สรุปข้อกำหนดการทดสอบทางจุลชีววิทยา
2024-01-24 15:14:33
ข้อกำหนดและขั้นตอนสำหรับการทดสอบทางจุลชีววิทยามีดังต่อไปนี้:
ข้อกำหนดการดำเนินงานปลอดเชื้อ:
1.คุณต้องสวมชุดทำงานและหมวกทำงานเมื่อทำการเพาะเชื้อแบคทีเรีย
2. เมื่อทำการเพาะเชื้อตัวอย่างอาหาร ต้องสวมชุดทำงานพิเศษ หมวก และรองเท้าแตะ ซึ่งควรวางไว้ในห้องบัฟเฟอร์ของห้องปลอดเชื้อ และใช้หลังจากการฆ่าเชื้อด้วยรังสียูวีก่อนทำงาน
3. เมื่อฉีดเชื้อตัวอย่างอาหาร ให้ล้างมือด้วยสบู่ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ แล้วเช็ดมือให้สะอาดด้วยสำลีแอลกอฮอล์ 75%
4. หลอด จานแบน และสื่อการเพาะเลี้ยงที่ใช้ในการเพาะเชื้อจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อและสเตอริไลซ์ ภาชนะที่ไม่ได้ใช้ไม่ควรปล่อยทิ้งไว้โดยไม่ได้ใช้หลังจากเปิดบรรจุภัณฑ์ อุปกรณ์โลหะควรนึ่งหรือเผาด้วยแอลกอฮอล์ 95% สามครั้งก่อนใช้งาน
5. เมื่อนำหลอดออกจากบรรจุภัณฑ์ ปลายหลอดจะต้องไม่สัมผัสกับส่วนที่ยื่นออกมา เมื่อใช้หลอดทดลองฉีดเชื้อในหลอดทดลองหรือจาน ปลายหลอดทดลองต้องไม่สัมผัสกับขอบของหลอดทดลองหรือจาน
6. จะต้องฉีดเชื้อตัวอย่างและเคลื่อนย้ายแบคทีเรียที่หน้าโคมไฟแอลกอฮอล์ เมื่อทำการเพาะเชื้อแบคทีเรียหรือตัวอย่าง หลอดจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟหลังจากนำออกจากบรรจุภัณฑ์และเปิดจุกหลอดทดลอง
7. ก่อนที่จะเพาะเชื้อแบคทีเรีย ควรเผาลวดโลหะทั้งหมดของห่วงปลูกเชื้อและเข็มด้วยเปลวไฟ และหากจำเป็น ควรเผาการเชื่อมต่อระหว่างห่วง เข็ม และก้าน วงจรการฉีดวัคซีนสำหรับปลูกเชื้อแบคทีเรียวัณโรคและแบคทีเรียที่มีฤทธิ์รุนแรงควรต้มในน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาทีแล้วเผาด้วยเปลวไฟ
8. เมื่อดูดของเหลวจากแบคทีเรียหรือตัวอย่างด้วยหลอด ให้ใช้ปลายยางที่เกี่ยวข้องในการดูด และอย่าดูดด้วยปากโดยตรง
ข้อกำหนดการใช้ห้องปลอดเชื้อ:
1. หน้าต่างที่ออกไปด้านนอกห้องปลอดเชื้อควรเป็นกระจกสองชั้นและปิดผนึก ไม่ควรเปิดตามต้องการ ควรมีห้องบัฟเฟอร์และประตูบานเลื่อนตามขนาดของห้องปลอดเชื้อ ควรมีหน้าต่างเล็ก ๆ ขนาด 0.5~0.7m2 เพื่อเตรียมการส่งต่อสิ่งของหลังเข้าห้องปลอดเชื้อ
2. ห้องปลอดเชื้อควรรักษาความสะอาด หลังเลิกงานควรฆ่าเชื้อด้วยสารละลายสบู่ครีซอล 2% ถึง 3% ควรเช็ดพื้นผิวการทำงาน และไม่ควรจัดเก็บสิ่งของที่ไม่เกี่ยวข้องกับการทดลอง
3. ควรปิดประตูห้องปลอดเชื้อให้แน่นก่อนและหลังการใช้งานและควรเปิดหลอดอัลตราไวโอเลต หากใช้หลอดอัลตราไวโอเลตแบบแขวนในอาคารเพื่อฆ่าเชื้อ จำเป็นต้องใช้หลอดอัลตราไวโอเลต 30W ระยะทาง 1.0 เมตร และเวลาในการฉายรังสีไม่น้อยกว่า 30 นาที เมื่อใช้หลอดอัลตราไวโอเลต ควรให้ความสนใจกับการใช้งานโดยตรงภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตเพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหาย ต้องเช็ดหลอดไฟเบาๆ ด้วยสำลีแอลกอฮอล์ทุกสองสัปดาห์เพื่อขจัดฝุ่นและไขมัน เพื่อลดผลกระทบจากการแทรกซึมของรังสีอัลตราไวโอเลต
4. เมื่อแปรรูปและเพาะเชื้อตัวอย่างอาหาร ให้เข้าไปในห้องปลอดเชื้อเพื่อดำเนินการ และไม่อนุญาตให้เข้าหรือออกตามต้องการ หากจำเป็นต้องส่งต่อสิ่งของก็สามารถผ่านหน้าต่างเล็ก ๆ ได้
5.หากจำเป็นต้องติดตั้งเครื่องปรับอากาศในห้องปลอดเชื้อควรมีเครื่องกรอง
ข้อกำหนดในการฆ่าเชื้อและการฆ่าเชื้อ
เครื่องแก้ว เครื่องใช้โลหะ และสื่อการเพาะเลี้ยงที่ใช้การทดสอบทางจุลชีววิทยา, วัฒนธรรมที่ปนเปื้อนและเพาะเชื้อ ฯลฯ จะต้องผ่านการฆ่าเชื้อก่อนใช้งาน วิธีการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำความร้อนแห้งและความร้อนชื้น
1. การเตรียมการก่อนการฆ่าเชื้อ
(1) รายการทั้งหมดที่ต้องฆ่าเชื้อควรล้างและทำให้แห้งก่อน เครื่องแก้ว เช่น หลอดและจานแบน ควรบรรจุด้วยกระดาษให้แน่น หากใช้ท่อโลหะควรเปิดรูระบายอากาศที่ท่อเหล่านั้น
(2) ห่อจุกของขวดทรงสามเหลี่ยมที่บรรจุอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ในกระดาษ ปิดหลอดทดลอง และดึงแกนของกระบอกฉีดยาออกมา แล้วพันด้วยผ้ากอซ
2. ติดตั้ง
(1) เครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยความร้อนแบบแห้ง: สินค้าจะต้องไม่แออัดจนเกินไปและไม่สามารถสัมผัสผนังทั้งสี่ด้านของกล่องได้
(2) หม้อนึ่งความดันสูงขนาดใหญ่: วางสิ่งของที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ห่อแยกกัน และใส่ลงในกระบอกฆ่าเชื้อโดยตรง อย่าให้สิ่งของแน่นเกินไป
3. การตรวจสอบอุปกรณ์
(1) ตรวจสอบว่าสวิตช์ประตูมีความยืดหยุ่นหรือไม่ แหวนยางเสียหายหรือไม่ และแบนหรือไม่
(2) ตรวจสอบว่าเกจวัดความดันอยู่ที่ตำแหน่งศูนย์หรือไม่เมื่อไอน้ำหมด ปิดประตูและฝาครอบ ระบายอากาศด้วยไอน้ำหรือความร้อน และสังเกตดูว่ามีอากาศรั่วหรือไม่ สภาพที่เกจวัดแรงดันและเทอร์โมมิเตอร์ทำเครื่องหมายไว้ตรงกันหรือไม่ และท่อถูกบล็อกหรือไม่
(3) สำหรับเครื่องฆ่าเชื้อที่มีอุปกรณ์ควบคุมโปรแกรมอิเล็กทรอนิกส์อัตโนมัติ ควรตรวจสอบโปรแกรมที่ระบุก่อนใช้งานเพื่อดูว่าตรงตามข้อกำหนดสำหรับการฆ่าเชื้อหรือไม่
4. การบำบัดด้วยการฆ่าเชื้อ
(1) วิธีการฆ่าเชื้อด้วยความร้อนแห้ง:
วิธีนี้เหมาะสำหรับสิ่งของที่ไม่เสียหาย เสื่อมสภาพ หรือระเหยภายใต้สภาวะความร้อนแห้ง มักใช้ในการฆ่าเชื้อเครื่องแก้ว ผลิตภัณฑ์โลหะ ผลิตภัณฑ์เซรามิก ฯลฯ
1. ควรล้างเครื่องมือและอุปกรณ์ต่างๆ ก่อนอบ - อบเพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งสกปรกที่ติดอยู่บนพื้นผิวถูกทำให้เป็นคาร์บอน
