rasti testiranih sevov. Če gre za biokemično gojišče, uporabite standardne bakterijske seve za inokulacijo in kulturo ter opazujte rezultate biokemične reakcije. Moral bi pokazati normalno reakcijo. Gojišča ne smemo shranjevati predolgo. Po potrebi ga lahko hranimo v hladilniku pri 4°C.
7. Trenutno obstaja veliko vrst suhih gojišč. Vsaka serija mora uporabiti standardne seve za test rasti ali opazovanje biokemične reakcije. Različna gojišča se lahko uporabljajo šele, ko je rastni test ustreznih sevov dober. Uporabimo lahko na novo kupljene ali posušene, ki so bile dlje časa shranjene. Pri pripravi je treba izmeriti tudi pH gojišča ter upoštevati odmerjanje in način uporabe v skladu z navodili za izdelek.
8. Kemijske reagente, pogoje sterilizacije, rezultate testov rasti seva in proizvodno osebje, uporabljeno v vsaki seriji pripravljenih gojišč, je treba zabeležiti za poizvedbo.
Zahteve za zbiranje in obdelavo vzorcev
1. Zbrani inšpekcijski vzorci morajo biti reprezentativni. Pri vzorčenju je treba podrobno raziskati surovine, predelavo, prevoz, načine shranjevanja in pogoje serije hrane, okoljske zdravstvene razmere itd., da se preveri, ali obstajajo viri kontaminacije.
2. Glede na vrsto in količino hrane je treba količino in metodo vzorčenja izvesti v skladu z zahtevami standardnih inšpekcijskih metod.
3. Pri vzorčenju bodite pozorni na aseptično delovanje, posodo pa je treba sterilizirati, da preprečite mikrobno kontaminacijo v okolju. Posoda ne sme biti sterilizirana z raztopino kreoznega mila, sterilizacija s klormetioninom, alkoholom in drugimi razkužili ter ne sme vsebovati teh razkužil ali antibiotikov. Da bi preprečili uničenje mikroorganizmov v vzorcu, je treba pred uporabo sterilizirati tudi uporabljene škarje, nože in žlice.
4. Vzorce je treba takoj po zbiranju poslati v inšpekcijsko sobo na pregled. Postopek pregleda običajno ne traja več kot 3 ure. Če je razdalja velika, jo lahko shranite v okolju 1 ~ 5 ℃. Če ga je treba zamrzniti, ga je treba hraniti v zamrznjenem stanju. Predajte v pregled.
5. Po prejemu vzorca ga inšpekcijska soba registrira (ime vzorca, enota za pregled, količina, datum, številka itd.) in opazuje videz vzorca. Če se ugotovi kateri koli od naslednjih pogojev, se pregled lahko zavrne:
(1) Vzorci, ki so bili sterilizirani s posebnim visokim pritiskom, vrenjem ali drugimi metodami, bodo izgubili svoj pomen pri predstavljanju izvirnega živila;
(2) Steklenice in vrečke živil so bile odprte, kuhano meso in izdelki iz njega, kuhana perutnina in druga živila razbita in nepopolna, to je izgubljena prvotna oblika živil (razen vzorcev zastrupitve s hrano);
(3) zahtevana količina vzorca ni zadostna;
Za vzorce, predložene v pregled, ki izpolnjujejo zahteve, mora inšpekcijska soba takoj po prejemu opraviti pregled. Če pogoji niso izpolnjeni, jih je treba shraniti v hladilniku pri 4 °C, pravočasno pripraviti na ustvarjanje pogojev in nato opraviti pregled.
6. Pri pregledu vzorcev opravite ustrezno obdelavo glede na njihove različne lastnosti.
(1) Pri inokulaciji tekočih vzorcev jih je treba temeljito premešati in inokulirati glede na količino.
(2) Pri trdnih vzorcih s steriliziranim nožem izrežite 25 g različnih delov, jih položite v 225 ml sterilizirane slane ali druge raztopine, zdrobite in premešajte s homogenizatorjem ter inokulirajte glede na količino.
