Resum dels requisits de les proves microbiològiques
24/01/2024 15:14:33
Els requisits i els passos perproves microbiològiquessón els següents:
Requisits de funcionament asèptic:
1. Heu de portar roba de treball i gorra de treball quan inoculeu bacteris.
2. Quan s'inoculin mostres d'aliments, s'han de portar roba de treball especial, gorres i sabatilles, que s'han de col·locar a la sala tampó de la sala estèril i s'han d'utilitzar després de la desinfecció UV abans del treball.
3. Quan inoculeu mostres d'aliments, renteu-vos les mans amb sabó abans d'entrar a l'habitació estèril, i després netegeu-vos les mans amb una bola de cotó al 75% d'alcohol.
4. Les palletes, plats plans i medis de cultiu utilitzats per a la inoculació s'han d'esterilitzar i esterilitzar. Els envasos no utilitzats no s'han de deixar sense utilitzar després d'obrir el paquet. Els estris metàl·lics s'han d'autoclau o cremar tres vegades amb alcohol al 95% abans d'utilitzar-los.
5. En treure la palla del paquet, la punta de la palla no ha de tocar les parts exposades. Quan utilitzeu la palleta per inocular el tub d'assaig o la placa, la punta de la palla no ha de tocar la vora del tub d'assaig o la placa.
6. La inoculació de mostres i la transferència de bacteris s'han de fer davant d'una làmpada d'alcohol. Quan s'inoculen bacteris o mostres, la palla s'ha d'esterilitzar amb flama després de treure-la de l'envàs i obrir el tap de la proveta.
7. Abans d'inocular els bacteris, tots els cables metàl·lics del bucle d'inoculació i l'agulla s'han de cremar amb una flama i, si cal, s'ha de cremar la connexió entre el bucle, l'agulla i la vareta. El bucle d'inoculació per inocular els bacteris de la tuberculosi i els bacteris virulents s'ha de bullir en aigua bullint durant 5 minuts i després cremar-lo amb la flama.
8. Quan xucleu líquid bacterian o mostres amb una palleta, feu servir la punta de goma corresponent per xuclar-lo, i no el xucleu directament amb la boca.
Requisits d'ús de la sala estèril:
1. Les finestres que donen a l'exterior de la sala estèril han de ser de doble vidre i estan segellades. No s'han d'obrir a voluntat. Hi hauria d'haver una sala d'amortiment i una porta corredissa corresponent a la mida de la sala estèril. També hi hauria d'haver una petita finestra de 0,5~0,7m2. En preparació per passar articles després d'entrar a la sala estèril.
2. La sala estèril s'ha de mantenir neta. Després del treball, s'ha de desinfectar amb una solució de sabó de cresol del 2% al 3%, s'ha de netejar la superfície de treball i no s'han d'emmagatzemar articles no relacionats amb l'experiment.
3. La porta de l'habitació estèril s'ha de tancar bé abans i després de l'ús, i la làmpada ultraviolada s'ha d'encendre. Si s'utilitza una làmpada ultraviolada suspesa per a la desinfecció, cal una làmpada ultraviolada de 30 W. La distància és d'1,0 m i el temps d'irradiació no és inferior a 30 minuts. Quan utilitzeu llums ultraviolada, s'ha de prestar atenció a Funcionar directament sota llum ultraviolada per evitar danys. El llum s'ha de netejar suaument amb una bola de cotó amb alcohol cada dues setmanes per eliminar la pols i el greix per reduir l'impacte de la penetració ultraviolada.
4. En processar i inocular mostres d'aliments, entrar a la sala estèril per operar i no se'ls permet entrar ni sortir a voluntat. Si cal passar articles, es poden passar per la petita finestra.
5. Si cal instal·lar aire condicionat a la sala estèril, hi hauria d'haver un dispositiu de filtratge.
Requisits de desinfecció i esterilització
Cristalleria, estris metàl·lics i medis de cultiu utilitzatsproves microbiològiques, els cultius contaminats i inoculats, etc. s'han d'esterilitzar abans del seu ús. Mètodes d'esterilització amb vapor per calor seca i calor humida.
1. Preparació abans de l'esterilització
(1) Tots els articles que s'han d'esterilitzar s'han de rentar i assecar primer. Els objectes de vidre com les palletes i els plats plans s'han d'empaquetar amb paper. Si s'utilitzen tubs metàl·lics, s'han d'obrir els forats de ventilació.
(2) Emboliqui el tap del matràs triangular que conté el medi de cultiu amb paper, tapeu el tub d'assaig i traieu el nucli de la xeringa i emboliqueu-lo amb una gasa.
2. instal·lar
(1) Esterilitzador de calor sec: els articles no han d'estar amuntegats i no poden tocar les quatre parets de la caixa.
(2) Olla de vapor d'alta pressió gran: col·loqueu articles esterilitzats, emboliqueu-los per separat i poseu-los directament al cilindre d'esterilització. No amuntegueu els articles.
3. Inspecció d'equips
(1) Comproveu si l'interruptor de la porta és flexible, si l'anell de goma està danyat i si és pla.
(2) Comproveu si el manòmetre es manté a la posició zero quan s'esgota el vapor, tanqueu la porta i la coberta, ventilau el vapor o la calor i observeu si hi ha fuites d'aire, si les condicions marcades pel manòmetre i el termòmetre coincideixen i si la canonada està bloquejada.
(3) Per als esterilitzadors amb dispositius de control automàtic de programes electrònics, el programa especificat s'ha de comprovar abans d'utilitzar-lo per veure si compleix els requisits d'esterilització.
4. Tractament d'esterilització
(1) Mètode d'esterilització per calor sec:
Aquest mètode és adequat per a articles que no danyin, es deteriorin o s'evaporin en condicions de calor seca. S'utilitza més habitualment per esterilitzar cristalleria, productes metàl·lics, productes ceràmics, etc.
① Els instruments i els estris s'han de rentar abans d'assecar-los per evitar que la brutícia adherida a la superfície es carbonitzi.
