Resumo dos requisitos de testes microbiológicos
2024-01-24 15:14:33
Os requisitos e etapas paratestes microbiológicossão os seguintes:
Requisitos de operação asséptica:
1. Você deve usar roupas de trabalho e boné ao inocular bactérias.
2. Na inoculação de amostras de alimentos, devem ser utilizadas roupas de trabalho especiais, bonés e chinelos, que devem ser colocados na sala tampão da sala estéril e utilizados após a desinfecção UV antes do trabalho.
3. Ao inocular amostras de alimentos, lave as mãos com sabão antes de entrar na sala estéril e, em seguida, limpe-as com uma bola de algodão com álcool 75%.
4. Os canudos, pratos rasos e meios de cultura utilizados para inoculação devem ser esterilizados e esterilizados. Os recipientes não utilizados não devem ser deixados sem uso após a abertura da embalagem. Utensílios de metal devem ser autoclavados ou queimados três vezes com álcool 95% antes do uso.
5. Ao retirar o canudo da embalagem, a ponta do canudo não deve tocar nas partes expostas. Ao usar o canudo para inocular o tubo de ensaio ou a placa, a ponta do canudo não deve tocar a borda do tubo de ensaio ou da placa.
6. A inoculação de amostras e a transferência de bactérias devem ser feitas em frente a uma lâmpada de álcool. Ao inocular bactérias ou amostras, o canudo deve ser esterilizado à chama após retirá-lo da embalagem e abrir a tampa do tubo de ensaio.
7. Antes de inocular bactérias, todos os fios metálicos da alça de inoculação e da agulha devem ser queimados com chama e, se necessário, a conexão entre a alça, a agulha e a haste deve ser queimada. A alça de inoculação para inocular bactérias da tuberculose e bactérias virulentas deve ser fervida em água fervente por 5 minutos e depois queimada pela chama.
8. Ao sugar líquidos bacterianos ou amostras com canudo, use a ponta de borracha correspondente para sugar e não chupe diretamente com a boca.
Requisitos de uso de sala estéril:
1. As janelas que dão para o exterior da sala estéril devem ser de vidro duplo e vedadas. Eles não devem ser abertos à vontade. Deve haver uma sala tampão e uma porta deslizante correspondente ao tamanho da sala estéril. Também deve haver uma pequena janela de 0,5~0,7m2. Em preparação para passar itens após entrar na sala estéril.
2. A sala estéril deve ser mantida limpa. Após o trabalho, deve ser desinfetado com solução de sabão de cresol 2% a 3%, a superfície de trabalho deve ser enxugada e itens não relacionados ao experimento não devem ser armazenados.
3. A porta da sala estéril deve ser bem fechada antes e depois do uso, e a lâmpada ultravioleta deve ser ligada. Se uma lâmpada ultravioleta suspensa interna for usada para desinfecção, será necessária uma lâmpada ultravioleta de 30W. A distância é de 1,0 m e o tempo de irradiação não é inferior a 30 minutos. Ao usar lâmpadas ultravioleta, deve-se prestar atenção para operar diretamente sob luz ultravioleta para evitar danos. A lâmpada precisa ser limpa suavemente com uma bola de algodão com álcool a cada duas semanas para remover poeira e graxa e reduzir o impacto da penetração ultravioleta.
4. Ao processar e inocular amostras de alimentos, entre na sala estéril para operação e não seja permitido entrar ou sair à vontade. Se for necessário repassar itens, eles podem ser repassados pela pequena janela.
5. Caso seja necessário instalar ar condicionado na sala estéril, deverá haver um dispositivo de filtragem.
Requisitos de desinfecção e esterilização
Vidrarias, utensílios metálicos e meios de cultura utilizados paratestes microbiológicos, culturas contaminadas e inoculadas, etc. devem ser esterilizadas antes do uso. Métodos de esterilização a vapor por calor seco e calor úmido com pressão.
1. Preparação antes da esterilização
(1) Todos os itens que precisam ser esterilizados devem ser lavados e secos primeiro. Vidros como canudos e pratos rasos devem ser bem embalados com papel. Se forem utilizados tubos de metal, os orifícios de ventilação devem ser abertos.
(2) Enrole a tampa do frasco triangular contendo o meio de cultura em papel, cubra o tubo de ensaio, retire o núcleo da seringa e envolva-o com gaze.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: Os itens não devem estar superlotados e não podem tocar as quatro paredes da caixa.
(2) Panela a vapor grande de alta pressão: Coloque os itens esterilizados, embrulhe-os separadamente e coloque-os diretamente no cilindro de esterilização. Não sobrecarregue os itens.
3. Inspeção de equipamentos
(1) Verifique se o interruptor da porta é flexível, se o anel de borracha está danificado e se está plano.
(2) Verifique se o manômetro permanece na posição zero quando o vapor é exaurido, feche a porta e a tampa, ventile o vapor ou o calor e observe se há vazamento de ar, se as condições marcadas pelo manômetro e pelo termômetro correspondem, e se a tubulação está bloqueada.
(3) Para esterilizadores com dispositivos eletrônicos automáticos de controle de programa, o programa especificado deve ser verificado antes do uso para verificar se atende aos requisitos de esterilização.
4. Tratamento de esterilização
(1) Método de esterilização por calor seco:
Este método é adequado para itens que não danificam, deterioram ou evaporam sob condições de calor seco. É mais comumente usado para esterilizar produtos de vidro, produtos de metal, produtos cerâmicos, etc.