(3) Steklenice in vrečke s hrano je treba odpreti s sterilizacijo, zgornje metode pa je treba izbrati glede na značilnosti pred inokulacijo.
Zahteve za inšpekcijo vzorcev, evidentiranje in poročanje
1. Po prejemu vzorca bo inšpekcijska soba najprej opravila inšpekcijo videza in takoj izvedla inšpekcijo v skladu z nacionalnimi standardnimi inšpekcijskimi metodami. Med inšpekcijskim postopkom je treba aseptične operacije izvajati previdno, odgovorno in se jim strogo izogibatirezultat mikrobnega testaonesnaženje v okolju.
2. Metode, uporabljene med postopkom inšpekcijskega pregleda vzorca, pojavi in rezultati, ki so se pojavili, itd., morajo biti zapisani v pisnih zapisih o preskusu kot osnova za analizo in presojo rezultatov. Zapisi morajo biti podrobni, jasni, verodostojni, objektivni in ne smejo biti spremenjeni ali ponarejeni.
Zahteve za aseptično delovanje:
1. Pri inokulaciji bakterij morate nositi delovno obleko in delovno kapo.
2. Pri inokulaciji vzorcev živil je potrebno nositi posebno delovno obleko, kape in copate, ki jih odložimo v tamponski prostor sterilne sobe in uporabimo po UV dezinfekciji pred delom.
3. Pri inokulaciji vzorcev hrane si umijte roke z milom, preden vstopite v sterilno sobo, nato pa si roke obrišite z vato, raztopljeno v 75 % alkoholu.
4. Slamice, ploščate posode in gojišča, ki se uporabljajo za inokulacijo, je treba sterilizirati in sterilizirati. Neuporabljenih vsebnikov po odprtju embalaže ne smete pustiti neuporabljenih. Kovinski pribor je treba pred uporabo avtoklavirati ali trikrat sežgati s 95% alkoholom.
5. Ko jemljete slamico iz embalaže, se konica slamice ne sme dotikati izpostavljenih delov. Pri uporabi slamice za inokulacijo epruvete ali plošče se konica slamice ne sme dotikati roba epruvete ali plošče.
6. Inokulacijo vzorcev in prenos bakterij je treba opraviti pred alkoholno svetilko. Pri inokulaciji bakterij ali vzorcev je treba slamico sterilizirati s plamenom, potem ko jo vzamemo iz embalaže in odpremo zamašek epruvete.
7. Pred inokulacijo bakterij je treba vse kovinske žice inokulacijske zanke in igle zažgati s plamenom, po potrebi pa zažgati tudi povezavo med zanko, iglo in palico. Inokulacijsko zanko za inokulacijo bakterij tuberkuloze in virulentnih bakterij je treba 5 minut kuhati v vreli vodi in nato zažgati na plamenu.
8. Pri sesanju bakterijske tekočine ali vzorcev s slamico uporabite ustrezno gumijasto konico za sesanje in ne sesajte neposredno z usti.
Zahteve za uporabo sterilne sobe:
1. Okna, ki vodijo na zunanjo stran sterilne sobe, morajo biti dvojno zastekljena in zatesnjena. Ne smejo se poljubno odpirati. Tam mora biti tamponska soba in drsna vrata, ki ustrezajo velikosti sterilne sobe. Prav tako mora biti majhno okno 0,5 ~ 0,7 m2. Pri pripravi na predajo predmetov po vstopu v sterilno sobo.
2. Sterilni prostor mora biti čist. Po končanem delu ga razkužimo z 2 % do 3 % milno raztopino krezola, delovno površino obrišemo, predmetov, ki niso povezani s poskusom, ne odlagamo.
3. Vrata sterilne sobe je treba pred in po uporabi tesno zapreti in prižgati ultravijolično svetilko. Če se za dezinfekcijo uporablja notranja viseča ultravijolična svetilka, je potrebna ultravijolična svetilka z močjo 30 W. Razdalja je 1,0 m, čas obsevanja pa najmanj 30 minut. Pri uporabi ultravijoličnih žarnic bodite pozorni na delovanje neposredno pod ultravijolično svetlobo, da preprečite poškodbe. Svetilko je treba vsaka dva tedna nežno obrisati z alkoholno vato, da odstranite prah in maščobo ter zmanjšate vpliv ultravijoličnega prodiranja.
