Sažetak zahtjeva za mikrobiološko ispitivanje
2024.-01-24 15:14:33
Zahtjevi i koraci zamikrobiološko ispitivanjesu kako slijedi:
Zahtjevi za aseptični rad:
1. Morate nositi radnu odjeću i radnu kapu kada inokulirate bakterije.
2. Prilikom inokulacije uzoraka hrane mora se nositi posebna radna odjeća, kape i papuče, koje treba staviti u tampon prostoriju sterilne prostorije i koristiti nakon UV dezinfekcije prije rada.
3. Kada inokulirate uzorke hrane, operite ruke sapunom prije ulaska u sterilnu prostoriju, a zatim obrišite ruke vatom sa 75% alkohola.
4. Slamke, ravne posude i podloge za kulturu koje se koriste za inokulaciju moraju biti sterilizirane i sterilizirane. Neiskorištene ambalaže ne smiju ostati neiskorištene nakon otvaranja pakovanja. Metalno posuđe prije upotrebe treba autoklavirati ili spaliti tri puta sa 95% alkohola.
5. Prilikom vađenja slamke iz pakovanja vrh slamke ne smije dodirivati izložene dijelove. Kada koristite slamku za inokulaciju epruvete ili ploče, vrh slamke ne smije dodirivati rub epruvete ili ploče.
6. Inokulacija uzoraka i prijenos bakterija moraju se obaviti ispred alkoholne lampe. Prilikom inokulacije bakterija ili uzoraka, slamka se mora sterilizirati plamenom nakon što je izvadite iz pakovanja i otvorite čep epruvete.
7. Prije inokulacije bakterija, sve metalne žice inokulacijske petlje i igle treba spaliti plamenom, a po potrebi spoj između petlje, igle i šipke treba spaliti. Inokulacionu petlju za inokulaciju bakterija tuberkuloze i virulentnih bakterija treba kuhati u kipućoj vodi 5 minuta, a zatim spaliti na plamenu.
8. Prilikom sisanja bakterijske tekućine ili uzoraka slamčicom, koristite odgovarajući gumeni vrh za sisanje i nemojte ga sisati direktno ustima.
Zahtjevi za korištenje sterilne sobe:
1. Prozori koji vode ka spoljašnosti sterilne sobe trebaju biti dvostruko zastakljeni i zapečaćeni. Ne treba ih otvarati po volji. Treba postojati tampon prostorija i klizna vrata koja odgovaraju veličini sterilne sobe. Također bi trebao biti mali prozor od 0,5~0,7m2. U pripremi za prenošenje predmeta nakon ulaska u sterilnu prostoriju.
2. Sterilnu sobu treba održavati čistom. Nakon rada treba ga dezinfikovati 2% do 3% rastvorom krezol sapuna, radnu površinu obrisati, a predmete koji nisu u vezi sa eksperimentom ne odlagati.
3. Vrata sterilne sobe treba dobro zatvoriti prije i poslije upotrebe i uključiti ultraljubičastu lampu. Ako se za dezinfekciju koristi zatvorena viseća ultraljubičasta lampa, potrebna je ultraljubičasta lampa od 30 W. Udaljenost je 1,0m, a vrijeme ozračivanja nije manje od 30 minuta. Kada koristite ultraljubičaste lampe, treba obratiti pažnju na rad direktno pod ultraljubičastim svjetlom kako biste izbjegli oštećenja. Lampu je potrebno nježno obrisati alkoholnom vatom svake dvije sedmice kako bi se uklonila prašina i masnoća kako bi se smanjio utjecaj ultraljubičastog prodiranja.
4. Prilikom obrade i inokulacije uzoraka hrane, uđite u sterilnu prostoriju za operaciju i nije dozvoljeno da ulazite ili izlazite po volji. Ako stvari treba da se prenesu, mogu se proći kroz mali prozor.
5. Ako je potrebno ugraditi klima uređaj u sterilnu prostoriju, treba da postoji uređaj za filtriranje.
Zahtjevi za dezinfekciju i sterilizaciju
Stakleno, metalno posuđe i podloge za kulturu koje se koriste zamikrobiološko ispitivanje, kontaminirane i inokulirane kulture itd. moraju se sterilizirati prije upotrebe. Metode sterilizacije suvom toplotom i vlažnom toplotom pod pritiskom.
1. Priprema prije sterilizacije
(1) Sve predmete koje je potrebno sterilizirati prvo treba oprati i osušiti. Stakleno posuđe kao što su slamke i plosnato posuđe treba da bude čvrsto upakovano papirom. Ako se koriste metalne cijevi, otvori za ventilaciju na njima treba otvoriti.
(2) Zamotajte čep trokutaste tikvice u kojoj se nalazi podloga za kulturu papirom, poklopite epruvetu i izvucite jezgro šprica i umotajte ga gazom.
2. instalirati
(1) Sterilizator na suvu toplotu: Predmeti ne smiju biti pretrpani i ne smiju dodirivati četiri zida kutije.
(2) Veliki štednjak na paru pod visokim pritiskom: Stavite sterilizirane predmete, zamotajte ih zasebno i stavite ih direktno u cilindar za sterilizaciju. Nemojte pretrpavati predmete.
3. Pregled opreme
(1) Provjerite da li je prekidač vrata fleksibilan, da li je gumeni prsten oštećen i da li je ravan.
(2) Provjeriti da li manometar ostaje na nultom položaju kada je para iscrpljena, zatvorite vrata i poklopac, prozračite paru ili grijanje i provjerite ima li curenja zraka, da li se poklapaju uvjeti koji su označeni manometrom i termometrom i da li je cjevovod blokiran.
(3) Za sterilizatore sa uređajima za automatsko elektronsko upravljanje programom, navedeni program treba provjeriti prije upotrebe kako bi se utvrdilo da li ispunjava zahtjeve za sterilizaciju.
4. Sterilizacijski tretman
(1) Metoda sterilizacije suhom toplinom:
Ova metoda je prikladna za predmete koji se ne oštećuju, propadaju ili isparavaju u uvjetima suhe topline. Češće se koristi za sterilizaciju staklenog posuđa, metalnih proizvoda, keramičkih proizvoda itd.