①Instrumentos e utensílios devem ser lavados antes de secar - assar para evitar que a sujeira grudada na superfície seja carbonizada.
② Durante a esterilização, os itens não devem ficar superlotados, não entrar em contato direto com o fundo e a parede da caixa e deixar espaços entre os itens.
③ Durante a esterilização, feche bem a porta, conecte a fonte de alimentação, abra o orifício de exaustão por cerca de 30 minutos para remover o ar frio do esterilizador, ajuste a luz indicadora quando a temperatura subir para 160°C e mantenha-a por 1,5 a 2 horas.
④Após a conclusão da esterilização ou durante o processo de aumento de temperatura, a porta deve ser aberta abaixo de 60°C.
(2) As seguintes etapas devem ser seguidas ao usar uma panela de pressão portátil ou um esterilizador a vapor de pressão vertical:
① Adicione 3L de água ao corpo principal da panela de pressão portátil e 16L de água à panela de pressão vertical (a quantidade de água deve ser reabastecida quando reutilizada, e a água precisa ser substituída se ficar turva);
② Para uma panela de pressão portátil, insira o tubo de exaustão da tampa superior no tubo quadrado na parede interna do cilindro de esterilização (não devem ser usados esterilizadores sem mangueiras ou com mangueiras corroídas e rachadas);
③ Cubra a tampa superior e aperte-a bem para evitar vazamento de ar; coloque o esterilizador na fonte de fogo para aquecer, ligue a panela de pressão vertical e abra a válvula de exaustão na tampa superior para deixar sair o ar (exaure o ar por 10 a 15 minutos após a água ferver));
④Feche a válvula de exaustão para aumentar a pressão do vapor até os requisitos especificados e mantê-la pelo tempo especificado (dependendo da natureza dos itens esterilizados e das circunstâncias relevantes);
⑤ Após atingir o tempo especificado, para itens que precisam ser secos, abra imediatamente a válvula de exaustão para descarregar o vapor. Quando a pressão voltar a zero, resfrie naturalmente até 60°C e depois abra a tampa para retirar os itens. Se for um item líquido, não abra a válvula de escape. A panela deve ser retirada imediatamente da fonte de calor e deixada esfriar naturalmente até que a pressão retorne a zero e a temperatura caia abaixo de 60°C antes de abrir a tampa para retirar o conteúdo e evitar a descompressão repentina do líquido devido à fervura violenta ou explosão do recipiente.
(3) Siga as etapas a seguir para usar o esterilizador a vapor para panela de pressão horizontal:
①Feche bem a porta da panela, abra a válvula de entrada de ar, introduza vapor no mezanino para pré-aquecimento e o ar frio do mezanino será descarregado automaticamente através da barreira de ar;
②Depois que a camada intermediária atingir a temperatura predeterminada, abra a válvula de entrada de ar da câmara do pote, introduza o vapor na câmara do pote e o ar frio na câmara do pote será descarregado automaticamente através do prendedor de ar da câmara do pote;
③Quando a pressão e a temperatura na câmara do pote atingirem a pressão especificada, ajuste a válvula de entrada de ar para mantê-la constante;
④ Resfrie a temperatura natural ou artificialmente para 60 ℃ antes de abrir a porta para retirar os itens. Não utilize o método de descarga rápida de vapor para evitar queda repentina de pressão, fervura violenta do líquido ou explosão do recipiente;
⑤ Ao utilizar um esterilizador a vapor com pressão controlada por programa automático, após colocar os itens e fechar bem a porta, o interruptor correspondente deve ser pressionado de acordo com a categoria dos itens para que a esterilização possa ser realizada automaticamente de acordo com os procedimentos exigidos. Durante a esterilização, o instrumento anexo deve ser utilizado para registrar a temperatura e o tempo. Para referência futura, os requisitos operacionais devem estar estritamente de acordo com as instruções do fabricante;
5. Temperatura e tempo de esterilização
(1) A temperatura de esterilização do esterilizador por calor seco é de 160 ℃, 1,5 ~ 2h.
(2) Temperatura de esterilização e tempo do esterilizador a vapor sob pressão
Método de esterilização intermitente
1. Método de esterilização:
Use esterilização a vapor sem pressão. Algumas substâncias são facilmente destruídas pela esterilização a vapor de alta pressão, portanto este método pode ser usado para esterilização.
(1) Coloque os itens a serem esterilizados na panela, cubra a tampa superior, abra a saída de drenagem e drene o restante da água da panela.
(2) Feche a saída de drenagem, abra a porta de entrada de ar e desinfete por 10 a 20 minutos conforme necessário.
(3) Após a conclusão da esterilização, feche a porta de entrada de ar, retire os itens e espere esfriar até a temperatura ambiente, coloque-os em uma incubadora a 37°C durante a noite e continue a esterilizar de acordo com o método acima no dia seguinte. Faça isso três vezes para atingir o objetivo da esterilização.
2. Como usar o coagulador de soro:
Quando o meio de cultura contém ingredientes especiais, como soro ou ovos, o calor elevado destruirá seus nutrientes. Portanto, a baixa temperatura pode ser usada para coagular o soro e atingir fins de esterilização:
(1) Ao utilizar soro esterilizado por este método para alíquotas, as operações assépticas devem ser rigorosamente seguidas, e os tubos de ensaio e placas também devem ser esterilizados antes do uso;
(2) Transforme o meio de cultura em uma inclinação ou camada alta conforme necessário. Depois de adicionar água suficiente, conecte a fonte de alimentação, aumente a temperatura para 75 ~ 90°C por uma hora e depois esterilize. Coloque-o numa incubadora a 37°C durante a noite e depois esterilize-o três vezes.