4. Pri obdelavi in inokulaciji vzorcev hrane vstopite v sterilno sobo za delovanje in vam ni dovoljeno vstopati ali izstopati po želji. Če je treba predmete predati naprej, jih lahko podate skozi majhno okence.
5. Če je treba v sterilni sobi namestiti klimatsko napravo, mora biti tam filtrirna naprava.
Zahteve za dezinfekcijo in sterilizacijo
Steklenina, kovinski pribor in gojišča, ki se uporabljajo zamikrobiološko testiranje, kontaminirane in cepljene kulture itd. je treba pred uporabo sterilizirati. Metode parne sterilizacije s suho toploto in tlakom z vlažno toploto.
1. Priprava pred sterilizacijo
(1) Vse predmete, ki jih je treba sterilizirati, je treba najprej oprati in posušiti. Stekleni izdelki, kot so slamice in ploščate posode, morajo biti tesno zapakirani s papirjem. Če uporabljate kovinske cevi, je treba prezračevalne luknje na njih odpreti.
(2) Zamašek trikotne bučke, ki vsebuje gojišče, zavijte v papir, pokrijte epruveto in izvlecite jedro brizge ter ga ovijte z gazo.
2. namestite
(1) Sterilizator s suho vročino: Predmeti ne smejo biti prenatrpani in se ne smejo dotikati štirih sten škatle.
(2) Velik visokotlačni parni kuhalnik: položite sterilizirane predmete, jih ločeno zavijte in vstavite neposredno v sterilizacijski valj. Ne prenatrpajte predmetov.
3. Pregled opreme
(1) Preverite, ali je vratno stikalo prožno, ali je gumijasti obroč poškodovan in ali je ploščat.
(2) Preverite, ali manometer ostane na ničelnem položaju, ko je para izčrpana, zaprite vrata in pokrov, prezračite paro ali toploto in opazujte, ali pride do uhajanja zraka, ali se pogoji, označeni z manometrom in termometrom, ujemajo in ali je cevovod zamašen.
(3) Pri sterilizatorjih z napravami za avtomatsko elektronsko krmiljenje programa je treba navedeni program pred uporabo preveriti, ali izpolnjuje zahteve za sterilizacijo.
4. Sterilizacija
(1) Metoda sterilizacije s suho vročino:
Ta metoda je primerna za predmete, ki se ne poškodujejo, poslabšajo ali izhlapijo v pogojih suhe toplote. Pogosteje se uporablja za sterilizacijo steklovine, kovinskih izdelkov, keramičnih izdelkov itd.
①Instrumente in pripomočke je treba pred sušenjem-peko oprati, da preprečite karbonizacijo umazanije, pritrjene na površino.
② Med sterilizacijo predmeti ne smejo biti prenatrpani, ne smejo se neposredno dotikati dna in stene škatle in puščati vrzeli med predmeti.
③ Med sterilizacijo tesno zaprite vrata, priključite napajalnik, odprite izpušno odprtino za približno 30 minut, da odstranite hladen zrak v sterilizatorju, nastavite indikatorsko lučko, ko temperatura naraste na 160 °C, in jo vzdržujte 1,5 do 2 uri.
④Po končani sterilizaciji ali med postopkom dviga temperature je treba vrata odpreti pod 60 °C.