2 ระหว่างการฆ่าเชื้อ สินค้าจะต้องไม่แน่นเกินไป ห้ามสัมผัสด้านล่างและผนังกล่องโดยตรง และเว้นช่องว่างระหว่างสิ่งของ
3 ระหว่างการฆ่าเชื้อ ให้ปิดประตูให้แน่น เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟ เปิดรูระบายอากาศเป็นเวลาประมาณ 30 นาทีเพื่อขจัดอากาศเย็นในเครื่องฆ่าเชื้อ ปรับไฟแสดงสถานะเมื่ออุณหภูมิสูงขึ้นถึง 160°C และคงไว้เป็นเวลา 1.5 ถึง 2 ชั่วโมง
④หลังจากการฆ่าเชื้อเสร็จสิ้นหรือในระหว่างกระบวนการเพิ่มอุณหภูมิ ประตูจะต้องเปิดที่อุณหภูมิต่ำกว่า 60°C
(2) ควรปฏิบัติตามขั้นตอนต่อไปนี้เมื่อใช้หม้ออัดแรงดันแบบพกพาหรือเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดันแนวตั้ง:
1. เติมน้ำ 3 ลิตรลงในตัวเครื่องหลักของหม้ออัดแรงดันแบบพกพา และเติมน้ำ 16 ลิตรลงในหม้ออัดแรงดันแนวตั้ง (ควรเติมน้ำเมื่อนำกลับมาใช้ใหม่ และต้องเปลี่ยนน้ำหากขุ่น)
② สำหรับหม้ออัดความดันแบบพกพา ให้สอดท่อไอเสียที่ฝาครอบด้านบนเข้าไปในท่อสี่เหลี่ยมที่ผนังด้านในของถังฆ่าเชื้อ (ต้องไม่ใช้เครื่องฆ่าเชื้อที่ไม่มีท่อหรือท่อที่สึกกร่อนและแตกร้าว)
3 ปิดฝาครอบด้านบนแล้วขันให้แน่นเพื่อป้องกันการรั่วไหลของอากาศ วางเครื่องนึ่งขวดนมบนแหล่งไฟเพื่อให้ความร้อน เปิดหม้ออัดความดันแนวตั้ง และเปิดวาล์วไอเสียบนฝาปิดด้านบนเพื่อระบายอากาศออก (ระบายอากาศออกเป็นเวลา 10 ถึง 15 นาทีหลังจากที่น้ำเดือด) );
④ปิดวาล์วไอเสียเพื่อเพิ่มแรงดันไอน้ำตามข้อกำหนดที่ระบุและคงไว้ตามเวลาที่กำหนด (ขึ้นอยู่กับลักษณะของรายการที่ผ่านการฆ่าเชื้อและสถานการณ์ที่เกี่ยวข้อง)
⑤ หลังจากถึงเวลาที่กำหนด สำหรับสิ่งของที่ต้องทำให้แห้ง ให้เปิดวาล์วไอเสียทันทีเพื่อระบายไอน้ำ เมื่อความดันกลับมาเป็นศูนย์ ให้ทำให้เย็นลงตามธรรมชาติที่ 60°C จากนั้นเปิดฝาเพื่อนำสิ่งของออกมา หากเป็นของเหลวห้ามเปิดวาล์วไอเสีย ควรนำหม้อออกจากแหล่งความร้อนทันทีและปล่อยให้เย็นตามธรรมชาติจนกระทั่งความดันกลับคืนสู่ศูนย์และอุณหภูมิลดลงต่ำกว่า 60°C ก่อนเปิดฝาเพื่อนำเนื้อหาออกมา เพื่อป้องกันการบีบอัดของเหลวอย่างฉับพลันจากการเดือดหรือการระเบิดของภาชนะอย่างรุนแรง
(3) ทำตามขั้นตอนต่อไปนี้เพื่อใช้เครื่องนึ่งขวดนมหม้อแรงดันแนวนอน:
①ปิดประตูหม้อให้แน่น เปิดวาล์วทางเข้าอากาศ นำไอน้ำเข้าไปในชั้นลอยเพื่ออุ่นเครื่อง และอากาศเย็นในชั้นลอยจะถูกระบายออกโดยอัตโนมัติผ่านแผงกั้นอากาศ
2. หลังจากที่ชั้นระหว่างชั้นถึงอุณหภูมิที่กำหนดไว้แล้ว ให้เปิดวาล์วทางเข้าอากาศของห้องหม้อ นำไอน้ำเข้าไปในห้องหม้อ และอากาศเย็นในห้องหม้อจะถูกระบายออกโดยอัตโนมัติผ่านตัวดักจับอากาศของห้องหม้อ
3 เมื่อความดันและอุณหภูมิในห้องหม้อถึงความดันที่กำหนด ให้ปรับวาล์วทางเข้าอากาศเพื่อให้คงที่
④ ปรับอุณหภูมิให้เย็นลงตามธรรมชาติหรือโดยไม่ได้ตั้งใจเป็น 60°C ก่อนเปิดประตูเพื่อนำสิ่งของออกมา อย่าใช้วิธีการปล่อยไอน้ำอย่างรวดเร็วเพื่อป้องกันแรงดันตกอย่างกะทันหัน ของเหลวเดือดอย่างรุนแรง หรือการระเบิดของภาชนะ
⑤ เมื่อใช้โปรแกรมอัตโนมัติ - เครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดันควบคุม หลังจากวางสิ่งของและปิดประตูอย่างแน่นหนา ควรกดสวิตช์ที่เกี่ยวข้องตามหมวดหมู่ของสิ่งของเพื่อให้สามารถดำเนินการฆ่าเชื้อได้โดยอัตโนมัติตามขั้นตอนที่กำหนด ในระหว่างการฆ่าเชื้อจะต้องใช้เครื่องมือที่แนบมาเพื่อบันทึกอุณหภูมิและเวลา สำหรับการอ้างอิงในอนาคต ข้อกำหนดในการใช้งานควรเป็นไปตามคำแนะนำของผู้ผลิตอย่างเคร่งครัด
5. อุณหภูมิและเวลาในการฆ่าเชื้อ
(1) อุณหภูมิในการฆ่าเชื้อของเครื่องนึ่งขวดนมด้วยความร้อนแห้งคือ 160°C, 1.5~2 ชั่วโมง
(2) อุณหภูมิและเวลาในการฆ่าเชื้อของเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดัน
วิธีการฆ่าเชื้อเป็นระยะ
1. วิธีการฆ่าเชื้อ:
ใช้การฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำโดยไม่มีแรงกด สารบางชนิดถูกทำลายได้ง่ายด้วยการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำแรงดันสูง ดังนั้นวิธีนี้จึงสามารถนำไปใช้ในการฆ่าเชื้อได้
(1) วางสิ่งของที่จะฆ่าเชื้อลงในหม้อ ปิดฝาด้านบน เปิดช่องระบายน้ำ และระบายน้ำที่เหลืออยู่ในหม้อออก
(2) ปิดช่องระบายน้ำ เปิดประตูช่องอากาศเข้า และฆ่าเชื้อเป็นเวลา 10 ถึง 20 นาทีตามความจำเป็น
(3) หลังจากการฆ่าเชื้อเสร็จสิ้น ให้ปิดประตูทางเข้าอากาศ นำสิ่งของออกและรอให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง จากนั้นนำไปแช่ในตู้อบที่มีอุณหภูมิ 37°C ค้างคืน และฆ่าเชื้อต่อไปตามวิธีการข้างต้นในวันถัดไป ทำเช่นนี้สามครั้งเพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อ
2. วิธีใช้เซรั่มแข็งตัว:
เมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อมีส่วนผสมพิเศษ เช่น เซรั่มหรือไข่ ความร้อนสูงจะทำลายสารอาหารของมัน ดังนั้น สามารถใช้อุณหภูมิต่ำเพื่อทำให้ซีรั่มแข็งตัวและบรรลุวัตถุประสงค์ในการฆ่าเชื้อได้:
(1) เมื่อใช้เซรั่มฆ่าเชื้อด้วยวิธีนี้เพื่อแบ่งส่วน ต้องปฏิบัติตามการดำเนินการปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัด และต้องฆ่าเชื้อหลอดทดลองและเพลตก่อนใช้งาน
(2) ทำให้อาหารเลี้ยงเชื้อมีความลาดชันหรือเป็นชั้นสูงตามต้องการ หลังจากเติมน้ำเพียงพอแล้ว ให้เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟ เพิ่มอุณหภูมิเป็น 75~90°C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง จากนั้นจึงฆ่าเชื้อ วางมันไว้ในตู้ฟักที่มีอุณหภูมิ 37°C ข้ามคืน จากนั้นฆ่าเชื้อสามครั้ง
3. ต้มและฆ่าเชื้อ:
คุณสามารถใช้หม้อต้มหรือเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อได้ หลังจากน้ำเดือดแล้วให้ต้มประมาณ 5 ถึง 15 นาที คุณยังสามารถเติมกรดคาร์โบลิก 2% ลงในน้ำแล้วต้มเป็นเวลา 5 นาที เติมฟอร์มาลดีไฮด์ 0.02% และต้มที่อุณหภูมิ 80°C เป็นเวลา 60 นาที เพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อ อย่างไรก็ตามสามารถทำการฆ่าเชื้อแบบเดือดได้ เมื่อใช้สารเสริม ควรให้ความสนใจกับการกัดกร่อนของสิ่งของ
4. การฆ่าเชื้อ:
หลังจากการฆ่าเชื้อ สินค้าจะผ่านการฆ่าเชื้อแล้วภายใต้สถานการณ์ปกติ ควรตรวจสอบและวางอย่างระมัดระวังเมื่อนำออกจากเครื่องฆ่าเชื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนซ้ำ
(1) นำสิ่งของออกและตรวจสอบความสมบูรณ์ของบรรจุภัณฑ์ทันที หากมีความเสียหายหรือถอดผ้าอนามัยแบบสอดออก จะไม่สามารถใช้เป็นของปลอดเชื้อได้
(2) สิ่งของที่นำออกมาไม่สามารถใช้เป็นสิ่งของปลอดเชื้อได้ หากบรรจุภัณฑ์แช่น้ำไว้อย่างเห็นได้ชัด
(3) ควรตรวจสอบอาหารเลี้ยงเชื้อหรือรีเอเจนต์เพื่อดูว่าตรงตามสีหรือสถานะหลังการฆ่าเชื้อหรือไม่ ผู้ที่ไม่ตรงตามข้อกำหนดควรละทิ้ง
(4) สำหรับภาชนะแบบเปิด - ปิด ควรปิดรูตะแกรงเมื่อนำออกมา
(5) หากสิ่งของที่ถอดออกตกลงสู่พื้น วางผิดที่ในสถานที่ที่ไม่สะอาด หรือเปื้อนน้ำ จะถือว่ามีสิ่งปนเปื้อนและไม่สามารถนำมาใช้เป็นของปลอดเชื้อได้
(6) สินค้าที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่ผ่านการรับรองแล้วควรเก็บไว้ในห้องเก็บของหรือตู้กันฝุ่น และห้ามมิให้ผสมกับสิ่งของที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยเด็ดขาด
(7) รายการที่ผ่านการรับรองทั้งหมดควรมีเครื่องหมายวันที่ฆ่าเชื้อและวันหมดอายุ
(8) หลังจากเสร็จสิ้นกระบวนการฆ่าเชื้อแต่ละชุดแล้ว ให้บันทึกชื่อ ปริมาณ อุณหภูมิ เวลา และผู้ปฏิบัติงานของผลิตภัณฑ์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ
ข้อกำหนดสำหรับการบำบัดของเสียที่เป็นพิษและแบคทีเรีย
ต้องไม่นำอุปกรณ์ทดลองและการเพาะเลี้ยงที่ใช้ในการทดลองทางจุลชีววิทยาออกจากห้องปฏิบัติการโดยไม่มีการฆ่าเชื้อ
1. วัสดุและของเสียที่ปนเปื้อนจากการเพาะเลี้ยงควรวางในภาชนะที่แน่นหนาหรือตะกร้าลวด และจัดเก็บไว้ตรงกลางในสถานที่ที่กำหนดจนกว่าจะนึ่งฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอ
2. การเพาะเลี้ยงที่ปนเปื้อนด้วยจุลินทรีย์จะต้องนำไปนึ่งที่อุณหภูมิ 121°C เป็นเวลา 30 นาที
3. หลังการใช้งาน ควรใส่หลอดที่ปนเปื้อนในสารละลายสบู่ครีออล 5% หรือสารละลายกรดคาร์โบลิก แช่ไว้อย่างน้อย 24 ชั่วโมง (น้ำยาฆ่าเชื้อต้องไม่ต่ำกว่าความสูงในการแช่) จากนั้นฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงที่ 121°C เป็นเวลา 30 นาที
4. โดยทั่วไปสามารถทิ้งของเหลวสำหรับคราบเปื้อนและล้างลงในท่อระบายน้ำได้โดยตรง น้ำยาล้างแบคทีเรียชนิดรุนแรงต้องล้างในบีกเกอร์และฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงก่อนเทลงท่อน้ำทิ้ง สไลด์ที่เปื้อนสีจะถูกใส่ลงในสารละลายสบู่ครีซอล 5% หลังจากแช่น้ำไว้ 24 ชั่วโมง ให้ต้มและล้าง สไลด์หรือจานที่ใช้สำหรับการทดสอบการเกาะติดกันจะต้องนำไปนึ่งฆ่าเชื้อแล้วจึงล้าง
5. หลังจากแยกเชื้อแล้ว ให้ฉีดสเปรย์และแช่ส่วนที่ปนเปื้อนด้วยสารละลายครีซอลโซป 5% หรือสารละลายกรดคาร์โบลิกทันที แช่ไว้ครึ่งชั่วโมงแล้วเช็ดทำความสะอาด
เสื้อผ้าทำงานที่ปนเปื้อนหรือชุดทำงาน หมวก หน้ากาก ฯลฯ ที่สวมใส่เพื่อการทดสอบความรุนแรงควรใส่ในถุงฆ่าเชื้อแบบพิเศษและฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงก่อนที่จะซัก
ข้อกำหนดการเตรียมการปานกลาง
คุณภาพของการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อจะส่งผลโดยตรงต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ เนื่องจากจุลินทรีย์หลายชนิดมีความต้องการทางโภชนาการและวัตถุประสงค์ในการเพาะเลี้ยงที่แตกต่างกัน ข้อกำหนดในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อต่างๆมีดังนี้:
1. ชั่งน้ำหนักส่วนผสมตามสูตรกลาง แล้วละลายในน้ำกลั่น ควรตรวจสอบคุณภาพของรีเอเจนต์และยาที่ใช้ก่อนใช้งาน
2. การวัดและการปรับค่า pH: ควรทำการวัดค่า pH เมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อเย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง เนื่องจากมีค่า pH ที่แตกต่างกันบ้างภายใต้สภาวะที่ร้อนหรือเย็น เมื่อการวัดเสร็จสิ้น ให้เติมอัลคาไลหรือกรดตามปริมาณที่คำนวณได้และผสมให้เข้ากัน ควรจะทดสอบอีกครั้ง ค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อจะต้องแม่นยำ มิฉะนั้นจะส่งผลต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์หรือส่งผลต่อการสังเกตผลลัพธ์ อย่างไรก็ตาม ควรสังเกตว่าการฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงอาจส่งผลต่อการลดหรือเพิ่มค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อบางชนิด จึงไม่แนะนำให้ฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงเกินไปหรือหลายครั้งเกินไปเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบต่อคุณภาพของอาหารเลี้ยงเชื้อ อินดิเคเตอร์, โซเดียมดีออกซีโคเลต, วุ้น ฯลฯ โดยทั่วไปจะเติมเข้าไปหลังจากปรับ pH แล้ว
3. ต้องเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อให้ชัดเจนเพื่อให้สามารถสังเกตการเจริญเติบโตของแบคทีเรียได้ หลังจากที่อาหารเลี้ยงเชื้อถูกให้ความร้อนและต้มแล้ว สามารถกรองด้วยสำลีหรือผ้าสักหลาดที่ดูดซับได้เพื่อกำจัดตะกอน หากจำเป็นก็สามารถชี้แจงด้วยไข่ขาวได้ แถบวุ้นที่ใช้จะต้องล้างและทำให้แห้งล่วงหน้า ก่อนใช้งานควรหลีกเลี่ยงไม่ให้กระทบต่อความโปร่งใสเนื่องจากมีสิ่งเจือปนในวุ้น