② Durant l'esterilització, els articles no s'han d'amuntegar, no contactar directament amb la part inferior i la paret de la caixa i deixar espais entre els articles.
③ Durant l'esterilització, tanqueu la porta amb força, connecteu la font d'alimentació, obriu el forat d'escapament durant uns 30 minuts per eliminar l'aire fred de l'esterilitzador, ajusteu la llum indicadora quan la temperatura pugi a 160 ° C i mantingueu-la durant 1,5 a 2 hores.
④Un cop finalitzada l'esterilització o durant el procés d'augment de la temperatura, la porta s'ha d'obrir per sota dels 60 °C.
(2) S'han de seguir els passos següents quan s'utilitza una olla a pressió portàtil o un esterilitzador de vapor a pressió vertical:
① Afegiu 3L d'aigua al cos principal de l'olla a pressió portàtil i 16L d'aigua a l'olla a pressió vertical (la quantitat d'aigua s'ha de reposar quan es reutilitza, i l'aigua s'ha de substituir si es torna tèrbol);
② Per a una olla a pressió portàtil, introduïu el tub d'escapament de la coberta superior al tub quadrat de la paret interior del barril d'esterilització (no s'han d'utilitzar esterilitzadors sense mànegues o amb mànegues corroïdes i esquerdades);
③ Cobriu la coberta superior i premeu-la amb força per evitar fuites d'aire; col·loqueu l'esterilitzador a la font de foc per escalfar-lo, engegueu l'olla a pressió vertical i obriu la vàlvula d'escapament a la coberta superior per deixar sortir l'aire (aire d'escapament durant 10 a 15 minuts després que l'aigua bulli));
④ Tanqueu la vàlvula d'escapament per augmentar la pressió del vapor als requisits especificats i mantenir-la durant el temps especificat (segons la naturalesa dels articles esterilitzats i les circumstàncies rellevants);
⑤ Un cop arribat al temps especificat, per als articles que s'han d'assecar, obriu immediatament la vàlvula d'escapament per descarregar el vapor. Quan la pressió torni a zero, refredeu-lo de manera natural a 60 °C i després obriu la tapa per treure els articles. Si es tracta d'un element líquid, no obriu la vàlvula d'escapament. L'olla s'ha de treure immediatament de la font de calor i deixar-la refredar de manera natural fins que la pressió torni a zero i la temperatura baixi dels 60 °C abans d'obrir la tapa per treure el contingut per evitar la descompressió sobtada del líquid per ebullició violenta o explosió del recipient.
(3) Seguiu els passos següents per utilitzar l'esterilitzador de vapor de l'olla a pressió horitzontal:
① Tanqueu la porta de l'olla amb força, obriu la vàlvula d'entrada d'aire, introduïu vapor a l'altell per preescalfar i l'aire fred de l'altell es descarregarà automàticament a través de la barrera d'aire;
②Un cop la capa intercalada arriba a la temperatura predeterminada, obriu la vàlvula d'entrada d'aire de la cambra de l'olla, introduïu el vapor a la cambra de l'olla i l'aire fred de la cambra de l'olla es descarregarà automàticament a través de l'aturador d'aire de la cambra de l'olla;
③ Quan la pressió i la temperatura de la cambra de l'olla arriben a la pressió especificada, ajusteu la vàlvula d'entrada d'aire per mantenir-la constant;
④ Refredar la temperatura de manera natural o artificial a 60 ℃ abans d'obrir la porta per treure els articles. No utilitzeu el mètode de descàrrega ràpida de vapor per evitar la caiguda de pressió sobtada, l'ebullició violenta del líquid o l'explosió del recipient;
⑤ Quan s'utilitza un programa automàtic - esterilitzador de vapor a pressió controlada, després de col·locar els articles i tancar la porta amb força, s'ha de prémer l'interruptor corresponent segons la categoria dels articles perquè l'esterilització es pugui dur a terme automàticament segons els procediments requerits. Durant l'esterilització, s'ha d'utilitzar l'instrument adjunt per registrar la temperatura i el temps. Per a una referència futura, els requisits de funcionament haurien de complir estrictament les instruccions del fabricant;
5. Temps i temperatura d'esterilització
(1) La temperatura d'esterilització de l'esterilitzador de calor sec és de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura d'esterilització i temps de l'esterilitzador de vapor a pressió
Mètode d'esterilització intermitent
1. Mètode d'esterilització:
Utilitzeu esterilització amb vapor sense pressió. Algunes substàncies es destrueixen fàcilment per esterilització amb vapor d'alta pressió, de manera que aquest mètode es pot utilitzar per a l'esterilització.
(1) Col·loqueu els articles a esterilitzar a l'olla, tapeu la coberta superior, obriu la sortida de desguàs i buideu l'aigua restant a l'olla.
(2) Tanqueu la sortida de desguàs, obriu la porta d'entrada d'aire i desinfecteu durant 10 a 20 minuts segons sigui necessari.
(3) Un cop finalitzada l'esterilització, tanqueu la porta d'entrada d'aire, traieu els articles i espereu que es refredin a temperatura ambient, poseu-los en una incubadora a 37 ° C durant la nit i continueu esterilitzant segons el mètode anterior l'endemà. Feu-ho tres vegades per aconseguir el propòsit de l'esterilització.
2. Com utilitzar el coagulador de sèrum:
Quan el medi de cultiu conté ingredients especials com sèrum o ous, la calor alta destruirà els seus nutrients. Per tant, la baixa temperatura es pot utilitzar per coagular el sèrum i aconseguir propòsits d'esterilització:
(1) Quan s'utilitza sèrum esterilitzat per aquest mètode en alíquotes, s'han de seguir estrictament les operacions asèptiques i també s'han d'esterilitzar els tubs d'assaig i les plaques abans d'utilitzar-los;
(2) Feu que el medi de cultiu sigui un pendent o una capa alta segons sigui necessari. Després d'afegir prou aigua, connecteu la font d'alimentació, augmenteu la temperatura a 75 ~ 90 ° C durant una hora i després esterilitzeu-la. Col·loqueu-lo en una incubadora a 37 ° C durant la nit i després esterilitzeu-lo tres vegades.
