Mikrobioloogiliste uuringute nõuete kokkuvõte
2024-01-24 15:14:33
Nõuded ja sammudmikrobioloogiline testimineon järgmised:
Aseptilise töö nõuded:
1. Bakterite nakatamisel tuleb kanda tööriideid ja töömütsi.
2. Toiduproovide inokuleerimisel tuleb kanda spetsiaalseid tööriideid, mütse ja susse, mis tuleb asetada steriilse ruumi puhverruumi ja kasutada pärast UV-desinfitseerimist enne tööd.
3. Toiduproovide inokuleerimisel peske enne steriilsesse ruumi sisenemist käed seebiga ning seejärel pühkige käed 75% alkoholisisaldusega vatitükiga puhtaks.
4. Inokuleerimiseks kasutatavad kõrred, lamedad nõud ja söötmed tuleb steriliseerida ja steriliseerida. Kasutamata konteinereid ei tohi pärast pakendi avamist kasutamata jätta. Metallist nõusid tuleks enne kasutamist autoklaavida või kolm korda 95% alkoholiga põletada.
5. Pakendist kõrsi välja võttes ei tohi kõrre ots puutuda kokku avatud osadega. Kui kasutate kõrt katseklaasi või plaadi inokuleerimiseks, ei tohi kõrre ots puutuda kokku katseklaasi või plaadi servaga.
6. Proovide nakatamine ja bakterite ülekandmine peab toimuma alkoholilambi ees. Bakterite või proovide inokuleerimisel tuleb põhk pärast pakendist väljavõtmist ja katseklaasi korgi avamist leegiga steriliseerida.
7. Enne bakterite nakatamist tuleks kõik inokulatsiooniaasa ja nõela metalltraadid leegiga põletada ning vajadusel silmuse, nõela ja varda ühenduskoht põletada. Tuberkuloosibakterite ja virulentsete bakterite nakatamiseks mõeldud inokulatsioonisilmust tuleks keeta 5 minutit keevas vees ja seejärel leegiga põletada.
8. Bakterivedelikku või proove kõrrega imedes kasutage selle imemiseks vastavat kummiotsa, mitte imege seda otse suuga.
Steriilse ruumi kasutamise nõuded:
1. Steriilse ruumi välisküljele viivad aknad peavad olema topeltklaasid ja suletud. Neid ei tohiks oma äranägemise järgi avada. Seal peaks olema steriilse ruumi suurusele vastav puhverruum ja lükanduks. Samuti peaks olema väike aken 0,5–0,7 m2. Ettevalmistus esemete üleandmiseks pärast steriilsesse ruumi sisenemist.
2. Steriilset ruumi tuleks hoida puhtana. Pärast tööd tuleks see desinfitseerida 2–3% kresoolseebilahusega, tööpind pühkida ning katsega mitteseotud esemeid ei tohi hoida.
3. Steriilse ruumi uks tuleb enne ja pärast kasutamist tihedalt sulgeda ning sisse lülitada ultraviolettlamp. Kui desinfitseerimiseks kasutatakse siseruumides rippuvat ultraviolettlampi, on vaja 30 W ultraviolettlampi. Kaugus on 1,0 m ja kiiritusaeg on vähemalt 30 minutit. Ultraviolettlampide kasutamisel tuleb kahjustuste vältimiseks pöörata tähelepanu funktsioonile Töötage otse ultraviolettvalguses. Lampi tuleb iga kahe nädala järel õrnalt pühkida alkoholiga vatitupsuga, et eemaldada tolm ja rasv, et vähendada ultraviolettkiirguse mõju.
4. Toiduproovide töötlemisel ja inokuleerimisel sisenege operatsiooniks steriilsesse ruumi, kuhu ei tohi omal soovil siseneda ega väljuda. Kui esemeid on vaja edasi anda, saab need läbi väikese akna lasta.
5. Kui steriilsesse ruumi on vaja paigaldada kliimaseade, peaks seal olema filtreerimisseade.
Desinfitseerimise ja steriliseerimise nõuded
Kasutatud klaasnõud, metallnõud ja söötmedmikrobioloogiline testimine, saastunud ja inokuleeritud kultuurid jne tuleb enne kasutamist steriliseerida. Kuiva kuumuse ja niiske kuumuse rõhuga auruga steriliseerimise meetodid.
1. Ettevalmistus enne steriliseerimist
(1) Kõik esemed, mida tuleb steriliseerida, tuleb esmalt pesta ja kuivatada. Klaasnõud, nagu õled ja lamedad nõud, peavad olema tihedalt paberiga pakitud. Kui kasutatakse metalltorusid, tuleks nende ventilatsiooniavad avada.
(2) Mähi kultuurisöödet sisaldava kolmnurkkolvi kork paberisse, katke katseklaas, tõmmake süstla südamik välja ja mässige see marli.
2. installida
(1) Kuivsterilisaator: esemed ei tohi olla ülerahvastatud ega puutu kokku kasti nelja seinaga.
(2) Suur kõrgsurveaurupliit: asetage steriliseeritud esemed, mähkige need eraldi ja asetage otse steriliseerimissilindrisse. Ärge koormake esemeid üle.
3. Seadmete ülevaatus
(1) Kontrollige, kas ukselüliti on painduv, kas kummirõngas on kahjustatud ja kas see on tasane.
(2) Kontrollige, kas manomeeter jääb auru väljalaskmisel nullasendisse, sulgege uks ja kaas, ventileerige auru või soojust ning jälgige, kas õhku ei leki, kas manomeetri ja termomeetriga tähistatud tingimused ühtivad ning kas torujuhe on ummistunud.
(3) Automaatsete elektrooniliste programmijuhtimisseadmetega sterilisaatorite puhul tuleks enne kasutamist kontrollida, kas see vastab steriliseerimise nõuetele.
4. Steriliseerimisravi
(1) Kuivsteriliseerimise meetod:
See meetod sobib esemete jaoks, mis ei kahjusta, ei rikne ega aurustu kuivas kuumuses. Seda kasutatakse sagedamini klaasnõude, metalltoodete, keraamiliste toodete jne steriliseerimiseks.
①Instrumendid ja riistad tuleb enne kuiva-küpsetamist pesta, et vältida pinnale kinnitunud mustuse karboniseerumist.