3. Ferva e desinfete:
Você pode usar uma panela fervente ou um esterilizador fervente. Depois que a água ferver, ferva por 5 a 15 minutos. Você também pode adicionar ácido carbólico a 2% à água e fervê-la por 5 minutos. Adicione formaldeído 0,02% e ferva a 80°C por 60 minutos para atingir o objetivo de esterilização. No entanto, a esterilização por ebulição pode ser alcançada. Ao usar intensificadores, deve-se prestar atenção à corrosividade dos itens.
4. Tratamento de esterilização:
Após a esterilização, os itens já estão estéreis em circunstâncias normais. Devem ser cuidadosamente inspecionados e colocados quando retirados do esterilizador para evitar recontaminação;
(1) Retire os itens e verifique imediatamente a integridade da embalagem. Se houver dano ou o tampão for removido, ele não pode ser usado como material estéril;
(2) Os itens retirados não podem ser utilizados como itens estéreis se sua embalagem estiver obviamente embebida em água;
(3) O meio de cultura ou reagentes devem ser verificados para ver se atendem à cor ou estado após a esterilização. Aqueles que não atenderem aos requisitos deverão ser descartados;
(4) Para recipientes abertos/fechados, os orifícios da tela devem ser fechados ao retirá-los;
(5) Se os itens retirados caírem no chão, forem extraviados em local sujo ou manchados com água, serão considerados contaminados e não poderão ser utilizados como itens estéreis;
(6) Os itens esterilizados qualificados retirados devem ser armazenados em depósito ou armário à prova de poeira, sendo estritamente proibido misturá-los com itens não esterilizados;
(7) Todos os itens qualificados devem ser marcados com a data de esterilização e prazo de validade;
(8) Após a conclusão de cada lote de processamento de esterilização, registre o nome, quantidade, temperatura, tempo e operador dos produtos esterilizados.
Requisitos para o tratamento de resíduos tóxicos e bacterianos
Os equipamentos experimentais e as culturas utilizadas em experimentos microbiológicos não devem ser retirados do laboratório sem desinfecção.
1. Os materiais e resíduos contaminados cultivados devem ser colocados em recipientes apertados ou cestos de arame e armazenados centralmente em locais designados até serem autoclavados uniformemente.
2. As culturas contaminadas por microrganismos devem ser autoclavadas a 121°C por 30 minutos.
3. Após o uso, os canudos contaminados devem ser colocados em solução de sabão crioulo a 5% ou solução de ácido carbólico, embebidos por pelo menos 24 horas (o líquido desinfetante não deve ser inferior à altura de imersão) e depois esterilizados em alta pressão a 121°C por 30 minutos.
4. O líquido para colorir e enxaguar os esfregaços geralmente pode ser despejado diretamente no esgoto. O fluido de lavagem para bactérias virulentas deve ser despejado em um copo e esterilizado em alta pressão antes de ser despejado no esgoto. As lâminas coradas são colocadas em solução de sabão de cresol a 5%. Após imersão em água por 24 horas, ferva e lave. As lâminas ou placas utilizadas para testes de aglutinação devem ser autoclavadas e depois lavadas.
5. Após quebrar a cultura, pulverize e molhe imediatamente as partes contaminadas com solução de sabão de cresol a 5% ou solução de ácido carbólico, deixe de molho por meia hora e depois limpe.
Roupas de trabalho contaminadas ou roupas de trabalho, bonés, máscaras, etc. usadas para testes violentos devem ser colocadas em sacos especiais de desinfecção e esterilizadas em alta pressão antes de serem lavadas.
Requisitos médios de preparação
A qualidade do preparo do meio de cultura afetará diretamente o crescimento dos microrganismos, pois vários microrganismos possuem diferentes necessidades nutricionais e diferentes finalidades de cultivo. Os requisitos de preparação para vários meios de cultura são os seguintes:
1. Pese os ingredientes de acordo com a fórmula do meio e dissolva-os em água destilada. A qualidade dos reagentes e medicamentos aplicados deve ser inspecionada antes do uso.
2. Medição e ajuste de pH: a medição de pH deve ser realizada quando o meio de cultura é resfriado à temperatura ambiente, pois há certa diferença de pH em condições de calor ou frio. Quando a medição for concluída, adicione álcali ou ácido de acordo com a quantidade calculada e misture bem. Deve ser testado novamente. O valor do pH do meio de cultura deve ser preciso, caso contrário afetará o crescimento de microrganismos ou afetará a observação dos resultados. No entanto, deve-se notar que a esterilização a alta pressão pode afetar a diminuição ou aumento do pH de alguns meios de cultura, por isso não é aconselhável esterilizar a uma pressão muito alta ou muitas vezes para evitar afetar a qualidade do meio de cultura. Indicadores, desoxicolato de sódio, ágar, etc. são geralmente adicionados após ajustar o pH.
3. O meio de cultura precisa ser mantido limpo para facilitar a observação do crescimento bacteriano. Após o meio de cultura ser aquecido e fervido, ele pode ser filtrado com algodão absorvente ou flanela para remoção de sedimentos. Se necessário, pode ser clarificado com clara de ovo. As tiras de ágar utilizadas devem ser lavadas e secas previamente. Antes de usar, evite afetar a transparência devido a impurezas no ágar.
