Резюме вимог до мікробіологічних досліджень
2024-01-24 15:14:33
Вимоги та кроки длямікробіологічне дослідженнятакі:
Вимоги до асептичної роботи:
1. Ви повинні носити робочий одяг і робочу шапку під час інокуляції бактерій.
2. Під час посіву проб харчових продуктів необхідно одягати спеціальний робочий одяг, шапочки та тапочки, які поміщають у буферну камеру стерильної кімнати та використовують після УФ-дезінфекції перед роботою.
3. Під час інокуляції зразків харчових продуктів вимийте руки з милом перед входом у стерильну кімнату, а потім витріть руки ватною кулькою, розчиненою 75% спиртом.
4. Соломини, плоскі чашки та живильні середовища, які використовуються для посіву, повинні бути простерилізовані та простерилізовані. Невикористані контейнери не повинні залишатися невикористаними після відкриття упаковки. Металевий посуд перед використанням слід автоклавувати або тричі обпалити 95% спиртом.
5. Виймаючи соломинку з упаковки, кінчик соломинки не повинен торкатися відкритих частин. При використанні соломинки для інокуляції пробірки або планшета кінчик соломинки не повинен торкатися краю пробірки або планшета.
6. Інокуляцію зразків і перенесення бактерій необхідно проводити перед спиртовою лампою. Під час інокуляції бактерій або зразків соломинку необхідно стерилізувати полум’ям після того, як її витягли з упаковки та відкрили пробку пробірки.
7. Перед інокуляцією бактерій усі металеві дроти інокуляційної петлі та голки слід обпалити полум’ям, а при необхідності спалити з’єднання між петлею, голкою та стрижнем. Інокуляційну петлю для посіву бактерій туберкульозу та вірулентних бактерій необхідно проварити в киплячій воді протягом 5 хвилин, а потім спалити на вогні.
8. Відсмоктуючи бактеріальну рідину або зразки соломинкою, використовуйте відповідний гумовий наконечник, щоб відсмоктувати їх, а не смоктайте прямо ротом.
Вимоги до використання стерильного приміщення:
1. Вікна, що виходять назовні стерильної кімнати, мають бути склопакетами та заклеєними. Їх не варто відкривати за бажанням. Повинна бути буферна кімната і розсувні двері, що відповідають розмірам стерильної кімнати. Також має бути невелике віконце 0,5~0,7 м2. При підготовці до проходження предметів після входу в стерильну кімнату.
2. Стерильну кімнату слід утримувати в чистоті. Після роботи її необхідно продезінфікувати 2—3 % розчином крезолового мила, робочу поверхню протерти, не зберігати предмети, не пов’язані з дослідом.
3. Двері стерильної кімнати до і після використання необхідно щільно зачинити, увімкнути ультрафіолетову лампу. Якщо для дезінфекції використовується кімнатна підвісна ультрафіолетова лампа, потрібна ультрафіолетова лампа потужністю 30 Вт. Відстань 1,0 м, час опромінення не менше 30 хвилин. Використовуючи ультрафіолетові лампи, слід звернути увагу на те, щоб працювати безпосередньо під ультрафіолетовим світлом, щоб уникнути пошкодження. Лампу потрібно обережно протирати спиртовою ваткою кожні два тижні, щоб видалити пил і жир, щоб зменшити вплив ультрафіолету.
4. Під час обробки та інокуляції зразків харчових продуктів увійдіть у стерильну кімнату для операції та не дозволяйте входити чи виходити за бажанням. Якщо предмети потрібно передати, їх можна передати через маленьке віконце.
5. Якщо в стерильному приміщенні необхідно встановити кондиціонер, там повинен бути фільтруючий пристрій.
Вимоги до дезінфекції та стерилізації
Скляний посуд, металевий посуд і культуральні середовища, що використовуються длямікробіологічне дослідження, заражені та інокульовані культури тощо необхідно стерилізувати перед використанням. Методи стерилізації парою під тиском сухим жаром і вологим жаром.
1. Підготовка перед стерилізацією
(1) Усі речі, які потрібно стерилізувати, слід спочатку вимити та висушити. Скляний посуд, такий як соломинки та плоскі блюда, слід щільно запакувати папером. Якщо використовуються металеві труби, вентиляційні отвори на них повинні бути відкриті.
(2) Загорніть пробку трикутної колби з живильним середовищем у папір, накрийте пробірку, витягніть серцевину шприца й оберніть її марлею.
2. встановити
(1) Сухий тепловий стерилізатор: предмети не повинні бути переповнені та не торкатися чотирьох стінок коробки.
(2) Велика пароварка високого тиску: покладіть стерилізовані предмети, загорніть їх окремо та помістіть безпосередньо в стерилізаційний циліндр. Не переповнюйте предмети.
3. Перевірка обладнання
(1) Перевірте, чи дверний вимикач гнучкий, чи не пошкоджено гумове кільце та чи воно пласке.
(2) Перевірте, чи залишається манометр у нульовому положенні, коли пара вичерпана, закрийте дверцята та кришку, виведіть пару або тепло та спостерігайте, чи немає витоку повітря, чи збігаються умови, позначені манометром і термометром, і чи не заблоковано трубопровід.
(3) Для стерилізаторів з автоматичними електронними пристроями керування програмою зазначену програму слід перевірити перед використанням, щоб переконатися, що вона відповідає вимогам до стерилізації.