② Steriliseerimise ajal ei tohi esemed olla ülerahvastatud, ei tohi puutuda vahetult kokku kasti põhja ja seinaga ning jätta esemete vahele tühimikke.
③ Steriliseerimise ajal sulgege uks tihedalt, ühendage toiteallikas, avage väljalaskeava umbes 30 minutiks, et eemaldada steriliseerijast külm õhk, reguleerige märgutuli, kui temperatuur tõuseb 160 °C-ni, ja hoidke seda 1,5–2 tundi.
④Pärast steriliseerimise lõppu või temperatuuri tõusu ajal tuleb uks avada temperatuuril alla 60°C.
(2) Kaasaskantava kiirkeedupliidi või vertikaalse rõhuga aurusterilisaatori kasutamisel tuleb järgida järgmisi samme:
① Lisage kaasaskantava kiirkeedupoti põhikorpusesse 3 liitrit vett ja vertikaalsesse kiirkeedupotti 16 liitrit vett (taaskasutamisel tuleb vee kogust täiendada ja vesi tuleb välja vahetada, kui see muutub häguseks);
② Kaasaskantava kiirkeedupoti puhul sisestage ülemisel kaanel olev väljalasketoru steriliseerimistünni siseseina ruudukujulisse torusse (ilma voolikuteta või korrodeerunud ja mõranenud voolikutega sterilisaatoreid ei tohi kasutada);
③ Katke ülemine kate ja pingutage õhulekke vältimiseks. asetage steriliseerija tuleallikale soojendamiseks, lülitage vertikaalse survepliidi toide sisse ja avage õhu väljalaskmiseks ülemise kaane väljalaskeklapp (väljatõmbeõhk 10–15 minutit pärast vee keemist) );
④ Sulgege väljalaskeklapp, et tõsta aururõhk ettenähtud nõueteni ja hoida seda kindlaksmääratud aja jooksul (olenevalt steriliseeritud esemete iseloomust ja asjakohastest asjaoludest);
⑤ Pärast määratud aja möödumist avage kuivatamist vajavate esemete puhul kohe väljalaskeklapp, et aur välja lasta. Kui rõhk taastub nullini, jahutage see loomulikult temperatuurini 60 °C ja seejärel avage esemete väljavõtmiseks kaas. Kui tegemist on vedela esemega, ärge avage väljalaskeklappi. Enne kaane avamist sisu väljavõtmiseks tuleks pott koheselt soojusallikalt eemaldada ja lasta loomulikul viisil jahtuda, kuni rõhk langeb nullini ja temperatuur langeb alla 60°C, et vältida vedeliku järsku dekompressiooni, mis tuleneb anuma ägedast keemisest või plahvatusest.
(3) Horisontaalse kiirkeedu aurusterilisaatori kasutamiseks järgige järgmisi samme.
① Sulgege poti uks tihedalt, avage õhu sisselaskeklapp, sisestage aur eelsoojenduseks ja poolkorrusel olev külm õhk väljub automaatselt läbi õhutõkke;
②Kui vahekiht saavutab etteantud temperatuuri, avage potikambri õhu sisselaskeklapp, sisestage aur potikambrisse ja potikambris olev külm õhk väljub automaatselt läbi potikambri õhupiiriku;
③ Kui rõhk ja temperatuur potikambris saavutavad määratud rõhu, reguleerige õhu sisselaskeventiili, et see püsiks konstantsena;
④ Enne ukse avamist esemete väljavõtmiseks jahutage temperatuur loomulikult või kunstlikult 60 ℃-ni. Ärge kasutage kiiret auruväljastusmeetodit, et vältida äkilist rõhulangust, vedeliku ägedat keemist või anuma plahvatust;
⑤ Kui kasutate automaatse programmiga - juhitava rõhuga auru sterilisaatorit, tuleb pärast esemete asetamist ja ukse tihedat sulgemist vajutada vastavat lülitit vastavalt esemete kategooriale, et steriliseerimine saaks automaatselt läbi viia vastavalt nõutavatele protseduuridele. Steriliseerimise ajal tuleb temperatuuri ja aja registreerimiseks kasutada lisatud instrumenti. Edaspidiseks kasutamiseks peaksid töönõuded olema rangelt kooskõlas tootja juhistega;
5. Steriliseerimise temperatuur ja aeg
(1) Kuivsoojusterilisaatori steriliseerimistemperatuur on 160 ℃, 1,5 ~ 2 tundi.
(2) Surveauru sterilisaatori steriliseerimistemperatuur ja aeg
Vahelduv steriliseerimismeetod
1. Steriliseerimismeetod:
Kasutage auruga steriliseerimist ilma surveta. Mõned ained hävivad kergesti kõrgsurveauruga steriliseerimisel, seega saab seda meetodit kasutada steriliseerimiseks.
(1) Asetage steriliseeritavad esemed potti, katke ülemine kaas, avage äravooluava ja tühjendage potti ülejäänud vesi.
(2) Sulgege äravooluava, avage õhu sisselaskeava uks ja desinfitseerige vajaduse korral 10–20 minutit.
(3) Pärast steriliseerimise lõpetamist sulgege õhu sisselaskeava uks, võtke esemed välja ja oodake, kuni see jahtub toatemperatuurini, asetage need ööseks inkubaatorisse temperatuuril 37 °C ja jätkake steriliseerimist ülaltoodud meetodil järgmisel päeval. Tehke seda kolm korda, et saavutada steriliseerimise eesmärk.
2. Kuidas kasutada seerumi koagulaatorit:
Kui sööde sisaldab spetsiaalseid koostisosi, nagu seerum või munad, hävitab kõrge kuumus selle toitained. Seetõttu saab seerumi koaguleerimiseks ja steriliseerimise eesmärkide saavutamiseks kasutada madalat temperatuuri:
(1) Selle meetodiga steriliseeritud seerumi kasutamisel alikvootide jaotamiseks tuleb rangelt järgida aseptilisi toiminguid ning ka katseklaasid ja plaadid tuleb enne kasutamist steriliseerida;
(2) Muutke kultiveerimissöötmele vastavalt vajadusele kaldu või kõrge kiht. Pärast piisava koguse vee lisamist ühendage toiteallikas, tõstke temperatuur üheks tunniks 75–90 °C-ni ja seejärel steriliseerige. Asetage see ööseks 37 °C inkubaatorisse ja steriliseerige kolm korda.