4. Não devem ser utilizados recipientes de ferro, cobre e outros recipientes para conter o meio de cultura. É melhor usar recipientes de vidro duro neutro e limpo.
5. A esterilização do meio de cultura deve não apenas atingir o objetivo de esterilização completa, mas também atentar para não reduzir seu valor nutricional devido ao aquecimento. Geralmente, 121°C durante 15 minutos é suficiente. Para meios de cultura contendo substâncias intolerantes ao calor elevado, como açúcares e soro, gelatina, etc., devem ser esterilizados por baixa temperatura ou método intermitente. Alguns reagentes que não podem ser aquecidos, como telurito de potássio, gema de ovo, TTC, antibióticos, etc., devem ser resfriados a cerca de 50°C após o ágar básico ser autoclavado e depois adicionado;
6. Após a preparação de cada lote de meio de cultura, deve ser realizado um teste de crescimento estéril e um teste de crescimento das cepas testadas. Se for um meio de cultura bioquímico, use cepas bacterianas padrão para inoculação e cultura e observe os resultados da reação bioquímica. Deve mostrar uma reação normal. O meio de cultura não deve ser armazenado por muito tempo. Se necessário, pode ser armazenado em geladeira a 4°C.
7. Atualmente, existem muitos tipos de meios de cultura secos. Cada lote precisa usar cepas padrão para teste de crescimento ou observação de reações bioquímicas. Vários meios de cultura podem ser usados somente após o teste de crescimento das cepas correspondentes ser bom. Podem ser usados recém-comprados ou secos que estão armazenados há muito tempo. O pH do meio de cultura também deve ser medido no preparo do mesmo, e a dosagem e método devem ser seguidos conforme instruções do produto.
8. Os reagentes químicos, as condições de esterilização, os resultados dos testes de crescimento de cepas e o pessoal de produção usados em cada lote de meio de cultura preparado devem ser registrados para consulta.
Requisitos de coleta e processamento de amostras
1. As amostras de inspeção colhidas devem ser representativas. Durante a amostragem, as matérias-primas, o processamento, o transporte, os métodos e condições de armazenamento do lote de alimentos, as condições de saúde ambiental circundantes, etc. devem ser investigados detalhadamente para verificar se existem fontes de contaminação.
2. De acordo com o tipo e quantidade de alimentos, a quantidade e o método de amostragem devem ser realizados de acordo com os requisitos dos métodos de inspeção padrão.
3. Preste atenção à operação asséptica durante a amostragem, e o recipiente deve ser esterilizado para evitar contaminação microbiana no meio ambiente. O recipiente não deve ser esterilizado com solução de sabão creosal, esterilização com clormetionina, álcool e outros desinfetantes, e não deve conter tais desinfetantes ou antibióticos. Para evitar a morte de microrganismos na amostra, as tesouras, facas e colheres utilizadas também devem ser esterilizadas antes do uso.
4. As amostras devem ser enviadas para a sala de inspeção para inspeção imediatamente após a coleta. O processo de inspeção geralmente não excede 3 horas. Se a distância for longa, pode ser armazenado em um ambiente de 1 ~ 5 ℃. Se precisar ser congelado, deve ser mantido congelado. Envie para inspeção.
5. Após o recebimento da amostra, a sala de inspeção irá registrá-la (nome da amostra, unidade a ser inspecionada, quantidade, data, número, etc.) e observar a aparência da amostra. Se for constatada alguma das seguintes condições, a inspeção poderá ser recusada:
(1) As amostras que foram esterilizadas por métodos especiais de alta pressão, fervura ou outros métodos perderão o seu significado na representação do alimento original;
(2) Garrafas e sacos de alimentos foram abertos, carnes cozidas e seus produtos, aves e outros alimentos cozidos foram quebrados e incompletos, ou seja, a forma original dos alimentos foi perdida (exceto amostras de intoxicação alimentar);
(3) A quantidade de amostragem é insuficiente conforme necessário;
Para amostras submetidas para inspeção que atendam aos requisitos, a sala de inspeção deve realizar a inspeção imediatamente após recebê-las. Se as condições não forem atendidas, devem ser armazenados em geladeira a 4°C, preparados para criar condições a tempo e, em seguida, realizar a inspeção.
6. Ao inspecionar amostras, realize o processamento adequado de acordo com suas diferentes propriedades.
(1) Ao inocular amostras líquidas, elas devem ser bem misturadas e inoculadas de acordo com a quantidade.
(2) Para amostras sólidas, utilizar faca esterilizada para cortar 25g de partes diferentes, colocar em 225mL de soro fisiológico esterilizado ou outras soluções, triturar e misturar com homogeneizador, e inocular de acordo com a quantidade.
(3) Os frascos e sacos de alimentos devem ser abertos por esterilização, e os métodos acima devem ser selecionados de acordo com as características antes da inoculação.
Requisitos de inspeção, registro e relatório de amostras
1. Depois de receber a amostra, a sala de inspeção realizará primeiro uma inspeção de aparência e conduzirá prontamente a inspeção de acordo com os métodos de inspeção padrão nacionais. Durante o processo de inspeção, as operações assépticas devem ser realizadas com cuidado, responsabilidade e rigor para evitarresultado do teste microbianocontaminação no meio ambiente.
2. Os métodos utilizados durante o processo de inspeção da amostra, os fenômenos e resultados ocorridos, etc. devem ser registrados em registros de teste escritos como base para análise e julgamento dos resultados. Os registros devem ser detalhados, claros, autênticos, objetivos e não devem ser alterados ou falsificados.