3. Bullir i desinfectar:
Podeu utilitzar una olla bullint o un esterilitzador bullint. Quan l'aigua bulli, bulliu-la entre 5 i 15 minuts. També podeu afegir un 2% d'àcid carbòlic a l'aigua i bullir-la durant 5 minuts. Afegiu formaldehid al 0,02% i bulliu-lo a 80 °C durant 60 minuts per aconseguir el propòsit de l'esterilització. Tanmateix, es pot aconseguir l'esterilització per ebullició. Quan s'utilitzen potenciadors, s'ha de parar atenció a la corrosivitat dels articles.
4. Tractament d'esterilització:
Després de l'esterilització, els articles ja són estèrils en circumstàncies normals. S'han d'inspeccionar acuradament i col·locar-los quan es treuen de l'esterilitzador per evitar la recontaminació;
(1) Traieu els articles i comproveu immediatament la integritat de l'embalatge. Si hi ha danys o es treu el tampó, no es pot utilitzar com a articles estèrils;
(2) Els articles trets no es poden utilitzar com a articles estèrils si el seu embalatge està òbviament remullat amb aigua;
(3) El medi de cultiu o els reactius s'han de comprovar per veure si compleixen el color o l'estat després de l'esterilització. Els que no compleixin els requisits s'han de descartar;
(4) Per als contenidors oberts/tancats, els forats de la pantalla s'han de tancar en treure'ls;
(5) Si els articles retirats cauen a terra, es troben fora de lloc en un lloc brut o estan tacats d'aigua, es consideren contaminats i no es poden utilitzar com a articles estèrils;
(6) Els articles esterilitzats qualificats extrets s'han d'emmagatzemar a l'emmagatzematge o a l'armari a prova de pols, i està estrictament prohibit barrejar-los amb articles no esterilitzats;
(7) Tots els articles qualificats han d'estar marcats amb la data d'esterilització i la data de caducitat;
(8) Després de completar cada lot de processament d'esterilització, registreu el nom, la quantitat, la temperatura, el temps i l'operador dels productes esterilitzats.
Requisits per al tractament de residus tòxics i bacterians
L'equip experimental i els cultius utilitzats en experiments microbiològics no s'han de treure del laboratori sense desinfecció.
1. Els materials i els residus contaminats cultivats s'han de col·locar en contenidors estancs o cistelles de filferro i s'han d'emmagatzemar centralment en llocs designats fins que s'autoclau de manera uniforme.
2. Els cultius contaminats per microorganismes s'han d'autoclau a 121°C durant 30 minuts.
3. Després de l'ús, les palletes contaminades s'han de col·locar en una solució de sabó crioll al 5% o en una solució d'àcid carbòlic, remullades durant almenys 24 hores (el líquid desinfectant no ha de ser inferior a l'alçada de remull) i després esterilitzar-les per alta pressió a 121 °C durant 30 minuts.
4. El líquid per tacar i esbandir els frotis generalment es pot abocar directament a la claveguera. El líquid de rentat per a bacteris virulents s'ha de rentar en un vas de precipitats i esterilitzar-lo a alta pressió abans d'abocar-lo a la claveguera. Les diapositives tacades es posen en una solució de sabó de cresol al 5%. Després de remullar en aigua durant 24 hores, bullir i rentar. Els portaobjectes o plats utilitzats per a les proves d'aglutinació s'han d'autoclau i després rentats.
5. Després de trencar el cultiu, ruixeu i remulleu immediatament les parts contaminades amb una solució de sabó de cresol al 5% o una solució d'àcid carbòlic, deixeu-ho en remull durant mitja hora i després netegeu-les.
La roba de treball contaminada o la roba de treball, gorres, mascaretes, etc. usades per a proves violentes s'han de col·locar en bosses especials de desinfecció i esterilitzar a alta pressió abans de rentar-la.
Requisits de preparació mitjans
La qualitat de la preparació del medi de cultiu afectarà directament el creixement dels microorganismes, ja que diversos microorganismes tenen diferents requisits nutricionals i diferents finalitats de cultiu. Els requisits de preparació per a diversos medis de cultiu són els següents:
1. Peseu els ingredients segons la fórmula mitjana, i després dissoleu-los en aigua destil·lada. La qualitat dels reactius i fàrmacs aplicats s'ha d'inspeccionar abans del seu ús.
2. Mesura i ajust del pH: la mesura del pH s'ha de dur a terme quan el medi de cultiu es refreda a temperatura ambient, perquè hi ha una certa diferència de pH en condicions de calor o fred. Quan s'hagi completat la mesura, afegiu àlcali o àcid segons la quantitat calculada i barregeu bé. S'ha de tornar a provar. El valor del pH del medi de cultiu ha de ser precís, en cas contrari afectarà el creixement de microorganismes o afectarà l'observació dels resultats. No obstant això, cal tenir en compte que l'esterilització a alta pressió pot afectar la disminució o l'augment del pH d'alguns medis de cultiu, per la qual cosa no és aconsellable esterilitzar a una pressió massa alta o massa vegades per no afectar la qualitat del medi de cultiu. Indicadors, desoxicolat de sodi, agar, etc. generalment s'afegeixen després d'ajustar el pH.
3. El medi de cultiu s'ha de mantenir clar per facilitar l'observació del creixement bacterià. Després d'escalfar i bullir el medi de cultiu, es pot filtrar amb cotó absorbent o franel·la per eliminar els sediments. Si cal, es pot aclarir amb clara d'ou. Les tires d'agar utilitzades s'han de rentar i assecar prèviament. Abans d'utilitzar, eviteu afectar la transparència a causa de les impureses de l'agar.
