Краткое изложение требований к микробиологическим исследованиям
2024-01-24 15:14:33
Требования и этапымикробиологические исследованияследующие:
Требования асептической эксплуатации:
1. При инокуляции бактерий необходимо носить рабочую одежду и рабочую кепку.
2. При инокуляции образцов пищевых продуктов необходимо носить специальную рабочую одежду, шапочки и тапочки, которые следует разместить в буферном помещении стерильного помещения и использовать после УФ-дезинфекции перед работой.
3. При инокуляции образцов пищи вымойте руки с мылом перед входом в стерильное помещение, а затем протрите руки ватным тампоном, содержащим 75% спирта.
4. Соломинки, плошки и питательные среды, используемые для инокуляции, должны быть стерилизованы и стерилизованы. Неиспользованные контейнеры нельзя оставлять неиспользованными после открытия упаковки. Металлическую посуду перед использованием следует автоклавировать или трижды прожечь 95% спиртом.
5. При извлечении соломинки из упаковки кончик соломинки не должен касаться открытых частей. При использовании соломинки для инокуляции пробирки или планшета кончик соломинки не должен касаться края пробирки или планшета.
6. Засев образцов и перенос бактерий необходимо производить перед спиртовкой. При инокуляции бактерий или образцов соломинку необходимо стерилизовать пламенем после ее извлечения из упаковки и открытия пробки пробирки.
7. Перед инокуляцией бактерий все металлические проволоки инокуляционной петли и иглы следует прожечь пламенем, а при необходимости прожечь соединение между петлей, иглой и стержнем. Прививочную петлю для прививки туберкулезных и вирулентных бактерий следует прокипятить в кипящей воде в течение 5 минут, а затем сжечь пламенем.
8. При всасывании бактериальной жидкости или образцов через соломинку используйте соответствующий резиновый наконечник, а не высасывайте непосредственно ртом.
Требования к стерильному помещению:
1. Окна, ведущие наружу стерильной комнаты, должны быть с двойным остеклением и герметично закрыты. Их не следует открывать по собственному желанию. Должна быть буферная комната и раздвижная дверь, соответствующая размеру стерильной комнаты. Также должно быть небольшое окно площадью 0,5–0,7 м2. При подготовке к сдаче предметов после входа в стерильное помещение.
2. Стерильная комната должна содержаться в чистоте. После работы ее следует продезинфицировать 2–3%-ным раствором крезолового мыла, протереть рабочую поверхность и не хранить на складе предметы, не связанные с экспериментом.
3. Дверь стерильной комнаты должна быть плотно закрыта до и после использования, а ультрафиолетовая лампа должна быть включена. Если для дезинфекции используется подвесная ультрафиолетовая лампа в помещении, необходима ультрафиолетовая лампа мощностью 30 Вт. Расстояние составляет 1,0 м, время облучения не менее 30 минут. При использовании ультрафиолетовых ламп следует обратить внимание на то, чтобы они работали непосредственно под ультрафиолетовым светом, чтобы избежать повреждений. Лампу необходимо аккуратно протирать спиртовым ватным тампоном каждые две недели, чтобы удалить пыль и жир, чтобы уменьшить влияние проникновения ультрафиолета.
4. При обработке и инокуляции образцов пищевых продуктов войдите в стерильное помещение для проведения операций, и вам не разрешается входить или выходить по своему желанию. Если предметы необходимо передать, их можно передать через маленькое окошко.
5. Если в стерильном помещении необходимо установить кондиционер, там должно быть фильтрующее устройство.
Требования к дезинфекции и стерилизации
Стеклянная посуда, металлическая посуда и питательные среды, используемые длямикробиологические исследования, контаминированные и инокулированные культуры и т. д. перед использованием необходимо стерилизовать. Методы стерилизации паром сухим жаром и влажным теплом.
1. Подготовка перед стерилизацией
(1) Все предметы, подлежащие стерилизации, следует сначала вымыть и высушить. Стеклянную посуду, такую как соломинки и плошки, следует плотно заворачивать в бумагу. Если используются металлические трубки, вентиляционные отверстия на них следует открыть.
(2) Оберните пробку треугольной колбы, содержащей культуральную среду, бумагой, накройте пробирку, вытащите сердцевину шприца и оберните ее марлей.
2. установить
(1) Сухожаровой стерилизатор: предметы не должны быть переполнены и не должны касаться четырех стенок коробки.
(2) Большая пароварка высокого давления: поместите стерилизованные предметы, заверните их отдельно и поместите непосредственно в стерилизационный цилиндр. Не перегружайте предметы.
3. Проверка оборудования
(1) Проверьте, является ли дверной переключатель гибким, не повреждено ли резиновое кольцо и плоско ли оно.
(2) Проверьте, остается ли манометр в нулевом положении при выпуске пара, закройте дверь и крышку, проветрите пар или нагрейте и проверьте, нет ли утечки воздуха, совпадают ли условия, отмеченные манометром и термометром, и не заблокирован ли трубопровод.
(3) Для стерилизаторов с автоматическими электронными устройствами управления программой перед использованием необходимо проверить указанную программу, чтобы убедиться, что она соответствует требованиям стерилизации.
4. Стерилизационная обработка
(1) Метод стерилизации сухим жаром:
Этот метод подходит для предметов, которые не повреждаются, не портятся и не испаряются в условиях сухого тепла. Его чаще используют для стерилизации стеклянной посуды, металлических изделий, керамических изделий и т. д.