Requisitos de operação asséptica:
1. Você deve usar roupas de trabalho e boné ao inocular bactérias.
2. Na inoculação de amostras de alimentos, devem ser utilizadas roupas de trabalho especiais, bonés e chinelos, que devem ser colocados na sala tampão da sala estéril e utilizados após a desinfecção UV antes do trabalho.
3. Ao inocular amostras de alimentos, lave as mãos com sabão antes de entrar na sala estéril e, em seguida, limpe-as com uma bola de algodão com álcool 75%.
4. Os canudos, pratos rasos e meios de cultura utilizados para inoculação devem ser esterilizados e esterilizados. Os recipientes não utilizados não devem ser deixados sem uso após a abertura da embalagem. Utensílios de metal devem ser autoclavados ou queimados três vezes com álcool 95% antes do uso.
5. Ao retirar o canudo da embalagem, a ponta do canudo não deve tocar nas partes expostas. Ao usar o canudo para inocular o tubo de ensaio ou a placa, a ponta do canudo não deve tocar a borda do tubo de ensaio ou da placa.
6. A inoculação de amostras e a transferência de bactérias devem ser feitas em frente a uma lâmpada de álcool. Ao inocular bactérias ou amostras, o canudo deve ser esterilizado à chama após retirá-lo da embalagem e abrir a tampa do tubo de ensaio.
7. Antes de inocular bactérias, todos os fios metálicos da alça de inoculação e da agulha devem ser queimados com chama e, se necessário, a conexão entre a alça, a agulha e a haste deve ser queimada. A alça de inoculação para inocular bactérias da tuberculose e bactérias virulentas deve ser fervida em água fervente por 5 minutos e depois queimada pela chama.
8. Ao sugar líquidos bacterianos ou amostras com canudo, use a ponta de borracha correspondente para sugar e não chupe diretamente com a boca.
Requisitos de uso de sala estéril:
1. As janelas que dão para o exterior da sala estéril devem ser de vidro duplo e vedadas. Eles não devem ser abertos à vontade. Deve haver uma sala tampão e uma porta deslizante correspondente ao tamanho da sala estéril. Também deve haver uma pequena janela de 0,5~0,7m2. Em preparação para passar itens após entrar na sala estéril.
2. A sala estéril deve ser mantida limpa. Após o trabalho, deve ser desinfetado com solução de sabão de cresol 2% a 3%, a superfície de trabalho deve ser enxugada e itens não relacionados ao experimento não devem ser armazenados.
3. A porta da sala estéril deve ser bem fechada antes e depois do uso, e a lâmpada ultravioleta deve ser ligada. Se uma lâmpada ultravioleta suspensa interna for usada para desinfecção, será necessária uma lâmpada ultravioleta de 30W. A distância é de 1,0 m e o tempo de irradiação não é inferior a 30 minutos. Ao usar lâmpadas ultravioleta, deve-se prestar atenção para operar diretamente sob luz ultravioleta para evitar danos. A lâmpada precisa ser limpa suavemente com uma bola de algodão com álcool a cada duas semanas para remover poeira e graxa e reduzir o impacto da penetração ultravioleta.
4. Ao processar e inocular amostras de alimentos, entre na sala estéril para operação e não seja permitido entrar ou sair à vontade. Se for necessário repassar itens, eles podem ser repassados pela pequena janela.
5. Caso seja necessário instalar ar condicionado na sala estéril, deverá haver um dispositivo de filtragem.
Requisitos de desinfecção e esterilização
Vidrarias, utensílios metálicos e meios de cultura utilizados paratestes microbiológicos, culturas contaminadas e inoculadas, etc. devem ser esterilizadas antes do uso. Métodos de esterilização a vapor por calor seco e calor úmido com pressão.
1. Preparação antes da esterilização
(1) Todos os itens que precisam ser esterilizados devem ser lavados e secos primeiro. Vidros como canudos e pratos rasos devem ser bem embalados com papel. Se forem utilizados tubos de metal, os orifícios de ventilação devem ser abertos.
(2) Enrole a tampa do frasco triangular contendo o meio de cultura em papel, cubra o tubo de ensaio, retire o núcleo da seringa e envolva-o com gaze.
2. instalar
(1) Esterilizador de calor seco: Os itens não devem estar superlotados e não podem tocar as quatro paredes da caixa.
(2) Panela a vapor grande de alta pressão: Coloque os itens esterilizados, embrulhe-os separadamente e coloque-os diretamente no cilindro de esterilização. Não sobrecarregue os itens.
3. Inspeção de equipamentos
(1) Verifique se o interruptor da porta é flexível, se o anel de borracha está danificado e se está plano.
(2) Verifique se o manômetro permanece na posição zero quando o vapor é exaurido, feche a porta e a tampa, ventile o vapor ou o calor e observe se há vazamento de ar, se as condições marcadas pelo manômetro e pelo termômetro correspondem, e se a tubulação está bloqueada.
(3) Para esterilizadores com dispositivos eletrônicos automáticos de controle de programa, o programa especificado deve ser verificado antes do uso para verificar se atende aos requisitos de esterilização.
4. Tratamento de esterilização
(1) Método de esterilização por calor seco:
Este método é adequado para itens que não danificam, deterioram ou evaporam sob condições de calor seco. É mais comumente usado para esterilizar produtos de vidro, produtos de metal, produtos cerâmicos, etc.