4. No s'han d'utilitzar recipients de ferro, coure i altres per contenir el medi de cultiu. És millor utilitzar recipients de vidre dur neutre i net.
5. L'esterilització del medi de cultiu no només ha d'aconseguir el propòsit d'una esterilització completa, sinó que també ha de prestar atenció a no reduir el seu valor nutricional a causa de l'escalfament. En general, 121 °C durant 15 minuts és suficient. Per als medis de cultiu que continguin substàncies que siguin intolerants a la calor elevada, com ara sucres i sèrum, gelatina, etc., s'han d'esterilitzar mitjançant un mètode intermitent o a baixa temperatura. Alguns reactius que no es poden escalfar, com ara tel·lurita de potassi, rovell d'ou, TTC, antibiòtics, etc., s'han de refredar a uns 50 °C després que l'agar bàsic s'autoclau i després s'afegeix;
6. Després de preparar cada lot de medis de cultiu, s'ha de realitzar una prova de creixement estèril i una prova de creixement de les soques provades. Si es tracta d'un medi de cultiu bioquímic, utilitzeu soques bacterianes estàndard per a la inoculació i el cultiu, i observeu els resultats de la reacció bioquímica. Hauria de mostrar una reacció normal. El medi de cultiu no s'ha d'emmagatzemar massa temps. Si cal, es pot emmagatzemar a la nevera a 4ºC.
7. Actualment, hi ha molts tipus de medis de cultiu sec. Cada lot ha d'utilitzar soques estàndard per a proves de creixement o observació de reaccions bioquímiques. Només es poden utilitzar diversos medis de cultiu després que la prova de creixement de les soques corresponents sigui bona. Es poden utilitzar els acabats de comprar o els assecats que s'han emmagatzemat durant molt de temps. També s'ha de mesurar el pH del medi de cultiu a l'hora de preparar-lo, i s'ha de seguir la dosi i el mètode segons les instruccions del producte.
8. Els reactius químics, les condicions d'esterilització, els resultats de les proves de creixement de la soca i el personal de producció utilitzats en cada lot de medis de cultiu preparats s'han de registrar per a la consulta.
Requisits de recollida i processament de mostres
1. Les mostres d'inspecció recollides han de ser representatives. Quan es prenen mostres, s'han d'investigar detalladament les matèries primeres, el processament, el transport, els mètodes d'emmagatzematge i les condicions del lot d'aliments, les condicions de salut ambiental, etc., per comprovar si hi ha fonts de contaminació.
2. Segons el tipus i la quantitat d'aliment, la quantitat i el mètode de mostreig s'han de dur a terme d'acord amb els requisits dels mètodes d'inspecció estàndard.
3. Presteu atenció al funcionament asèptic quan feu el mostreig i l'envàs s'ha d'esterilitzar per evitar la contaminació microbiana del medi ambient. El recipient no s'ha d'esterilitzar amb solució de sabó creosal, esterilització amb clormetionina, alcohol i altres desinfectants, i no ha de contenir aquests desinfectants o antibiòtics. Per tal d'evitar matar els microorganismes de la mostra, les tisores, els ganivets i les culleres utilitzats també s'han d'esterilitzar abans d'utilitzar-los.
4. Les mostres s'han d'enviar a la sala d'inspecció per a la seva inspecció immediatament després de la recollida. El procés d'inspecció generalment no supera les 3 hores. Si la distància és llarga, es pot emmagatzemar en un entorn d'1 ~ 5 ℃. Si s'ha de congelar, s'ha de mantenir en estat congelat. Presentar a inspecció.
5. Després de rebre la mostra, la sala d'inspecció la registrarà (nom de la mostra, unitat d'inspecció, quantitat, data, número, etc.) i observarà l'aspecte de la mostra. Si es troba alguna de les condicions següents, es pot denegar la inspecció:
(1) Les mostres que s'han esterilitzat mitjançant mètodes especials d'alta pressió, ebullició o altres perdran la seva importància per representar l'aliment original;
(2) S'han obert ampolles i bosses d'aliments, carn cuinada i els seus productes, aus de corral cuites i altres aliments s'han trencat i incomplets, és a dir, s'ha perdut la forma original dels aliments (excepte les mostres d'intoxicació alimentària);
(3) La quantitat de mostreig és insuficient segons cal;
Per a les mostres presentades per a la inspecció que compleixin els requisits, la sala d'inspecció hauria de realitzar una inspecció immediatament després de rebre-les. Si no es compleixen les condicions, s'han d'emmagatzemar en una nevera a 4 °C, preparar-se per crear les condicions a temps i, a continuació, realitzar una inspecció.
6. A l'hora d'inspeccionar mostres, realitzar un tractament adequat segons les seves diferents propietats.
(1) Quan s'inoculen mostres líquides, s'han de barrejar i inocular a fons segons la quantitat.
(2) Per a mostres sòlides, utilitzeu un ganivet esterilitzat per tallar 25 g de peces diferents, col·loqueu-les en 225 ml de solució salina esterilitzada o altres solucions, tritureu i barregeu amb un homogeneïtzador i inoculeu segons la quantitat.
(3) Les ampolles i bosses d'aliments s'han d'obrir per esterilització i els mètodes anteriors s'han de seleccionar segons les característiques abans de la inoculació.
Requisits d'inspecció, registre i informes de mostres
1. Després de rebre la mostra, la sala d'inspecció realitzarà primer una inspecció d'aparença i la realitzarà ràpidament d'acord amb els mètodes d'inspecció estàndard nacionals. Durant el procés d'inspecció, les operacions asèptiques s'han de realitzar amb cura, responsabilitat i estrictament per evitar-lesresultat de la prova microbianacontaminació en el medi ambient.
2. Els mètodes utilitzats durant el procés d'inspecció de mostres, els fenòmens i resultats que s'han produït, etc. s'han d'inscriure en registres de proves escrites com a base per a l'anàlisi i el judici dels resultats. Els registres han de ser detallats, clars, autèntics, objectius i no han de ser alterats ni falsificats.