3. Keetke ja desinfitseerige:
Võite kasutada keedupotti või keevat sterilisaatorit. Pärast vee keetmist keetke seda 5–15 minutit. Veele võib lisada ka 2% karboolhapet ja keeta 5 minutit. Lisage 0,02% formaldehüüdi ja keetke seda 80 °C juures 60 minutit, et saavutada steriliseerimise eesmärk. Siiski on võimalik saavutada keev steriliseerimine. Tugevdajate kasutamisel tuleb tähelepanu pöörata esemete söövitavusele.
4. Steriliseerimine:
Pärast steriliseerimist on esemed juba tavatingimustes steriilsed. Neid tuleks sterilisaatorist väljavõtmisel hoolikalt üle vaadata ja asetada, et vältida uuesti saastumist;
(1) Võtke esemed välja ja kontrollige kohe pakendi terviklikkust. Kahjustuse või tampoon eemaldamise korral ei saa seda kasutada steriilsete esemetena;
(2) Väljavõetud esemeid ei saa kasutada steriilsete esemetena, kui nende pakend on ilmselgelt vees läbi imbunud;
(3) Kultuurikeskkonda või reaktiive tuleks kontrollida, et näha, kas need vastavad pärast steriliseerimist värvile või olekule. Need, mis nõuetele ei vasta, tuleks ära visata;
(4) Avatud-sulgede konteinerite puhul tuleb ekraaniaugud nende väljavõtmisel sulgeda;
(5) Kui eemaldatud esemed kukuvad maapinnale, on valesti paigutatud ebapuhtasse kohta või on veega määrdunud, loetakse need saastunuks ja neid ei saa kasutada steriilsete esemetena;
(6) Väljavõetud kvalifitseeritud steriliseeritud esemeid tuleks hoida laoruumis või tolmukindlas kapis ning nende segamine steriliseerimata esemetega on rangelt keelatud;
(7) Kõik kvalifitseeritud esemed peaksid olema märgistatud steriliseerimiskuupäeva ja aegumiskuupäevaga;
(8) Pärast iga steriliseerimise partii lõppu registreerige steriliseeritud toodete nimi, kogus, temperatuur, aeg ja operaator.
Nõuded toksiliste ja bakteriaalsete jäätmete töötlemisele
Mikrobioloogilistes katsetes kasutatud katseseadmeid ja kultuure ei tohi ilma desinfitseerimiseta laborist välja viia.
1. Kultiveeritud saastunud materjalid ja jäätmed tuleb asetada tihedatesse konteineritesse või traatkorvidesse ja hoida tsentraalselt selleks ettenähtud kohtades, kuni need on ühtlaselt autoklaavitud.
2. Mikroorganismidega saastunud kultuure tuleb autoklaavida 121°C juures 30 minutit.
3. Pärast kasutamist tuleb saastunud kõrred asetada 5% kreoolseebi lahusesse või karboolhappe lahusesse, leotada vähemalt 24 tundi (desinfitseerimisvedelik ei tohi olla leotuskõrgusest madalam) ja seejärel steriliseerida kõrgsurvega 121°C juures 30 minutit.
4. Värvimis- ja loputusvedeliku võib üldjuhul loputada otse kanalisatsiooni. Virulentsete bakterite loputusvedelik tuleb enne kanalisatsiooni valamist keeduklaasis loputada ja kõrge rõhuga steriliseerida. Värvitud objektiklaasid pannakse 5% kresoolseebi lahusesse. Pärast 24-tunnist vees leotamist keetke ja peske. Aglutinatsiooni testimiseks kasutatavad alusklaasid või nõud tuleb autoklaavida ja seejärel pesta.
5. Pärast kultuuri purustamist piserdage ja leotage saastunud osi kohe 5% kresoolseebilahuse või karboolhappe lahusega, leotage pool tundi ja seejärel pühkige puhtaks.
Saastunud tööriided või vägivaldseteks katseteks kantud tööriided, mütsid, maskid jms tuleb enne pesemist asetada spetsiaalsetesse desinfitseerimiskottidesse ja steriliseerida kõrgsurvega.
Keskmised ettevalmistusnõuded
Kultuurisöötme valmistamise kvaliteet mõjutab otseselt mikroorganismide kasvu, kuna erinevatel mikroorganismidel on erinevad toitumisvajadused ja erinevad kultiveerimise eesmärgid. Erinevate söötmete ettevalmistamise nõuded on järgmised:
1. Kaaluge koostisained keskmise valemi järgi ja seejärel lahustage need destilleeritud vees. Kasutatud reaktiivide ja ravimite kvaliteeti tuleb enne kasutamist kontrollida.
2. pH mõõtmine ja reguleerimine: pH mõõtmine tuleks läbi viia, kui sööde on jahutatud toatemperatuurini, kuna kuumades või külmades tingimustes on pH teatud erinevus. Kui mõõtmine on lõppenud, lisage leelist või hapet vastavalt arvutatud kogusele ja segage hästi. Tuleks uuesti testida. Kultuurisöötme pH väärtus peab olema täpne, vastasel juhul mõjutab see mikroorganismide kasvu või tulemuste jälgimist. Siiski tuleb märkida, et kõrgsurve steriliseerimine võib mõjutada mõne söötme pH langust või tõusu, mistõttu ei ole soovitatav steriliseerida liiga kõrgel rõhul või liiga palju kordi, et vältida söötme kvaliteedi mõjutamist. Näitajad, naatriumdeoksükolaat, agar jne on üldiselt Lisage see pärast pH reguleerimist.
3. Kultuurikeskkond peab olema selge, et hõlbustada bakterite kasvu jälgimist. Pärast söötme kuumutamist ja keetmist võib selle setete eemaldamiseks filtreerida absorbeeriva puuvilla või flanelliga. Vajadusel saab munavalgega selgeks teha. Kasutatavad agariribad tuleb eelnevalt pesta ja kuivatada. Enne kasutamist vältige agari lisandite tõttu läbipaistvuse mõjutamist.