①Instrumente i pribor treba oprati prije suhog-pečenja kako bi se spriječilo karboniziranje prljavštine na površini.
② Tokom sterilizacije, predmeti ne smiju biti pretrpani, nemojte direktno dodirivati dno i zid kutije i ostavljati praznine između predmeta.
③ Tokom sterilizacije, dobro zatvorite vrata, priključite napajanje, otvorite izduvni otvor na oko 30 minuta da biste uklonili hladni vazduh iz sterilizatora, podesite indikatorsko svetlo kada temperatura poraste na 160°C i održavajte ga 1,5 do 2 sata.
④Nakon završene sterilizacije ili tokom procesa porasta temperature, vrata se moraju otvoriti ispod 60°C.
(2) Sljedeće korake treba slijediti kada koristite prijenosni ekspres lonac ili vertikalni parni sterilizator pod pritiskom:
① Dodajte 3L vode u glavni dio prijenosnog ekspres lonca, a 16L vode u vertikalni ekspres lonac (količinu vode treba dopuniti kada se ponovo koristi, a vodu treba zamijeniti ako se zamuti);
② Za prijenosni ekspres lonac, umetnite ispušnu cijev na gornjem poklopcu u četvrtastu cijev na unutrašnjem zidu bureta za sterilizaciju (ne smiju se koristiti sterilizatori bez crijeva ili oni sa korodiranim i napuklim crijevima);
③ Pokrijte gornji poklopac i čvrsto ga zategnite da sprečite curenje vazduha; stavite sterilizator na izvor vatre da se zagrije, uključite napajanje vertikalnog ekspres lonca i otvorite ispušni ventil na gornjem poklopcu kako biste ispustili zrak (ispustite zrak 10 do 15 minuta nakon što voda proključa) );
④Zatvorite ispušni ventil kako biste podignuli pritisak pare na propisane zahtjeve i održavali ga određeno vrijeme (u zavisnosti od prirode steriliziranih predmeta i relevantnih okolnosti);
⑤ Nakon što se postigne određeno vrijeme, za predmete koje treba osušiti, odmah otvorite ispušni ventil kako biste ispustili paru. Kada se pritisak vrati na nulu, ohladite ga prirodno na 60°C, a zatim otvorite poklopac da izvadite predmete. Ako se radi o tečnom predmetu, nemojte otvarati ispušni ventil. Lonac treba odmah ukloniti iz izvora topline i ostaviti da se prirodno ohladi dok se tlak ne vrati na nulu i temperatura ne padne ispod 60°C prije otvaranja poklopca kako bi se izvadio sadržaj kako bi se spriječilo iznenadno dekompresija tečnosti od nasilnog ključanja ili eksplozije posude.
(3) Slijedite sljedeće korake da biste koristili parni sterilizator horizontalnog ekspres lonca:
①Čvrsto zatvorite vrata lonca, otvorite ventil za dovod zraka, unesite paru u međuspratu radi predgrijavanja, a hladni zrak u međukatu će se automatski ispustiti kroz vazdušnu barijeru;
②Nakon što međusloj dostigne prethodno određenu temperaturu, otvorite ventil za dovod zraka u komoru za lonac, unesite paru u komoru za lonac, a hladni zrak u komori posude će se automatski ispustiti kroz odvodnik zraka u komori posude;
③Kada pritisak i temperatura u komori posude dostignu specificirani pritisak, podesite ventil za dovod vazduha da ostane konstantan;
④ Prirodno ili umjetno ohladite temperaturu na 60℃ prije otvaranja vrata da izvadite predmete. Nemojte koristiti metodu brzog pražnjenja pare kako biste spriječili iznenadni pad tlaka, burno ključanje tekućine ili eksploziju posude;
⑤ Kada koristite parni sterilizator sa automatskim programom-kontrolisanim pritiskom, nakon postavljanja predmeta i čvrstog zatvaranja vrata, treba pritisnuti odgovarajući prekidač prema kategoriji predmeta kako bi se sterilizacija mogla automatski izvršiti prema potrebnim procedurama. Tokom sterilizacije, priloženi instrument se mora koristiti za snimanje temperature i vremena. Za buduću referencu, radni zahtjevi trebaju biti striktno u skladu s uputama proizvođača;
5. Temperatura i vrijeme sterilizacije
(1) Temperatura sterilizacije sterilizatora suve toplote je 160℃, 1,5~2h.
(2) Temperatura sterilizacije i vrijeme parnog sterilizatora pod pritiskom
Metoda intermitentne sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Koristite parnu sterilizaciju bez pritiska. Neke supstance se lako unište-parnom sterilizacijom pod visokim pritiskom, pa se ova metoda može koristiti za sterilizaciju.
(1) Stavite predmete za sterilizaciju u lonac, pokrijte gornji poklopac, otvorite otvor za odvod i ocijedite preostalu vodu u loncu.
(2) Zatvorite odvodni otvor, otvorite vrata za ulaz zraka i po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minuta.
(3) Nakon što je sterilizacija završena, zatvorite vrata za ulaz zraka, izvadite predmete i pričekajte da se ohlade na sobnu temperaturu, stavite ih u inkubator na 37°C preko noći i nastavite sa sterilizacijom prema gore navedenoj metodi sljedećeg dana. Uradite to tri puta kako biste postigli svrhu sterilizacije.
2. Kako koristiti koagulator seruma:
Kada medij kulture sadrži posebne sastojke kao što su serum ili jaja, visoka toplota će uništiti njegove hranjive sastojke. Stoga se niska temperatura može koristiti za koagulaciju seruma i postizanje svrhe sterilizacije:
(1) Kada se koristi serum steriliziran ovom metodom u alikvotu, moraju se strogo poštovati aseptičke operacije, a epruvete i ploče također moraju biti sterilizirane prije upotrebe;
(2) Po potrebi napravite podlogu za kulturu u nagib ili visoki sloj. Nakon što dodate dovoljno vode, priključite napajanje, podignite temperaturu na 75~90°C na jedan sat i potom sterilizirajte. Stavite ga u inkubator na 37°C preko noći, a zatim ga sterilizirajte tri puta.