①Инструменты и посуду следует мыть перед сушкой-запеканием, чтобы предотвратить обугливание грязи, прилипшей к поверхности.
② Во время стерилизации предметы не должны быть перегружены, не должны напрямую касаться дна и стенок коробки и оставлять зазоры между предметами.
③ Во время стерилизации плотно закройте дверцу, подключите источник питания, откройте выпускное отверстие примерно на 30 минут, чтобы удалить холодный воздух из стерилизатора, отрегулируйте световой индикатор, когда температура поднимется до 160°C, и поддерживайте ее в течение 1,5–2 часов.
④После завершения стерилизации или во время процесса повышения температуры дверцу необходимо открывать при температуре ниже 60°C.
(2) При использовании портативной скороварки или парового стерилизатора вертикального давления необходимо выполнить следующие действия:
① Добавьте 3 л воды в основной корпус портативной скороварки и 16 л воды в вертикальную скороварку (количество воды следует пополнять при повторном использовании, а воду необходимо заменять, если она становится мутной);
② Для портативной скороварки вставьте вытяжную трубу на верхней крышке в квадратную трубку на внутренней стенке стерилизационного барабана (нельзя использовать стерилизаторы без шлангов или с проржавевшими и треснутыми шлангами);
③ Закройте верхнюю крышку и плотно затяните ее, чтобы предотвратить утечку воздуха; поместите стерилизатор на источник огня для нагрева, включите питание вертикальной скороварки и откройте выпускной клапан на верхней крышке, чтобы выпустить воздух (выпуск воздуха в течение 10–15 минут после закипания воды));
④Закройте выпускной клапан, чтобы поднять давление пара до заданных требований и поддерживать его в течение указанного времени (в зависимости от характера стерилизуемых предметов и соответствующих обстоятельств);
⑤ По истечении указанного времени для предметов, которые необходимо высушить, немедленно откройте выпускной клапан, чтобы выпустить пар. Когда давление вернется к нулю, охладите его естественным путем до 60°C, а затем откройте крышку, чтобы вынуть предметы. Если это жидкий предмет, не открывайте выпускной клапан. Кастрюлю следует немедленно снять с источника тепла и дать ей остыть естественным путем до тех пор, пока давление не вернется к нулю, а температура не упадет ниже 60°C, прежде чем открывать крышку и вынимать содержимое, чтобы предотвратить внезапную декомпрессию жидкости из-за бурного кипения или взрыва контейнера.
(3) Для использования парового стерилизатора с горизонтальной скороваркой выполните следующие действия:
①Плотно закройте дверцу кастрюли, откройте впускной клапан воздуха, подайте пар в мезонин для предварительного нагрева, и холодный воздух в мезонине будет автоматически выпущен через воздушный барьер;
②После того, как промежуточный слой достигнет заданной температуры, откройте впускной клапан для воздуха в камере горшка, введите пар в камеру горшка, и холодный воздух в камере горшка будет автоматически выпущен через воздушный затвор камеры горшка;
③Когда давление и температура в камере горшка достигнут заданного давления, отрегулируйте впускной клапан воздуха, чтобы поддерживать его постоянным;
④ Охладите температуру естественным или искусственным путем до 60℃, прежде чем открывать дверцу и вынимать предметы. Не используйте метод быстрого выпуска пара, чтобы предотвратить внезапное падение давления, бурное кипение жидкости или взрыв контейнера;
⑤ При использовании парового стерилизатора под давлением с автоматическим программным управлением после размещения предметов и плотного закрытия дверцы необходимо нажать соответствующий переключатель в соответствии с категорией предметов, чтобы стерилизация могла быть выполнена автоматически в соответствии с необходимыми процедурами. Во время стерилизации необходимо использовать прилагаемый инструмент для регистрации температуры и времени. Для дальнейшего использования эксплуатационные требования должны строго соответствовать инструкциям производителя;
5. Температура и время стерилизации.
(1) Температура стерилизации сухожарового стерилизатора составляет 160 ℃, продолжительность 1,5–2 часа.
(2) Температура и время стерилизации парового стерилизатора под давлением.
Прерывистый метод стерилизации
1. Метод стерилизации:
Используйте стерилизацию паром без давления. Некоторые вещества легко разрушаются при стерилизации паром под высоким давлением, поэтому этот метод можно использовать для стерилизации.
(1) Поместите предметы, подлежащие стерилизации, в кастрюлю, закройте верхнюю крышку, откройте сливное отверстие и слейте оставшуюся воду из кастрюли.
(2) Закройте сливное отверстие, откройте дверцу воздухозаборника и при необходимости продезинфицируйте в течение 10–20 минут.
(3) После завершения стерилизации закройте дверцу воздухозаборника, выньте предметы и подождите, пока они остынут до комнатной температуры, поместите их в инкубатор с температурой 37°C на ночь и продолжите стерилизацию в соответствии с вышеуказанным методом на следующий день. Сделайте это три раза, чтобы достичь цели стерилизации.
2. Как пользоваться сывороточным коагулятором:
Если питательная среда содержит специальные ингредиенты, такие как сыворотка или яйца, высокая температура разрушит ее питательные вещества. Следовательно, низкую температуру можно использовать для коагуляции сыворотки и достижения целей стерилизации:
(1) При использовании сыворотки, стерилизованной этим методом, в аликвотах необходимо строго соблюдать асептические операции, а также простерилизовать пробирки и планшеты перед использованием;
(2) При необходимости сделайте из культуральной среды наклонный или высокий слой. После добавления достаточного количества воды подключите источник питания, поднимите температуру до 75–90°C на один час, а затем стерилизуйте. Поместите его в инкубатор при температуре 37°C на ночь, а затем трижды стерилизуйте.