(2) Pri uporabi prenosnega tlačnega lonca ali navpičnega tlačnega parnega sterilizatorja je treba upoštevati naslednje korake:
① Dodajte 3 L vode v glavno ohišje prenosnega lonca na pritisk in 16 L vode v navpični lonec na pritisk (količino vode je treba dopolniti ob ponovni uporabi in vodo je treba zamenjati, če postane motna);
② Pri prenosnem loncu na pritisk vstavite izpušno cev na zgornjem pokrovu v kvadratno cev na notranji steni sterilizacijskega soda (sterilizatorjev brez cevi ali tistih s korodirano in počeno cevjo ne smete uporabljati);
③ Pokrijte zgornji pokrov in ga trdno privijte, da preprečite uhajanje zraka; postavite sterilizator na vir ognja, da se segreje, vklopite navpični lonec na pritisk in odprite izpušni ventil na zgornjem pokrovu, da izpustite zrak (izpušni zrak 10 do 15 minut po tem, ko voda zavre));
④Zaprite izpušni ventil, da dvignete tlak pare na določene zahteve in ga ohranite določen čas (odvisno od narave steriliziranih predmetov in ustreznih okoliščin);
⑤ Ko je dosežen določen čas, za predmete, ki jih je treba posušiti, takoj odprite izpušni ventil, da izpustite paro. Ko se tlak vrne na nič, jo naravno ohladite na 60 °C in nato odprite pokrov, da vzamete predmete ven. Če gre za tekočino, ne odpirajte izpušnega ventila. Lonec je treba takoj odstraniti iz vira toplote in pustiti, da se naravno ohladi, dokler se tlak ne vrne na nič in temperatura pade pod 60 °C, preden odprete pokrov, da odstranite vsebino, da preprečite nenadno dekompresijo tekočine zaradi močnega vrenja ali eksplozije posode.
(3) Sledite naslednjim korakom za uporabo parnega sterilizatorja z vodoravnim tlačnim loncem:
①Trdno zaprite vrata lonca, odprite ventil za dovod zraka, vnesite paro v medetažo za predgretje in hladen zrak v medetažo bo samodejno izpuščen skozi zračno pregrado;
②Ko vmesni sloj doseže vnaprej določeno temperaturo, odprite ventil za dovod zraka v komoro lonca, vnesite paro v komoro lonca in hladen zrak v komori lonca se bo samodejno izpustil skozi odvodnik zraka v komori lonca;
③Ko tlak in temperatura v komori lonca dosežeta določen tlak, prilagodite dovodni ventil zraka, da ostane konstanten;
④ Ohladite naravno ali umetno temperaturo na 60 ℃, preden odprete vrata in vzamete ven predmete. Ne uporabljajte metode hitrega izpusta pare, da preprečite nenaden padec tlaka, močno vrenje tekočine ali eksplozijo posode;
⑤ Ko uporabljate samodejni program - parni sterilizator z nadzorovanim tlakom, morate po namestitvi predmetov in tesnem zapiranju vrat pritisniti ustrezno stikalo glede na kategorijo predmetov, tako da se lahko sterilizacija samodejno izvede v skladu z zahtevanimi postopki. Med sterilizacijo je treba s priloženim instrumentom beležiti temperaturo in čas. Za prihodnjo uporabo morajo biti zahteve glede delovanja strogo v skladu z navodili proizvajalca;
5. Temperatura in čas sterilizacije
(1) Sterilizacijska temperatura sterilizatorja s suho toploto je 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Sterilizacijska temperatura in čas tlačnega parnega sterilizatorja
Intermitentna metoda sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Uporabite sterilizacijo s paro brez pritiska. Nekatere snovi se zlahka uničijo pri sterilizaciji s paro pod visokim-tlakom, zato se ta metoda lahko uporablja za sterilizacijo.
(1) Predmete, ki jih želite sterilizirati, postavite v lonec, pokrijte zgornji pokrov, odprite odtočno odprtino in odcedite preostalo vodo v loncu.
(2) Zaprite odtočno odprtino, odprite vrata za dovod zraka in po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minut.
(3) Po končani sterilizaciji zaprite vrata za dovod zraka, vzemite predmete ven in počakajte, da se ohladijo na sobno temperaturo, jih čez noč postavite v inkubator pri 37 °C in naslednji dan nadaljujte s sterilizacijo po zgornji metodi. To naredite trikrat, da dosežete namen sterilizacije.