4. Стерилізаційна обробка
(1) Метод стерилізації сухим жаром:
Цей метод підходить для речей, які не пошкоджуються, не псуються та не випаровуються в умовах сухого тепла. Його частіше використовують для стерилізації скляного посуду, металевих виробів, керамічних виробів тощо.
①Інструменти та посуд слід вимити перед висушуванням, щоб запобігти карбонізації бруду, прикріпленого до поверхні.
② Під час стерилізації предмети не повинні бути переповненими, не торкатися безпосередньо дна та стінок коробки та залишати проміжки між предметами.
③ Під час стерилізації щільно закрийте дверцята, підключіть джерело живлення, відкрийте випускний отвір приблизно на 30 хвилин, щоб видалити холодне повітря в стерилізаторі, відрегулюйте світловий індикатор, коли температура підвищиться до 160°C, і підтримуйте її протягом 1,5-2 годин.
④Після завершення стерилізації або під час процесу підвищення температури дверцята необхідно відкрити при температурі нижче 60°C.
(2) Під час використання портативної скороварки або вертикального парового стерилізатора під тиском необхідно виконати такі дії:
① Додайте 3 л води в основний корпус портативної скороварки та 16 л води у вертикальну скороварку (кількість води слід поповнити при повторному використанні, і воду потрібно замінити, якщо вона стане каламутною);
② Для портативної скороварки вставте випускну трубу на верхній кришці в квадратну трубку на внутрішній стінці стерилізаційного барабана (не можна використовувати стерилізатори без шлангів або з корозійними та тріснутими шлангами);
③ Накрийте верхню кришку та щільно затягніть її, щоб запобігти витоку повітря; поставте стерилізатор на джерело вогню для нагрівання, увімкніть живлення вертикальної скороварки та відкрийте випускний клапан на верхній кришці, щоб випустити повітря (видихайте повітря протягом 10-15 хвилин після закипання води));
④Закрийте випускний клапан, щоб підвищити тиск пари до вказаних вимог і підтримувати його протягом зазначеного часу (залежно від характеру стерилізованих предметів і відповідних обставин);
⑤ Після досягнення зазначеного часу для речей, які потрібно висушити, негайно відкрийте випускний клапан, щоб випустити пару. Коли тиск повернеться до нуля, охолодіть його природним шляхом до 60°C, а потім відкрийте кришку, щоб дістати предмети. Якщо це рідина, не відкривайте випускний клапан. Каструлю слід негайно від’єднати від джерела тепла та дати охолонути природним шляхом, доки тиск не повернеться до нуля, а температура не впаде нижче 60°C, перш ніж відкривати кришку, щоб вийняти вміст, щоб запобігти раптовому зниженню тиску рідини внаслідок бурхливого кипіння або вибуху контейнера.
(3) Для використання парового стерилізатора горизонтальної скороварки виконайте наступні кроки:
①Щільно закрийте дверцята каструлі, відкрийте впускний клапан повітря, подайте пару в мезонін для попереднього нагріву, і холодне повітря в мезоніні буде автоматично виведено через повітряний бар’єр;
②Після того, як проміжний шар досягне заданої температури, відкрийте впускний клапан камери горщика, подайте пару в камеру горщика, і холодне повітря в камері горщика буде автоматично виведено через повітровідвідник камери горщика;
③Коли тиск і температура в камері горщика досягнуть заданого тиску, відрегулюйте впускний клапан повітря, щоб підтримувати його постійним;
④ Охолодіть температуру природним або штучним шляхом до 60 ℃, перш ніж відкривати дверцята, щоб вийняти речі. Не використовуйте метод швидкого випуску пари, щоб запобігти раптовому падінню тиску, бурхливому кипінню рідини або вибуху контейнера;
⑤ Під час використання автоматичної програми-парового стерилізатора з контрольованим тиском після розміщення предметів і щільного закриття дверцят слід натиснути відповідний перемикач відповідно до категорії предметів, щоб стерилізація могла бути автоматично виконана відповідно до необхідних процедур. Під час стерилізації необхідно використовувати доданий інструмент для реєстрації температури та часу. Для подальших довідок вимоги до експлуатації мають суворо відповідати інструкціям виробника;
5. Температура і час стерилізації
(1) Температура стерилізації сухожарового стерилізатора становить 160 ℃, 1,5~2 години.
(2) Температура стерилізації та час парового стерилізатора під тиском
Переривчастий метод стерилізації
1. Метод стерилізації:
Використовуйте стерилізацію парою без тиску. Деякі речовини легко руйнуються при стерилізації парою під високим тиском, тому цей метод можна використовувати для стерилізації.
(1) Помістіть предмети, які потрібно стерилізувати, у каструлю, накрийте верхню кришку, відкрийте зливний отвір і злийте воду, що залишилася в каструлі.
(2) Закрийте дренажний отвір, відкрийте дверцята входу повітря та за потреби продезінфікуйте протягом 10–20 хвилин.
(3) Після завершення стерилізації закрийте дверцята входу повітря, вийміть предмети та зачекайте, щоб вони охолонули до кімнатної температури, помістіть їх в інкубатор при 37°C на ніч і продовжуйте стерилізацію відповідно до вищезазначеного методу наступного дня. Зробіть це тричі, щоб досягти мети стерилізації.