3. Прокипятить и продезинфицировать:
Вы можете использовать кипящую кастрюлю или кипящий стерилизатор. После того, как вода закипит, кипятите ее 5–15 минут. Также можно добавить в воду 2% карболовую кислоту и прокипятить ее 5 минут. Добавьте 0,02% формальдегида и кипятите при 80°C в течение 60 минут для достижения цели стерилизации. Однако можно добиться стерилизации кипячением. При использовании усилителей следует обращать внимание на коррозионную активность предметов.
4. Стерилизационная обработка:
После стерилизации предметы уже стерильны при нормальных обстоятельствах. Их следует тщательно осматривать и укладывать после извлечения из стерилизатора во избежание повторного загрязнения;
(1) Немедленно выньте предметы и проверьте целостность упаковки. При наличии повреждений или извлечении тампона его нельзя использовать в качестве стерильного предмета;
(2) Вынутые предметы не могут использоваться в качестве стерильных предметов, если их упаковка явно пропитана водой;
(3) Культуральную среду или реагенты следует проверить на предмет соответствия их цвету и состоянию после стерилизации. Те, которые не соответствуют требованиям, следует отбросить;
(4) Для открытых/закрытых контейнеров отверстия сетки должны быть закрыты при их извлечении;
(5) Если изъятые предметы упали на землю, были помещены в нечистое место или испачканы водой, они считаются загрязненными и не могут быть использованы в качестве стерильных предметов;
(6) Вынесенные квалифицированные стерилизованные предметы должны храниться в складском помещении или пыленепроницаемом шкафу, и строго запрещено смешивать их с нестерилизованными предметами;
(7) На всех сертифицированных предметах должна быть указана дата стерилизации и срок годности;
(8) После завершения каждой партии стерилизации запишите название, количество, температуру, время и оператора стерилизованных продуктов.
Требования к обращению с токсичными и бактериальными отходами
Экспериментальное оборудование и культуры, используемые в микробиологических экспериментах, нельзя выносить из лаборатории без дезинфекции.
1. Культивированные зараженные материалы и отходы следует помещать в плотные контейнеры или проволочные корзины и хранить централизованно в специально отведенных местах до тех пор, пока они не будут равномерно обработаны в автоклаве.
2. Культуры, контаминированные микроорганизмами, необходимо автоклавировать при температуре 121°С в течение 30 минут.
3. После использования загрязненные соломинки следует поместить в 5%-ный раствор креольного мыла или раствор карболовой кислоты, замочить не менее чем на 24 часа (дезинфицирующая жидкость не должна быть ниже высоты замачивания), а затем стерилизовать под высоким давлением при температуре 121°C в течение 30 минут.
4. Жидкость для окрашивания и смывания мазков, как правило, можно сливать непосредственно в канализацию. Промывочную жидкость от вирулентных бактерий необходимо смыть в стакане и стерилизовать под высоким давлением перед сливом в канализацию. Окрашенные предметные стекла помещают в 5%-ный раствор крезолового мыла. После замачивания в воде на 24 часа прокипятите и промойте. Предметные стекла или чашки, используемые для реакции агглютинации, необходимо автоклавировать, а затем промыть.
5. После разрушения культуры немедленно опрыскать и пропитать загрязненные участки 5%-ным раствором крезолового мыла или раствором карболовой кислоты, выдержать полчаса, а затем протереть.
Загрязненную рабочую одежду или рабочую одежду, кепки, маски и т.п., надетую для жестоких испытаний, перед стиркой следует поместить в специальные дезинфекционные пакеты и стерилизовать под высоким давлением.
Требования к средней подготовке
Качество приготовления питательной среды напрямую влияет на рост микроорганизмов, поскольку разные микроорганизмы имеют разные потребности в питании и разные цели культивирования. Требования к приготовлению различных питательных сред следующие:
1. Взвесьте ингредиенты по формуле среды, а затем растворите их в дистиллированной воде. Перед использованием необходимо проверить качество применяемых реагентов и препаратов.
2. Измерение и корректировка pH: измерение pH следует проводить, когда культуральная среда охлаждена до комнатной температуры, поскольку существует определенная разница в pH в горячих или холодных условиях. По завершении измерения добавьте щелочь или кислоту в соответствии с расчетным количеством и хорошо перемешайте. Надо бы еще раз пройти тестирование. Значение pH культуральной среды должно быть точным, иначе оно повлияет на рост микроорганизмов или повлияет на наблюдение результатов. Однако следует отметить, что стерилизация под высоким давлением может повлиять на снижение или повышение pH некоторых культуральных сред, поэтому не рекомендуется стерилизовать при слишком высоком давлении или слишком много раз, чтобы не повлиять на качество культуральной среды. Индикаторы, дезоксихолат натрия, агар и т. д. обычно добавляют после корректировки pH.
3. Культуральная среда должна оставаться прозрачной, чтобы облегчить наблюдение за ростом бактерий. После того как питательную среду нагреют и прокипятят, ее можно профильтровать через впитывающую вату или фланель для удаления осадка. При необходимости его можно осветлить яичным белком. Используемые агаровые полоски необходимо заранее промыть и высушить. Перед использованием избегайте нарушения прозрачности агара из-за примесей.