3. Prokuhajte i dezinfikujte:
Možete koristiti lonac ili sterilizator. Nakon što voda proključa, kuvajte je 5 do 15 minuta. Također možete dodati 2% karbonske kiseline u vodu i kuhati je 5 minuta. Dodati 0,02% formaldehida i kuvati na 80°C 60 minuta da bi se postigla svrha sterilizacije. Međutim, može se postići sterilizacija ključanjem. Kada koristite pojačivače, treba obratiti pažnju na korozivnost predmeta.
4. Sterilizacijski tretman:
Nakon sterilizacije, predmeti su već sterilni pod normalnim okolnostima. Treba ih pažljivo pregledati i staviti kada se izvade iz sterilizatora kako bi se izbjegla ponovna-kontaminacija;
(1) Izvadite artikle i odmah provjerite integritet ambalaže. Ako postoji oštećenje ili je tampon uklonjen, ne može se koristiti kao sterilni predmet;
(2) Izvađeni predmeti ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti ako je njihova ambalaža očigledno natopljena vodom;
(3) Medij za kulturu ili reagense treba provjeriti da se vidi da li zadovoljavaju boju ili stanje nakon sterilizacije. One koje ne ispunjavaju uslove treba odbaciti;
(4) Za otvorene-zatvorene kontejnere, otvori za sito treba da budu zatvoreni prilikom vađenja;
(5) Ako uklonjeni predmeti padnu na zemlju, budu izgubljeni na nečistom mjestu ili su umrljani vodom, smatraju se kontaminiranim i ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti;
(6) Izvađene kvalifikovane sterilisane artikle treba čuvati u skladištu ili ormanu otpornom na prašinu, i strogo je zabranjeno mešati ih sa nesterilizovanim predmetima;
(7) Svi kvalifikovani artikli treba da budu označeni datumom sterilizacije i rokom trajanja;
(8) Nakon što je svaka serija sterilizacije završena, zabilježite naziv, količinu, temperaturu, vrijeme i operatera steriliziranih proizvoda.
Zahtjevi za tretman toksičnog i bakterijskog otpada
Eksperimentalna oprema i kulture korištene u mikrobiološkim eksperimentima ne smiju se iznositi iz laboratorija bez dezinfekcije.
1. Kultivisani kontaminirani materijali i otpad treba da se stave u čvrste kontejnere ili žičane korpe i da se čuvaju centralno na određenim lokacijama dok se jednolično ne autoklaviraju.
2. Kulture kontaminirane mikroorganizmima moraju se autoklavirati na 121°C 30 minuta.
3. Nakon upotrebe, kontaminirane slamke treba staviti u 5% rastvor kreol sapuna ili rastvor karbonske kiseline, namakati najmanje 24 sata (tečnost za dezinfekciju ne sme biti niža od visine namakanja), a zatim sterilisati pod visokim pritiskom na 121°C 30 minuta.
4. Tečnost za bojenje i ispiranje mrlja se generalno može isprati direktno u kanalizaciju. Tečnost za ispiranje virulentnih bakterija mora se isprati u čašu i sterilisati pod visokim pritiskom pre nego što se izlije u kanalizaciju. Obojena stakalca se stavljaju u 5% rastvor krezol sapuna. Nakon namakanja u vodi 24 sata, prokuhajte i operite. Stakalca ili posude koje se koriste za ispitivanje aglutinacije moraju se autoklavirati, a zatim oprati.
5. Nakon lomljenja kulture, odmah poprskajte i natopite kontaminirane dijelove 5% otopinom krezol sapuna ili otopinom karbonske kiseline, potopite pola sata i zatim obrišite.
Kontaminirana radna odjeća ili radna odjeća, kape, maske itd. koje se nose za nasilne testove treba staviti u posebne vreće za dezinfekciju i sterilizirati pod visokim pritiskom prije pranja.
Srednji zahtjevi za pripremu
Kvalitet pripreme podloge direktno će uticati na rast mikroorganizama, jer različiti mikroorganizmi imaju različite nutritivne potrebe i različite namjene kulture. Zahtjevi za pripremu različitih medija kulture su sljedeći:
1. Izvagajte sastojke prema formuli medija, a zatim ih otopite u destilovanoj vodi. Prije upotrebe treba provjeriti kvalitetu primijenjenih reagensa i lijekova.
2. Merenje i podešavanje pH vrednosti: pH merenje treba da se vrši kada se medijum za kulturu ohladi na sobnu temperaturu, jer postoji određena razlika u pH vrednosti u toplim ili hladnim uslovima. Kada je mjerenje završeno, dodajte lužinu ili kiselinu prema izračunatoj količini i dobro promiješajte. Trebalo bi se ponovo testirati. pH vrijednost podloge za kulturu mora biti tačna, inače će utjecati na rast mikroorganizama ili utjecati na promatranje rezultata. Međutim, treba napomenuti da sterilizacija pod visokim-tlakom može utjecati na smanjenje ili povećanje pH nekih podloga za uzgoj, tako da nije preporučljivo sterilizirati pod previsokim pritiskom ili previše puta kako bi se izbjeglo utjecanje na kvalitetu podloge. Indikatori, natrijum deoksiholat, agar, itd. se generalno dodaju nakon podešavanja pH vrednosti.
3. Podloga za kulturu mora biti čista kako bi se olakšalo promatranje rasta bakterija. Nakon što se podloga za kulturu zagrije i prokuha, može se filtrirati upijajućim pamukom ili flanelom kako bi se uklonio sediment. Po potrebi se može razbistriti bjelanjkom. Trake agara koje se koriste moraju se prethodno oprati i osušiti. Prije upotrebe izbjegavajte utjecaj na prozirnost zbog nečistoća u agaru.