4. ไม่ควรใช้เหล็ก ทองแดง และภาชนะอื่นๆ เพื่อยึดอาหารเลี้ยงเชื้อ ควรใช้ภาชนะแก้วแข็งที่สะอาดและเป็นกลาง
5. การฆ่าเชื้ออาหารเลี้ยงเชื้อต้องไม่เพียงแต่บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อโดยสมบูรณ์เท่านั้น แต่ยังต้องใส่ใจที่จะไม่ลดคุณค่าทางโภชนาการเนื่องจากความร้อน โดยทั่วไป อุณหภูมิ 121°C เป็นเวลา 15 นาทีก็เพียงพอแล้ว สำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีสารที่ไม่ทนต่อความร้อนสูง เช่น น้ำตาลและซีรั่ม เจลาติน ฯลฯ ควรฆ่าเชื้อด้วยอุณหภูมิต่ำหรือวิธีเป็นระยะๆ รีเอเจนต์บางชนิดที่ไม่สามารถให้ความร้อนได้ เช่น โพแทสเซียมเทลลูไรต์ ไข่แดง TTC ยาปฏิชีวนะ ฯลฯ ควรทำให้เย็นลงที่ประมาณ 50°C หลังจากที่วุ้นพื้นฐานถูกนึ่งฆ่าเชื้อแล้วเติมลงไป
6. หลังจากเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อแต่ละชุดแล้ว ควรทำการทดสอบการเจริญเติบโตแบบปลอดเชื้อและทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ที่ทดสอบ หากเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อทางชีวเคมี ให้ใช้สายพันธุ์แบคทีเรียมาตรฐานสำหรับการปลูกเชื้อและการเพาะเลี้ยง และสังเกตผลปฏิกิริยาทางชีวเคมี มันควรจะแสดงปฏิกิริยาปกติ ไม่ควรเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อไว้นานเกินไป หากจำเป็น สามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4°C
7. ปัจจุบันมีอาหารเลี้ยงแบบแห้งหลายชนิด แต่ละชุดจำเป็นต้องใช้สายพันธุ์มาตรฐานสำหรับการทดสอบการเจริญเติบโตหรือการสังเกตปฏิกิริยาทางชีวเคมี อาหารเลี้ยงเชื้อหลายชนิดสามารถใช้ได้หลังจากการทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องนั้นดีเท่านั้น ของที่ซื้อมาใหม่หรือของแห้งที่เก็บไว้เป็นเวลานานก็สามารถใช้ได้ ควรวัดค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อเมื่อเตรียม และควรปฏิบัติตามขนาดและวิธีการตามคำแนะนำของผลิตภัณฑ์
8. ควรบันทึกสารเคมี สภาวะการฆ่าเชื้อ ผลการทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ และบุคลากรฝ่ายผลิตที่ใช้ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมไว้แต่ละชุดเพื่อสอบถาม
ข้อกำหนดการเก็บตัวอย่างและการประมวลผล
1. ตัวอย่างการตรวจสอบที่รวบรวมจะต้องเป็นตัวแทน เมื่อสุ่มตัวอย่าง ควรมีการตรวจสอบวัตถุดิบ การแปรรูป การขนส่ง วิธีการเก็บรักษาและเงื่อนไขของชุดอาหาร สภาวะสุขภาพสิ่งแวดล้อมโดยรอบ ฯลฯ โดยละเอียดเพื่อตรวจสอบว่ามีแหล่งที่มาของการปนเปื้อนหรือไม่
2. ตามประเภทและปริมาณของอาหาร ปริมาณและวิธีการสุ่มตัวอย่างควรดำเนินการตามข้อกำหนดของวิธีการตรวจสอบมาตรฐาน
3. ให้ความสนใจกับการดำเนินการปลอดเชื้อเมื่อสุ่มตัวอย่าง และภาชนะจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในสิ่งแวดล้อม ภาชนะต้องไม่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยสารละลายสบู่ครีโอซอล การฆ่าเชื้อด้วยคลอร์เมไทโอนีน แอลกอฮอล์ และสารฆ่าเชื้ออื่นๆ และต้องไม่มีสารฆ่าเชื้อหรือยาปฏิชีวนะดังกล่าว เพื่อหลีกเลี่ยงการฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ในตัวอย่าง จะต้องฆ่าเชื้อกรรไกร มีด และช้อนที่ใช้ก่อนใช้งานด้วย
4. ควรส่งตัวอย่างไปที่ห้องตรวจสอบเพื่อตรวจสอบทันทีหลังการเก็บตัวอย่าง กระบวนการตรวจสอบโดยทั่วไปจะใช้เวลาไม่เกิน 3 ชั่วโมง หากระยะทางยาว สามารถเก็บไว้ในสภาพแวดล้อม 1~5°C หากจำเป็นต้องแช่แข็งก็ควรเก็บไว้ในสถานะแช่แข็ง ส่งมาตรวจสอบ.
5. หลังจากได้รับตัวอย่างแล้ว ห้องตรวจจะลงทะเบียน (ชื่อตัวอย่าง หน่วยตรวจสอบ ปริมาณ วันที่ หมายเลข ฯลฯ) และสังเกตลักษณะของตัวอย่าง หากพบเงื่อนไขใด ๆ ต่อไปนี้ การตรวจสอบอาจถูกปฏิเสธ:
(1) ตัวอย่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงพิเศษ การต้ม หรือวิธีการอื่น ๆ จะสูญเสียความสำคัญในการเป็นตัวแทนของอาหารดั้งเดิม
(2) เปิดขวดและถุงอาหาร เนื้อปรุงสุกและผลิตภัณฑ์ เนื้อสัตว์ปีกปรุงสุก และอาหารอื่น ๆ แตกหักและไม่สมบูรณ์ กล่าวคือ รูปร่างอาหารดั้งเดิมสูญหายไป (ยกเว้นตัวอย่างอาหารเป็นพิษ)
(3) ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอตามที่กำหนด
สำหรับตัวอย่างที่ส่งมาเพื่อตรวจสอบที่ตรงตามข้อกำหนด ห้องตรวจสอบควรทำการตรวจสอบทันทีหลังจากได้รับตัวอย่าง หากไม่เป็นไปตามเงื่อนไข ควรเก็บไว้ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ 4°C เตรียมสร้างเงื่อนไขให้ทันเวลา จากนั้นจึงดำเนินการตรวจสอบ
6. เมื่อตรวจสอบตัวอย่าง ให้ดำเนินการที่เหมาะสมตามคุณสมบัติที่แตกต่างกัน
(1) ในการเพาะเชื้อตัวอย่างของเหลวควรผสมให้ละเอียดและเพาะเชื้อตามปริมาณ
(2) สำหรับตัวอย่างที่เป็นของแข็ง ให้ใช้มีดฆ่าเชื้อเพื่อตัดส่วนต่างๆ จำนวน 25 กรัมออก แล้วใส่ลงในน้ำเกลือฆ่าเชื้อหรือสารละลายอื่นๆ 225 มล. บดและผสมกับโฮโมจีไนเซอร์ และปลูกเชื้อตามปริมาณ
(3) ควรเปิดขวดและถุงอาหารโดยการฆ่าเชื้อ และเลือกวิธีการข้างต้นตามลักษณะก่อนการเพาะเชื้อ
ข้อกำหนดการตรวจสอบ การบันทึก และการรายงานตัวอย่าง
1. หลังจากได้รับตัวอย่างแล้ว ห้องตรวจสอบจะดำเนินการตรวจสอบลักษณะภายนอกก่อนและดำเนินการตรวจสอบทันทีตามวิธีการตรวจสอบมาตรฐานแห่งชาติ ในระหว่างกระบวนการตรวจสอบ การดำเนินการปลอดเชื้อจะต้องดำเนินการอย่างระมัดระวัง รับผิดชอบ และหลีกเลี่ยงอย่างเคร่งครัดผลการทดสอบจุลินทรีย์การปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อม