4. Для хранения питательной среды нельзя использовать железные, медные и другие контейнеры. Лучше использовать чистую тару из нейтрального твердого стекла.
5. Стерилизация питательной среды должна не только достигать цели полной стерилизации, но также следить за тем, чтобы не снижалась ее пищевая ценность из-за нагревания. Обычно достаточно температуры 121°C в течение 15 минут. Культуральные среды, содержащие вещества, непереносимые к высокой температуре, такие как сахара и сыворотка, желатин и т. д., следует стерилизовать низкотемпературным или периодическим методом. Некоторые реагенты, которые нельзя нагревать, например теллурит калия, яичный желток, ТТС, антибиотики и т. д., следует охладить примерно до 50°C после автоклавирования и последующего добавления основного агара;
6. После приготовления каждой партии питательных сред следует провести тест на стерильность и рост тестируемых штаммов. Если это биохимическая культуральная среда, используйте стандартные бактериальные штаммы для инокуляции и культивирования и наблюдайте за результатами биохимических реакций. Он должен показать нормальную реакцию. Питательную среду не следует хранить слишком долго. При необходимости его можно хранить в холодильнике при температуре 4°C.
7. В настоящее время существует множество видов сухих питательных сред. В каждой партии необходимо использовать стандартные штаммы для тестирования роста или наблюдения за биохимическими реакциями. Различные питательные среды можно использовать только после того, как тест на рост соответствующих штаммов окажется положительным. Можно использовать только что купленные или высушенные, которые хранились длительное время. При ее приготовлении также следует измерять pH культуральной среды, а дозировку и метод следует соблюдать в соответствии с инструкциями к продукту.
8. Химические реагенты, условия стерилизации, результаты испытаний на рост штаммов и производственный персонал, использованные в каждой партии приготовленных питательных сред, должны быть записаны для справки.
Требования к сбору и обработке проб
1. Собранные контрольные пробы должны быть репрезентативными. При отборе проб необходимо подробно исследовать сырье, обработку, транспортировку, методы и условия хранения партии пищевых продуктов, состояние окружающей среды и т. д., чтобы проверить наличие каких-либо источников загрязнения.
2. В зависимости от типа и количества пищевых продуктов количество и метод отбора проб должны осуществляться в соответствии с требованиями стандартных методов проверки.
3. При отборе проб обращайте внимание на соблюдение асептики, а контейнер должен быть стерилизован во избежание микробного загрязнения окружающей среды. Контейнер нельзя стерилизовать раствором креозального мыла, хлорметионином, спиртом и другими дезинфицирующими средствами, а также он не должен содержать такие дезинфицирующие средства или антибиотики. Чтобы избежать гибели микроорганизмов в образце, используемые ножницы, ножи и ложки также необходимо стерилизовать перед использованием.
4. Образцы следует отправить в инспекционную комнату для проверки сразу после сбора. Процесс проверки обычно не превышает 3 часов. Если расстояние большое, его можно хранить при температуре 1–5 ℃. Если его необходимо заморозить, его следует хранить в замороженном состоянии. Отдать на проверку.
5. После получения образца инспекционное помещение регистрирует его (наименование образца, единицу контроля, количество, дату, номер и т.д.) и наблюдает за внешним видом образца. В проверке может быть отказано при наличии любого из следующих условий:
(1) Образцы, которые были стерилизованы специальным высоким давлением, кипячением или другими методами, потеряют свое значение как исходные пищевые продукты;
(2) бутылки и пакеты с пищевыми продуктами были вскрыты, приготовленное мясо и продукты из него, приготовленная птица и другие пищевые продукты были разбиты и некомплектны, то есть утрачена первоначальная форма пищевых продуктов (за исключением образцов пищевого отравления);
(3) Объем выборки недостаточен;
Для представленных на проверку образцов, соответствующих требованиям, инспекционная должна немедленно провести проверку после их получения. Если условия не соблюдены, их следует хранить в холодильнике при температуре 4°С, вовремя подготовиться к созданию условий, а затем провести проверку.
6. При проверке образцов выполняйте соответствующую обработку в соответствии с их различными свойствами.
(1) При инокуляции жидких образцов их следует тщательно перемешать и инокулировать в соответствии с количеством.
(2) Для твердых образцов используйте стерилизованный нож, чтобы вырезать 25 г различных частей, поместите их в 225 мл стерилизованного физиологического раствора или других растворов, раздавите и перемешайте гомогенизатором и инокулируйте в соответствии с количеством.
(3) Бутылки и пакеты с пищевыми продуктами следует открывать путем стерилизации, а вышеуказанные методы следует выбирать в соответствии с характеристиками перед инокуляцией.
Требования к выборочной проверке, регистрации и отчетности
1. После получения образца инспекционная комната сначала проведет проверку внешнего вида и незамедлительно проведет проверку в соответствии с национальными стандартными методами проверки. В процессе проверки асептические операции необходимо выполнять внимательно, ответственно и строго во избежаниерезультат микробного тестазагрязнение окружающей среды.
2. Методы, использованные в процессе выборочного контроля, возникшие явления и результаты и т. д. должны быть записаны в письменных протоколах испытаний в качестве основы для анализа и оценки результатов. Записи должны быть подробными, ясными, достоверными, объективными и не должны быть изменены или подделаны.