4. Gvozdene, bakarne i druge posude ne treba koristiti za držanje medijuma za kulturu. Bolje je koristiti čiste neutralne posude od tvrdog stakla.
5. Sterilizacijom podloge za kulturu mora biti postignuta ne samo svrha potpune sterilizacije, već i paziti da se zbog zagrijavanja ne smanji njegova nutritivna vrijednost. Generalno, dovoljno je 121°C tokom 15 minuta. Za podloge za kulturu koje sadrže supstance koje su netolerantne na visoku toplotu, kao što su šećeri i serum, želatin, itd., treba sterilisati na niskoj temperaturi ili povremenom metodom. Neki reagensi koji se ne mogu zagrijati, kao što su kalijum telurit, žumance, TTC, antibiotici, itd., treba ohladiti na oko 50°C nakon što se osnovni agar autoklavira i zatim dodati;
6. Nakon što je pripremljena svaka serija medija za kulturu, treba izvršiti sterilni test rasta i test rasta testiranih sojeva. Ako je u pitanju biohemijski medij, koristite standardne sojeve bakterija za inokulaciju i kulturu i posmatrajte rezultate biohemijske reakcije. Trebalo bi pokazati normalnu reakciju. Podlogu za kulturu ne treba čuvati predugo. Po potrebi se može čuvati u frižideru na 4°C.
7. Trenutno postoji mnogo vrsta suvih podloga za kulturu. Svaka serija treba da koristi standardne sojeve za test rasta ili posmatranje biohemijskih reakcija. Različite podloge za kulturu mogu se koristiti samo nakon što je test rasta odgovarajućih sojeva dobar. Mogu se koristiti novokupljeni ili osušeni koji su dugo čuvani. Prilikom pripreme treba izmjeriti i pH podloge za kulturu, a dozu i metodu treba slijediti prema uputama za proizvod.
8. Hemijski reagensi, uslovi sterilizacije, rezultati testova rasta soja i proizvodno osoblje koje se koristi u svakoj seriji pripremljenih podloga za kulturu treba da se zabeleže za upit.
Zahtjevi za prikupljanje i obradu uzoraka
1. Prikupljeni inspekcijski uzorci moraju biti reprezentativni. Prilikom uzorkovanja treba detaljno ispitati sirovine, preradu, transport, metode skladištenja i uslove serije hrane, okolišne zdravstvene uslove itd. kako bi se provjerilo da li postoje izvori kontaminacije.
2. Prema vrsti i količini hrane, količina i metoda uzorkovanja treba da se sprovedu u skladu sa zahtevima standardnih metoda inspekcije.
3. Obratite pažnju na aseptični rad prilikom uzorkovanja, a kontejner mora biti steriliziran kako bi se izbjegla mikrobna kontaminacija u okolini. Posuda se ne smije sterilizirati otopinom kreozalnog sapuna, sterilizacijom hlormetioninom, alkoholom i drugim dezinficijensima, te ne smije sadržavati takva dezinficijensa ili antibiotike. Kako bi se izbjeglo ubijanje mikroorganizama u uzorku, korištene makaze, noževi i kašike također se moraju sterilizirati prije upotrebe.
4. Uzorke treba poslati u inspekcijsku sobu na pregled odmah nakon prikupljanja. Proces inspekcije uglavnom ne traje duže od 3 sata. Ako je udaljenost velika, može se čuvati u okruženju od 1~5℃. Ako je potrebno zamrznuti, treba je čuvati u smrznutom stanju. Dostaviti na uvid.
5. Nakon prijema uzorka, soba za inspekciju će ga registrovati (naziv uzorka, jedinica za pregled, količina, datum, broj itd.) i posmatrati izgled uzorka. Ako se utvrdi bilo koji od sljedećih uslova, inspekcija se može odbiti:
(1) Uzorci koji su sterilisani specijalnim visokim pritiskom, ključanjem ili drugim metodama gube svoj značaj u predstavljanju originalne hrane;
(2) otvorene su boce i kese sa hranom, kuvano meso i proizvodi od njega, kuvana perad i druga hrana su polomljeni i nekompletni, odnosno izgubljen je izvorni oblik hrane (osim uzoraka za trovanje hranom);
(3) Količina uzorkovanja je nedovoljna prema potrebi;
Za uzorke dostavljene na pregled koji ispunjavaju uslove, prostorija za inspekciju treba da izvrši pregled odmah nakon njihovog prijema. Ukoliko uslovi nisu ispunjeni, treba ih čuvati u frižideru na 4°C, na vreme pripremiti za stvaranje uslova, a zatim izvršiti inspekciju.
6. Prilikom pregleda uzoraka izvršite odgovarajuću obradu prema njihovim različitim svojstvima.
(1) Prilikom inokulacije tekućih uzoraka, potrebno ih je temeljito promiješati i inokulirati prema količini.
(2) Za čvrste uzorke, steriliziranim nožem izrežite 25 g različitih dijelova, stavite ih u 225 mL steriliziranog fiziološkog rastvora ili drugih otopina, zgnječite i pomiješajte s homogenizatorom i inokulirajte prema količini.
(3) Boce i vrećice sa hranom treba otvoriti sterilizacijom, a gore navedene metode treba odabrati prema karakteristikama prije inokulacije.
Zahtjevi za inspekciju uzorka, evidentiranje i izvještavanje
1. Nakon prijema uzorka, soba za inspekciju će prvo izvršiti inspekciju izgleda i odmah izvršiti inspekciju u skladu sa nacionalnim standardnim metodama inspekcije. Tokom procesa inspekcije, aseptične radnje moraju se obavljati pažljivo, odgovorno i striktno kako bi se izbjeglorezultat mikrobnog testakontaminacije u okolini.
2. Metode koje se koriste tokom procesa inspekcije uzorka, pojave i rezultati koji su se desili, itd. moraju biti zapisani u pisanim zapisnicima ispitivanja kao osnova za analizu i prosuđivanje rezultata. Zapisi moraju biti detaljni, jasni, autentični, objektivni i ne smiju se mijenjati ili krivotvoriti.