Requisits de funcionament asèptic:
1. Heu de portar roba de treball i gorra de treball quan inoculeu bacteris.
2. Quan s'inoculin mostres d'aliments, s'han de portar roba de treball especial, gorres i sabatilles, que s'han de col·locar a la sala tampó de la sala estèril i s'han d'utilitzar després de la desinfecció UV abans del treball.
3. Quan inoculeu mostres d'aliments, renteu-vos les mans amb sabó abans d'entrar a l'habitació estèril, i després netegeu-vos les mans amb una bola de cotó al 75% d'alcohol.
4. Les palletes, plats plans i medis de cultiu utilitzats per a la inoculació s'han d'esterilitzar i esterilitzar. Els envasos no utilitzats no s'han de deixar sense utilitzar després d'obrir el paquet. Els estris metàl·lics s'han d'autoclau o cremar tres vegades amb alcohol al 95% abans d'utilitzar-los.
5. En treure la palla del paquet, la punta de la palla no ha de tocar les parts exposades. Quan utilitzeu la palleta per inocular el tub d'assaig o la placa, la punta de la palla no ha de tocar la vora del tub d'assaig o la placa.
6. La inoculació de mostres i la transferència de bacteris s'han de fer davant d'una làmpada d'alcohol. Quan s'inoculen bacteris o mostres, la palla s'ha d'esterilitzar amb flama després de treure-la de l'envàs i obrir el tap de la proveta.
7. Abans d'inocular els bacteris, tots els cables metàl·lics del bucle d'inoculació i l'agulla s'han de cremar amb una flama i, si cal, s'ha de cremar la connexió entre el bucle, l'agulla i la vareta. El bucle d'inoculació per inocular els bacteris de la tuberculosi i els bacteris virulents s'ha de bullir en aigua bullint durant 5 minuts i després cremar-lo amb la flama.
8. Quan xucleu líquid bacterian o mostres amb una palleta, feu servir la punta de goma corresponent per xuclar-lo, i no el xucleu directament amb la boca.
Requisits d'ús de la sala estèril:
1. Les finestres que donen a l'exterior de la sala estèril han de ser de doble vidre i estan segellades. No s'han d'obrir a voluntat. Hi hauria d'haver una sala d'amortiment i una porta corredissa corresponent a la mida de la sala estèril. També hi hauria d'haver una petita finestra de 0,5~0,7m2. En preparació per passar articles després d'entrar a la sala estèril.
2. La sala estèril s'ha de mantenir neta. Després del treball, s'ha de desinfectar amb una solució de sabó de cresol del 2% al 3%, s'ha de netejar la superfície de treball i no s'han d'emmagatzemar articles no relacionats amb l'experiment.
3. La porta de l'habitació estèril s'ha de tancar bé abans i després de l'ús, i la làmpada ultraviolada s'ha d'encendre. Si s'utilitza una làmpada ultraviolada suspesa per a la desinfecció, cal una làmpada ultraviolada de 30 W. La distància és d'1,0 m i el temps d'irradiació no és inferior a 30 minuts. Quan utilitzeu llums ultraviolada, s'ha de prestar atenció a Funcionar directament sota llum ultraviolada per evitar danys. El llum s'ha de netejar suaument amb una bola de cotó amb alcohol cada dues setmanes per eliminar la pols i el greix per reduir l'impacte de la penetració ultraviolada.
4. En processar i inocular mostres d'aliments, entrar a la sala estèril per operar i no se'ls permet entrar ni sortir a voluntat. Si cal passar articles, es poden passar per la petita finestra.
5. Si cal instal·lar aire condicionat a la sala estèril, hi hauria d'haver un dispositiu de filtratge.
Requisits de desinfecció i esterilització
Cristalleria, estris metàl·lics i medis de cultiu utilitzatsproves microbiològiques, els cultius contaminats i inoculats, etc. s'han d'esterilitzar abans del seu ús. Mètodes d'esterilització amb vapor per calor seca i calor humida.
1. Preparació abans de l'esterilització
(1) Tots els articles que s'han d'esterilitzar s'han de rentar i assecar primer. Els objectes de vidre com les palletes i els plats plans s'han d'empaquetar amb paper. Si s'utilitzen tubs metàl·lics, s'han d'obrir els forats de ventilació.
(2) Emboliqui el tap del matràs triangular que conté el medi de cultiu amb paper, tapeu el tub d'assaig i traieu el nucli de la xeringa i emboliqueu-lo amb una gasa.
2. instal·lar
(1) Esterilitzador de calor sec: els articles no han d'estar amuntegats i no poden tocar les quatre parets de la caixa.
(2) Olla de vapor d'alta pressió gran: col·loqueu articles esterilitzats, emboliqueu-los per separat i poseu-los directament al cilindre d'esterilització. No amuntegueu els articles.
3. Inspecció d'equips
(1) Comproveu si l'interruptor de la porta és flexible, si l'anell de goma està danyat i si és pla.
(2) Comproveu si el manòmetre es manté a la posició zero quan s'esgota el vapor, tanqueu la porta i la coberta, ventilau el vapor o la calor i observeu si hi ha fuites d'aire, si les condicions marcades pel manòmetre i el termòmetre coincideixen i si la canonada està bloquejada.
(3) Per als esterilitzadors amb dispositius de control automàtic de programes electrònics, el programa especificat s'ha de comprovar abans d'utilitzar-lo per veure si compleix els requisits d'esterilització.
4. Tractament d'esterilització
(1) Mètode d'esterilització per calor sec:
Aquest mètode és adequat per a articles que no danyin, es deteriorin o s'evaporin en condicions de calor seca. S'utilitza més habitualment per esterilitzar cristalleria, productes metàl·lics, productes ceràmics, etc.
① Els instruments i els estris s'han de rentar abans d'assecar-los per evitar que la brutícia adherida a la superfície es carbonitzi.