2. Kako uporabljati serumski koagulator:
Kadar gojišče vsebuje posebne sestavine, kot so serum ali jajca, visoka vročina uniči njegova hranila. Zato lahko nizko temperaturo uporabimo za koagulacijo seruma in doseganje namenov sterilizacije:
(1) Pri uporabi seruma, steriliziranega s to metodo za alikvot, je treba dosledno upoštevati aseptične postopke, pred uporabo pa je treba sterilizirati tudi epruvete in plošče;
(2) Gojišče postavite v nagnjeno ali visoko plast, kot je potrebno. Ko dodate dovolj vode, priključite napajalnik, dvignite temperaturo na 75~90°C za eno uro in nato sterilizirajte. Čez noč ga postavite v inkubator pri 37 °C in ga nato trikrat sterilizirajte.
3. Prekuhajte in razkužite:
Uporabite lahko kuhalno posodo ali kuhalni sterilizator. Ko voda zavre, jo kuhajte 5 do 15 minut. Vodi lahko dodamo tudi 2 % karbolno kislino in pustimo vreti 5 minut. Dodajte 0,02 % formaldehida in kuhajte pri 80 °C 60 minut, da dosežete namen sterilizacije. Vendar je mogoče doseči sterilizacijo z vrenjem. Pri uporabi ojačevalcev je treba biti pozoren na jedkost predmetov.
4. Sterilizacija:
Po sterilizaciji so predmeti v normalnih okoliščinah že sterilni. Ko jih vzamete iz sterilizatorja, jih je treba natančno pregledati in namestiti, da preprečite ponovno kontaminacijo;
(1) Predmete takoj vzemite ven in preverite celovitost embalaže. Če je tampon poškodovan ali je tampon odstranjen, ga ni mogoče uporabiti kot sterilnega predmeta;
(2) Izvzeti predmeti se ne morejo uporabljati kot sterilni predmeti, če je njihova embalaža očitno prepojena z vodo;
(3) Gojišče ali reagente je treba preveriti, ali ustrezajo barvi ali stanju po sterilizaciji. Tiste, ki ne izpolnjujejo zahtev, je treba zavreči;
(4) Pri odprtih/zaprtih posodah morajo biti odprtine na mrežici zaprte, ko jih jemljete ven;
(5) Če odstranjeni predmeti padejo na tla, so odloženi na nečisto mesto ali so umazani z vodo, se štejejo za kontaminirane in jih ni mogoče uporabiti kot sterilne predmete;
(6) Kvalificirane sterilizirane predmete je treba shraniti v skladišču ali v omari, odporni proti prahu, in strogo je prepovedano mešati jih z nesteriliziranimi predmeti;
(7) Vsi kvalificirani izdelki morajo biti označeni z datumom sterilizacije in datumom poteka;
(8) Ko je vsaka serija sterilizacijske obdelave končana, zabeležite ime, količino, temperaturo, čas in operaterja steriliziranih izdelkov.
Zahteve za obdelavo strupenih in bakterijskih odpadkov
Eksperimentalne opreme in kultur, ki se uporabljajo v mikrobioloških poskusih, ne smete odnašati iz laboratorija brez razkuževanja.
1. Gojene kontaminirane materiale in odpadke je treba dati v tesne posode ali žične košare in jih shraniti centralno na določenih lokacijah, dokler niso enakomerno obdelani v avtoklavu.
2. Kulture, kontaminirane z mikroorganizmi, je treba 30 minut avtoklavirati pri 121 °C.
3. Po uporabi je treba kontaminirane slamice dati v 5-odstotno raztopino kreolnega mila ali raztopino karbolne kisline, namakati vsaj 24 ur (razkužilna tekočina ne sme biti nižja od višine namakanja) in nato 30 minut sterilizirati pod visokim pritiskom pri 121 °C.
4. Tekočino za barvanje in izpiranje razmazov lahko na splošno splaknete neposredno v kanalizacijo. Tekočino za izpiranje virulentnih bakterij je treba splakniti v čašo in sterilizirati pod visokim pritiskom, preden jo zlijemo v kanalizacijo. Obarvana stekelca damo v 5 % raztopino krezolnega mila. Po 24-urnem namakanju v vodi zavrite in operite. Predmetna stekelca ali posode, uporabljene za aglutinacijski test, je treba avtoklavirati in nato oprati.