4. Kultuurisöötme hoidmiseks ei tohi kasutada rauda, vaske ega muid anumaid. Parem on kasutada puhtaid neutraalseid kõvast klaasist anumaid.
5. Kultuurisöötme steriliseerimine ei pea mitte ainult saavutama täieliku steriliseerimise eesmärki, vaid pöörama tähelepanu ka sellele, et kuumutamise tõttu ei väheneks selle toiteväärtus. Üldiselt piisab 121°C 15 minutist. Kõrget kuumust talumatuid aineid, nagu suhkrud ja seerum, želatiin jne sisaldavad söötmed tuleb steriliseerida madalal temperatuuril või vahelduva meetodiga. Mõned reaktiivid, mida ei saa kuumutada, nagu kaaliumtelluriit, munakollane, TTC, antibiootikumid jne, tuleks pärast aluselise agari autoklaavimist jahutada temperatuurini umbes 50 °C ja seejärel lisada;
6. Pärast iga söötmepartii valmistamist tuleb läbi viia steriilne kasvutest ja testitud tüvede kasvutest. Kui tegemist on biokeemilise söötmega, kasutage inokuleerimiseks ja kultiveerimiseks standardseid bakteritüvesid ning jälgige biokeemilise reaktsiooni tulemusi. See peaks näitama normaalset reaktsiooni. Kultuurikeskkonda ei tohi liiga kaua säilitada. Vajadusel võib seda säilitada 4°C külmkapis.
7. Praegu on palju erinevaid kuivsöötmeid. Iga partii peab kasvutesti või biokeemilise reaktsiooni jälgimiseks kasutama standardseid tüvesid. Erinevaid söötmeid võib kasutada alles pärast seda, kui vastavate tüvede kasvutest on hea. Kasutada võib äsja ostetud või kuivanud, mis on kaua seisnud. Söötme valmistamisel tuleks mõõta ka söötme pH-d ning järgida annust ja meetodit vastavalt toote juhistele.
8. Igas ettevalmistatud söötmepartiis kasutatud keemilised reaktiivid, steriliseerimistingimused, tüve kasvutesti tulemused ja tootmispersonal tuleks järelepärimiseks registreerida.
Proovide kogumise ja töötlemise nõuded
1. Kogutud kontrolliproovid peavad olema representatiivsed. Proovide võtmisel tuleks põhjalikult uurida toidupartii toorainet, töötlemist, transporti, ladustamisviise ja -tingimusi, ümbritseva keskkonna tervislikku seisundit jne, et kontrollida saasteallikate olemasolu.
2. Sõltuvalt toidu liigist ja kogusest tuleks proovide võtmise kogus ja meetod läbi viia standardsete kontrollimeetodite nõuete kohaselt.
3. Pöörake proovide võtmisel tähelepanu aseptilisele toimimisele ja anum tuleb steriliseerida, et vältida mikroobset saastumist keskkonnas. Anumat ei tohi steriliseerida kreosaalseebi lahusega, steriliseerida kloormetioniini, alkoholi ja muude desinfektsioonivahenditega ning see ei tohi sisaldada selliseid desinfektsioonivahendeid ega antibiootikume. Et vältida proovis olevate mikroorganismide tapmist, tuleb enne kasutamist steriliseerida ka kasutatavad käärid, noad ja lusikad.
4. Proovid tuleb kohe pärast kogumist saata kontrolliruumi kontrollimiseks. Kontrolliprotsess ei kesta üldjuhul üle 3 tunni. Kui vahemaa on pikk, saab seda säilitada keskkonnas 1–5 ℃. Kui seda on vaja külmutada, tuleb seda hoida külmutatud olekus. Esitage kontrollimiseks.
5. Pärast proovi vastuvõtmist registreerib ülevaatusruum selle (proovi nimi, kontrollimise ühik, kogus, kuupäev, number jne) ja jälgib proovi välimust. Kui leitakse mõni järgmistest tingimustest, võidakse ülevaatusest keelduda:
(1) Spetsiaalse kõrgsurve, keetmise või muul viisil steriliseeritud proovid kaotavad oma tähtsuse algse toidu esindamisel;
(2) Toidupudelid ja kotid on avatud, küpsetatud liha ja sellest valmistatud tooted, keedetud linnuliha ja muud toidud on purunenud ja mittetäielikud, st toidu esialgne kuju on kadunud (v.a toidumürgituse proovid);
(3) Proovivõtu kogus on ebapiisav;
Kontrollimiseks esitatud, nõuetele vastavate proovide puhul peaks ülevaatusruum pärast nende kättesaamist viivitamatult läbi viima kontrolli. Kui tingimused ei ole täidetud, tuleb neid hoida 4°C külmikus, õigel ajal tingimuste loomiseks ette valmistada ja seejärel läbi viia kontroll.
6. Proovide kontrollimisel viige läbi asjakohane töötlemine vastavalt nende erinevatele omadustele.
(1) Vedelate proovide inokuleerimisel tuleb need põhjalikult segada ja nakatada vastavalt kogusele.
(2) Tahkete proovide puhul lõigake steriliseeritud noaga välja 25 g erinevaid osi, asetage need 225 ml steriliseeritud soolalahusesse või muusse lahusesse, purustage ja segage homogenisaatoriga ning nakatage vastavalt kogusele.
(3) Toidupudelid ja kotid tuleks avada steriliseerimise teel ning ülaltoodud meetodid tuleks enne nakatamist valida vastavalt omadustele.
Näidiskontrolli, registreerimise ja aruandluse nõuded
1. Pärast proovi kättesaamist teostab kontrolliruum esmalt välimuse kontrolli ja viivitamatult kontrolli vastavalt riiklikele standardsetele kontrollimeetoditele. Kontrollimise ajal tuleb aseptilisi toiminguid teha hoolikalt, vastutustundlikult ja rangelt vältidamikroobse testi tulemussaastumine keskkonnas.
2. Proovikontrolli käigus kasutatud meetodid, ilmnenud nähtused ja tulemused jms tuleb analüüsi ja tulemuste üle otsustamise aluseks võtta kirjalikes testiprotokollides. Kirjed peavad olema üksikasjalikud, selged, autentsed, objektiivsed ning neid ei tohi muuta ega võltsitud.