② Durant l'esterilització, els articles no s'han d'amuntegar, no contactar directament amb la part inferior i la paret de la caixa i deixar espais entre els articles.
③ Durant l'esterilització, tanqueu la porta amb força, connecteu la font d'alimentació, obriu el forat d'escapament durant uns 30 minuts per eliminar l'aire fred de l'esterilitzador, ajusteu la llum indicadora quan la temperatura pugi a 160 ° C i mantingueu-la durant 1,5 a 2 hores.
④Un cop finalitzada l'esterilització o durant el procés d'augment de la temperatura, la porta s'ha d'obrir per sota dels 60 °C.
(2) S'han de seguir els passos següents quan s'utilitza una olla a pressió portàtil o un esterilitzador de vapor a pressió vertical:
① Afegiu 3L d'aigua al cos principal de l'olla a pressió portàtil i 16L d'aigua a l'olla a pressió vertical (la quantitat d'aigua s'ha de reposar quan es reutilitza, i l'aigua s'ha de substituir si es torna tèrbol);
② Per a una olla a pressió portàtil, introduïu el tub d'escapament de la coberta superior al tub quadrat de la paret interior del barril d'esterilització (no s'han d'utilitzar esterilitzadors sense mànegues o amb mànegues corroïdes i esquerdades);
③ Cobriu la coberta superior i premeu-la amb força per evitar fuites d'aire; col·loqueu l'esterilitzador a la font de foc per escalfar-lo, engegueu l'olla a pressió vertical i obriu la vàlvula d'escapament a la coberta superior per deixar sortir l'aire (aire d'escapament durant 10 a 15 minuts després que l'aigua bulli));
④ Tanqueu la vàlvula d'escapament per augmentar la pressió del vapor als requisits especificats i mantenir-la durant el temps especificat (segons la naturalesa dels articles esterilitzats i les circumstàncies rellevants);
⑤ Un cop arribat al temps especificat, per als articles que s'han d'assecar, obriu immediatament la vàlvula d'escapament per descarregar el vapor. Quan la pressió torni a zero, refredeu-lo de manera natural a 60 °C i després obriu la tapa per treure els articles. Si es tracta d'un element líquid, no obriu la vàlvula d'escapament. L'olla s'ha de treure immediatament de la font de calor i deixar-la refredar de manera natural fins que la pressió torni a zero i la temperatura baixi dels 60 °C abans d'obrir la tapa per treure el contingut per evitar la descompressió sobtada del líquid per ebullició violenta o explosió del recipient.
(3) Seguiu els passos següents per utilitzar l'esterilitzador de vapor de l'olla a pressió horitzontal:
① Tanqueu la porta de l'olla amb força, obriu la vàlvula d'entrada d'aire, introduïu vapor a l'altell per preescalfar i l'aire fred de l'altell es descarregarà automàticament a través de la barrera d'aire;
②Un cop la capa intercalada arriba a la temperatura predeterminada, obriu la vàlvula d'entrada d'aire de la cambra de l'olla, introduïu el vapor a la cambra de l'olla i l'aire fred de la cambra de l'olla es descarregarà automàticament a través de l'aturador d'aire de la cambra de l'olla;
③ Quan la pressió i la temperatura de la cambra de l'olla arriben a la pressió especificada, ajusteu la vàlvula d'entrada d'aire per mantenir-la constant;
④ Refredar la temperatura de manera natural o artificial a 60 ℃ abans d'obrir la porta per treure els articles. No utilitzeu el mètode de descàrrega ràpida de vapor per evitar la caiguda de pressió sobtada, l'ebullició violenta del líquid o l'explosió del recipient;
⑤ Quan s'utilitza un programa automàtic - esterilitzador de vapor a pressió controlada, després de col·locar els articles i tancar la porta amb força, s'ha de prémer l'interruptor corresponent segons la categoria dels articles perquè l'esterilització es pugui dur a terme automàticament segons els procediments requerits. Durant l'esterilització, s'ha d'utilitzar l'instrument adjunt per registrar la temperatura i el temps. Per a una referència futura, els requisits de funcionament haurien de complir estrictament les instruccions del fabricant;
5. Temps i temperatura d'esterilització
(1) La temperatura d'esterilització de l'esterilitzador de calor sec és de 160 ℃, 1,5 ~ 2 h.
(2) Temperatura d'esterilització i temps de l'esterilitzador de vapor a pressió
Mètode d'esterilització intermitent
1. Mètode d'esterilització:
Utilitzeu esterilització amb vapor sense pressió. Algunes substàncies es destrueixen fàcilment per esterilització amb vapor d'alta pressió, de manera que aquest mètode es pot utilitzar per a l'esterilització.
(1) Col·loqueu els articles a esterilitzar a l'olla, tapeu la coberta superior, obriu la sortida de desguàs i buideu l'aigua restant a l'olla.
(2) Tanqueu la sortida de desguàs, obriu la porta d'entrada d'aire i desinfecteu durant 10 a 20 minuts segons sigui necessari.
(3) Un cop finalitzada l'esterilització, tanqueu la porta d'entrada d'aire, traieu els articles i espereu que es refredin a temperatura ambient, poseu-los en una incubadora a 37 ° C durant la nit i continueu esterilitzant segons el mètode anterior l'endemà. Feu-ho tres vegades per aconseguir el propòsit de l'esterilització.
2. Com utilitzar el coagulador de sèrum:
Quan el medi de cultiu conté ingredients especials com sèrum o ous, la calor alta destruirà els seus nutrients. Per tant, la baixa temperatura es pot utilitzar per coagular el sèrum i aconseguir propòsits d'esterilització:
(1) Quan s'utilitza sèrum esterilitzat per aquest mètode en alíquotes, s'han de seguir estrictament les operacions asèptiques i també s'han d'esterilitzar els tubs d'assaig i les plaques abans d'utilitzar-los;
(2) Feu que el medi de cultiu sigui un pendent o una capa alta segons sigui necessari. Després d'afegir prou aigua, connecteu la font d'alimentació, augmenteu la temperatura a 75 ~ 90 ° C durant una hora i després esterilitzeu-la. Col·loqueu-lo en una incubadora a 37 ° C durant la nit i després esterilitzeu-lo tres vegades.