2. วิธีการที่ใช้ในระหว่างกระบวนการตรวจสอบตัวอย่าง ปรากฏการณ์และผลลัพธ์ที่เกิดขึ้น ฯลฯ จะต้องเขียนไว้ในบันทึกการทดสอบที่เป็นลายลักษณ์อักษรเพื่อใช้เป็นพื้นฐานในการวิเคราะห์และการตัดสินผลลัพธ์ บันทึกจะต้องมีรายละเอียด ชัดเจน เป็นของแท้ มีวัตถุประสงค์ และต้องไม่เปลี่ยนแปลงหรือปลอมแปลง
ข้อกำหนดการดำเนินงานปลอดเชื้อ:
1.คุณต้องสวมชุดทำงานและหมวกทำงานเมื่อทำการเพาะเชื้อแบคทีเรีย
2. เมื่อทำการเพาะเชื้อตัวอย่างอาหาร ต้องสวมชุดทำงานพิเศษ หมวก และรองเท้าแตะ ซึ่งควรวางไว้ในห้องบัฟเฟอร์ของห้องปลอดเชื้อ และใช้หลังจากการฆ่าเชื้อด้วยรังสียูวีก่อนทำงาน
3. เมื่อฉีดเชื้อตัวอย่างอาหาร ให้ล้างมือด้วยสบู่ก่อนเข้าห้องปลอดเชื้อ แล้วเช็ดมือให้สะอาดด้วยสำลีแอลกอฮอล์ 75%
4. หลอด จานแบน และสื่อการเพาะเลี้ยงที่ใช้ในการเพาะเชื้อจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อและสเตอริไลซ์ ภาชนะที่ไม่ได้ใช้ไม่ควรปล่อยทิ้งไว้โดยไม่ได้ใช้หลังจากเปิดบรรจุภัณฑ์ อุปกรณ์โลหะควรนึ่งหรือเผาด้วยแอลกอฮอล์ 95% สามครั้งก่อนใช้งาน
5. เมื่อนำหลอดออกจากบรรจุภัณฑ์ ปลายหลอดจะต้องไม่สัมผัสกับส่วนที่ยื่นออกมา เมื่อใช้หลอดทดลองฉีดเชื้อในหลอดทดลองหรือจาน ปลายหลอดทดลองต้องไม่สัมผัสกับขอบของหลอดทดลองหรือจาน
6. จะต้องฉีดเชื้อตัวอย่างและเคลื่อนย้ายแบคทีเรียที่หน้าโคมไฟแอลกอฮอล์ เมื่อทำการเพาะเชื้อแบคทีเรียหรือตัวอย่าง หลอดจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟหลังจากนำออกจากบรรจุภัณฑ์และเปิดจุกหลอดทดลอง
7. ก่อนที่จะเพาะเชื้อแบคทีเรีย ควรเผาลวดโลหะทั้งหมดของห่วงปลูกเชื้อและเข็มด้วยเปลวไฟ และหากจำเป็น ควรเผาการเชื่อมต่อระหว่างห่วง เข็ม และก้าน วงจรการฉีดวัคซีนสำหรับปลูกเชื้อแบคทีเรียวัณโรคและแบคทีเรียที่มีฤทธิ์รุนแรงควรต้มในน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาทีแล้วเผาด้วยเปลวไฟ
8. เมื่อดูดของเหลวจากแบคทีเรียหรือตัวอย่างด้วยหลอด ให้ใช้ปลายยางที่เกี่ยวข้องในการดูด และอย่าดูดด้วยปากโดยตรง
ข้อกำหนดการใช้ห้องปลอดเชื้อ:
1. หน้าต่างที่ออกไปด้านนอกห้องปลอดเชื้อควรเป็นกระจกสองชั้นและปิดผนึก ไม่ควรเปิดตามต้องการ ควรมีห้องบัฟเฟอร์และประตูบานเลื่อนตามขนาดของห้องปลอดเชื้อ ควรมีหน้าต่างเล็ก ๆ ขนาด 0.5~0.7m2 เพื่อเตรียมการส่งต่อสิ่งของหลังเข้าห้องปลอดเชื้อ
2. ห้องปลอดเชื้อควรรักษาความสะอาด หลังเลิกงานควรฆ่าเชื้อด้วยสารละลายสบู่ครีซอล 2% ถึง 3% ควรเช็ดพื้นผิวการทำงาน และไม่ควรจัดเก็บสิ่งของที่ไม่เกี่ยวข้องกับการทดลอง
3. ควรปิดประตูห้องปลอดเชื้อให้แน่นก่อนและหลังการใช้งานและควรเปิดหลอดอัลตราไวโอเลต หากใช้หลอดอัลตราไวโอเลตแบบแขวนในอาคารเพื่อฆ่าเชื้อ จำเป็นต้องใช้หลอดอัลตราไวโอเลต 30W ระยะทาง 1.0 เมตร และเวลาในการฉายรังสีไม่น้อยกว่า 30 นาที เมื่อใช้หลอดอัลตราไวโอเลต ควรให้ความสนใจกับการใช้งานโดยตรงภายใต้แสงอัลตราไวโอเลตเพื่อหลีกเลี่ยงความเสียหาย ต้องเช็ดหลอดไฟเบาๆ ด้วยสำลีแอลกอฮอล์ทุกสองสัปดาห์เพื่อขจัดฝุ่นและไขมัน เพื่อลดผลกระทบจากการแทรกซึมของรังสีอัลตราไวโอเลต
4. เมื่อแปรรูปและเพาะเชื้อตัวอย่างอาหาร ให้เข้าไปในห้องปลอดเชื้อเพื่อดำเนินการ และไม่อนุญาตให้เข้าหรือออกตามต้องการ หากจำเป็นต้องส่งต่อสิ่งของก็สามารถผ่านหน้าต่างเล็ก ๆ ได้
5.หากจำเป็นต้องติดตั้งเครื่องปรับอากาศในห้องปลอดเชื้อควรมีเครื่องกรอง
ข้อกำหนดในการฆ่าเชื้อและการฆ่าเชื้อ
เครื่องแก้ว เครื่องใช้โลหะ และสื่อการเพาะเลี้ยงที่ใช้การทดสอบทางจุลชีววิทยา, วัฒนธรรมที่ปนเปื้อนและเพาะเชื้อ ฯลฯ จะต้องผ่านการฆ่าเชื้อก่อนใช้งาน วิธีการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำความร้อนแห้งและความร้อนชื้น
1. การเตรียมการก่อนการฆ่าเชื้อ
(1) รายการทั้งหมดที่ต้องฆ่าเชื้อควรล้างและทำให้แห้งก่อน เครื่องแก้ว เช่น หลอดและจานแบน ควรบรรจุด้วยกระดาษให้แน่น หากใช้ท่อโลหะควรเปิดรูระบายอากาศที่ท่อเหล่านั้น
(2) ห่อจุกของขวดทรงสามเหลี่ยมที่บรรจุอาหารเลี้ยงเชื้อไว้ในกระดาษ ปิดหลอดทดลอง และดึงแกนของกระบอกฉีดยาออกมา แล้วพันด้วยผ้ากอซ
2. ติดตั้ง
(1) เครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยความร้อนแบบแห้ง: สินค้าจะต้องไม่แออัดจนเกินไปและไม่สามารถสัมผัสผนังทั้งสี่ด้านของกล่องได้
(2) หม้อนึ่งความดันสูงขนาดใหญ่: วางสิ่งของที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ห่อแยกกัน และใส่ลงในกระบอกฆ่าเชื้อโดยตรง อย่าให้สิ่งของแน่นเกินไป
3. การตรวจสอบอุปกรณ์
(1) ตรวจสอบว่าสวิตช์ประตูมีความยืดหยุ่นหรือไม่ แหวนยางเสียหายหรือไม่ และแบนหรือไม่
(2) ตรวจสอบว่าเกจวัดความดันอยู่ที่ตำแหน่งศูนย์หรือไม่เมื่อไอน้ำหมด ปิดประตูและฝาครอบ ระบายอากาศด้วยไอน้ำหรือความร้อน และสังเกตดูว่ามีอากาศรั่วหรือไม่ สภาพที่เกจวัดแรงดันและเทอร์โมมิเตอร์ทำเครื่องหมายไว้ตรงกันหรือไม่ และท่อถูกบล็อกหรือไม่
(3) สำหรับเครื่องฆ่าเชื้อที่มีอุปกรณ์ควบคุมโปรแกรมอิเล็กทรอนิกส์อัตโนมัติ ควรตรวจสอบโปรแกรมที่ระบุก่อนใช้งานเพื่อดูว่าตรงตามข้อกำหนดสำหรับการฆ่าเชื้อหรือไม่
4. การบำบัดด้วยการฆ่าเชื้อ
(1) วิธีการฆ่าเชื้อด้วยความร้อนแห้ง:
วิธีนี้เหมาะสำหรับสิ่งของที่ไม่เสียหาย เสื่อมสภาพ หรือระเหยภายใต้สภาวะความร้อนแห้ง มักใช้ในการฆ่าเชื้อเครื่องแก้ว ผลิตภัณฑ์โลหะ ผลิตภัณฑ์เซรามิก ฯลฯ
1. ควรล้างเครื่องมือและอุปกรณ์ต่างๆ ก่อนอบ - อบเพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งสกปรกที่ติดอยู่บนพื้นผิวถูกทำให้เป็นคาร์บอน