)
)
Aseptilise töö nõuded:
1. Bakterite nakatamisel tuleb kanda tööriideid ja töömütsi.
2. Toiduproovide inokuleerimisel tuleb kanda spetsiaalseid tööriideid, mütse ja susse, mis tuleb asetada steriilse ruumi puhverruumi ja kasutada pärast UV-desinfitseerimist enne tööd.
3. Toiduproovide inokuleerimisel peske enne steriilsesse ruumi sisenemist käed seebiga ning seejärel pühkige käed 75% alkoholisisaldusega vatitükiga puhtaks.
4. Inokuleerimiseks kasutatavad kõrred, lamedad nõud ja söötmed tuleb steriliseerida ja steriliseerida. Kasutamata konteinereid ei tohi pärast pakendi avamist kasutamata jätta. Metallist nõusid tuleks enne kasutamist autoklaavida või kolm korda 95% alkoholiga põletada.
5. Pakendist kõrsi välja võttes ei tohi kõrre ots puutuda kokku avatud osadega. Kui kasutate kõrt katseklaasi või plaadi inokuleerimiseks, ei tohi kõrre ots puutuda kokku katseklaasi või plaadi servaga.
6. Proovide nakatamine ja bakterite ülekandmine peab toimuma alkoholilambi ees. Bakterite või proovide inokuleerimisel tuleb põhk pärast pakendist väljavõtmist ja katseklaasi korgi avamist leegiga steriliseerida.
7. Enne bakterite nakatamist tuleks kõik inokulatsiooniaasa ja nõela metalltraadid leegiga põletada ning vajadusel silmuse, nõela ja varda ühenduskoht põletada. Tuberkuloosibakterite ja virulentsete bakterite nakatamiseks mõeldud inokulatsioonisilmust tuleks keeta 5 minutit keevas vees ja seejärel leegiga põletada.
8. Bakterivedelikku või proove kõrrega imedes kasutage selle imemiseks vastavat kummiotsa, mitte imege seda otse suuga.
Steriilse ruumi kasutamise nõuded:
1. Steriilse ruumi välisküljele viivad aknad peavad olema topeltklaasid ja suletud. Neid ei tohiks oma äranägemise järgi avada. Seal peaks olema steriilse ruumi suurusele vastav puhverruum ja lükanduks. Samuti peaks olema väike aken 0,5–0,7 m2. Ettevalmistus esemete üleandmiseks pärast steriilsesse ruumi sisenemist.
2. Steriilset ruumi tuleks hoida puhtana. Pärast tööd tuleks see desinfitseerida 2–3% kresoolseebilahusega, tööpind pühkida ning katsega mitteseotud esemeid ei tohi hoida.
3. Steriilse ruumi uks tuleb enne ja pärast kasutamist tihedalt sulgeda ning sisse lülitada ultraviolettlamp. Kui desinfitseerimiseks kasutatakse siseruumides rippuvat ultraviolettlampi, on vaja 30 W ultraviolettlampi. Kaugus on 1,0 m ja kiiritusaeg on vähemalt 30 minutit. Ultraviolettlampide kasutamisel tuleb kahjustuste vältimiseks pöörata tähelepanu funktsioonile Töötage otse ultraviolettvalguses. Lampi tuleb iga kahe nädala järel õrnalt pühkida alkoholiga vatitupsuga, et eemaldada tolm ja rasv, et vähendada ultraviolettkiirguse mõju.
4. Toiduproovide töötlemisel ja inokuleerimisel sisenege operatsiooniks steriilsesse ruumi, kuhu ei tohi omal soovil siseneda ega väljuda. Kui esemeid on vaja edasi anda, saab need läbi väikese akna lasta.
5. Kui steriilsesse ruumi on vaja paigaldada kliimaseade, peaks seal olema filtreerimisseade.
Desinfitseerimise ja steriliseerimise nõuded
Kasutatud klaasnõud, metallnõud ja söötmedmikrobioloogiline testimine, saastunud ja inokuleeritud kultuurid jne tuleb enne kasutamist steriliseerida. Kuiva kuumuse ja niiske kuumuse rõhuga auruga steriliseerimise meetodid.
1. Ettevalmistus enne steriliseerimist
(1) Kõik esemed, mida tuleb steriliseerida, tuleb esmalt pesta ja kuivatada. Klaasnõud, nagu õled ja lamedad nõud, peavad olema tihedalt paberiga pakitud. Kui kasutatakse metalltorusid, tuleks nende ventilatsiooniavad avada.
(2) Mähi kultuurisöödet sisaldava kolmnurkkolvi kork paberisse, katke katseklaas, tõmmake süstla südamik välja ja mässige see marli.
2. installida
(1) Kuivsterilisaator: esemed ei tohi olla ülerahvastatud ega puutu kokku kasti nelja seinaga.
(2) Suur kõrgsurveaurupliit: asetage steriliseeritud esemed, mähkige need eraldi ja asetage otse steriliseerimissilindrisse. Ärge koormake esemeid üle.
3. Seadmete ülevaatus
(1) Kontrollige, kas ukselüliti on painduv, kas kummirõngas on kahjustatud ja kas see on tasane.
(2) Kontrollige, kas manomeeter jääb auru väljalaskmisel nullasendisse, sulgege uks ja kaas, ventileerige auru või soojust ning jälgige, kas õhku ei leki, kas manomeetri ja termomeetriga tähistatud tingimused ühtivad ning kas torujuhe on ummistunud.
(3) Automaatsete elektrooniliste programmijuhtimisseadmetega sterilisaatorite puhul tuleks enne kasutamist kontrollida, kas see vastab steriliseerimise nõuetele.
4. Steriliseerimisravi
(1) Kuivsteriliseerimise meetod:
See meetod sobib esemete jaoks, mis ei kahjusta, ei rikne ega aurustu kuivas kuumuses. Seda kasutatakse sagedamini klaasnõude, metalltoodete, keraamiliste toodete jne steriliseerimiseks.
①Instrumendid ja riistad tuleb enne kuiva-küpsetamist pesta, et vältida pinnale kinnitunud mustuse karboniseerumist.