Требования асептической эксплуатации:
1. При инокуляции бактерий необходимо носить рабочую одежду и рабочую кепку.
2. При инокуляции образцов пищевых продуктов необходимо носить специальную рабочую одежду, шапочки и тапочки, которые следует разместить в буферном помещении стерильного помещения и использовать после УФ-дезинфекции перед работой.
3. При инокуляции образцов пищи вымойте руки с мылом перед входом в стерильное помещение, а затем протрите руки ватным тампоном, содержащим 75% спирта.
4. Соломинки, плошки и питательные среды, используемые для инокуляции, должны быть стерилизованы и стерилизованы. Неиспользованные контейнеры нельзя оставлять неиспользованными после открытия упаковки. Металлическую посуду перед использованием следует автоклавировать или трижды прожечь 95% спиртом.
5. При извлечении соломинки из упаковки кончик соломинки не должен касаться открытых частей. При использовании соломинки для инокуляции пробирки или планшета кончик соломинки не должен касаться края пробирки или планшета.
6. Засев образцов и перенос бактерий необходимо производить перед спиртовкой. При инокуляции бактерий или образцов соломинку необходимо стерилизовать пламенем после ее извлечения из упаковки и открытия пробки пробирки.
7. Перед инокуляцией бактерий все металлические проволоки инокуляционной петли и иглы следует прожечь пламенем, а при необходимости прожечь соединение между петлей, иглой и стержнем. Прививочную петлю для прививки туберкулезных и вирулентных бактерий следует прокипятить в кипящей воде в течение 5 минут, а затем сжечь пламенем.
8. При всасывании бактериальной жидкости или образцов через соломинку используйте соответствующий резиновый наконечник, а не высасывайте непосредственно ртом.
Требования к стерильному помещению:
1. Окна, ведущие наружу стерильной комнаты, должны быть с двойным остеклением и герметично закрыты. Их не следует открывать по собственному желанию. Должна быть буферная комната и раздвижная дверь, соответствующая размеру стерильной комнаты. Также должно быть небольшое окно площадью 0,5–0,7 м2. При подготовке к сдаче предметов после входа в стерильное помещение.
2. Стерильная комната должна содержаться в чистоте. После работы ее следует продезинфицировать 2–3%-ным раствором крезолового мыла, протереть рабочую поверхность и не хранить на складе предметы, не связанные с экспериментом.
3. Дверь стерильной комнаты должна быть плотно закрыта до и после использования, а ультрафиолетовая лампа должна быть включена. Если для дезинфекции используется подвесная ультрафиолетовая лампа в помещении, необходима ультрафиолетовая лампа мощностью 30 Вт. Расстояние составляет 1,0 м, время облучения не менее 30 минут. При использовании ультрафиолетовых ламп следует обратить внимание на то, чтобы они работали непосредственно под ультрафиолетовым светом, чтобы избежать повреждений. Лампу необходимо аккуратно протирать спиртовым ватным тампоном каждые две недели, чтобы удалить пыль и жир, чтобы уменьшить влияние проникновения ультрафиолета.
4. При обработке и инокуляции образцов пищевых продуктов войдите в стерильное помещение для проведения операций, и вам не разрешается входить или выходить по своему желанию. Если предметы необходимо передать, их можно передать через маленькое окошко.
5. Если в стерильном помещении необходимо установить кондиционер, там должно быть фильтрующее устройство.
Требования к дезинфекции и стерилизации
Стеклянная посуда, металлическая посуда и питательные среды, используемые длямикробиологические исследования, контаминированные и инокулированные культуры и т. д. перед использованием необходимо стерилизовать. Методы стерилизации паром сухим жаром и влажным теплом.
1. Подготовка перед стерилизацией
(1) Все предметы, подлежащие стерилизации, следует сначала вымыть и высушить. Стеклянную посуду, такую как соломинки и плошки, следует плотно заворачивать в бумагу. Если используются металлические трубки, вентиляционные отверстия на них следует открыть.
(2) Оберните пробку треугольной колбы, содержащей культуральную среду, бумагой, накройте пробирку, вытащите сердцевину шприца и оберните ее марлей.
2. установить
(1) Сухожаровой стерилизатор: предметы не должны быть переполнены и не должны касаться четырех стенок коробки.
(2) Большая пароварка высокого давления: поместите стерилизованные предметы, заверните их отдельно и поместите непосредственно в стерилизационный цилиндр. Не перегружайте предметы.
3. Проверка оборудования
(1) Проверьте, является ли дверной переключатель гибким, не повреждено ли резиновое кольцо и плоско ли оно.
(2) Проверьте, остается ли манометр в нулевом положении при выпуске пара, закройте дверь и крышку, проветрите пар или нагрейте и проверьте, нет ли утечки воздуха, совпадают ли условия, отмеченные манометром и термометром, и не заблокирован ли трубопровод.
(3) Для стерилизаторов с автоматическими электронными устройствами управления программой перед использованием необходимо проверить указанную программу, чтобы убедиться, что она соответствует требованиям стерилизации.
4. Стерилизационная обработка
(1) Метод стерилизации сухим жаром:
Этот метод подходит для предметов, которые не повреждаются, не портятся и не испаряются в условиях сухого тепла. Его чаще используют для стерилизации стеклянной посуды, металлических изделий, керамических изделий и т. д.