2 ระหว่างการฆ่าเชื้อ สินค้าจะต้องไม่แน่นเกินไป ห้ามสัมผัสด้านล่างและผนังกล่องโดยตรง และเว้นช่องว่างระหว่างสิ่งของ
3 ระหว่างการฆ่าเชื้อ ให้ปิดประตูให้แน่น เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟ เปิดรูระบายอากาศเป็นเวลาประมาณ 30 นาทีเพื่อขจัดอากาศเย็นในเครื่องฆ่าเชื้อ ปรับไฟแสดงสถานะเมื่ออุณหภูมิสูงขึ้นถึง 160°C และคงไว้เป็นเวลา 1.5 ถึง 2 ชั่วโมง
④หลังจากการฆ่าเชื้อเสร็จสิ้นหรือในระหว่างกระบวนการเพิ่มอุณหภูมิ ประตูจะต้องเปิดที่อุณหภูมิต่ำกว่า 60°C
(2) ควรปฏิบัติตามขั้นตอนต่อไปนี้เมื่อใช้หม้ออัดแรงดันแบบพกพาหรือเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดันแนวตั้ง:
1. เติมน้ำ 3 ลิตรลงในตัวเครื่องหลักของหม้ออัดแรงดันแบบพกพา และเติมน้ำ 16 ลิตรลงในหม้ออัดแรงดันแนวตั้ง (ควรเติมน้ำเมื่อนำกลับมาใช้ใหม่ และต้องเปลี่ยนน้ำหากขุ่น)
② สำหรับหม้ออัดความดันแบบพกพา ให้สอดท่อไอเสียที่ฝาครอบด้านบนเข้าไปในท่อสี่เหลี่ยมที่ผนังด้านในของถังฆ่าเชื้อ (ต้องไม่ใช้เครื่องฆ่าเชื้อที่ไม่มีท่อหรือท่อที่สึกกร่อนและแตกร้าว)
3 ปิดฝาครอบด้านบนแล้วขันให้แน่นเพื่อป้องกันการรั่วไหลของอากาศ วางเครื่องนึ่งขวดนมบนแหล่งไฟเพื่อให้ความร้อน เปิดหม้ออัดความดันแนวตั้ง และเปิดวาล์วไอเสียบนฝาปิดด้านบนเพื่อระบายอากาศออก (ระบายอากาศออกเป็นเวลา 10 ถึง 15 นาทีหลังจากที่น้ำเดือด) );
④ปิดวาล์วไอเสียเพื่อเพิ่มแรงดันไอน้ำตามข้อกำหนดที่ระบุและคงไว้ตามเวลาที่กำหนด (ขึ้นอยู่กับลักษณะของรายการที่ผ่านการฆ่าเชื้อและสถานการณ์ที่เกี่ยวข้อง)
⑤ หลังจากถึงเวลาที่กำหนด สำหรับสิ่งของที่ต้องทำให้แห้ง ให้เปิดวาล์วไอเสียทันทีเพื่อระบายไอน้ำ เมื่อความดันกลับมาเป็นศูนย์ ให้ทำให้เย็นลงตามธรรมชาติที่ 60°C จากนั้นเปิดฝาเพื่อนำสิ่งของออกมา หากเป็นของเหลวห้ามเปิดวาล์วไอเสีย ควรนำหม้อออกจากแหล่งความร้อนทันทีและปล่อยให้เย็นตามธรรมชาติจนกระทั่งความดันกลับคืนสู่ศูนย์และอุณหภูมิลดลงต่ำกว่า 60°C ก่อนเปิดฝาเพื่อนำเนื้อหาออกมา เพื่อป้องกันการบีบอัดของเหลวอย่างฉับพลันจากการเดือดหรือการระเบิดของภาชนะอย่างรุนแรง
(3) ทำตามขั้นตอนต่อไปนี้เพื่อใช้เครื่องนึ่งขวดนมหม้อแรงดันแนวนอน:
①ปิดประตูหม้อให้แน่น เปิดวาล์วทางเข้าอากาศ นำไอน้ำเข้าไปในชั้นลอยเพื่ออุ่นเครื่อง และอากาศเย็นในชั้นลอยจะถูกระบายออกโดยอัตโนมัติผ่านแผงกั้นอากาศ
2. หลังจากที่ชั้นระหว่างชั้นถึงอุณหภูมิที่กำหนดไว้แล้ว ให้เปิดวาล์วทางเข้าอากาศของห้องหม้อ นำไอน้ำเข้าไปในห้องหม้อ และอากาศเย็นในห้องหม้อจะถูกระบายออกโดยอัตโนมัติผ่านตัวดักจับอากาศของห้องหม้อ
3 เมื่อความดันและอุณหภูมิในห้องหม้อถึงความดันที่กำหนด ให้ปรับวาล์วทางเข้าอากาศเพื่อให้คงที่
④ ปรับอุณหภูมิให้เย็นลงตามธรรมชาติหรือโดยไม่ได้ตั้งใจเป็น 60°C ก่อนเปิดประตูเพื่อนำสิ่งของออกมา อย่าใช้วิธีการปล่อยไอน้ำอย่างรวดเร็วเพื่อป้องกันแรงดันตกอย่างกะทันหัน ของเหลวเดือดอย่างรุนแรง หรือการระเบิดของภาชนะ
⑤ เมื่อใช้โปรแกรมอัตโนมัติ - เครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดันควบคุม หลังจากวางสิ่งของและปิดประตูอย่างแน่นหนา ควรกดสวิตช์ที่เกี่ยวข้องตามหมวดหมู่ของสิ่งของเพื่อให้สามารถดำเนินการฆ่าเชื้อได้โดยอัตโนมัติตามขั้นตอนที่กำหนด ในระหว่างการฆ่าเชื้อจะต้องใช้เครื่องมือที่แนบมาเพื่อบันทึกอุณหภูมิและเวลา สำหรับการอ้างอิงในอนาคต ข้อกำหนดในการใช้งานควรเป็นไปตามคำแนะนำของผู้ผลิตอย่างเคร่งครัด
5. อุณหภูมิและเวลาในการฆ่าเชื้อ
(1) อุณหภูมิในการฆ่าเชื้อของเครื่องนึ่งขวดนมด้วยความร้อนแห้งคือ 160°C, 1.5~2 ชั่วโมง
(2) อุณหภูมิและเวลาในการฆ่าเชื้อของเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อด้วยแรงดัน
วิธีการฆ่าเชื้อเป็นระยะ
1. วิธีการฆ่าเชื้อ:
ใช้การฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำโดยไม่มีแรงกด สารบางชนิดถูกทำลายได้ง่ายด้วยการฆ่าเชื้อด้วยไอน้ำแรงดันสูง ดังนั้นวิธีนี้จึงสามารถนำไปใช้ในการฆ่าเชื้อได้
(1) วางสิ่งของที่จะฆ่าเชื้อลงในหม้อ ปิดฝาด้านบน เปิดช่องระบายน้ำ และระบายน้ำที่เหลืออยู่ในหม้อออก
(2) ปิดช่องระบายน้ำ เปิดประตูช่องอากาศเข้า และฆ่าเชื้อเป็นเวลา 10 ถึง 20 นาทีตามความจำเป็น
(3) หลังจากการฆ่าเชื้อเสร็จสิ้น ให้ปิดประตูทางเข้าอากาศ นำสิ่งของออกและรอให้เย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง จากนั้นนำไปแช่ในตู้อบที่มีอุณหภูมิ 37°C ค้างคืน และฆ่าเชื้อต่อไปตามวิธีการข้างต้นในวันถัดไป ทำเช่นนี้สามครั้งเพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อ
2. วิธีใช้เซรั่มแข็งตัว:
เมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อมีส่วนผสมพิเศษ เช่น เซรั่มหรือไข่ ความร้อนสูงจะทำลายสารอาหารของมัน ดังนั้น สามารถใช้อุณหภูมิต่ำเพื่อทำให้ซีรั่มแข็งตัวและบรรลุวัตถุประสงค์ในการฆ่าเชื้อได้:
(1) เมื่อใช้เซรั่มฆ่าเชื้อด้วยวิธีนี้เพื่อแบ่งส่วน ต้องปฏิบัติตามการดำเนินการปลอดเชื้ออย่างเคร่งครัด และต้องฆ่าเชื้อหลอดทดลองและเพลตก่อนใช้งาน
(2) ทำให้อาหารเลี้ยงเชื้อมีความลาดชันหรือเป็นชั้นสูงตามต้องการ หลังจากเติมน้ำเพียงพอแล้ว ให้เชื่อมต่อแหล่งจ่ายไฟ เพิ่มอุณหภูมิเป็น 75~90°C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง จากนั้นจึงฆ่าเชื้อ วางมันไว้ในตู้ฟักที่มีอุณหภูมิ 37°C ข้ามคืน จากนั้นฆ่าเชื้อสามครั้ง
3. ต้มและฆ่าเชื้อ:
คุณสามารถใช้หม้อต้มหรือเครื่องนึ่งฆ่าเชื้อได้ หลังจากน้ำเดือดแล้วให้ต้มประมาณ 5 ถึง 15 นาที คุณยังสามารถเติมกรดคาร์โบลิก 2% ลงในน้ำแล้วต้มเป็นเวลา 5 นาที เติมฟอร์มาลดีไฮด์ 0.02% และต้มที่อุณหภูมิ 80°C เป็นเวลา 60 นาที เพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อ อย่างไรก็ตามสามารถทำการฆ่าเชื้อแบบเดือดได้ เมื่อใช้สารเสริม ควรให้ความสนใจกับการกัดกร่อนของสิ่งของ
4. การฆ่าเชื้อ:
หลังจากการฆ่าเชื้อ สินค้าจะผ่านการฆ่าเชื้อแล้วภายใต้สถานการณ์ปกติ ควรตรวจสอบและวางอย่างระมัดระวังเมื่อนำออกจากเครื่องฆ่าเชื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนซ้ำ
(1) นำสิ่งของออกและตรวจสอบความสมบูรณ์ของบรรจุภัณฑ์ทันที หากมีความเสียหายหรือถอดผ้าอนามัยแบบสอดออก จะไม่สามารถใช้เป็นของปลอดเชื้อได้
(2) สิ่งของที่นำออกมาไม่สามารถใช้เป็นสิ่งของปลอดเชื้อได้ หากบรรจุภัณฑ์แช่น้ำไว้อย่างเห็นได้ชัด
(3) ควรตรวจสอบอาหารเลี้ยงเชื้อหรือรีเอเจนต์เพื่อดูว่าตรงตามสีหรือสถานะหลังการฆ่าเชื้อหรือไม่ ผู้ที่ไม่ตรงตามข้อกำหนดควรละทิ้ง
(4) สำหรับภาชนะแบบเปิด - ปิด ควรปิดรูตะแกรงเมื่อนำออกมา
(5) หากสิ่งของที่ถอดออกตกลงสู่พื้น วางผิดที่ในสถานที่ที่ไม่สะอาด หรือเปื้อนน้ำ จะถือว่ามีสิ่งปนเปื้อนและไม่สามารถนำมาใช้เป็นของปลอดเชื้อได้
(6) สินค้าที่ผ่านการฆ่าเชื้อที่ผ่านการรับรองแล้วควรเก็บไว้ในห้องเก็บของหรือตู้กันฝุ่น และห้ามมิให้ผสมกับสิ่งของที่ไม่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยเด็ดขาด
(7) รายการที่ผ่านการรับรองทั้งหมดควรมีเครื่องหมายวันที่ฆ่าเชื้อและวันหมดอายุ
(8) หลังจากเสร็จสิ้นกระบวนการฆ่าเชื้อแต่ละชุดแล้ว ให้บันทึกชื่อ ปริมาณ อุณหภูมิ เวลา และผู้ปฏิบัติงานของผลิตภัณฑ์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ
ข้อกำหนดสำหรับการบำบัดของเสียที่เป็นพิษและแบคทีเรีย
ต้องไม่นำอุปกรณ์ทดลองและการเพาะเลี้ยงที่ใช้ในการทดลองทางจุลชีววิทยาออกจากห้องปฏิบัติการโดยไม่มีการฆ่าเชื้อ
1. วัสดุและของเสียที่ปนเปื้อนจากการเพาะเลี้ยงควรวางในภาชนะที่แน่นหนาหรือตะกร้าลวด และจัดเก็บไว้ตรงกลางในสถานที่ที่กำหนดจนกว่าจะนึ่งฆ่าเชื้ออย่างสม่ำเสมอ
2. การเพาะเลี้ยงที่ปนเปื้อนด้วยจุลินทรีย์จะต้องนำไปนึ่งที่อุณหภูมิ 121°C เป็นเวลา 30 นาที
3. หลังการใช้งาน ควรใส่หลอดที่ปนเปื้อนในสารละลายสบู่ครีออล 5% หรือสารละลายกรดคาร์โบลิก แช่ไว้อย่างน้อย 24 ชั่วโมง (น้ำยาฆ่าเชื้อต้องไม่ต่ำกว่าความสูงในการแช่) จากนั้นฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงที่ 121°C เป็นเวลา 30 นาที
4. โดยทั่วไปสามารถทิ้งของเหลวสำหรับคราบเปื้อนและล้างลงในท่อระบายน้ำได้โดยตรง น้ำยาล้างแบคทีเรียชนิดรุนแรงต้องล้างในบีกเกอร์และฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงก่อนเทลงท่อน้ำทิ้ง สไลด์ที่เปื้อนสีจะถูกใส่ลงในสารละลายสบู่ครีซอล 5% หลังจากแช่น้ำไว้ 24 ชั่วโมง ให้ต้มและล้าง สไลด์หรือจานที่ใช้สำหรับการทดสอบการเกาะติดกันจะต้องนำไปนึ่งฆ่าเชื้อแล้วจึงล้าง
5. หลังจากแยกเชื้อแล้ว ให้ฉีดสเปรย์และแช่ส่วนที่ปนเปื้อนด้วยสารละลายครีซอลโซป 5% หรือสารละลายกรดคาร์โบลิกทันที แช่ไว้ครึ่งชั่วโมงแล้วเช็ดทำความสะอาด
เสื้อผ้าทำงานที่ปนเปื้อนหรือชุดทำงาน หมวก หน้ากาก ฯลฯ ที่สวมใส่เพื่อการทดสอบความรุนแรงควรใส่ในถุงฆ่าเชื้อแบบพิเศษและฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงก่อนที่จะซัก
ข้อกำหนดการเตรียมการปานกลาง
คุณภาพของการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อจะส่งผลโดยตรงต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ เนื่องจากจุลินทรีย์หลายชนิดมีความต้องการทางโภชนาการและวัตถุประสงค์ในการเพาะเลี้ยงที่แตกต่างกัน ข้อกำหนดในการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อต่างๆมีดังนี้:
1. ชั่งน้ำหนักส่วนผสมตามสูตรกลาง แล้วละลายในน้ำกลั่น ควรตรวจสอบคุณภาพของรีเอเจนต์และยาที่ใช้ก่อนใช้งาน
2. การวัดและการปรับค่า pH: ควรทำการวัดค่า pH เมื่ออาหารเลี้ยงเชื้อเย็นลงจนถึงอุณหภูมิห้อง เนื่องจากมีค่า pH ที่แตกต่างกันบ้างภายใต้สภาวะที่ร้อนหรือเย็น เมื่อการวัดเสร็จสิ้น ให้เติมอัลคาไลหรือกรดตามปริมาณที่คำนวณได้และผสมให้เข้ากัน ควรจะทดสอบอีกครั้ง ค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อจะต้องแม่นยำ มิฉะนั้นจะส่งผลต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์หรือส่งผลต่อการสังเกตผลลัพธ์ อย่างไรก็ตาม ควรสังเกตว่าการฆ่าเชื้อด้วยแรงดันสูงอาจส่งผลต่อการลดหรือเพิ่มค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อบางชนิด จึงไม่แนะนำให้ฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงเกินไปหรือหลายครั้งเกินไปเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบต่อคุณภาพของอาหารเลี้ยงเชื้อ อินดิเคเตอร์, โซเดียมดีออกซีโคเลต, วุ้น ฯลฯ โดยทั่วไปจะเติมเข้าไปหลังจากปรับ pH แล้ว
3. ต้องเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อให้ชัดเจนเพื่อให้สามารถสังเกตการเจริญเติบโตของแบคทีเรียได้ หลังจากที่อาหารเลี้ยงเชื้อถูกให้ความร้อนและต้มแล้ว สามารถกรองด้วยสำลีหรือผ้าสักหลาดที่ดูดซับได้เพื่อกำจัดตะกอน หากจำเป็นก็สามารถชี้แจงด้วยไข่ขาวได้ แถบวุ้นที่ใช้จะต้องล้างและทำให้แห้งล่วงหน้า ก่อนใช้งานควรหลีกเลี่ยงไม่ให้กระทบต่อความโปร่งใสเนื่องจากมีสิ่งเจือปนในวุ้น
4. ไม่ควรใช้เหล็ก ทองแดง และภาชนะอื่นๆ เพื่อยึดอาหารเลี้ยงเชื้อ ควรใช้ภาชนะแก้วแข็งที่สะอาดและเป็นกลาง