② Steriliseerimise ajal ei tohi esemed olla ülerahvastatud, ei tohi puutuda vahetult kokku kasti põhja ja seinaga ning jätta esemete vahele tühimikke.
③ Steriliseerimise ajal sulgege uks tihedalt, ühendage toiteallikas, avage väljalaskeava umbes 30 minutiks, et eemaldada steriliseerijast külm õhk, reguleerige märgutuli, kui temperatuur tõuseb 160 °C-ni, ja hoidke seda 1,5–2 tundi.
④Pärast steriliseerimise lõppu või temperatuuri tõusu ajal tuleb uks avada temperatuuril alla 60°C.
(2) Kaasaskantava kiirkeedupliidi või vertikaalse rõhuga aurusterilisaatori kasutamisel tuleb järgida järgmisi samme:
① Lisage kaasaskantava kiirkeedupoti põhikorpusesse 3 liitrit vett ja vertikaalsesse kiirkeedupotti 16 liitrit vett (taaskasutamisel tuleb vee kogust täiendada ja vesi tuleb välja vahetada, kui see muutub häguseks);
② Kaasaskantava kiirkeedupoti puhul sisestage ülemisel kaanel olev väljalasketoru steriliseerimistünni siseseina ruudukujulisse torusse (ilma voolikuteta või korrodeerunud ja mõranenud voolikutega sterilisaatoreid ei tohi kasutada);
③ Katke ülemine kate ja pingutage õhulekke vältimiseks. asetage steriliseerija tuleallikale soojendamiseks, lülitage vertikaalse survepliidi toide sisse ja avage õhu väljalaskmiseks ülemise kaane väljalaskeklapp (väljatõmbeõhk 10–15 minutit pärast vee keemist) );
④ Sulgege väljalaskeklapp, et tõsta aururõhk ettenähtud nõueteni ja hoida seda kindlaksmääratud aja jooksul (olenevalt steriliseeritud esemete iseloomust ja asjakohastest asjaoludest);
⑤ Pärast määratud aja möödumist avage kuivatamist vajavate esemete puhul kohe väljalaskeklapp, et aur välja lasta. Kui rõhk taastub nullini, jahutage see loomulikult temperatuurini 60 °C ja seejärel avage esemete väljavõtmiseks kaas. Kui tegemist on vedela esemega, ärge avage väljalaskeklappi. Enne kaane avamist sisu väljavõtmiseks tuleks pott koheselt soojusallikalt eemaldada ja lasta loomulikul viisil jahtuda, kuni rõhk langeb nullini ja temperatuur langeb alla 60°C, et vältida vedeliku järsku dekompressiooni, mis tuleneb anuma ägedast keemisest või plahvatusest.
(3) Horisontaalse kiirkeedu aurusterilisaatori kasutamiseks järgige järgmisi samme.
① Sulgege poti uks tihedalt, avage õhu sisselaskeklapp, sisestage aur eelsoojenduseks ja poolkorrusel olev külm õhk väljub automaatselt läbi õhutõkke;
②Kui vahekiht saavutab etteantud temperatuuri, avage potikambri õhu sisselaskeklapp, sisestage aur potikambrisse ja potikambris olev külm õhk väljub automaatselt läbi potikambri õhupiiriku;
③ Kui rõhk ja temperatuur potikambris saavutavad määratud rõhu, reguleerige õhu sisselaskeventiili, et see püsiks konstantsena;
④ Enne ukse avamist esemete väljavõtmiseks jahutage temperatuur loomulikult või kunstlikult 60 ℃-ni. Ärge kasutage kiiret auruväljastusmeetodit, et vältida äkilist rõhulangust, vedeliku ägedat keemist või anuma plahvatust;
⑤ Kui kasutate automaatse programmiga - juhitava rõhuga auru sterilisaatorit, tuleb pärast esemete asetamist ja ukse tihedat sulgemist vajutada vastavat lülitit vastavalt esemete kategooriale, et steriliseerimine saaks automaatselt läbi viia vastavalt nõutavatele protseduuridele. Steriliseerimise ajal tuleb temperatuuri ja aja registreerimiseks kasutada lisatud instrumenti. Edaspidiseks kasutamiseks peaksid töönõuded olema rangelt kooskõlas tootja juhistega;
5. Steriliseerimise temperatuur ja aeg
(1) Kuivsoojusterilisaatori steriliseerimistemperatuur on 160 ℃, 1,5 ~ 2 tundi.
(2) Surveauru sterilisaatori steriliseerimistemperatuur ja aeg
Vahelduv steriliseerimismeetod
1. Steriliseerimismeetod:
Kasutage auruga steriliseerimist ilma surveta. Mõned ained hävivad kergesti kõrgsurveauruga steriliseerimisel, seega saab seda meetodit kasutada steriliseerimiseks.
(1) Asetage steriliseeritavad esemed potti, katke ülemine kaas, avage äravooluava ja tühjendage potti ülejäänud vesi.
(2) Sulgege äravooluava, avage õhu sisselaskeava uks ja desinfitseerige vajaduse korral 10–20 minutit.
(3) Pärast steriliseerimise lõpetamist sulgege õhu sisselaskeava uks, võtke esemed välja ja oodake, kuni see jahtub toatemperatuurini, asetage need ööseks inkubaatorisse temperatuuril 37 °C ja jätkake steriliseerimist ülaltoodud meetodil järgmisel päeval. Tehke seda kolm korda, et saavutada steriliseerimise eesmärk.
2. Kuidas kasutada seerumi koagulaatorit:
Kui sööde sisaldab spetsiaalseid koostisosi, nagu seerum või munad, hävitab kõrge kuumus selle toitained. Seetõttu saab seerumi koaguleerimiseks ja steriliseerimise eesmärkide saavutamiseks kasutada madalat temperatuuri:
(1) Selle meetodiga steriliseeritud seerumi kasutamisel alikvootide jaotamiseks tuleb rangelt järgida aseptilisi toiminguid ning ka katseklaasid ja plaadid tuleb enne kasutamist steriliseerida;
(2) Muutke kultiveerimissöötmele vastavalt vajadusele kaldu või kõrge kiht. Pärast piisava koguse vee lisamist ühendage toiteallikas, tõstke temperatuur üheks tunniks 75–90 °C-ni ja seejärel steriliseerige. Asetage see ööseks 37 °C inkubaatorisse ja steriliseerige kolm korda.