2. Як користуватися сироватковим коагулятором:
Якщо культуральне середовище містить спеціальні інгредієнти, такі як сироватка або яйця, висока температура знищує її поживні речовини. Таким чином, низька температура може бути використана для коагуляції сироватки та досягнення цілей стерилізації:
(1) При використанні сироватки, стерилізованої цим методом для аліквоти, необхідно суворо дотримуватися асептичних операцій, а пробірки та чашки також необхідно стерилізувати перед використанням;
(2) Розмістіть культуральне середовище у нахиленому або високому шарі, якщо потрібно. Додавши достатньо води, підключіть джерело живлення, підвищте температуру до 75~90°C протягом однієї години, а потім стерилізуйте. Помістіть його в інкубатор при 37°C на ніч, а потім тричі стерилізуйте.
3. Прокип'ятіть і продезінфікуйте:
Ви можете використовувати каструлю з кип’ятінням або стерилізатор з кип’ятінням. Після того, як вода закипить, кип’ятіть її 5-15 хвилин. Можна також додати у воду 2% карболової кислоти і кип'ятити 5 хвилин. Додайте 0,02% формальдегіду та кип’ятіть при 80°C протягом 60 хвилин для досягнення мети стерилізації. Однак можна досягти стерилізації кип'ятінням. При використанні підсилювачів слід звертати увагу на корозійну активність предметів.
4. Стерилізаційна обробка:
Після стерилізації вироби вже є стерильними за звичайних умов. Їх слід уважно оглянути та розмістити після виймання зі стерилізатора, щоб уникнути повторного зараження;
(1) Негайно вийміть речі та перевірте цілісність упаковки. Якщо є пошкодження або тампон видалений, його не можна використовувати як стерильний предмет;
(2) Витягнуті предмети не можна використовувати як стерильні, якщо їхня упаковка явно змочена водою;
(3) Культуральне середовище або реагенти слід перевірити, щоб побачити, чи відповідають вони кольору або стану після стерилізації. Ті, що не відповідають вимогам, слід викинути;
(4) Для відкритих/закритих контейнерів отвори сітки повинні бути закриті під час їх виймання;
(5) Якщо вилучені предмети падають на землю, лежать у нечистому місці або забруднені водою, вони вважаються зараженими та не можуть використовуватися як стерильні;
(6) Витягнуті кваліфіковані стерилізовані предмети слід зберігати в камері зберігання або пилозахищеній шафі, і суворо заборонено змішувати їх із нестерилізованими предметами;
(7) Усі кваліфіковані предмети мають бути позначені датою стерилізації та терміном придатності;
(8) Після завершення кожної партії обробки стерилізації запишіть назву, кількість, температуру, час і оператора стерилізованих продуктів.
Вимоги до поводження з токсичними та бактеріальними відходами
Забороняється виносити з лабораторії без дезінфекції експериментальне обладнання та культури, які використовувалися в мікробіологічних дослідах.
1. Забруднені культивуванням матеріали та відходи слід поміщати в щільні контейнери або дротяні кошики та зберігати в централізованих місцях, поки вони не будуть рівномірно оброблені в автоклаві.
2. Культури, заражені мікроорганізмами, необхідно автоклавувати при 121°C протягом 30 хвилин.
3. Після використання забруднені соломинки слід помістити в 5% розчин мильного креолу або розчин карболової кислоти, замочити щонайменше на 24 години (дезінфікуюча рідина не повинна бути нижче висоти замочування), а потім стерилізувати під високим тиском при 121°C протягом 30 хвилин.
4. Рідину для фарбування та промивання мазків зазвичай можна змивати безпосередньо в каналізацію. Рідину для промивання вірулентних бактерій необхідно змити в стакан і стерилізувати під високим тиском перед тим, як вилити в каналізацію. Пофарбовані предметні скла поміщають у 5% розчин крезолового мила. Після замочування у воді протягом 24 годин, прокип'ятити і випрати. Предметні скла або чашки, які використовуються для тесту на аглютинацію, повинні бути автоклавовані, а потім промиті.
5. Після розбиття культури негайно обприскати та просочити забруднені частини 5% розчином крезолового мила або розчином карболової кислоти, замочити на півгодини, а потім витерти.
Забруднений робочий одяг або робочий одяг, шапки, маски тощо, які використовуються для насильницьких тестів, слід помістити в спеціальні пакети для дезінфекції та стерилізувати під високим тиском перед пранням.
Середні вимоги до підготовки
Якість приготування культурального середовища безпосередньо впливатиме на ріст мікроорганізмів, оскільки різні мікроорганізми мають різні потреби в харчуванні та різні цілі культури. Вимоги до підготовки різних живильних середовищ такі:
1. Зважте інгредієнти відповідно до формули середовища, а потім розчиніть їх у дистильованій воді. Якість застосованих реагентів і препаратів необхідно перевірити перед використанням.
2. Вимірювання та регулювання рН: вимірювання рН слід проводити, коли культуральне середовище охолоджене до кімнатної температури, оскільки існує певна різниця в рН у гарячих і холодних умовах. Після завершення вимірювання додайте луг або кислоту відповідно до розрахованої кількості та добре перемішайте. Потрібно перевірити ще раз. Значення pH культурального середовища має бути точним, інакше це вплине на ріст мікроорганізмів або вплине на спостереження за результатами. Однак слід зазначити, що стерилізація під високим тиском може вплинути на зниження або підвищення рН деяких культуральних середовищ, тому не рекомендується стерилізувати під занадто високим тиском або занадто багато разів, щоб уникнути впливу на якість культурального середовища. Індикатори, дезоксихолат натрію, агар тощо зазвичай додають після регулювання pH.
3. Поживне середовище має бути чистим, щоб полегшити спостереження за ростом бактерій. Після нагрівання та кип’ятіння культурального середовища її можна відфільтрувати ватою або фланеллю для видалення осаду. При необхідності можна освітлити яєчним білком. Використовувані смужки агару необхідно заздалегідь промити і висушити. Перед використанням уникайте впливу на прозорість через домішки в агарі.