①Инструменты и посуду следует мыть перед сушкой-запеканием, чтобы предотвратить обугливание грязи, прилипшей к поверхности.
② Во время стерилизации предметы не должны быть перегружены, не должны напрямую касаться дна и стенок коробки и оставлять зазоры между предметами.
③ Во время стерилизации плотно закройте дверцу, подключите источник питания, откройте выпускное отверстие примерно на 30 минут, чтобы удалить холодный воздух из стерилизатора, отрегулируйте световой индикатор, когда температура поднимется до 160°C, и поддерживайте ее в течение 1,5–2 часов.
④После завершения стерилизации или во время процесса повышения температуры дверцу необходимо открывать при температуре ниже 60°C.
(2) При использовании портативной скороварки или парового стерилизатора вертикального давления необходимо выполнить следующие действия:
① Добавьте 3 л воды в основной корпус портативной скороварки и 16 л воды в вертикальную скороварку (количество воды следует пополнять при повторном использовании, а воду необходимо заменять, если она становится мутной);
② Для портативной скороварки вставьте вытяжную трубу на верхней крышке в квадратную трубку на внутренней стенке стерилизационного барабана (нельзя использовать стерилизаторы без шлангов или с проржавевшими и треснутыми шлангами);
③ Закройте верхнюю крышку и плотно затяните ее, чтобы предотвратить утечку воздуха; поместите стерилизатор на источник огня для нагрева, включите питание вертикальной скороварки и откройте выпускной клапан на верхней крышке, чтобы выпустить воздух (выпуск воздуха в течение 10–15 минут после закипания воды));
④Закройте выпускной клапан, чтобы поднять давление пара до заданных требований и поддерживать его в течение указанного времени (в зависимости от характера стерилизуемых предметов и соответствующих обстоятельств);
⑤ По истечении указанного времени для предметов, которые необходимо высушить, немедленно откройте выпускной клапан, чтобы выпустить пар. Когда давление вернется к нулю, охладите его естественным путем до 60°C, а затем откройте крышку, чтобы вынуть предметы. Если это жидкий предмет, не открывайте выпускной клапан. Кастрюлю следует немедленно снять с источника тепла и дать ей остыть естественным путем до тех пор, пока давление не вернется к нулю, а температура не упадет ниже 60°C, прежде чем открывать крышку и вынимать содержимое, чтобы предотвратить внезапную декомпрессию жидкости из-за бурного кипения или взрыва контейнера.
(3) Для использования парового стерилизатора с горизонтальной скороваркой выполните следующие действия:
①Плотно закройте дверцу кастрюли, откройте впускной клапан воздуха, подайте пар в мезонин для предварительного нагрева, и холодный воздух в мезонине будет автоматически выпущен через воздушный барьер;
②После того, как промежуточный слой достигнет заданной температуры, откройте впускной клапан для воздуха в камере горшка, введите пар в камеру горшка, и холодный воздух в камере горшка будет автоматически выпущен через воздушный затвор камеры горшка;
③Когда давление и температура в камере горшка достигнут заданного давления, отрегулируйте впускной клапан воздуха, чтобы поддерживать его постоянным;
④ Охладите температуру естественным или искусственным путем до 60℃, прежде чем открывать дверцу и вынимать предметы. Не используйте метод быстрого выпуска пара, чтобы предотвратить внезапное падение давления, бурное кипение жидкости или взрыв контейнера;
⑤ При использовании парового стерилизатора под давлением с автоматическим программным управлением после размещения предметов и плотного закрытия дверцы необходимо нажать соответствующий переключатель в соответствии с категорией предметов, чтобы стерилизация могла быть выполнена автоматически в соответствии с необходимыми процедурами. Во время стерилизации необходимо использовать прилагаемый инструмент для регистрации температуры и времени. Для дальнейшего использования эксплуатационные требования должны строго соответствовать инструкциям производителя;
5. Температура и время стерилизации.
(1) Температура стерилизации сухожарового стерилизатора составляет 160 ℃, продолжительность 1,5–2 часа.
(2) Температура и время стерилизации парового стерилизатора под давлением.
Прерывистый метод стерилизации
1. Метод стерилизации:
Используйте стерилизацию паром без давления. Некоторые вещества легко разрушаются при стерилизации паром под высоким давлением, поэтому этот метод можно использовать для стерилизации.
(1) Поместите предметы, подлежащие стерилизации, в кастрюлю, закройте верхнюю крышку, откройте сливное отверстие и слейте оставшуюся воду из кастрюли.
(2) Закройте сливное отверстие, откройте дверцу воздухозаборника и при необходимости продезинфицируйте в течение 10–20 минут.
(3) После завершения стерилизации закройте дверцу воздухозаборника, выньте предметы и подождите, пока они остынут до комнатной температуры, поместите их в инкубатор с температурой 37°C на ночь и продолжите стерилизацию в соответствии с вышеуказанным методом на следующий день. Сделайте это три раза, чтобы достичь цели стерилизации.
2. Как пользоваться сывороточным коагулятором:
Если питательная среда содержит специальные ингредиенты, такие как сыворотка или яйца, высокая температура разрушит ее питательные вещества. Следовательно, низкую температуру можно использовать для коагуляции сыворотки и достижения целей стерилизации:
(1) При использовании сыворотки, стерилизованной этим методом, в аликвотах необходимо строго соблюдать асептические операции, а также простерилизовать пробирки и планшеты перед использованием;
(2) При необходимости сделайте из культуральной среды наклонный или высокий слой. После добавления достаточного количества воды подключите источник питания, поднимите температуру до 75–90°C на один час, а затем стерилизуйте. Поместите его в инкубатор при температуре 37°C на ночь, а затем трижды стерилизуйте.