3. Keetke ja desinfitseerige:
Võite kasutada keedupotti või keevat sterilisaatorit. Pärast vee keetmist keetke seda 5–15 minutit. Veele võib lisada ka 2% karboolhapet ja keeta 5 minutit. Lisage 0,02% formaldehüüdi ja keetke seda 80 °C juures 60 minutit, et saavutada steriliseerimise eesmärk. Siiski on võimalik saavutada keev steriliseerimine. Tugevdajate kasutamisel tuleb tähelepanu pöörata esemete söövitavusele.
4. Steriliseerimine:
Pärast steriliseerimist on esemed juba tavatingimustes steriilsed. Neid tuleks sterilisaatorist väljavõtmisel hoolikalt üle vaadata ja asetada, et vältida uuesti saastumist;
(1) Võtke esemed välja ja kontrollige kohe pakendi terviklikkust. Kahjustuse või tampoon eemaldamise korral ei saa seda kasutada steriilsete esemetena;
(2) Väljavõetud esemeid ei saa kasutada steriilsete esemetena, kui nende pakend on ilmselgelt vees läbi imbunud;
(3) Kultuurikeskkonda või reaktiive tuleks kontrollida, et näha, kas need vastavad pärast steriliseerimist värvile või olekule. Need, mis nõuetele ei vasta, tuleks ära visata;
(4) Avatud-sulgede konteinerite puhul tuleb ekraaniaugud nende väljavõtmisel sulgeda;
(5) Kui eemaldatud esemed kukuvad maapinnale, on valesti paigutatud ebapuhtasse kohta või on veega määrdunud, loetakse need saastunuks ja neid ei saa kasutada steriilsete esemetena;
(6) Väljavõetud kvalifitseeritud steriliseeritud esemeid tuleks hoida laoruumis või tolmukindlas kapis ning nende segamine steriliseerimata esemetega on rangelt keelatud;
(7) Kõik kvalifitseeritud esemed peaksid olema märgistatud steriliseerimiskuupäeva ja aegumiskuupäevaga;
(8) Pärast iga steriliseerimise partii lõppu registreerige steriliseeritud toodete nimi, kogus, temperatuur, aeg ja operaator.
Nõuded toksiliste ja bakteriaalsete jäätmete töötlemisele
Mikrobioloogilistes katsetes kasutatud katseseadmeid ja kultuure ei tohi ilma desinfitseerimiseta laborist välja viia.
1. Kultiveeritud saastunud materjalid ja jäätmed tuleb asetada tihedatesse konteineritesse või traatkorvidesse ja hoida tsentraalselt selleks ettenähtud kohtades, kuni need on ühtlaselt autoklaavitud.
2. Mikroorganismidega saastunud kultuure tuleb autoklaavida 121°C juures 30 minutit.
3. Pärast kasutamist tuleb saastunud kõrred asetada 5% kreoolseebi lahusesse või karboolhappe lahusesse, leotada vähemalt 24 tundi (desinfitseerimisvedelik ei tohi olla leotuskõrgusest madalam) ja seejärel steriliseerida kõrgsurvega 121°C juures 30 minutit.
4. Värvimis- ja loputusvedeliku võib üldjuhul loputada otse kanalisatsiooni. Virulentsete bakterite loputusvedelik tuleb enne kanalisatsiooni valamist keeduklaasis loputada ja kõrge rõhuga steriliseerida. Värvitud objektiklaasid pannakse 5% kresoolseebi lahusesse. Pärast 24-tunnist vees leotamist keetke ja peske. Aglutinatsiooni testimiseks kasutatavad alusklaasid või nõud tuleb autoklaavida ja seejärel pesta.
5. Pärast kultuuri purustamist piserdage ja leotage saastunud osi kohe 5% kresoolseebilahuse või karboolhappe lahusega, leotage pool tundi ja seejärel pühkige puhtaks.
Saastunud tööriided või vägivaldseteks katseteks kantud tööriided, mütsid, maskid jms tuleb enne pesemist asetada spetsiaalsetesse desinfitseerimiskottidesse ja steriliseerida kõrgsurvega.
Keskmised ettevalmistusnõuded
Kultuurisöötme valmistamise kvaliteet mõjutab otseselt mikroorganismide kasvu, kuna erinevatel mikroorganismidel on erinevad toitumisvajadused ja erinevad kultiveerimise eesmärgid. Erinevate söötmete ettevalmistamise nõuded on järgmised:
1. Kaaluge koostisained keskmise valemi järgi ja seejärel lahustage need destilleeritud vees. Kasutatud reaktiivide ja ravimite kvaliteeti tuleb enne kasutamist kontrollida.
2. pH mõõtmine ja reguleerimine: pH mõõtmine tuleks läbi viia, kui sööde on jahutatud toatemperatuurini, kuna kuumades või külmades tingimustes on pH teatud erinevus. Kui mõõtmine on lõppenud, lisage leelist või hapet vastavalt arvutatud kogusele ja segage hästi. Tuleks uuesti testida. Kultuurisöötme pH väärtus peab olema täpne, vastasel juhul mõjutab see mikroorganismide kasvu või tulemuste jälgimist. Siiski tuleb märkida, et kõrgsurve steriliseerimine võib mõjutada mõne söötme pH langust või tõusu, mistõttu ei ole soovitatav steriliseerida liiga kõrgel rõhul või liiga palju kordi, et vältida söötme kvaliteedi mõjutamist. Näitajad, naatriumdeoksükolaat, agar jne on üldiselt Lisage see pärast pH reguleerimist.
3. Kultuurikeskkond peab olema selge, et hõlbustada bakterite kasvu jälgimist. Pärast söötme kuumutamist ja keetmist võib selle setete eemaldamiseks filtreerida absorbeeriva puuvilla või flanelliga. Vajadusel saab munavalgega selgeks teha. Kasutatavad agariribad tuleb eelnevalt pesta ja kuivatada. Enne kasutamist vältige agari lisandite tõttu läbipaistvuse mõjutamist.