Zahtjevi za aseptični rad:
1. Morate nositi radnu odjeću i radnu kapu kada inokulirate bakterije.
2. Prilikom inokulacije uzoraka hrane mora se nositi posebna radna odjeća, kape i papuče, koje treba staviti u tampon prostoriju sterilne prostorije i koristiti nakon UV dezinfekcije prije rada.
3. Kada inokulirate uzorke hrane, operite ruke sapunom prije ulaska u sterilnu prostoriju, a zatim obrišite ruke vatom sa 75% alkohola.
4. Slamke, ravne posude i podloge za kulturu koje se koriste za inokulaciju moraju biti sterilizirane i sterilizirane. Neiskorištene ambalaže ne smiju ostati neiskorištene nakon otvaranja pakovanja. Metalno posuđe prije upotrebe treba autoklavirati ili spaliti tri puta sa 95% alkohola.
5. Prilikom vađenja slamke iz pakovanja vrh slamke ne smije dodirivati izložene dijelove. Kada koristite slamku za inokulaciju epruvete ili ploče, vrh slamke ne smije dodirivati rub epruvete ili ploče.
6. Inokulacija uzoraka i prijenos bakterija moraju se obaviti ispred alkoholne lampe. Prilikom inokulacije bakterija ili uzoraka, slamka se mora sterilizirati plamenom nakon što je izvadite iz pakovanja i otvorite čep epruvete.
7. Prije inokulacije bakterija, sve metalne žice inokulacijske petlje i igle treba spaliti plamenom, a po potrebi spoj između petlje, igle i šipke treba spaliti. Inokulacionu petlju za inokulaciju bakterija tuberkuloze i virulentnih bakterija treba kuhati u kipućoj vodi 5 minuta, a zatim spaliti na plamenu.
8. Prilikom sisanja bakterijske tekućine ili uzoraka slamčicom, koristite odgovarajući gumeni vrh za sisanje i nemojte ga sisati direktno ustima.
Zahtjevi za korištenje sterilne sobe:
1. Prozori koji vode ka spoljašnosti sterilne sobe trebaju biti dvostruko zastakljeni i zapečaćeni. Ne treba ih otvarati po volji. Treba postojati tampon prostorija i klizna vrata koja odgovaraju veličini sterilne sobe. Također bi trebao biti mali prozor od 0,5~0,7m2. U pripremi za prenošenje predmeta nakon ulaska u sterilnu prostoriju.
2. Sterilnu sobu treba održavati čistom. Nakon rada treba ga dezinfikovati 2% do 3% rastvorom krezol sapuna, radnu površinu obrisati, a predmete koji nisu u vezi sa eksperimentom ne odlagati.
3. Vrata sterilne sobe treba dobro zatvoriti prije i poslije upotrebe i uključiti ultraljubičastu lampu. Ako se za dezinfekciju koristi zatvorena viseća ultraljubičasta lampa, potrebna je ultraljubičasta lampa od 30 W. Udaljenost je 1,0m, a vrijeme ozračivanja nije manje od 30 minuta. Kada koristite ultraljubičaste lampe, treba obratiti pažnju na rad direktno pod ultraljubičastim svjetlom kako biste izbjegli oštećenja. Lampu je potrebno nježno obrisati alkoholnom vatom svake dvije sedmice kako bi se uklonila prašina i masnoća kako bi se smanjio utjecaj ultraljubičastog prodiranja.
4. Prilikom obrade i inokulacije uzoraka hrane, uđite u sterilnu prostoriju za operaciju i nije dozvoljeno da ulazite ili izlazite po volji. Ako stvari treba da se prenesu, mogu se proći kroz mali prozor.
5. Ako je potrebno ugraditi klima uređaj u sterilnu prostoriju, treba da postoji uređaj za filtriranje.
Zahtjevi za dezinfekciju i sterilizaciju
Stakleno, metalno posuđe i podloge za kulturu koje se koriste zamikrobiološko ispitivanje, kontaminirane i inokulirane kulture itd. moraju se sterilizirati prije upotrebe. Metode sterilizacije suvom toplotom i vlažnom toplotom pod pritiskom.
1. Priprema prije sterilizacije
(1) Sve predmete koje je potrebno sterilizirati prvo treba oprati i osušiti. Stakleno posuđe kao što su slamke i plosnato posuđe treba da bude čvrsto upakovano papirom. Ako se koriste metalne cijevi, otvori za ventilaciju na njima treba otvoriti.
(2) Zamotajte čep trokutaste tikvice u kojoj se nalazi podloga za kulturu papirom, poklopite epruvetu i izvucite jezgro šprica i umotajte ga gazom.
2. instalirati
(1) Sterilizator na suvu toplotu: Predmeti ne smiju biti pretrpani i ne smiju dodirivati četiri zida kutije.
(2) Veliki štednjak na paru pod visokim pritiskom: Stavite sterilizirane predmete, zamotajte ih zasebno i stavite ih direktno u cilindar za sterilizaciju. Nemojte pretrpavati predmete.
3. Pregled opreme
(1) Provjerite da li je prekidač vrata fleksibilan, da li je gumeni prsten oštećen i da li je ravan.
(2) Provjeriti da li manometar ostaje na nultom položaju kada je para iscrpljena, zatvorite vrata i poklopac, prozračite paru ili grijanje i provjerite ima li curenja zraka, da li se poklapaju uvjeti koji su označeni manometrom i termometrom i da li je cjevovod blokiran.
(3) Za sterilizatore sa uređajima za automatsko elektronsko upravljanje programom, navedeni program treba provjeriti prije upotrebe kako bi se utvrdilo da li ispunjava zahtjeve za sterilizaciju.
4. Sterilizacijski tretman
(1) Metoda sterilizacije suhom toplinom:
Ova metoda je prikladna za predmete koji se ne oštećuju, propadaju ili isparavaju u uvjetima suhe topline. Češće se koristi za sterilizaciju staklenog posuđa, metalnih proizvoda, keramičkih proizvoda itd.