3. Прокипятить и продезинфицировать:
Вы можете использовать кипящую кастрюлю или кипящий стерилизатор. После того, как вода закипит, кипятите ее 5–15 минут. Также можно добавить в воду 2% карболовую кислоту и прокипятить ее 5 минут. Добавьте 0,02% формальдегида и кипятите при 80°C в течение 60 минут для достижения цели стерилизации. Однако можно добиться стерилизации кипячением. При использовании усилителей следует обращать внимание на коррозионную активность предметов.
4. Стерилизационная обработка:
После стерилизации предметы уже стерильны при нормальных обстоятельствах. Их следует тщательно осматривать и укладывать после извлечения из стерилизатора во избежание повторного загрязнения;
(1) Немедленно выньте предметы и проверьте целостность упаковки. При наличии повреждений или извлечении тампона его нельзя использовать в качестве стерильного предмета;
(2) Вынутые предметы не могут использоваться в качестве стерильных предметов, если их упаковка явно пропитана водой;
(3) Культуральную среду или реагенты следует проверить на предмет соответствия их цвету и состоянию после стерилизации. Те, которые не соответствуют требованиям, следует отбросить;
(4) Для открытых/закрытых контейнеров отверстия сетки должны быть закрыты при их извлечении;
(5) Если изъятые предметы упали на землю, были помещены в нечистое место или испачканы водой, они считаются загрязненными и не могут быть использованы в качестве стерильных предметов;
(6) Вынесенные квалифицированные стерилизованные предметы должны храниться в складском помещении или пыленепроницаемом шкафу, и строго запрещено смешивать их с нестерилизованными предметами;
(7) На всех сертифицированных предметах должна быть указана дата стерилизации и срок годности;
(8) После завершения каждой партии стерилизации запишите название, количество, температуру, время и оператора стерилизованных продуктов.
Требования к обращению с токсичными и бактериальными отходами
Экспериментальное оборудование и культуры, используемые в микробиологических экспериментах, нельзя выносить из лаборатории без дезинфекции.
1. Культивированные зараженные материалы и отходы следует помещать в плотные контейнеры или проволочные корзины и хранить централизованно в специально отведенных местах до тех пор, пока они не будут равномерно обработаны в автоклаве.
2. Культуры, контаминированные микроорганизмами, необходимо автоклавировать при температуре 121°С в течение 30 минут.
3. После использования загрязненные соломинки следует поместить в 5%-ный раствор креольного мыла или раствор карболовой кислоты, замочить не менее чем на 24 часа (дезинфицирующая жидкость не должна быть ниже высоты замачивания), а затем стерилизовать под высоким давлением при температуре 121°C в течение 30 минут.
4. Жидкость для окрашивания и смывания мазков, как правило, можно сливать непосредственно в канализацию. Промывочную жидкость от вирулентных бактерий необходимо смыть в стакане и стерилизовать под высоким давлением перед сливом в канализацию. Окрашенные предметные стекла помещают в 5%-ный раствор крезолового мыла. После замачивания в воде на 24 часа прокипятите и промойте. Предметные стекла или чашки, используемые для реакции агглютинации, необходимо автоклавировать, а затем промыть.
5. После разрушения культуры немедленно опрыскать и пропитать загрязненные участки 5%-ным раствором крезолового мыла или раствором карболовой кислоты, выдержать полчаса, а затем протереть.
Загрязненную рабочую одежду или рабочую одежду, кепки, маски и т.п., надетую для жестоких испытаний, перед стиркой следует поместить в специальные дезинфекционные пакеты и стерилизовать под высоким давлением.
Требования к средней подготовке
Качество приготовления питательной среды напрямую влияет на рост микроорганизмов, поскольку разные микроорганизмы имеют разные потребности в питании и разные цели культивирования. Требования к приготовлению различных питательных сред следующие:
1. Взвесьте ингредиенты по формуле среды, а затем растворите их в дистиллированной воде. Перед использованием необходимо проверить качество применяемых реагентов и препаратов.
2. Измерение и корректировка pH: измерение pH следует проводить, когда культуральная среда охлаждена до комнатной температуры, поскольку существует определенная разница в pH в горячих или холодных условиях. По завершении измерения добавьте щелочь или кислоту в соответствии с расчетным количеством и хорошо перемешайте. Надо бы еще раз пройти тестирование. Значение pH культуральной среды должно быть точным, иначе оно повлияет на рост микроорганизмов или повлияет на наблюдение результатов. Однако следует отметить, что стерилизация под высоким давлением может повлиять на снижение или повышение pH некоторых культуральных сред, поэтому не рекомендуется стерилизовать при слишком высоком давлении или слишком много раз, чтобы не повлиять на качество культуральной среды. Индикаторы, дезоксихолат натрия, агар и т. д. обычно добавляют после корректировки pH.
3. Культуральная среда должна оставаться прозрачной, чтобы облегчить наблюдение за ростом бактерий. После того как питательную среду нагреют и прокипятят, ее можно профильтровать через впитывающую вату или фланель для удаления осадка. При необходимости его можно осветлить яичным белком. Используемые агаровые полоски необходимо заранее промыть и высушить. Перед использованием избегайте нарушения прозрачности агара из-за примесей.