3. Bullir i desinfectar:
Podeu utilitzar una olla bullint o un esterilitzador bullint. Quan l'aigua bulli, bulliu-la entre 5 i 15 minuts. També podeu afegir un 2% d'àcid carbòlic a l'aigua i bullir-la durant 5 minuts. Afegiu formaldehid al 0,02% i bulliu-lo a 80 °C durant 60 minuts per aconseguir el propòsit de l'esterilització. Tanmateix, es pot aconseguir l'esterilització per ebullició. Quan s'utilitzen potenciadors, s'ha de parar atenció a la corrosivitat dels articles.
4. Tractament d'esterilització:
Després de l'esterilització, els articles ja són estèrils en circumstàncies normals. S'han d'inspeccionar acuradament i col·locar-los quan es treuen de l'esterilitzador per evitar la recontaminació;
(1) Traieu els articles i comproveu immediatament la integritat de l'embalatge. Si hi ha danys o es treu el tampó, no es pot utilitzar com a articles estèrils;
(2) Els articles trets no es poden utilitzar com a articles estèrils si el seu embalatge està òbviament remullat amb aigua;
(3) El medi de cultiu o els reactius s'han de comprovar per veure si compleixen el color o l'estat després de l'esterilització. Els que no compleixin els requisits s'han de descartar;
(4) Per als contenidors oberts/tancats, els forats de la pantalla s'han de tancar en treure'ls;
(5) Si els articles retirats cauen a terra, es troben fora de lloc en un lloc brut o estan tacats d'aigua, es consideren contaminats i no es poden utilitzar com a articles estèrils;
(6) Els articles esterilitzats qualificats extrets s'han d'emmagatzemar a l'emmagatzematge o a l'armari a prova de pols, i està estrictament prohibit barrejar-los amb articles no esterilitzats;
(7) Tots els articles qualificats han d'estar marcats amb la data d'esterilització i la data de caducitat;
(8) Després de completar cada lot de processament d'esterilització, registreu el nom, la quantitat, la temperatura, el temps i l'operador dels productes esterilitzats.
Requisits per al tractament de residus tòxics i bacterians
L'equip experimental i els cultius utilitzats en experiments microbiològics no s'han de treure del laboratori sense desinfecció.
1. Els materials i els residus contaminats cultivats s'han de col·locar en contenidors estancs o cistelles de filferro i s'han d'emmagatzemar centralment en llocs designats fins que s'autoclau de manera uniforme.
2. Els cultius contaminats per microorganismes s'han d'autoclau a 121°C durant 30 minuts.
3. Després de l'ús, les palletes contaminades s'han de col·locar en una solució de sabó crioll al 5% o en una solució d'àcid carbòlic, remullades durant almenys 24 hores (el líquid desinfectant no ha de ser inferior a l'alçada de remull) i després esterilitzar-les per alta pressió a 121 °C durant 30 minuts.
4. El líquid per tacar i esbandir els frotis generalment es pot abocar directament a la claveguera. El líquid de rentat per a bacteris virulents s'ha de rentar en un vas de precipitats i esterilitzar-lo a alta pressió abans d'abocar-lo a la claveguera. Les diapositives tacades es posen en una solució de sabó de cresol al 5%. Després de remullar en aigua durant 24 hores, bullir i rentar. Els portaobjectes o plats utilitzats per a les proves d'aglutinació s'han d'autoclau i després rentats.
5. Després de trencar el cultiu, ruixeu i remulleu immediatament les parts contaminades amb una solució de sabó de cresol al 5% o una solució d'àcid carbòlic, deixeu-ho en remull durant mitja hora i després netegeu-les.
La roba de treball contaminada o la roba de treball, gorres, mascaretes, etc. usades per a proves violentes s'han de col·locar en bosses especials de desinfecció i esterilitzar a alta pressió abans de rentar-la.
Requisits de preparació mitjans
La qualitat de la preparació del medi de cultiu afectarà directament el creixement dels microorganismes, ja que diversos microorganismes tenen diferents requisits nutricionals i diferents finalitats de cultiu. Els requisits de preparació per a diversos medis de cultiu són els següents:
1. Peseu els ingredients segons la fórmula mitjana, i després dissoleu-los en aigua destil·lada. La qualitat dels reactius i fàrmacs aplicats s'ha d'inspeccionar abans del seu ús.
2. Mesura i ajust del pH: la mesura del pH s'ha de dur a terme quan el medi de cultiu es refreda a temperatura ambient, perquè hi ha una certa diferència de pH en condicions de calor o fred. Quan s'hagi completat la mesura, afegiu àlcali o àcid segons la quantitat calculada i barregeu bé. S'ha de tornar a provar. El valor del pH del medi de cultiu ha de ser precís, en cas contrari afectarà el creixement de microorganismes o afectarà l'observació dels resultats. No obstant això, cal tenir en compte que l'esterilització a alta pressió pot afectar la disminució o l'augment del pH d'alguns medis de cultiu, per la qual cosa no és aconsellable esterilitzar a una pressió massa alta o massa vegades per no afectar la qualitat del medi de cultiu. Indicadors, desoxicolat de sodi, agar, etc. generalment s'afegeixen després d'ajustar el pH.
3. El medi de cultiu s'ha de mantenir clar per facilitar l'observació del creixement bacterià. Després d'escalfar i bullir el medi de cultiu, es pot filtrar amb cotó absorbent o franel·la per eliminar els sediments. Si cal, es pot aclarir amb clara d'ou. Les tires d'agar utilitzades s'han de rentar i assecar prèviament. Abans d'utilitzar, eviteu afectar la transparència a causa de les impureses de l'agar.