5. Po zlomu kulture takoj poškropite in namočite kontaminirane dele s 5 % raztopino krezolnega mila ali raztopino karbolne kisline, namakajte pol ure in nato obrišite.
Kontaminirana delovna oblačila ali delovna oblačila, kape, maske itd., ki se uporabljajo za nasilne teste, je treba pred pranjem dati v posebne dezinfekcijske vrečke in sterilizirati pod visokim pritiskom.
Srednje zahtevne priprave
Kakovost priprave gojišča bo neposredno vplivala na rast mikroorganizmov, saj imajo različni mikroorganizmi različne prehranske zahteve in različne namene kulture. Zahteve za pripravo različnih gojišč kulture so naslednje:
1. Sestavine stehtajte po formuli medija in jih nato raztopite v destilirani vodi. Pred uporabo je treba preveriti kakovost uporabljenih reagentov in zdravil.
2. Merjenje pH in nastavitev: Merjenje pH je treba opraviti, ko je gojišče ohlajeno na sobno temperaturo, ker obstaja določena razlika v pH v vročih ali hladnih pogojih. Ko je meritev končana, dodamo lužino ali kislino glede na izračunano količino in dobro premešamo. Ponovno bi bilo treba testirati. Vrednost pH gojišča mora biti točna, sicer bo vplivala na rast mikroorganizmov ali vplivala na opazovanje rezultatov. Vendar je treba opozoriti, da lahko visokotlačna sterilizacija vpliva na znižanje ali povečanje pH nekaterih gojišč, zato ni priporočljivo sterilizirati pri previsokem tlaku ali prevečkrat, da ne bi vplivali na kakovost gojišča. Indikatorji, natrijev deoksiholat, agar itd. so na splošno dodani po prilagoditvi pH.
3. Gojišče mora biti čisto, da se olajša opazovanje rasti bakterij. Ko se gojišče segreje in zavre, ga lahko filtriramo z vpojno vato ali flanelo, da odstranimo usedlino. Po potrebi lahko zbistrimo z beljakom. Uporabljene trakove agarja je treba vnaprej oprati in posušiti. Pred uporabo ne smete vplivati na prosojnost zaradi nečistoč v agarju.
4. Za shranjevanje gojišča ne smete uporabljati železnih, bakrenih in drugih posod. Bolje je, da uporabite čiste posode iz nevtralnega trdega stekla.
5. Sterilizacija gojišča ne sme doseči le namena popolne sterilizacije, temveč tudi paziti, da se zaradi segrevanja ne zmanjša njegova hranilna vrednost. Na splošno zadostuje 121 °C za 15 minut. Za gojišča, ki vsebujejo snovi, ki so intolerantne na visoko vročino, kot so sladkorji in serum, želatina itd., je treba sterilizirati z nizko temperaturo ali intermitentno metodo. Nekatere reagente, ki jih ni mogoče segrevati, kot so kalijev telurit, jajčni rumenjak, TTC, antibiotiki itd., je treba ohladiti na približno 50 °C, potem ko je osnovni agar avtoklaviran in nato dodan;
6. Po pripravi vsake serije gojišča je treba izvesti sterilni test rasti in test rasti testiranih sevov. Če gre za biokemično gojišče, uporabite standardne bakterijske seve za inokulacijo in kulturo ter opazujte rezultate biokemične reakcije. Moral bi pokazati normalno reakcijo. Gojišča ne smemo shranjevati predolgo. Po potrebi ga lahko hranimo v hladilniku pri 4°C.
7. Trenutno obstaja veliko vrst suhih gojišč. Vsaka serija mora uporabiti standardne seve za test rasti ali opazovanje biokemične reakcije. Različna gojišča se lahko uporabljajo šele, ko je rastni test ustreznih sevov dober. Uporabimo lahko na novo kupljene ali posušene, ki so bile dlje časa shranjene. Pri pripravi je treba izmeriti tudi pH gojišča ter upoštevati odmerjanje in način uporabe v skladu z navodili za izdelek.
8. Kemijske reagente, pogoje sterilizacije, rezultate testov rasti seva in proizvodno osebje, uporabljeno v vsaki seriji pripravljenih gojišč, je treba zabeležiti za poizvedbo.