4. Для хранения питательной среды нельзя использовать железные, медные и другие контейнеры. Лучше использовать чистую тару из нейтрального твердого стекла.
5. Стерилизация питательной среды должна не только достигать цели полной стерилизации, но также следить за тем, чтобы не снижалась ее пищевая ценность из-за нагревания. Обычно достаточно температуры 121°C в течение 15 минут. Культуральные среды, содержащие вещества, непереносимые к высокой температуре, такие как сахара и сыворотка, желатин и т. д., следует стерилизовать низкотемпературным или периодическим методом. Некоторые реагенты, которые нельзя нагревать, например теллурит калия, яичный желток, ТТС, антибиотики и т. д., следует охладить примерно до 50°C после автоклавирования и последующего добавления основного агара;
6. После приготовления каждой партии питательных сред следует провести тест на стерильность и рост тестируемых штаммов. Если это биохимическая культуральная среда, используйте стандартные бактериальные штаммы для инокуляции и культивирования и наблюдайте за результатами биохимических реакций. Он должен показать нормальную реакцию. Питательную среду не следует хранить слишком долго. При необходимости его можно хранить в холодильнике при температуре 4°C.
7. В настоящее время существует множество видов сухих питательных сред. В каждой партии необходимо использовать стандартные штаммы для тестирования роста или наблюдения за биохимическими реакциями. Различные питательные среды можно использовать только после того, как тест на рост соответствующих штаммов окажется положительным. Можно использовать только что купленные или высушенные, которые хранились длительное время. При ее приготовлении также следует измерять pH культуральной среды, а дозировку и метод следует соблюдать в соответствии с инструкциями к продукту.
8. Химические реагенты, условия стерилизации, результаты испытаний на рост штаммов и производственный персонал, использованные в каждой партии приготовленных питательных сред, должны быть записаны для справки.
Требования к сбору и обработке проб
1. Собранные контрольные пробы должны быть репрезентативными. При отборе проб необходимо подробно исследовать сырье, обработку, транспортировку, методы и условия хранения партии пищевых продуктов, состояние окружающей среды и т. д., чтобы проверить наличие каких-либо источников загрязнения.
2. В зависимости от типа и количества пищевых продуктов количество и метод отбора проб должны осуществляться в соответствии с требованиями стандартных методов проверки.
3. При отборе проб обращайте внимание на соблюдение асептики, а контейнер должен быть стерилизован во избежание микробного загрязнения окружающей среды. Контейнер нельзя стерилизовать раствором креозального мыла, хлорметионином, спиртом и другими дезинфицирующими средствами, а также он не должен содержать такие дезинфицирующие средства или антибиотики. Чтобы избежать гибели микроорганизмов в образце, используемые ножницы, ножи и ложки также необходимо стерилизовать перед использованием.
4. Образцы следует отправить в инспекционную комнату для проверки сразу после сбора. Процесс проверки обычно не превышает 3 часов. Если расстояние большое, его можно хранить при температуре 1–5 ℃. Если его необходимо заморозить, его следует хранить в замороженном состоянии. Отдать на проверку.
5. После получения образца инспекционное помещение регистрирует его (наименование образца, единицу контроля, количество, дату, номер и т.д.) и наблюдает за внешним видом образца. В проверке может быть отказано при наличии любого из следующих условий:
(1) Образцы, которые были стерилизованы специальным высоким давлением, кипячением или другими методами, потеряют свое значение как исходные пищевые продукты;
(2) бутылки и пакеты с пищевыми продуктами были вскрыты, приготовленное мясо и продукты из него, приготовленная птица и другие пищевые продукты были разбиты и некомплектны, то есть утрачена первоначальная форма пищевых продуктов (за исключением образцов пищевого отравления);
(3) Объем выборки недостаточен;
Для представленных на проверку образцов, соответствующих требованиям, инспекционная должна немедленно провести проверку после их получения. Если условия не соблюдены, их следует хранить в холодильнике при температуре 4°С, вовремя подготовиться к созданию условий, а затем провести проверку.
6. При проверке образцов выполняйте соответствующую обработку в соответствии с их различными свойствами.
(1) При инокуляции жидких образцов их следует тщательно перемешать и инокулировать в соответствии с количеством.
(2) Для твердых образцов используйте стерилизованный нож, чтобы вырезать 25 г различных частей, поместите их в 225 мл стерилизованного физиологического раствора или других растворов, раздавите и перемешайте гомогенизатором и инокулируйте в соответствии с количеством.
(3) Бутылки и пакеты с пищевыми продуктами следует открывать путем стерилизации, а вышеуказанные методы следует выбирать в соответствии с характеристиками перед инокуляцией.
Требования к выборочной проверке, регистрации и отчетности
1. После получения образца инспекционная комната сначала проведет проверку внешнего вида и незамедлительно проведет проверку в соответствии с национальными стандартными методами проверки. В процессе проверки асептические операции необходимо выполнять внимательно, ответственно и строго во избежаниерезультат микробного тестазагрязнение окружающей среды.
2. Методы, использованные в процессе выборочного контроля, возникшие явления и результаты и т. д. должны быть записаны в письменных протоколах испытаний в качестве основы для анализа и оценки результатов. Записи должны быть подробными, ясными, достоверными, объективными и не должны быть изменены или подделаны.