①Instrumente i pribor treba oprati prije suhog-pečenja kako bi se spriječilo karboniziranje prljavštine na površini.
② Tokom sterilizacije, predmeti ne smiju biti pretrpani, nemojte direktno dodirivati dno i zid kutije i ostavljati praznine između predmeta.
③ Tokom sterilizacije, dobro zatvorite vrata, priključite napajanje, otvorite izduvni otvor na oko 30 minuta da biste uklonili hladni vazduh iz sterilizatora, podesite indikatorsko svetlo kada temperatura poraste na 160°C i održavajte ga 1,5 do 2 sata.
④Nakon završene sterilizacije ili tokom procesa porasta temperature, vrata se moraju otvoriti ispod 60°C.
(2) Sljedeće korake treba slijediti kada koristite prijenosni ekspres lonac ili vertikalni parni sterilizator pod pritiskom:
① Dodajte 3L vode u glavni dio prijenosnog ekspres lonca, a 16L vode u vertikalni ekspres lonac (količinu vode treba dopuniti kada se ponovo koristi, a vodu treba zamijeniti ako se zamuti);
② Za prijenosni ekspres lonac, umetnite ispušnu cijev na gornjem poklopcu u četvrtastu cijev na unutrašnjem zidu bureta za sterilizaciju (ne smiju se koristiti sterilizatori bez crijeva ili oni sa korodiranim i napuklim crijevima);
③ Pokrijte gornji poklopac i čvrsto ga zategnite da sprečite curenje vazduha; stavite sterilizator na izvor vatre da se zagrije, uključite napajanje vertikalnog ekspres lonca i otvorite ispušni ventil na gornjem poklopcu kako biste ispustili zrak (ispustite zrak 10 do 15 minuta nakon što voda proključa) );
④Zatvorite ispušni ventil kako biste podignuli pritisak pare na propisane zahtjeve i održavali ga određeno vrijeme (u zavisnosti od prirode steriliziranih predmeta i relevantnih okolnosti);
⑤ Nakon što se postigne određeno vrijeme, za predmete koje treba osušiti, odmah otvorite ispušni ventil kako biste ispustili paru. Kada se pritisak vrati na nulu, ohladite ga prirodno na 60°C, a zatim otvorite poklopac da izvadite predmete. Ako se radi o tečnom predmetu, nemojte otvarati ispušni ventil. Lonac treba odmah ukloniti iz izvora topline i ostaviti da se prirodno ohladi dok se tlak ne vrati na nulu i temperatura ne padne ispod 60°C prije otvaranja poklopca kako bi se izvadio sadržaj kako bi se spriječilo iznenadno dekompresija tečnosti od nasilnog ključanja ili eksplozije posude.
(3) Slijedite sljedeće korake da biste koristili parni sterilizator horizontalnog ekspres lonca:
①Čvrsto zatvorite vrata lonca, otvorite ventil za dovod zraka, unesite paru u međuspratu radi predgrijavanja, a hladni zrak u međukatu će se automatski ispustiti kroz vazdušnu barijeru;
②Nakon što međusloj dostigne prethodno određenu temperaturu, otvorite ventil za dovod zraka u komoru za lonac, unesite paru u komoru za lonac, a hladni zrak u komori posude će se automatski ispustiti kroz odvodnik zraka u komori posude;
③Kada pritisak i temperatura u komori posude dostignu specificirani pritisak, podesite ventil za dovod vazduha da ostane konstantan;
④ Prirodno ili umjetno ohladite temperaturu na 60℃ prije otvaranja vrata da izvadite predmete. Nemojte koristiti metodu brzog pražnjenja pare kako biste spriječili iznenadni pad tlaka, burno ključanje tekućine ili eksploziju posude;
⑤ Kada koristite parni sterilizator sa automatskim programom-kontrolisanim pritiskom, nakon postavljanja predmeta i čvrstog zatvaranja vrata, treba pritisnuti odgovarajući prekidač prema kategoriji predmeta kako bi se sterilizacija mogla automatski izvršiti prema potrebnim procedurama. Tokom sterilizacije, priloženi instrument se mora koristiti za snimanje temperature i vremena. Za buduću referencu, radni zahtjevi trebaju biti striktno u skladu s uputama proizvođača;
5. Temperatura i vrijeme sterilizacije
(1) Temperatura sterilizacije sterilizatora suve toplote je 160℃, 1,5~2h.
(2) Temperatura sterilizacije i vrijeme parnog sterilizatora pod pritiskom
Metoda intermitentne sterilizacije
1. Metoda sterilizacije:
Koristite parnu sterilizaciju bez pritiska. Neke supstance se lako unište-parnom sterilizacijom pod visokim pritiskom, pa se ova metoda može koristiti za sterilizaciju.
(1) Stavite predmete za sterilizaciju u lonac, pokrijte gornji poklopac, otvorite otvor za odvod i ocijedite preostalu vodu u loncu.
(2) Zatvorite odvodni otvor, otvorite vrata za ulaz zraka i po potrebi dezinficirajte 10 do 20 minuta.
(3) Nakon što je sterilizacija završena, zatvorite vrata za ulaz zraka, izvadite predmete i pričekajte da se ohlade na sobnu temperaturu, stavite ih u inkubator na 37°C preko noći i nastavite sa sterilizacijom prema gore navedenoj metodi sljedećeg dana. Uradite to tri puta kako biste postigli svrhu sterilizacije.
2. Kako koristiti koagulator seruma:
Kada medij kulture sadrži posebne sastojke kao što su serum ili jaja, visoka toplota će uništiti njegove hranjive sastojke. Stoga se niska temperatura može koristiti za koagulaciju seruma i postizanje svrhe sterilizacije:
(1) Kada se koristi serum steriliziran ovom metodom u alikvotu, moraju se strogo poštovati aseptičke operacije, a epruvete i ploče također moraju biti sterilizirane prije upotrebe;
(2) Po potrebi napravite podlogu za kulturu u nagib ili visoki sloj. Nakon što dodate dovoljno vode, priključite napajanje, podignite temperaturu na 75~90°C na jedan sat i potom sterilizirajte. Stavite ga u inkubator na 37°C preko noći, a zatim ga sterilizirajte tri puta.