4. Залізні, мідні та інші контейнери не можна використовувати для зберігання культурального середовища. Краще використовувати чисту нейтральну тару з твердого скла.
5. Стерилізація живильного середовища повинна не тільки досягати мети повної стерилізації, але також звертати увагу на те, щоб не знизити його харчову цінність через нагрівання. Як правило, достатньо 121°C протягом 15 хвилин. Для культуральних середовищ, що містять речовини, які не переносять високу температуру, такі як цукор і сироватка, желатин тощо, слід стерилізувати методом низької температури або періодичним методом. Деякі реагенти, які не можна нагрівати, такі як телурит калію, яєчний жовток, ТТС, антибіотики тощо, слід охолодити приблизно до 50°C після автоклавування основного агару, а потім додати;
6. Після приготування кожної партії культуральних середовищ необхідно провести тест на стерильний ріст і тест на ріст досліджуваних штамів. Якщо це біохімічне культуральне середовище, використовуйте стандартні штами бактерій для посіву та культивування та спостерігайте за результатами біохімічної реакції. Він повинен показати нормальну реакцію. Поживне середовище не можна зберігати занадто довго. При необхідності можна зберігати в холодильнику при температурі 4°C.
7. В даний час існує багато видів сухих культуральних середовищ. Кожна партія повинна використовувати стандартні штами для тесту на зростання або спостереження за біохімічними реакціями. Різні культуральні середовища можна використовувати тільки після того, як тест на ріст відповідних штамів буде добрим. Можна використовувати щойно придбані або висушені, які довго зберігалися. Під час приготування слід також виміряти рН культурального середовища, а також дотримуватися дозування та методу відповідно до інструкцій до продукту.
8. Хімічні реагенти, умови стерилізації, результати тестування росту штаму та виробничий персонал, використаний для кожної партії підготовлених культуральних середовищ, повинні бути записані для запиту.
Вимоги до збору та обробки проб
1. Зібрані контрольні зразки мають бути репрезентативними. Під час відбору зразків слід детально дослідити сировину, методи обробки, транспортування, зберігання та умови партії харчових продуктів, навколишнє гігієнічне середовище тощо, щоб перевірити наявність джерел забруднення.
2. Відповідно до типу та кількості харчових продуктів, кількість і метод відбору зразків повинні проводитися відповідно до вимог стандартних методів перевірки.
3. Звертайте увагу на асептику під час відбору проб, а контейнер необхідно стерилізувати, щоб уникнути мікробного забруднення навколишнього середовища. Ємність не підлягає стерилізації креозальним мильним розчином, стерилізації хлорметіоніном, спиртом та іншими дезінфікуючими засобами, в ній не повинні бути такі дезінфікуючі засоби та антибіотики. Щоб уникнути знищення мікроорганізмів у зразку, використовувані ножиці, ножі та ложки також повинні бути стерилізовані перед використанням.
4. Зразки слід відправляти в кімнату для перевірки відразу після збору. Процес перевірки зазвичай не перевищує 3 годин. Якщо відстань велика, його можна зберігати при температурі 1~5 ℃. Якщо його необхідно заморозити, то його слід зберігати в замороженому стані. Здати на перевірку.
5. Отримавши зразок, оглядова кімната реєструє його (назва зразка, одиниця для перевірки, кількість, дата, номер тощо) та спостерігає за зовнішнім виглядом зразка. У разі виявлення будь-якої з наступних умов перевірка може бути відмовлена:
(1) Samples that have been sterilized by special high pressure, boiling or other methods will lose their significance in representing the original food;
(2) Пляшки та пакети з харчовими продуктами були відкриті, варене м’ясо та продукти з нього, варена птиця та інші харчові продукти були розбиті та неповні, тобто харчові продукти втратили первинну форму (за винятком зразків харчового отруєння);
(3) Кількість зразків є недостатньою відповідно до вимог;
Для поданих на перевірку зразків, які відповідають вимогам, оглядова кімната повинна негайно провести перевірку після їх отримання. Якщо умови не виконуються, їх слід зберігати в холодильнику при температурі 4°C, вчасно підготувати умови, а потім провести огляд.
6. When inspecting samples, perform appropriate processing according to their different properties.
(1) Під час інокуляції рідких зразків їх слід ретельно перемішати та інокулювати відповідно до кількості.
(2) Для твердих зразків використовуйте стерилізований ніж, щоб вирізати 25 г різних частин, помістити їх у 225 мл стерилізованого фізіологічного розчину або інших розчинів, подрібнити та змішати за допомогою гомогенізатора та засіяти відповідно до кількості.
(3) Пляшки та пакети з харчовими продуктами слід відкривати шляхом стерилізації, а вищезазначені методи слід вибирати відповідно до характеристик перед щепленням.
Вимоги до перевірки зразків, реєстрації та звітності
1. Після отримання зразка інспекційна кімната спочатку проведе перевірку зовнішнього вигляду та негайно проведе перевірку відповідно до національних стандартних методів перевірки. Під час процесу перевірки асептичні операції необхідно виконувати обережно, відповідально та строго уникатирезультат мікробного дослідженнязабруднення навколишнього середовища.
2. Методи, які використовуються під час перевірки зразків, явища та результати, що відбулися, тощо повинні бути записані в письмових протоколах випробувань як основа для аналізу та оцінки результатів. Записи мають бути детальними, чіткими, автентичними, об’єктивними та не повинні бути зміненими чи підробленими.