①Instrumentos e utensílios devem ser lavados antes de secar - assar para evitar que a sujeira grudada na superfície seja carbonizada.
② Durante a esterilização, os itens não devem ficar superlotados, não entrar em contato direto com o fundo e a parede da caixa e deixar espaços entre os itens.
③ Durante a esterilização, feche bem a porta, conecte a fonte de alimentação, abra o orifício de exaustão por cerca de 30 minutos para remover o ar frio do esterilizador, ajuste a luz indicadora quando a temperatura subir para 160°C e mantenha-a por 1,5 a 2 horas.
④Após a conclusão da esterilização ou durante o processo de aumento de temperatura, a porta deve ser aberta abaixo de 60°C.
(2) As seguintes etapas devem ser seguidas ao usar uma panela de pressão portátil ou um esterilizador a vapor de pressão vertical:
① Adicione 3L de água ao corpo principal da panela de pressão portátil e 16L de água à panela de pressão vertical (a quantidade de água deve ser reabastecida quando reutilizada, e a água precisa ser substituída se ficar turva);
② Para uma panela de pressão portátil, insira o tubo de exaustão da tampa superior no tubo quadrado na parede interna do cilindro de esterilização (não devem ser usados esterilizadores sem mangueiras ou com mangueiras corroídas e rachadas);
③ Cubra a tampa superior e aperte-a bem para evitar vazamento de ar; coloque o esterilizador na fonte de fogo para aquecer, ligue a panela de pressão vertical e abra a válvula de exaustão na tampa superior para deixar sair o ar (exaure o ar por 10 a 15 minutos após a água ferver));
④Feche a válvula de exaustão para aumentar a pressão do vapor até os requisitos especificados e mantê-la pelo tempo especificado (dependendo da natureza dos itens esterilizados e das circunstâncias relevantes);
⑤ Após atingir o tempo especificado, para itens que precisam ser secos, abra imediatamente a válvula de exaustão para descarregar o vapor. Quando a pressão voltar a zero, resfrie naturalmente até 60°C e depois abra a tampa para retirar os itens. Se for um item líquido, não abra a válvula de escape. A panela deve ser retirada imediatamente da fonte de calor e deixada esfriar naturalmente até que a pressão retorne a zero e a temperatura caia abaixo de 60°C antes de abrir a tampa para retirar o conteúdo e evitar a descompressão repentina do líquido devido à fervura violenta ou explosão do recipiente.
(3) Siga as etapas a seguir para usar o esterilizador a vapor para panela de pressão horizontal:
①Feche bem a porta da panela, abra a válvula de entrada de ar, introduza vapor no mezanino para pré-aquecimento e o ar frio do mezanino será descarregado automaticamente através da barreira de ar;
②Depois que a camada intermediária atingir a temperatura predeterminada, abra a válvula de entrada de ar da câmara do pote, introduza o vapor na câmara do pote e o ar frio na câmara do pote será descarregado automaticamente através do prendedor de ar da câmara do pote;
③Quando a pressão e a temperatura na câmara do pote atingirem a pressão especificada, ajuste a válvula de entrada de ar para mantê-la constante;
④ Resfrie a temperatura natural ou artificialmente para 60 ℃ antes de abrir a porta para retirar os itens. Não utilize o método de descarga rápida de vapor para evitar queda repentina de pressão, fervura violenta do líquido ou explosão do recipiente;
⑤ Ao utilizar um esterilizador a vapor com pressão controlada por programa automático, após colocar os itens e fechar bem a porta, o interruptor correspondente deve ser pressionado de acordo com a categoria dos itens para que a esterilização possa ser realizada automaticamente de acordo com os procedimentos exigidos. Durante a esterilização, o instrumento anexo deve ser utilizado para registrar a temperatura e o tempo. Para referência futura, os requisitos operacionais devem estar estritamente de acordo com as instruções do fabricante;
5. Temperatura e tempo de esterilização
(1) A temperatura de esterilização do esterilizador por calor seco é de 160 ℃, 1,5 ~ 2h.
(2) Temperatura de esterilização e tempo do esterilizador a vapor sob pressão
Método de esterilização intermitente
1. Método de esterilização:
Use esterilização a vapor sem pressão. Algumas substâncias são facilmente destruídas pela esterilização a vapor de alta pressão, portanto este método pode ser usado para esterilização.
(1) Coloque os itens a serem esterilizados na panela, cubra a tampa superior, abra a saída de drenagem e drene o restante da água da panela.
(2) Feche a saída de drenagem, abra a porta de entrada de ar e desinfete por 10 a 20 minutos conforme necessário.
(3) Após a conclusão da esterilização, feche a porta de entrada de ar, retire os itens e espere esfriar até a temperatura ambiente, coloque-os em uma incubadora a 37°C durante a noite e continue a esterilizar de acordo com o método acima no dia seguinte. Faça isso três vezes para atingir o objetivo da esterilização.
2. Como usar o coagulador de soro:
Quando o meio de cultura contém ingredientes especiais, como soro ou ovos, o calor elevado destruirá seus nutrientes. Portanto, a baixa temperatura pode ser usada para coagular o soro e atingir fins de esterilização:
(1) Ao utilizar soro esterilizado por este método para alíquotas, as operações assépticas devem ser rigorosamente seguidas, e os tubos de ensaio e placas também devem ser esterilizados antes do uso;
(2) Transforme o meio de cultura em uma inclinação ou camada alta conforme necessário. Depois de adicionar água suficiente, conecte a fonte de alimentação, aumente a temperatura para 75 ~ 90°C por uma hora e depois esterilize. Coloque-o numa incubadora a 37°C durante a noite e depois esterilize-o três vezes.