3. Prokuhajte i dezinfikujte:
Možete koristiti lonac ili sterilizator. Nakon što voda proključa, kuvajte je 5 do 15 minuta. Također možete dodati 2% karbonske kiseline u vodu i kuhati je 5 minuta. Dodati 0,02% formaldehida i kuvati na 80°C 60 minuta da bi se postigla svrha sterilizacije. Međutim, može se postići sterilizacija ključanjem. Kada koristite pojačivače, treba obratiti pažnju na korozivnost predmeta.
4. Sterilizacijski tretman:
Nakon sterilizacije, predmeti su već sterilni pod normalnim okolnostima. Treba ih pažljivo pregledati i staviti kada se izvade iz sterilizatora kako bi se izbjegla ponovna-kontaminacija;
(1) Izvadite artikle i odmah provjerite integritet ambalaže. Ako postoji oštećenje ili je tampon uklonjen, ne može se koristiti kao sterilni predmet;
(2) Izvađeni predmeti ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti ako je njihova ambalaža očigledno natopljena vodom;
(3) Medij za kulturu ili reagense treba provjeriti da se vidi da li zadovoljavaju boju ili stanje nakon sterilizacije. One koje ne ispunjavaju uslove treba odbaciti;
(4) Za otvorene-zatvorene kontejnere, otvori za sito treba da budu zatvoreni prilikom vađenja;
(5) Ako uklonjeni predmeti padnu na zemlju, budu izgubljeni na nečistom mjestu ili su umrljani vodom, smatraju se kontaminiranim i ne mogu se koristiti kao sterilni predmeti;
(6) Izvađene kvalifikovane sterilisane artikle treba čuvati u skladištu ili ormanu otpornom na prašinu, i strogo je zabranjeno mešati ih sa nesterilizovanim predmetima;
(7) Svi kvalifikovani artikli treba da budu označeni datumom sterilizacije i rokom trajanja;
(8) Nakon što je svaka serija sterilizacije završena, zabilježite naziv, količinu, temperaturu, vrijeme i operatera steriliziranih proizvoda.
Zahtjevi za tretman toksičnog i bakterijskog otpada
Eksperimentalna oprema i kulture korištene u mikrobiološkim eksperimentima ne smiju se iznositi iz laboratorija bez dezinfekcije.
1. Kultivisani kontaminirani materijali i otpad treba da se stave u čvrste kontejnere ili žičane korpe i da se čuvaju centralno na određenim lokacijama dok se jednolično ne autoklaviraju.
2. Kulture kontaminirane mikroorganizmima moraju se autoklavirati na 121°C 30 minuta.
3. Nakon upotrebe, kontaminirane slamke treba staviti u 5% rastvor kreol sapuna ili rastvor karbonske kiseline, namakati najmanje 24 sata (tečnost za dezinfekciju ne sme biti niža od visine namakanja), a zatim sterilisati pod visokim pritiskom na 121°C 30 minuta.
4. Tečnost za bojenje i ispiranje mrlja se generalno može isprati direktno u kanalizaciju. Tečnost za ispiranje virulentnih bakterija mora se isprati u čašu i sterilisati pod visokim pritiskom pre nego što se izlije u kanalizaciju. Obojena stakalca se stavljaju u 5% rastvor krezol sapuna. Nakon namakanja u vodi 24 sata, prokuhajte i operite. Stakalca ili posude koje se koriste za ispitivanje aglutinacije moraju se autoklavirati, a zatim oprati.
5. Nakon lomljenja kulture, odmah poprskajte i natopite kontaminirane dijelove 5% otopinom krezol sapuna ili otopinom karbonske kiseline, potopite pola sata i zatim obrišite.
Kontaminirana radna odjeća ili radna odjeća, kape, maske itd. koje se nose za nasilne testove treba staviti u posebne vreće za dezinfekciju i sterilizirati pod visokim pritiskom prije pranja.
Srednji zahtjevi za pripremu
Kvalitet pripreme podloge direktno će uticati na rast mikroorganizama, jer različiti mikroorganizmi imaju različite nutritivne potrebe i različite namjene kulture. Zahtjevi za pripremu različitih medija kulture su sljedeći:
1. Izvagajte sastojke prema formuli medija, a zatim ih otopite u destilovanoj vodi. Prije upotrebe treba provjeriti kvalitetu primijenjenih reagensa i lijekova.
2. Merenje i podešavanje pH vrednosti: pH merenje treba da se vrši kada se medijum za kulturu ohladi na sobnu temperaturu, jer postoji određena razlika u pH vrednosti u toplim ili hladnim uslovima. Kada je mjerenje završeno, dodajte lužinu ili kiselinu prema izračunatoj količini i dobro promiješajte. Trebalo bi se ponovo testirati. pH vrijednost podloge za kulturu mora biti tačna, inače će utjecati na rast mikroorganizama ili utjecati na promatranje rezultata. Međutim, treba napomenuti da sterilizacija pod visokim-tlakom može utjecati na smanjenje ili povećanje pH nekih podloga za uzgoj, tako da nije preporučljivo sterilizirati pod previsokim pritiskom ili previše puta kako bi se izbjeglo utjecanje na kvalitetu podloge. Indikatori, natrijum deoksiholat, agar, itd. se generalno dodaju nakon podešavanja pH vrednosti.
3. Podloga za kulturu mora biti čista kako bi se olakšalo promatranje rasta bakterija. Nakon što se podloga za kulturu zagrije i prokuha, može se filtrirati upijajućim pamukom ili flanelom kako bi se uklonio sediment. Po potrebi se može razbistriti bjelanjkom. Trake agara koje se koriste moraju se prethodno oprati i osušiti. Prije upotrebe izbjegavajte utjecaj na prozirnost zbog nečistoća u agaru.