4. Kultuurisöötme hoidmiseks ei tohi kasutada rauda, vaske ega muid anumaid. Parem on kasutada puhtaid neutraalseid kõvast klaasist anumaid.
5. Kultuurisöötme steriliseerimine ei pea mitte ainult saavutama täieliku steriliseerimise eesmärki, vaid pöörama tähelepanu ka sellele, et kuumutamise tõttu ei väheneks selle toiteväärtus. Üldiselt piisab 121°C 15 minutist. Kõrget kuumust talumatuid aineid, nagu suhkrud ja seerum, želatiin jne sisaldavad söötmed tuleb steriliseerida madalal temperatuuril või vahelduva meetodiga. Mõned reaktiivid, mida ei saa kuumutada, nagu kaaliumtelluriit, munakollane, TTC, antibiootikumid jne, tuleks pärast aluselise agari autoklaavimist jahutada temperatuurini umbes 50 °C ja seejärel lisada;
6. Pärast iga söötmepartii valmistamist tuleb läbi viia steriilne kasvutest ja testitud tüvede kasvutest. Kui tegemist on biokeemilise söötmega, kasutage inokuleerimiseks ja kultiveerimiseks standardseid bakteritüvesid ning jälgige biokeemilise reaktsiooni tulemusi. See peaks näitama normaalset reaktsiooni. Kultuurikeskkonda ei tohi liiga kaua säilitada. Vajadusel võib seda säilitada 4°C külmkapis.
7. Praegu on palju erinevaid kuivsöötmeid. Iga partii peab kasvutesti või biokeemilise reaktsiooni jälgimiseks kasutama standardseid tüvesid. Erinevaid söötmeid võib kasutada alles pärast seda, kui vastavate tüvede kasvutest on hea. Kasutada võib äsja ostetud või kuivanud, mis on kaua seisnud. Söötme valmistamisel tuleks mõõta ka söötme pH-d ning järgida annust ja meetodit vastavalt toote juhistele.
8. Igas ettevalmistatud söötmepartiis kasutatud keemilised reaktiivid, steriliseerimistingimused, tüve kasvutesti tulemused ja tootmispersonal tuleks järelepärimiseks registreerida.
Proovide kogumise ja töötlemise nõuded
1. Kogutud kontrolliproovid peavad olema representatiivsed. Proovide võtmisel tuleks põhjalikult uurida toidupartii toorainet, töötlemist, transporti, ladustamisviise ja -tingimusi, ümbritseva keskkonna tervislikku seisundit jne, et kontrollida saasteallikate olemasolu.
2. Sõltuvalt toidu liigist ja kogusest tuleks proovide võtmise kogus ja meetod läbi viia standardsete kontrollimeetodite nõuete kohaselt.
3. Pöörake proovide võtmisel tähelepanu aseptilisele toimimisele ja anum tuleb steriliseerida, et vältida mikroobset saastumist keskkonnas. Anumat ei tohi steriliseerida kreosaalseebi lahusega, steriliseerida kloormetioniini, alkoholi ja muude desinfektsioonivahenditega ning see ei tohi sisaldada selliseid desinfektsioonivahendeid ega antibiootikume. Et vältida proovis olevate mikroorganismide tapmist, tuleb enne kasutamist steriliseerida ka kasutatavad käärid, noad ja lusikad.
4. Proovid tuleb kohe pärast kogumist saata kontrolliruumi kontrollimiseks. Kontrolliprotsess ei kesta üldjuhul üle 3 tunni. Kui vahemaa on pikk, saab seda säilitada keskkonnas 1–5 ℃. Kui seda on vaja külmutada, tuleb seda hoida külmutatud olekus. Esitage kontrollimiseks.
5. Pärast proovi vastuvõtmist registreerib ülevaatusruum selle (proovi nimi, kontrollimise ühik, kogus, kuupäev, number jne) ja jälgib proovi välimust. Kui leitakse mõni järgmistest tingimustest, võidakse ülevaatusest keelduda:
(1) Spetsiaalse kõrgsurve, keetmise või muul viisil steriliseeritud proovid kaotavad oma tähtsuse algse toidu esindamisel;
(2) Toidupudelid ja kotid on avatud, küpsetatud liha ja sellest valmistatud tooted, keedetud linnuliha ja muud toidud on purunenud ja mittetäielikud, st toidu esialgne kuju on kadunud (v.a toidumürgituse proovid);
(3) Proovivõtu kogus on ebapiisav;
Kontrollimiseks esitatud, nõuetele vastavate proovide puhul peaks ülevaatusruum pärast nende kättesaamist viivitamatult läbi viima kontrolli. Kui tingimused ei ole täidetud, tuleb neid hoida 4°C külmikus, õigel ajal tingimuste loomiseks ette valmistada ja seejärel läbi viia kontroll.
6. Proovide kontrollimisel viige läbi asjakohane töötlemine vastavalt nende erinevatele omadustele.
(1) Vedelate proovide inokuleerimisel tuleb need põhjalikult segada ja nakatada vastavalt kogusele.
(2) Tahkete proovide puhul lõigake steriliseeritud noaga välja 25 g erinevaid osi, asetage need 225 ml steriliseeritud soolalahusesse või muusse lahusesse, purustage ja segage homogenisaatoriga ning nakatage vastavalt kogusele.
(3) Toidupudelid ja kotid tuleks avada steriliseerimise teel ning ülaltoodud meetodid tuleks enne nakatamist valida vastavalt omadustele.
Näidiskontrolli, registreerimise ja aruandluse nõuded
1. Pärast proovi kättesaamist teostab kontrolliruum esmalt välimuse kontrolli ja viivitamatult kontrolli vastavalt riiklikele standardsetele kontrollimeetoditele. Kontrollimise ajal tuleb aseptilisi toiminguid teha hoolikalt, vastutustundlikult ja rangelt vältidamikroobse testi tulemussaastumine keskkonnas.
2. Proovikontrolli käigus kasutatud meetodid, ilmnenud nähtused ja tulemused jms tuleb analüüsi ja tulemuste üle otsustamise aluseks võtta kirjalikes testiprotokollides. Kirjed peavad olema üksikasjalikud, selged, autentsed, objektiivsed ning neid ei tohi muuta ega võltsitud.
)
)