3. Ferva e desinfete:
Você pode usar uma panela fervente ou um esterilizador fervente. Depois que a água ferver, ferva por 5 a 15 minutos. Você também pode adicionar ácido carbólico a 2% à água e fervê-la por 5 minutos. Adicione formaldeído 0,02% e ferva a 80°C por 60 minutos para atingir o objetivo de esterilização. No entanto, a esterilização por ebulição pode ser alcançada. Ao usar intensificadores, deve-se prestar atenção à corrosividade dos itens.
4. Tratamento de esterilização:
Após a esterilização, os itens já estão estéreis em circunstâncias normais. Devem ser cuidadosamente inspecionados e colocados quando retirados do esterilizador para evitar recontaminação;
(1) Retire os itens e verifique imediatamente a integridade da embalagem. Se houver dano ou o tampão for removido, ele não pode ser usado como material estéril;
(2) Os itens retirados não podem ser utilizados como itens estéreis se sua embalagem estiver obviamente embebida em água;
(3) O meio de cultura ou reagentes devem ser verificados para ver se atendem à cor ou estado após a esterilização. Aqueles que não atenderem aos requisitos deverão ser descartados;
(4) Para recipientes abertos/fechados, os orifícios da tela devem ser fechados ao retirá-los;
(5) Se os itens retirados caírem no chão, forem extraviados em local sujo ou manchados com água, serão considerados contaminados e não poderão ser utilizados como itens estéreis;
(6) Os itens esterilizados qualificados retirados devem ser armazenados em depósito ou armário à prova de poeira, sendo estritamente proibido misturá-los com itens não esterilizados;
(7) Todos os itens qualificados devem ser marcados com a data de esterilização e prazo de validade;
(8) Após a conclusão de cada lote de processamento de esterilização, registre o nome, quantidade, temperatura, tempo e operador dos produtos esterilizados.
Requisitos para o tratamento de resíduos tóxicos e bacterianos
Os equipamentos experimentais e as culturas utilizadas em experimentos microbiológicos não devem ser retirados do laboratório sem desinfecção.
1. Os materiais e resíduos contaminados cultivados devem ser colocados em recipientes apertados ou cestos de arame e armazenados centralmente em locais designados até serem autoclavados uniformemente.
2. As culturas contaminadas por microrganismos devem ser autoclavadas a 121°C por 30 minutos.
3. Após o uso, os canudos contaminados devem ser colocados em solução de sabão crioulo a 5% ou solução de ácido carbólico, embebidos por pelo menos 24 horas (o líquido desinfetante não deve ser inferior à altura de imersão) e depois esterilizados em alta pressão a 121°C por 30 minutos.
4. O líquido para colorir e enxaguar os esfregaços geralmente pode ser despejado diretamente no esgoto. O fluido de lavagem para bactérias virulentas deve ser despejado em um copo e esterilizado em alta pressão antes de ser despejado no esgoto. As lâminas coradas são colocadas em solução de sabão de cresol a 5%. Após imersão em água por 24 horas, ferva e lave. As lâminas ou placas utilizadas para testes de aglutinação devem ser autoclavadas e depois lavadas.
5. Após quebrar a cultura, pulverize e molhe imediatamente as partes contaminadas com solução de sabão de cresol a 5% ou solução de ácido carbólico, deixe de molho por meia hora e depois limpe.
Roupas de trabalho contaminadas ou roupas de trabalho, bonés, máscaras, etc. usadas para testes violentos devem ser colocadas em sacos especiais de desinfecção e esterilizadas em alta pressão antes de serem lavadas.
Requisitos médios de preparação
A qualidade do preparo do meio de cultura afetará diretamente o crescimento dos microrganismos, pois vários microrganismos possuem diferentes necessidades nutricionais e diferentes finalidades de cultivo. Os requisitos de preparação para vários meios de cultura são os seguintes:
1. Pese os ingredientes de acordo com a fórmula do meio e dissolva-os em água destilada. A qualidade dos reagentes e medicamentos aplicados deve ser inspecionada antes do uso.
2. Medição e ajuste de pH: a medição de pH deve ser realizada quando o meio de cultura é resfriado à temperatura ambiente, pois há certa diferença de pH em condições de calor ou frio. Quando a medição for concluída, adicione álcali ou ácido de acordo com a quantidade calculada e misture bem. Deve ser testado novamente. O valor do pH do meio de cultura deve ser preciso, caso contrário afetará o crescimento de microrganismos ou afetará a observação dos resultados. No entanto, deve-se notar que a esterilização a alta pressão pode afetar a diminuição ou aumento do pH de alguns meios de cultura, por isso não é aconselhável esterilizar a uma pressão muito alta ou muitas vezes para evitar afetar a qualidade do meio de cultura. Indicadores, desoxicolato de sódio, ágar, etc. são geralmente adicionados após ajustar o pH.
3. O meio de cultura precisa ser mantido limpo para facilitar a observação do crescimento bacteriano. Após o meio de cultura ser aquecido e fervido, ele pode ser filtrado com algodão absorvente ou flanela para remoção de sedimentos. Se necessário, pode ser clarificado com clara de ovo. As tiras de ágar utilizadas devem ser lavadas e secas previamente. Antes de usar, evite afetar a transparência devido a impurezas no ágar.