Вимоги до асептичної роботи:
1. Ви повинні носити робочий одяг і робочу шапку під час інокуляції бактерій.
2. Під час посіву проб харчових продуктів необхідно одягати спеціальний робочий одяг, шапочки та тапочки, які поміщають у буферну камеру стерильної кімнати та використовують після УФ-дезінфекції перед роботою.
3. Під час інокуляції зразків харчових продуктів вимийте руки з милом перед входом у стерильну кімнату, а потім витріть руки ватною кулькою, розчиненою 75% спиртом.
4. Соломини, плоскі чашки та живильні середовища, які використовуються для посіву, повинні бути простерилізовані та простерилізовані. Невикористані контейнери не повинні залишатися невикористаними після відкриття упаковки. Металевий посуд перед використанням слід автоклавувати або тричі обпалити 95% спиртом.
5. Виймаючи соломинку з упаковки, кінчик соломинки не повинен торкатися відкритих частин. При використанні соломинки для інокуляції пробірки або планшета кінчик соломинки не повинен торкатися краю пробірки або планшета.
6. Інокуляцію зразків і перенесення бактерій необхідно проводити перед спиртовою лампою. Під час інокуляції бактерій або зразків соломинку необхідно стерилізувати полум’ям після того, як її витягли з упаковки та відкрили пробку пробірки.
7. Перед інокуляцією бактерій усі металеві дроти інокуляційної петлі та голки слід обпалити полум’ям, а при необхідності спалити з’єднання між петлею, голкою та стрижнем. Інокуляційну петлю для посіву бактерій туберкульозу та вірулентних бактерій необхідно проварити в киплячій воді протягом 5 хвилин, а потім спалити на вогні.
8. Відсмоктуючи бактеріальну рідину або зразки соломинкою, використовуйте відповідний гумовий наконечник, щоб відсмоктувати їх, а не смоктайте прямо ротом.
Вимоги до використання стерильного приміщення:
1. Вікна, що виходять назовні стерильної кімнати, мають бути склопакетами та заклеєними. Їх не варто відкривати за бажанням. Повинна бути буферна кімната і розсувні двері, що відповідають розмірам стерильної кімнати. Також має бути невелике віконце 0,5~0,7 м2. При підготовці до проходження предметів після входу в стерильну кімнату.
2. Стерильну кімнату слід утримувати в чистоті. Після роботи її необхідно продезінфікувати 2—3 % розчином крезолового мила, робочу поверхню протерти, не зберігати предмети, не пов’язані з дослідом.
3. Двері стерильної кімнати до і після використання необхідно щільно зачинити, увімкнути ультрафіолетову лампу. Якщо для дезінфекції використовується кімнатна підвісна ультрафіолетова лампа, потрібна ультрафіолетова лампа потужністю 30 Вт. Відстань 1,0 м, час опромінення не менше 30 хвилин. Використовуючи ультрафіолетові лампи, слід звернути увагу на те, щоб працювати безпосередньо під ультрафіолетовим світлом, щоб уникнути пошкодження. Лампу потрібно обережно протирати спиртовою ваткою кожні два тижні, щоб видалити пил і жир, щоб зменшити вплив ультрафіолету.
4. Під час обробки та інокуляції зразків харчових продуктів увійдіть у стерильну кімнату для операції та не дозволяйте входити чи виходити за бажанням. Якщо предмети потрібно передати, їх можна передати через маленьке віконце.
5. Якщо в стерильному приміщенні необхідно встановити кондиціонер, там повинен бути фільтруючий пристрій.
Вимоги до дезінфекції та стерилізації
Скляний посуд, металевий посуд і культуральні середовища, що використовуються длямікробіологічне дослідження, заражені та інокульовані культури тощо необхідно стерилізувати перед використанням. Методи стерилізації парою під тиском сухим жаром і вологим жаром.
1. Підготовка перед стерилізацією
(1) Усі речі, які потрібно стерилізувати, слід спочатку вимити та висушити. Скляний посуд, такий як соломинки та плоскі блюда, слід щільно запакувати папером. Якщо використовуються металеві труби, вентиляційні отвори на них повинні бути відкриті.
(2) Загорніть пробку трикутної колби з живильним середовищем у папір, накрийте пробірку, витягніть серцевину шприца й оберніть її марлею.
2. встановити
(1) Сухий тепловий стерилізатор: предмети не повинні бути переповнені та не торкатися чотирьох стінок коробки.
(2) Велика пароварка високого тиску: покладіть стерилізовані предмети, загорніть їх окремо та помістіть безпосередньо в стерилізаційний циліндр. Не переповнюйте предмети.
3. Перевірка обладнання
(1) Перевірте, чи дверний вимикач гнучкий, чи не пошкоджено гумове кільце та чи воно пласке.
(2) Перевірте, чи залишається манометр у нульовому положенні, коли пара вичерпана, закрийте дверцята та кришку, виведіть пару або тепло та спостерігайте, чи немає витоку повітря, чи збігаються умови, позначені манометром і термометром, і чи не заблоковано трубопровід.
(3) Для стерилізаторів з автоматичними електронними пристроями керування програмою зазначену програму слід перевірити перед використанням, щоб переконатися, що вона відповідає вимогам до стерилізації.
4. Стерилізаційна обробка
(1) Метод стерилізації сухим жаром:
Цей метод підходить для речей, які не пошкоджуються, не псуються та не випаровуються в умовах сухого тепла. Його частіше використовують для стерилізації скляного посуду, металевих виробів, керамічних виробів тощо.