4. No s'han d'utilitzar recipients de ferro, coure i altres per contenir el medi de cultiu. És millor utilitzar recipients de vidre dur neutre i net.
5. L'esterilització del medi de cultiu no només ha d'aconseguir el propòsit d'una esterilització completa, sinó que també ha de prestar atenció a no reduir el seu valor nutricional a causa de l'escalfament. En general, 121 °C durant 15 minuts és suficient. Per als medis de cultiu que continguin substàncies que siguin intolerants a la calor elevada, com ara sucres i sèrum, gelatina, etc., s'han d'esterilitzar mitjançant un mètode intermitent o a baixa temperatura. Alguns reactius que no es poden escalfar, com ara tel·lurita de potassi, rovell d'ou, TTC, antibiòtics, etc., s'han de refredar a uns 50 °C després que l'agar bàsic s'autoclau i després s'afegeix;
6. Després de preparar cada lot de medis de cultiu, s'ha de realitzar una prova de creixement estèril i una prova de creixement de les soques provades. Si es tracta d'un medi de cultiu bioquímic, utilitzeu soques bacterianes estàndard per a la inoculació i el cultiu, i observeu els resultats de la reacció bioquímica. Hauria de mostrar una reacció normal. El medi de cultiu no s'ha d'emmagatzemar massa temps. Si cal, es pot emmagatzemar a la nevera a 4ºC.
7. Actualment, hi ha molts tipus de medis de cultiu sec. Cada lot ha d'utilitzar soques estàndard per a proves de creixement o observació de reaccions bioquímiques. Només es poden utilitzar diversos medis de cultiu després que la prova de creixement de les soques corresponents sigui bona. Es poden utilitzar els acabats de comprar o els assecats que s'han emmagatzemat durant molt de temps. També s'ha de mesurar el pH del medi de cultiu a l'hora de preparar-lo, i s'ha de seguir la dosi i el mètode segons les instruccions del producte.
8. Els reactius químics, les condicions d'esterilització, els resultats de les proves de creixement de la soca i el personal de producció utilitzats en cada lot de medis de cultiu preparats s'han de registrar per a la consulta.
Requisits de recollida i processament de mostres
1. Les mostres d'inspecció recollides han de ser representatives. Quan es prenen mostres, s'han d'investigar detalladament les matèries primeres, el processament, el transport, els mètodes d'emmagatzematge i les condicions del lot d'aliments, les condicions de salut ambiental, etc., per comprovar si hi ha fonts de contaminació.
2. Segons el tipus i la quantitat d'aliment, la quantitat i el mètode de mostreig s'han de dur a terme d'acord amb els requisits dels mètodes d'inspecció estàndard.
3. Presteu atenció al funcionament asèptic quan feu el mostreig i l'envàs s'ha d'esterilitzar per evitar la contaminació microbiana del medi ambient. El recipient no s'ha d'esterilitzar amb solució de sabó creosal, esterilització amb clormetionina, alcohol i altres desinfectants, i no ha de contenir aquests desinfectants o antibiòtics. Per tal d'evitar matar els microorganismes de la mostra, les tisores, els ganivets i les culleres utilitzats també s'han d'esterilitzar abans d'utilitzar-los.
4. Les mostres s'han d'enviar a la sala d'inspecció per a la seva inspecció immediatament després de la recollida. El procés d'inspecció generalment no supera les 3 hores. Si la distància és llarga, es pot emmagatzemar en un entorn d'1 ~ 5 ℃. Si s'ha de congelar, s'ha de mantenir en estat congelat. Presentar a inspecció.
5. Després de rebre la mostra, la sala d'inspecció la registrarà (nom de la mostra, unitat d'inspecció, quantitat, data, número, etc.) i observarà l'aspecte de la mostra. Si es troba alguna de les condicions següents, es pot denegar la inspecció:
(1) Les mostres que s'han esterilitzat mitjançant mètodes especials d'alta pressió, ebullició o altres perdran la seva importància per representar l'aliment original;
(2) S'han obert ampolles i bosses d'aliments, carn cuinada i els seus productes, aus de corral cuites i altres aliments s'han trencat i incomplets, és a dir, s'ha perdut la forma original dels aliments (excepte les mostres d'intoxicació alimentària);
(3) La quantitat de mostreig és insuficient segons cal;
Per a les mostres presentades per a la inspecció que compleixin els requisits, la sala d'inspecció hauria de realitzar una inspecció immediatament després de rebre-les. Si no es compleixen les condicions, s'han d'emmagatzemar en una nevera a 4 °C, preparar-se per crear les condicions a temps i, a continuació, realitzar una inspecció.
6. A l'hora d'inspeccionar mostres, realitzar un tractament adequat segons les seves diferents propietats.
(1) Quan s'inoculen mostres líquides, s'han de barrejar i inocular a fons segons la quantitat.
(2) Per a mostres sòlides, utilitzeu un ganivet esterilitzat per tallar 25 g de peces diferents, col·loqueu-les en 225 ml de solució salina esterilitzada o altres solucions, tritureu i barregeu amb un homogeneïtzador i inoculeu segons la quantitat.
(3) Les ampolles i bosses d'aliments s'han d'obrir per esterilització i els mètodes anteriors s'han de seleccionar segons les característiques abans de la inoculació.
Requisits d'inspecció, registre i informes de mostres
1. Després de rebre la mostra, la sala d'inspecció realitzarà primer una inspecció d'aparença i la realitzarà ràpidament d'acord amb els mètodes d'inspecció estàndard nacionals. Durant el procés d'inspecció, les operacions asèptiques s'han de realitzar amb cura, responsabilitat i estrictament per evitar-lesresultat de la prova microbianacontaminació en el medi ambient.
2. Els mètodes utilitzats durant el procés d'inspecció de mostres, els fenòmens i resultats que s'han produït, etc. s'han d'inscriure en registres de proves escrites com a base per a l'anàlisi i el judici dels resultats. Els registres han de ser detallats, clars, autèntics, objectius i no han de ser alterats ni falsificats.