4. Não devem ser utilizados recipientes de ferro, cobre e outros recipientes para conter o meio de cultura. É melhor usar recipientes de vidro duro neutro e limpo.
5. A esterilização do meio de cultura deve não apenas atingir o objetivo de esterilização completa, mas também atentar para não reduzir seu valor nutricional devido ao aquecimento. Geralmente, 121°C durante 15 minutos é suficiente. Para meios de cultura contendo substâncias intolerantes ao calor elevado, como açúcares e soro, gelatina, etc., devem ser esterilizados por baixa temperatura ou método intermitente. Alguns reagentes que não podem ser aquecidos, como telurito de potássio, gema de ovo, TTC, antibióticos, etc., devem ser resfriados a cerca de 50°C após o ágar básico ser autoclavado e depois adicionado;
6. Após a preparação de cada lote de meio de cultura, deve ser realizado um teste de crescimento estéril e um teste de crescimento das cepas testadas. Se for um meio de cultura bioquímico, use cepas bacterianas padrão para inoculação e cultura e observe os resultados da reação bioquímica. Deve mostrar uma reação normal. O meio de cultura não deve ser armazenado por muito tempo. Se necessário, pode ser armazenado em geladeira a 4°C.
7. Atualmente, existem muitos tipos de meios de cultura secos. Cada lote precisa usar cepas padrão para teste de crescimento ou observação de reações bioquímicas. Vários meios de cultura podem ser usados somente após o teste de crescimento das cepas correspondentes ser bom. Podem ser usados recém-comprados ou secos que estão armazenados há muito tempo. O pH do meio de cultura também deve ser medido no preparo do mesmo, e a dosagem e método devem ser seguidos conforme instruções do produto.
8. Os reagentes químicos, as condições de esterilização, os resultados dos testes de crescimento de cepas e o pessoal de produção usados em cada lote de meio de cultura preparado devem ser registrados para consulta.
Requisitos de coleta e processamento de amostras
1. As amostras de inspeção colhidas devem ser representativas. Durante a amostragem, as matérias-primas, o processamento, o transporte, os métodos e condições de armazenamento do lote de alimentos, as condições de saúde ambiental circundantes, etc. devem ser investigados detalhadamente para verificar se existem fontes de contaminação.
2. De acordo com o tipo e quantidade de alimentos, a quantidade e o método de amostragem devem ser realizados de acordo com os requisitos dos métodos de inspeção padrão.
3. Preste atenção à operação asséptica durante a amostragem, e o recipiente deve ser esterilizado para evitar contaminação microbiana no meio ambiente. O recipiente não deve ser esterilizado com solução de sabão creosal, esterilização com clormetionina, álcool e outros desinfetantes, e não deve conter tais desinfetantes ou antibióticos. Para evitar a morte de microrganismos na amostra, as tesouras, facas e colheres utilizadas também devem ser esterilizadas antes do uso.
4. As amostras devem ser enviadas para a sala de inspeção para inspeção imediatamente após a coleta. O processo de inspeção geralmente não excede 3 horas. Se a distância for longa, pode ser armazenado em um ambiente de 1 ~ 5 ℃. Se precisar ser congelado, deve ser mantido congelado. Envie para inspeção.
5. Após o recebimento da amostra, a sala de inspeção irá registrá-la (nome da amostra, unidade a ser inspecionada, quantidade, data, número, etc.) e observar a aparência da amostra. Se for constatada alguma das seguintes condições, a inspeção poderá ser recusada:
(1) As amostras que foram esterilizadas por métodos especiais de alta pressão, fervura ou outros métodos perderão o seu significado na representação do alimento original;
(2) Garrafas e sacos de alimentos foram abertos, carnes cozidas e seus produtos, aves e outros alimentos cozidos foram quebrados e incompletos, ou seja, a forma original dos alimentos foi perdida (exceto amostras de intoxicação alimentar);
(3) A quantidade de amostragem é insuficiente conforme necessário;
Para amostras submetidas para inspeção que atendam aos requisitos, a sala de inspeção deve realizar a inspeção imediatamente após recebê-las. Se as condições não forem atendidas, devem ser armazenados em geladeira a 4°C, preparados para criar condições a tempo e, em seguida, realizar a inspeção.
6. Ao inspecionar amostras, realize o processamento adequado de acordo com suas diferentes propriedades.
(1) Ao inocular amostras líquidas, elas devem ser bem misturadas e inoculadas de acordo com a quantidade.
(2) Para amostras sólidas, utilizar faca esterilizada para cortar 25g de partes diferentes, colocar em 225mL de soro fisiológico esterilizado ou outras soluções, triturar e misturar com homogeneizador, e inocular de acordo com a quantidade.
(3) Os frascos e sacos de alimentos devem ser abertos por esterilização, e os métodos acima devem ser selecionados de acordo com as características antes da inoculação.
Requisitos de inspeção, registro e relatório de amostras
1. Depois de receber a amostra, a sala de inspeção realizará primeiro uma inspeção de aparência e conduzirá prontamente a inspeção de acordo com os métodos de inspeção padrão nacionais. Durante o processo de inspeção, as operações assépticas devem ser realizadas com cuidado, responsabilidade e rigor para evitarresultado do teste microbianocontaminação no meio ambiente.
2. Os métodos utilizados durante o processo de inspeção da amostra, os fenômenos e resultados ocorridos, etc. devem ser registrados em registros de teste escritos como base para análise e julgamento dos resultados. Os registros devem ser detalhados, claros, autênticos, objetivos e não devem ser alterados ou falsificados.