①Інструменти та посуд слід вимити перед висушуванням, щоб запобігти карбонізації бруду, прикріпленого до поверхні.
② Під час стерилізації предмети не повинні бути переповненими, не торкатися безпосередньо дна та стінок коробки та залишати проміжки між предметами.
③ Під час стерилізації щільно закрийте дверцята, підключіть джерело живлення, відкрийте випускний отвір приблизно на 30 хвилин, щоб видалити холодне повітря в стерилізаторі, відрегулюйте світловий індикатор, коли температура підвищиться до 160°C, і підтримуйте її протягом 1,5-2 годин.
④Після завершення стерилізації або під час процесу підвищення температури дверцята необхідно відкрити при температурі нижче 60°C.
(2) Під час використання портативної скороварки або вертикального парового стерилізатора під тиском необхідно виконати такі дії:
① Додайте 3 л води в основний корпус портативної скороварки та 16 л води у вертикальну скороварку (кількість води слід поповнити при повторному використанні, і воду потрібно замінити, якщо вона стане каламутною);
② Для портативної скороварки вставте випускну трубу на верхній кришці в квадратну трубку на внутрішній стінці стерилізаційного барабана (не можна використовувати стерилізатори без шлангів або з корозійними та тріснутими шлангами);
③ Накрийте верхню кришку та щільно затягніть її, щоб запобігти витоку повітря; поставте стерилізатор на джерело вогню для нагрівання, увімкніть живлення вертикальної скороварки та відкрийте випускний клапан на верхній кришці, щоб випустити повітря (видихайте повітря протягом 10-15 хвилин після закипання води));
④Закрийте випускний клапан, щоб підвищити тиск пари до вказаних вимог і підтримувати його протягом зазначеного часу (залежно від характеру стерилізованих предметів і відповідних обставин);
⑤ Після досягнення зазначеного часу для речей, які потрібно висушити, негайно відкрийте випускний клапан, щоб випустити пару. Коли тиск повернеться до нуля, охолодіть його природним шляхом до 60°C, а потім відкрийте кришку, щоб дістати предмети. Якщо це рідина, не відкривайте випускний клапан. Каструлю слід негайно від’єднати від джерела тепла та дати охолонути природним шляхом, доки тиск не повернеться до нуля, а температура не впаде нижче 60°C, перш ніж відкривати кришку, щоб вийняти вміст, щоб запобігти раптовому зниженню тиску рідини внаслідок бурхливого кипіння або вибуху контейнера.
(3) Для використання парового стерилізатора горизонтальної скороварки виконайте наступні кроки:
①Щільно закрийте дверцята каструлі, відкрийте впускний клапан повітря, подайте пару в мезонін для попереднього нагріву, і холодне повітря в мезоніні буде автоматично виведено через повітряний бар’єр;
②Після того, як проміжний шар досягне заданої температури, відкрийте впускний клапан камери горщика, подайте пару в камеру горщика, і холодне повітря в камері горщика буде автоматично виведено через повітровідвідник камери горщика;
③Коли тиск і температура в камері горщика досягнуть заданого тиску, відрегулюйте впускний клапан повітря, щоб підтримувати його постійним;
④ Охолодіть температуру природним або штучним шляхом до 60 ℃, перш ніж відкривати дверцята, щоб вийняти речі. Не використовуйте метод швидкого випуску пари, щоб запобігти раптовому падінню тиску, бурхливому кипінню рідини або вибуху контейнера;
⑤ Під час використання автоматичної програми-парового стерилізатора з контрольованим тиском після розміщення предметів і щільного закриття дверцят слід натиснути відповідний перемикач відповідно до категорії предметів, щоб стерилізація могла бути автоматично виконана відповідно до необхідних процедур. Під час стерилізації необхідно використовувати доданий інструмент для реєстрації температури та часу. Для подальших довідок вимоги до експлуатації мають суворо відповідати інструкціям виробника;
5. Температура і час стерилізації
(1) Температура стерилізації сухожарового стерилізатора становить 160 ℃, 1,5~2 години.
(2) Температура стерилізації та час парового стерилізатора під тиском
Переривчастий метод стерилізації
1. Метод стерилізації:
Використовуйте стерилізацію парою без тиску. Деякі речовини легко руйнуються при стерилізації парою під високим тиском, тому цей метод можна використовувати для стерилізації.
(1) Помістіть предмети, які потрібно стерилізувати, у каструлю, накрийте верхню кришку, відкрийте зливний отвір і злийте воду, що залишилася в каструлі.
(2) Закрийте дренажний отвір, відкрийте дверцята входу повітря та за потреби продезінфікуйте протягом 10–20 хвилин.
(3) Після завершення стерилізації закрийте дверцята входу повітря, вийміть предмети та зачекайте, щоб вони охолонули до кімнатної температури, помістіть їх в інкубатор при 37°C на ніч і продовжуйте стерилізацію відповідно до вищезазначеного методу наступного дня. Зробіть це тричі, щоб досягти мети стерилізації.
2. Як користуватися сироватковим коагулятором:
Якщо культуральне середовище містить спеціальні інгредієнти, такі як сироватка або яйця, висока температура знищує її поживні речовини. Таким чином, низька температура може бути використана для коагуляції сироватки та досягнення цілей стерилізації:
(1) При використанні сироватки, стерилізованої цим методом для аліквоти, необхідно суворо дотримуватися асептичних операцій, а пробірки та чашки також необхідно стерилізувати перед використанням;
(2) Розмістіть культуральне середовище у нахиленому або високому шарі, якщо потрібно. Додавши достатньо води, підключіть джерело живлення, підвищте температуру до 75~90°C протягом однієї години, а потім стерилізуйте. Помістіть його в інкубатор при 37°C на ніч, а потім тричі стерилізуйте.