4. Gvozdene, bakarne i druge posude ne treba koristiti za držanje medijuma za kulturu. Bolje je koristiti čiste neutralne posude od tvrdog stakla.
5. Sterilizacijom podloge za kulturu mora biti postignuta ne samo svrha potpune sterilizacije, već i paziti da se zbog zagrijavanja ne smanji njegova nutritivna vrijednost. Generalno, dovoljno je 121°C tokom 15 minuta. Za podloge za kulturu koje sadrže supstance koje su netolerantne na visoku toplotu, kao što su šećeri i serum, želatin, itd., treba sterilisati na niskoj temperaturi ili povremenom metodom. Neki reagensi koji se ne mogu zagrijati, kao što su kalijum telurit, žumance, TTC, antibiotici, itd., treba ohladiti na oko 50°C nakon što se osnovni agar autoklavira i zatim dodati;
6. Nakon što je pripremljena svaka serija medija za kulturu, treba izvršiti sterilni test rasta i test rasta testiranih sojeva. Ako je u pitanju biohemijski medij, koristite standardne sojeve bakterija za inokulaciju i kulturu i posmatrajte rezultate biohemijske reakcije. Trebalo bi pokazati normalnu reakciju. Podlogu za kulturu ne treba čuvati predugo. Po potrebi se može čuvati u frižideru na 4°C.
7. Trenutno postoji mnogo vrsta suvih podloga za kulturu. Svaka serija treba da koristi standardne sojeve za test rasta ili posmatranje biohemijskih reakcija. Različite podloge za kulturu mogu se koristiti samo nakon što je test rasta odgovarajućih sojeva dobar. Mogu se koristiti novokupljeni ili osušeni koji su dugo čuvani. Prilikom pripreme treba izmjeriti i pH podloge za kulturu, a dozu i metodu treba slijediti prema uputama za proizvod.
8. Hemijski reagensi, uslovi sterilizacije, rezultati testova rasta soja i proizvodno osoblje koje se koristi u svakoj seriji pripremljenih podloga za kulturu treba da se zabeleže za upit.
Zahtjevi za prikupljanje i obradu uzoraka
1. Prikupljeni inspekcijski uzorci moraju biti reprezentativni. Prilikom uzorkovanja treba detaljno ispitati sirovine, preradu, transport, metode skladištenja i uslove serije hrane, okolišne zdravstvene uslove itd. kako bi se provjerilo da li postoje izvori kontaminacije.
2. Prema vrsti i količini hrane, količina i metoda uzorkovanja treba da se sprovedu u skladu sa zahtevima standardnih metoda inspekcije.
3. Obratite pažnju na aseptični rad prilikom uzorkovanja, a kontejner mora biti steriliziran kako bi se izbjegla mikrobna kontaminacija u okolini. Posuda se ne smije sterilizirati otopinom kreozalnog sapuna, sterilizacijom hlormetioninom, alkoholom i drugim dezinficijensima, te ne smije sadržavati takva dezinficijensa ili antibiotike. Kako bi se izbjeglo ubijanje mikroorganizama u uzorku, korištene makaze, noževi i kašike također se moraju sterilizirati prije upotrebe.
4. Uzorke treba poslati u inspekcijsku sobu na pregled odmah nakon prikupljanja. Proces inspekcije uglavnom ne traje duže od 3 sata. Ako je udaljenost velika, može se čuvati u okruženju od 1~5℃. Ako je potrebno zamrznuti, treba je čuvati u smrznutom stanju. Dostaviti na uvid.
5. Nakon prijema uzorka, soba za inspekciju će ga registrovati (naziv uzorka, jedinica za pregled, količina, datum, broj itd.) i posmatrati izgled uzorka. Ako se utvrdi bilo koji od sljedećih uslova, inspekcija se može odbiti:
(1) Uzorci koji su sterilisani specijalnim visokim pritiskom, ključanjem ili drugim metodama gube svoj značaj u predstavljanju originalne hrane;
(2) otvorene su boce i kese sa hranom, kuvano meso i proizvodi od njega, kuvana perad i druga hrana su polomljeni i nekompletni, odnosno izgubljen je izvorni oblik hrane (osim uzoraka za trovanje hranom);
(3) Količina uzorkovanja je nedovoljna prema potrebi;
Za uzorke dostavljene na pregled koji ispunjavaju uslove, prostorija za inspekciju treba da izvrši pregled odmah nakon njihovog prijema. Ukoliko uslovi nisu ispunjeni, treba ih čuvati u frižideru na 4°C, na vreme pripremiti za stvaranje uslova, a zatim izvršiti inspekciju.
6. Prilikom pregleda uzoraka izvršite odgovarajuću obradu prema njihovim različitim svojstvima.
(1) Prilikom inokulacije tekućih uzoraka, potrebno ih je temeljito promiješati i inokulirati prema količini.
(2) Za čvrste uzorke, steriliziranim nožem izrežite 25 g različitih dijelova, stavite ih u 225 mL steriliziranog fiziološkog rastvora ili drugih otopina, zgnječite i pomiješajte s homogenizatorom i inokulirajte prema količini.
(3) Boce i vrećice sa hranom treba otvoriti sterilizacijom, a gore navedene metode treba odabrati prema karakteristikama prije inokulacije.
Zahtjevi za inspekciju uzorka, evidentiranje i izvještavanje
1. Nakon prijema uzorka, soba za inspekciju će prvo izvršiti inspekciju izgleda i odmah izvršiti inspekciju u skladu sa nacionalnim standardnim metodama inspekcije. Tokom procesa inspekcije, aseptične radnje moraju se obavljati pažljivo, odgovorno i striktno kako bi se izbjeglorezultat mikrobnog testakontaminacije u okolini.
2. Metode koje se koriste tokom procesa inspekcije uzorka, pojave i rezultati koji su se desili, itd. moraju biti zapisani u pisanim zapisnicima ispitivanja kao osnova za analizu i prosuđivanje rezultata. Zapisi moraju biti detaljni, jasni, autentični, objektivni i ne smiju se mijenjati ili krivotvoriti.