Zahteve za zbiranje in obdelavo vzorcev
1. Zbrani inšpekcijski vzorci morajo biti reprezentativni. Pri vzorčenju je treba podrobno raziskati surovine, predelavo, prevoz, načine shranjevanja in pogoje serije hrane, okoljske zdravstvene razmere itd., da se preveri, ali obstajajo viri kontaminacije.
2. Glede na vrsto in količino hrane je treba količino in metodo vzorčenja izvesti v skladu z zahtevami standardnih inšpekcijskih metod.
3. Pri vzorčenju bodite pozorni na aseptično delovanje, posodo pa je treba sterilizirati, da preprečite mikrobno kontaminacijo v okolju. Posoda ne sme biti sterilizirana z raztopino kreoznega mila, sterilizacija s klormetioninom, alkoholom in drugimi razkužili ter ne sme vsebovati teh razkužil ali antibiotikov. Da bi preprečili uničenje mikroorganizmov v vzorcu, je treba pred uporabo sterilizirati tudi uporabljene škarje, nože in žlice.
4. Vzorce je treba takoj po zbiranju poslati v inšpekcijsko sobo na pregled. Postopek pregleda običajno ne traja več kot 3 ure. Če je razdalja velika, jo lahko shranite v okolju 1 ~ 5 ℃. Če ga je treba zamrzniti, ga je treba hraniti v zamrznjenem stanju. Predajte v pregled.
5. Po prejemu vzorca ga inšpekcijska soba registrira (ime vzorca, enota za pregled, količina, datum, številka itd.) in opazuje videz vzorca. Če se ugotovi kateri koli od naslednjih pogojev, se pregled lahko zavrne:
(1) Vzorci, ki so bili sterilizirani s posebnim visokim pritiskom, vrenjem ali drugimi metodami, bodo izgubili svoj pomen pri predstavljanju izvirnega živila;
(2) Steklenice in vrečke živil so bile odprte, kuhano meso in izdelki iz njega, kuhana perutnina in druga živila razbita in nepopolna, to je izgubljena prvotna oblika živil (razen vzorcev zastrupitve s hrano);
(3) zahtevana količina vzorca ni zadostna;
Za vzorce, predložene v pregled, ki izpolnjujejo zahteve, mora inšpekcijska soba takoj po prejemu opraviti pregled. Če pogoji niso izpolnjeni, jih je treba shraniti v hladilniku pri 4 °C, pravočasno pripraviti na ustvarjanje pogojev in nato opraviti pregled.
6. Pri pregledu vzorcev opravite ustrezno obdelavo glede na njihove različne lastnosti.
(1) Pri inokulaciji tekočih vzorcev jih je treba temeljito premešati in inokulirati glede na količino.
(2) Pri trdnih vzorcih s steriliziranim nožem izrežite 25 g različnih delov, jih položite v 225 ml sterilizirane slane ali druge raztopine, zdrobite in premešajte s homogenizatorjem ter inokulirajte glede na količino.
(3) Steklenice in vrečke s hrano je treba odpreti s sterilizacijo, zgornje metode pa je treba izbrati glede na značilnosti pred inokulacijo.
Zahteve za inšpekcijo vzorcev, evidentiranje in poročanje
1. Po prejemu vzorca bo inšpekcijska soba najprej opravila inšpekcijo videza in takoj izvedla inšpekcijo v skladu z nacionalnimi standardnimi inšpekcijskimi metodami. Med inšpekcijskim postopkom je treba aseptične operacije izvajati previdno, odgovorno in se jim strogo izogibatirezultat mikrobnega testaonesnaženje v okolju.
2. Metode, uporabljene med postopkom inšpekcijskega pregleda vzorca, pojavi in rezultati, ki so se pojavili, itd., morajo biti zapisani v pisnih zapisih o preskusu kot osnova za analizo in presojo rezultatov. Zapisi morajo biti podrobni, jasni, verodostojni, objektivni in ne smejo biti spremenjeni ali ponarejeni.