3. Прокип'ятіть і продезінфікуйте:
Ви можете використовувати каструлю з кип’ятінням або стерилізатор з кип’ятінням. Після того, як вода закипить, кип’ятіть її 5-15 хвилин. Можна також додати у воду 2% карболової кислоти і кип'ятити 5 хвилин. Додайте 0,02% формальдегіду та кип’ятіть при 80°C протягом 60 хвилин для досягнення мети стерилізації. Однак можна досягти стерилізації кип'ятінням. При використанні підсилювачів слід звертати увагу на корозійну активність предметів.
4. Стерилізаційна обробка:
Після стерилізації вироби вже є стерильними за звичайних умов. Їх слід уважно оглянути та розмістити після виймання зі стерилізатора, щоб уникнути повторного зараження;
(1) Негайно вийміть речі та перевірте цілісність упаковки. Якщо є пошкодження або тампон видалений, його не можна використовувати як стерильний предмет;
(2) Витягнуті предмети не можна використовувати як стерильні, якщо їхня упаковка явно змочена водою;
(3) Культуральне середовище або реагенти слід перевірити, щоб побачити, чи відповідають вони кольору або стану після стерилізації. Ті, що не відповідають вимогам, слід викинути;
(4) Для відкритих/закритих контейнерів отвори сітки повинні бути закриті під час їх виймання;
(5) Якщо вилучені предмети падають на землю, лежать у нечистому місці або забруднені водою, вони вважаються зараженими та не можуть використовуватися як стерильні;
(6) Витягнуті кваліфіковані стерилізовані предмети слід зберігати в камері зберігання або пилозахищеній шафі, і суворо заборонено змішувати їх із нестерилізованими предметами;
(7) Усі кваліфіковані предмети мають бути позначені датою стерилізації та терміном придатності;
(8) Після завершення кожної партії обробки стерилізації запишіть назву, кількість, температуру, час і оператора стерилізованих продуктів.
Вимоги до поводження з токсичними та бактеріальними відходами
Забороняється виносити з лабораторії без дезінфекції експериментальне обладнання та культури, які використовувалися в мікробіологічних дослідах.
1. Забруднені культивуванням матеріали та відходи слід поміщати в щільні контейнери або дротяні кошики та зберігати в централізованих місцях, поки вони не будуть рівномірно оброблені в автоклаві.
2. Культури, заражені мікроорганізмами, необхідно автоклавувати при 121°C протягом 30 хвилин.
3. Після використання забруднені соломинки слід помістити в 5% розчин мильного креолу або розчин карболової кислоти, замочити щонайменше на 24 години (дезінфікуюча рідина не повинна бути нижче висоти замочування), а потім стерилізувати під високим тиском при 121°C протягом 30 хвилин.
4. Рідину для фарбування та промивання мазків зазвичай можна змивати безпосередньо в каналізацію. Рідину для промивання вірулентних бактерій необхідно змити в стакан і стерилізувати під високим тиском перед тим, як вилити в каналізацію. Пофарбовані предметні скла поміщають у 5% розчин крезолового мила. Після замочування у воді протягом 24 годин, прокип'ятити і випрати. Предметні скла або чашки, які використовуються для тесту на аглютинацію, повинні бути автоклавовані, а потім промиті.
5. Після розбиття культури негайно обприскати та просочити забруднені частини 5% розчином крезолового мила або розчином карболової кислоти, замочити на півгодини, а потім витерти.
Забруднений робочий одяг або робочий одяг, шапки, маски тощо, які використовуються для насильницьких тестів, слід помістити в спеціальні пакети для дезінфекції та стерилізувати під високим тиском перед пранням.
Середні вимоги до підготовки
Якість приготування культурального середовища безпосередньо впливатиме на ріст мікроорганізмів, оскільки різні мікроорганізми мають різні потреби в харчуванні та різні цілі культури. Вимоги до підготовки різних живильних середовищ такі:
1. Зважте інгредієнти відповідно до формули середовища, а потім розчиніть їх у дистильованій воді. Якість застосованих реагентів і препаратів необхідно перевірити перед використанням.
2. Вимірювання та регулювання рН: вимірювання рН слід проводити, коли культуральне середовище охолоджене до кімнатної температури, оскільки існує певна різниця в рН у гарячих і холодних умовах. Після завершення вимірювання додайте луг або кислоту відповідно до розрахованої кількості та добре перемішайте. Потрібно перевірити ще раз. Значення pH культурального середовища має бути точним, інакше це вплине на ріст мікроорганізмів або вплине на спостереження за результатами. Однак слід зазначити, що стерилізація під високим тиском може вплинути на зниження або підвищення рН деяких культуральних середовищ, тому не рекомендується стерилізувати під занадто високим тиском або занадто багато разів, щоб уникнути впливу на якість культурального середовища. Індикатори, дезоксихолат натрію, агар тощо зазвичай додають після регулювання pH.
3. Поживне середовище має бути чистим, щоб полегшити спостереження за ростом бактерій. Після нагрівання та кип’ятіння культурального середовища її можна відфільтрувати ватою або фланеллю для видалення осаду. При необхідності можна освітлити яєчним білком. Використовувані смужки агару необхідно заздалегідь промити і висушити. Перед використанням уникайте впливу на прозорість через домішки в агарі.