5. การฆ่าเชื้ออาหารเลี้ยงเชื้อต้องไม่เพียงแต่บรรลุวัตถุประสงค์ของการฆ่าเชื้อโดยสมบูรณ์เท่านั้น แต่ยังต้องใส่ใจที่จะไม่ลดคุณค่าทางโภชนาการเนื่องจากความร้อน โดยทั่วไป อุณหภูมิ 121°C เป็นเวลา 15 นาทีก็เพียงพอแล้ว สำหรับอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีสารที่ไม่ทนต่อความร้อนสูง เช่น น้ำตาลและซีรั่ม เจลาติน ฯลฯ ควรฆ่าเชื้อด้วยอุณหภูมิต่ำหรือวิธีเป็นระยะๆ รีเอเจนต์บางชนิดที่ไม่สามารถให้ความร้อนได้ เช่น โพแทสเซียมเทลลูไรต์ ไข่แดง TTC ยาปฏิชีวนะ ฯลฯ ควรทำให้เย็นลงที่ประมาณ 50°C หลังจากที่วุ้นพื้นฐานถูกนึ่งฆ่าเชื้อแล้วเติมลงไป
6. หลังจากเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อแต่ละชุดแล้ว ควรทำการทดสอบการเจริญเติบโตแบบปลอดเชื้อและทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ที่ทดสอบ หากเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อทางชีวเคมี ให้ใช้สายพันธุ์แบคทีเรียมาตรฐานสำหรับการปลูกเชื้อและการเพาะเลี้ยง และสังเกตผลปฏิกิริยาทางชีวเคมี มันควรจะแสดงปฏิกิริยาปกติ ไม่ควรเก็บอาหารเลี้ยงเชื้อไว้นานเกินไป หากจำเป็น สามารถเก็บไว้ในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4°C
7. ปัจจุบันมีอาหารเลี้ยงแบบแห้งหลายชนิด แต่ละชุดจำเป็นต้องใช้สายพันธุ์มาตรฐานสำหรับการทดสอบการเจริญเติบโตหรือการสังเกตปฏิกิริยาทางชีวเคมี อาหารเลี้ยงเชื้อหลายชนิดสามารถใช้ได้หลังจากการทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ที่เกี่ยวข้องนั้นดีเท่านั้น ของที่ซื้อมาใหม่หรือของแห้งที่เก็บไว้เป็นเวลานานก็สามารถใช้ได้ ควรวัดค่า pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อเมื่อเตรียม และควรปฏิบัติตามขนาดและวิธีการตามคำแนะนำของผลิตภัณฑ์
8. ควรบันทึกสารเคมี สภาวะการฆ่าเชื้อ ผลการทดสอบการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ และบุคลากรฝ่ายผลิตที่ใช้ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียมไว้แต่ละชุดเพื่อสอบถาม
ข้อกำหนดการเก็บตัวอย่างและการประมวลผล
1. ตัวอย่างการตรวจสอบที่รวบรวมจะต้องเป็นตัวแทน เมื่อสุ่มตัวอย่าง ควรมีการตรวจสอบวัตถุดิบ การแปรรูป การขนส่ง วิธีการเก็บรักษาและเงื่อนไขของชุดอาหาร สภาวะสุขภาพสิ่งแวดล้อมโดยรอบ ฯลฯ โดยละเอียดเพื่อตรวจสอบว่ามีแหล่งที่มาของการปนเปื้อนหรือไม่
2. ตามประเภทและปริมาณของอาหาร ปริมาณและวิธีการสุ่มตัวอย่างควรดำเนินการตามข้อกำหนดของวิธีการตรวจสอบมาตรฐาน
3. ให้ความสนใจกับการดำเนินการปลอดเชื้อเมื่อสุ่มตัวอย่าง และภาชนะจะต้องผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในสิ่งแวดล้อม ภาชนะต้องไม่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยสารละลายสบู่ครีโอซอล การฆ่าเชื้อด้วยคลอร์เมไทโอนีน แอลกอฮอล์ และสารฆ่าเชื้ออื่นๆ และต้องไม่มีสารฆ่าเชื้อหรือยาปฏิชีวนะดังกล่าว เพื่อหลีกเลี่ยงการฆ่าเชื้อจุลินทรีย์ในตัวอย่าง จะต้องฆ่าเชื้อกรรไกร มีด และช้อนที่ใช้ก่อนใช้งานด้วย
4. ควรส่งตัวอย่างไปที่ห้องตรวจสอบเพื่อตรวจสอบทันทีหลังการเก็บตัวอย่าง กระบวนการตรวจสอบโดยทั่วไปจะใช้เวลาไม่เกิน 3 ชั่วโมง หากระยะทางยาว สามารถเก็บไว้ในสภาพแวดล้อม 1~5°C หากจำเป็นต้องแช่แข็งก็ควรเก็บไว้ในสถานะแช่แข็ง ส่งมาตรวจสอบ.
5. หลังจากได้รับตัวอย่างแล้ว ห้องตรวจจะลงทะเบียน (ชื่อตัวอย่าง หน่วยตรวจสอบ ปริมาณ วันที่ หมายเลข ฯลฯ) และสังเกตลักษณะของตัวอย่าง หากพบเงื่อนไขใด ๆ ต่อไปนี้ การตรวจสอบอาจถูกปฏิเสธ:
(1) ตัวอย่างที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงพิเศษ การต้ม หรือวิธีการอื่น ๆ จะสูญเสียความสำคัญในการเป็นตัวแทนของอาหารดั้งเดิม
(2) เปิดขวดและถุงอาหาร เนื้อปรุงสุกและผลิตภัณฑ์ เนื้อสัตว์ปีกปรุงสุก และอาหารอื่น ๆ แตกหักและไม่สมบูรณ์ กล่าวคือ รูปร่างอาหารดั้งเดิมสูญหายไป (ยกเว้นตัวอย่างอาหารเป็นพิษ)
(3) ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอตามที่กำหนด
สำหรับตัวอย่างที่ส่งมาเพื่อตรวจสอบที่ตรงตามข้อกำหนด ห้องตรวจสอบควรทำการตรวจสอบทันทีหลังจากได้รับตัวอย่าง หากไม่เป็นไปตามเงื่อนไข ควรเก็บไว้ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ 4°C เตรียมสร้างเงื่อนไขให้ทันเวลา จากนั้นจึงดำเนินการตรวจสอบ
6. เมื่อตรวจสอบตัวอย่าง ให้ดำเนินการที่เหมาะสมตามคุณสมบัติที่แตกต่างกัน
(1) ในการเพาะเชื้อตัวอย่างของเหลวควรผสมให้ละเอียดและเพาะเชื้อตามปริมาณ
(2) สำหรับตัวอย่างที่เป็นของแข็ง ให้ใช้มีดฆ่าเชื้อเพื่อตัดส่วนต่างๆ จำนวน 25 กรัมออก แล้วใส่ลงในน้ำเกลือฆ่าเชื้อหรือสารละลายอื่นๆ 225 มล. บดและผสมกับโฮโมจีไนเซอร์ และปลูกเชื้อตามปริมาณ
(3) ควรเปิดขวดและถุงอาหารโดยการฆ่าเชื้อ และเลือกวิธีการข้างต้นตามลักษณะก่อนการเพาะเชื้อ
ข้อกำหนดการตรวจสอบ การบันทึก และการรายงานตัวอย่าง
1. หลังจากได้รับตัวอย่างแล้ว ห้องตรวจสอบจะดำเนินการตรวจสอบลักษณะภายนอกก่อนและดำเนินการตรวจสอบทันทีตามวิธีการตรวจสอบมาตรฐานแห่งชาติ ในระหว่างกระบวนการตรวจสอบ การดำเนินการปลอดเชื้อจะต้องดำเนินการอย่างระมัดระวัง รับผิดชอบ และหลีกเลี่ยงอย่างเคร่งครัดผลการทดสอบจุลินทรีย์การปนเปื้อนในสิ่งแวดล้อม
2. วิธีการที่ใช้ในระหว่างกระบวนการตรวจสอบตัวอย่าง ปรากฏการณ์และผลลัพธ์ที่เกิดขึ้น ฯลฯ จะต้องเขียนไว้ในบันทึกการทดสอบที่เป็นลายลักษณ์อักษรเพื่อใช้เป็นพื้นฐานในการวิเคราะห์และการตัดสินผลลัพธ์ บันทึกจะต้องมีรายละเอียด ชัดเจน เป็นของแท้ มีวัตถุประสงค์ และต้องไม่เปลี่ยนแปลงหรือปลอมแปลง