4. Залізні, мідні та інші контейнери не можна використовувати для зберігання культурального середовища. Краще використовувати чисту нейтральну тару з твердого скла.
5. Стерилізація живильного середовища повинна не тільки досягати мети повної стерилізації, але також звертати увагу на те, щоб не знизити його харчову цінність через нагрівання. Як правило, достатньо 121°C протягом 15 хвилин. Для культуральних середовищ, що містять речовини, які не переносять високу температуру, такі як цукор і сироватка, желатин тощо, слід стерилізувати методом низької температури або періодичним методом. Деякі реагенти, які не можна нагрівати, такі як телурит калію, яєчний жовток, ТТС, антибіотики тощо, слід охолодити приблизно до 50°C після автоклавування основного агару, а потім додати;
6. Після приготування кожної партії культуральних середовищ необхідно провести тест на стерильний ріст і тест на ріст досліджуваних штамів. Якщо це біохімічне культуральне середовище, використовуйте стандартні штами бактерій для посіву та культивування та спостерігайте за результатами біохімічної реакції. Він повинен показати нормальну реакцію. Поживне середовище не можна зберігати занадто довго. При необхідності можна зберігати в холодильнику при температурі 4°C.
7. В даний час існує багато видів сухих культуральних середовищ. Кожна партія повинна використовувати стандартні штами для тесту на зростання або спостереження за біохімічними реакціями. Різні культуральні середовища можна використовувати тільки після того, як тест на ріст відповідних штамів буде добрим. Можна використовувати щойно придбані або висушені, які довго зберігалися. Під час приготування слід також виміряти рН культурального середовища, а також дотримуватися дозування та методу відповідно до інструкцій до продукту.
8. Хімічні реагенти, умови стерилізації, результати тестування росту штаму та виробничий персонал, використаний для кожної партії підготовлених культуральних середовищ, повинні бути записані для запиту.
Вимоги до збору та обробки проб
1. Зібрані контрольні зразки мають бути репрезентативними. Під час відбору зразків слід детально дослідити сировину, методи обробки, транспортування, зберігання та умови партії харчових продуктів, навколишнє гігієнічне середовище тощо, щоб перевірити наявність джерел забруднення.
2. Відповідно до типу та кількості харчових продуктів, кількість і метод відбору зразків повинні проводитися відповідно до вимог стандартних методів перевірки.
3. Звертайте увагу на асептику під час відбору проб, а контейнер необхідно стерилізувати, щоб уникнути мікробного забруднення навколишнього середовища. Ємність не підлягає стерилізації креозальним мильним розчином, стерилізації хлорметіоніном, спиртом та іншими дезінфікуючими засобами, в ній не повинні бути такі дезінфікуючі засоби та антибіотики. Щоб уникнути знищення мікроорганізмів у зразку, використовувані ножиці, ножі та ложки також повинні бути стерилізовані перед використанням.
4. Зразки слід відправляти в кімнату для перевірки відразу після збору. Процес перевірки зазвичай не перевищує 3 годин. Якщо відстань велика, його можна зберігати при температурі 1~5 ℃. Якщо його необхідно заморозити, то його слід зберігати в замороженому стані. Здати на перевірку.
5. Отримавши зразок, оглядова кімната реєструє його (назва зразка, одиниця для перевірки, кількість, дата, номер тощо) та спостерігає за зовнішнім виглядом зразка. У разі виявлення будь-якої з наступних умов перевірка може бути відмовлена:
(1) Samples that have been sterilized by special high pressure, boiling or other methods will lose their significance in representing the original food;
(2) Пляшки та пакети з харчовими продуктами були відкриті, варене м’ясо та продукти з нього, варена птиця та інші харчові продукти були розбиті та неповні, тобто харчові продукти втратили первинну форму (за винятком зразків харчового отруєння);
(3) Кількість зразків є недостатньою відповідно до вимог;
Для поданих на перевірку зразків, які відповідають вимогам, оглядова кімната повинна негайно провести перевірку після їх отримання. Якщо умови не виконуються, їх слід зберігати в холодильнику при температурі 4°C, вчасно підготувати умови, а потім провести огляд.
6. When inspecting samples, perform appropriate processing according to their different properties.
(1) Під час інокуляції рідких зразків їх слід ретельно перемішати та інокулювати відповідно до кількості.
(2) Для твердих зразків використовуйте стерилізований ніж, щоб вирізати 25 г різних частин, помістити їх у 225 мл стерилізованого фізіологічного розчину або інших розчинів, подрібнити та змішати за допомогою гомогенізатора та засіяти відповідно до кількості.
(3) Пляшки та пакети з харчовими продуктами слід відкривати шляхом стерилізації, а вищезазначені методи слід вибирати відповідно до характеристик перед щепленням.
Вимоги до перевірки зразків, реєстрації та звітності
1. Після отримання зразка інспекційна кімната спочатку проведе перевірку зовнішнього вигляду та негайно проведе перевірку відповідно до національних стандартних методів перевірки. Під час процесу перевірки асептичні операції необхідно виконувати обережно, відповідально та строго уникатирезультат мікробного дослідженнязабруднення навколишнього середовища.
2. Методи, які використовуються під час перевірки зразків, явища та результати, що відбулися, тощо повинні бути записані в письмових протоколах випробувань як основа для аналізу та оцінки результатів. Записи мають бути детальними, чіткими, автентичними, об’єктивними та не повинні бути зміненими чи підробленими.
